实验二培养基母液的配制及保存

实验二培养基母液的配制及保存

一、目的要求

了解并掌握植物组织培养中MS培养基母液、生长调节剂母液配制与保存的基本知识及操作规范，能根据配方准确计算各种药品的称取量。

二、基本原理

在配制培养基之前，为了使用方便、简化操作、用量准确，减少每次配药称量各种化学成分所花费的时间和误差，常常将配制培养基所需无机大量元素、微量元素、有机物、铁盐、激素等分别配制成比需要量大若干倍的浓缩母液，置于冰箱内保存。当配制培养基时，按预先计算好的量分别吸取各种母液即可。本实训以MS 培养基为例，学习培养基母液的配制方法。

三、试剂与主要用具

1．仪器、用具

电子天平(感量0.01g和0.0001g)、药匙、玻璃棒、称量纸、吸水纸、滴管、洗瓶、标签纸、烧杯（50ml、100ml、200ml）、容量瓶（100ml、200ml、500ml、1000ml）、试剂瓶（100mL、200mL、500ml、1000ml）、量杯、量筒、移液管、移液枪、洗耳球、电炉、冰箱等。

2．试剂

（1）95%乙醇、1mol/L NaOH、1mol/L HCl

（2）MS培养基各成分试剂

（3）植物生长调节剂：2，4-D、6-BA、IAA、NAA等

（4）洗涤剂、蒸馏水

四、方法步骤

1．大量元素母液的配制

按照MS培养基配方的需要量，将各种化合物称量扩大10倍，用电子天平称取，并分别用少量蒸馏水溶解，如溶解速度慢，可稍加热。完全溶解后，按表4-1顺序依次混合已溶解的化合物溶液，并搅拌，以免产生沉淀，注意最后加入氯化钙溶液，混匀，用量筒定容到500ml，倒入试剂瓶中并贴好标签。保存于4℃冰箱待用。

表4-1 MS培养基大量元素母液（10倍）的配制剂量

2．微量元素母液的配制

按照MS培养基配方需要量，将微量元素各种化合物（如表4-2）扩大100倍，用万分之一的电子天平分别准确称取，用少量蒸馏水溶解，也可以混合溶解，混合后定容到500mL。将配制好的母液倒入试剂瓶中，并贴好标签，保存于4℃冰箱中。

表4-2 MS培养基微量元素母液（100倍）的配制剂量

3. 铁盐母液的配制

常用的铁盐是FeSO4·7H2O和Na2-EDTA的螯合物，必须单独配制。配制时，按照扩大100倍的用量（如表4-3），分别称取FeSO4·7H2O和Na2-EDTA，分别溶解后，将Na2-EDTA溶液缓缓倒入FeSO4溶液中(需加热溶解)，搅拌均匀使其充分螯合，用蒸馏水定容到500mL后贮放于棕色玻璃瓶中，贴好标签，保存于4℃冰箱中。

表4-3 MS培养基铁盐母液（100倍）的配制剂量

4．有机物母液的配制

按照表4-4 中各成分浓度扩大100倍后的用量，用感量0.0001g电子天平分别称量各有机物。分别溶解定容后装入试剂瓶中，也可以混合溶解定容，装入同一试剂瓶中，写好标签，放入冰箱中保存。一般有机物都溶于水，但叶酸（VBc）先用少量稀氨水或1mol/L NaOH溶液溶解；VH（生物素）先用1mol/L NaOH溶液溶解；VA、VD3、VB12应先用95%乙醇溶解，然后再用蒸馏水定容。

表4-4 MS培养基有机物母液（100倍）的配制剂量

注：表中各成分的扩大倍数与称取量仅是举例，可以根据各实际需要，确定扩大倍数、计算实际称取量。

5．激素母液的配制

激素母液必须分别配制，浓度根据培养基配方的需要量灵活确定，一般是0.1～2mg/ml，根据需要确定配制的浓度。称量激素要用感量万分之一天平。配制激素母液时应注意，各激素的溶剂不同，具体见表4-5。

表4-5 常用植物激素及生长调节物质的溶剂

中文名缩写溶剂

2，4-二氯苯氧乙酸2,4-D NaOH/乙醇

吲哚乙酸IAA NaOH/乙醇

吲哚丁酸IBA NaOH/乙醇

α-萘乙酸α-NAA NaOH/乙醇

6-苄基氨基腺嘌呤6-BA NaOH/ HCl

腺嘌呤Ade H2O

激动素KT HCl / NaOH

玉米素ZT NaOH

赤霉素GA 乙醇

脱落酸ABA NaOH

注：称取10mgNAA溶解后定容至100ml，即得到0.1mg/mlNAA贮备液。

称取100mg 6-BA溶解后定容至100ml，即得到1mg/ml6-BA贮备液。

6．在配制母液时应注意：

（1）培养基各试剂应使用分析纯，用蒸馏水溶解及定容。

（2）在称量时应防止药品间的污染，药匙、称量纸不能混用，每种试剂使用一把药匙，多出的试剂原则上不能再倒回原试剂瓶。

（3）使用电子天平时注意不要把药品撒到称盘上，用完以后，用洗耳球将天平内的脏物清理干净。

（4）母液配制好后，贴上标签，标明母液名称、试剂浓度或扩大倍数、配制日期，并存放在4℃冰箱中。使用前，要进行检查，若发现试剂中有絮状沉淀、或长菌、或铁盐母液的颜色变为棕褐色，都不应再使用。

五、结果与分析

1 为什么要配制培养基母液？

2 在配制培养基时，配制1升MS基本培养基应吸取本实验中所配制的四种混

合母液各多少毫升？

3仔细观察在配制母液过程中的现象与遇到的问题，如是否产生浑浊或沉淀，并分析出现混浊的原因。