小儿肺结核痰涂菌临床研究进展

新疆医科大学学报ＪＯＵＲＮＡＬＯＦＸＩＮＪＩＡＮＧＭＥＤＩＣＡＬＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ２００９Ｓｅｐ．，３２（９）１２３１核诊断。

张蔚等ｎ１１认为ＥＰＴ误诊可由以下主观因素造成：未行仔细病史询问和体检，尤门诊的接诊时间短，更易漏诊；忽略了简单易行的常见结核检查，如结核菌素试验、结核抗体检测等；受影像学检查结果所误导；部分肺外结核可合并其他细菌感染，经抗炎治疗好转，而误诊为非特异性细菌炎症，未做进一步追踪观察，至病情反复才明确诊断；诊断性抗痨治疗的时间短，用药方法欠规则，导致抗痨失败，而轻易否定结核的诊断。

此外，少数病例在肺外结核基础卜合并有其他疾病，后者在一定程度Ｅ可干扰诊断者的视线，而延误或遗漏肺外结核。

秦树林等ｆ１３１报道在１１０例小明原因发热（ＦＵＯ）的病因中，感染性疾病占５２．７％，其巾结核病占感染性疾病的４６．６％，且以肺外结核居多。

故对于长期不明原因发热，血沉增快，一般抗生素治疗无效时，应高度怀疑肺外结核，完善结核病相关检查以明确诊断，必要时诊断性抗痨治疗。

我们认为对本病认识不足、疾病表现小典型及辅助检查方法不敏感是导敛误诊的重要丰客观因素。

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３７（９）：６０５—６０７．［收稿日期：２００９—０６一ｉｏ］小儿肺结核痰涂菌临床研究进展布力布丽・巴哈提综述张卫平审校（新疆医科大学第一附属医院儿科。

新疆乌鲁木齐８３００１１）中图分类号：Ｒ５２文献标识码：Ａ文章编号：１００９－５５５１（２００９）０９—１２３１—０３肺结核（ｐｕｌｍｏｎａｒｙｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ，ＰＴＢ）足危害小儿健康的严重疾病。

由于结核杆菌（ｂａｃｉｌｌｕｓｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）阳件足确诊小儿肺结核的会标准，对于疑难病例的诊断垒关重要，并且能提供药敏结果。

冈此强凋常规进行细菌学检查。

上世纪８０年代・｝Ｉ期。

我国结核病疫情出现回升。

多家医院资料表明，日前儿童符型肺结核有增多趋势，而ｒＬ病情也有加重趋势ｕ一。

为减少儿童肺结核的误诊和误治，提高早期诊断率和治疗成功率。

痰涂片抗酸染色查找结核分枝杆菌作为细菌学检测的常规手段之一，简便、经济、快捷足其优点，但检出率低，而ＦＬ标本的选取、涂片的质量以及显微镜检速度等人为的因素都会较大地影响痰检质量，但作为现代防痨策略的重要组成部分，仍将作为检查结核杆菌的首选方法。

本文将对痰涂片在Ａ，ＪＬ肺结核中的临床研究进展进行综述。

ｌ传统痰涂片检测１．１标本留取小儿痰标本留取较困难。

通常≥５岁的儿童可在家跃配合下留取痰液，年龄较小者均采用一次性吸痰管吸痰，痰液较少者町在吸痰前用生理盐水进行雾化后冉吸痰，这样留取标本的合格率较高。

１．２痰涂片抗酸染色［２］（１）用竹签挑取痰液在洁净的玻片右１／３处涂上１ｃｍ×２ｃｍ大小的痰膜。

（２）在通风处自然干燥。

（３）加右炭酸复红溶液，徐徐加热甭有蒸气出现，切不可沸腾，染５ｒａｉｎ水洗。

（４）加３％的盐酸脱色全红色完全脱去，水洗。

（５）加美篮复染１ｍｉｎ，水洗。

（６）十后油镜渎片，抗酸杆菌呈红色，背景为蓝色。

１．３结果判断¨１抗酸杆菌阴性：连续观察３００个不问视野，未发现抗酸杆菌。

抗酸杆菌阳性：报告抗酸杆菌菌数：１～８条／３００视野。

抗酸杆菌阳性（ｉ＋）：３～９条／１００视野。

抗酸杆菌阳性（２＋）：ｌ～９条／ｌｏ视野。

抗酸杆菌阳性（３＋）：１～９条／每视野。

抗酸杆菌阳性（４＋）：≥１０条／每视野。

１．４评价近年米，诊断结核病仍辛要依靠实验窜检测抗酸杆菌，虽然分ｒ生物学方法如聚合酶链反应（ＰｏｌｙｍｅｒａｓｅＣｈａｉｎＲｅａｃｔｉｏｎ，ＰＣＲ）、脉冲电场凝胶电泳等¨钥方法检测痰或血结核杆菌ＤＮＡ，具有快速、敏感等优点，但其费用昂万方数据１２３２新疆医科大学学报Ｊ（）ＵＲＮＡＩ，（）ＦＸＩＮＪＩＡＮＧＭＥＤＩＣＡｌ。

ＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ２００９Ｓｅｐ．。

３２（９）贵、技术要求高、枉基层不易普及．所以临床诊断需要仍采用痰液涂片抗酸杆菌榆测。

作为结核病最重要、最直接的依据。

小儿肺结核痰涂菌榆测作为确诊肺结核的金标准，其特异性诊断价值在目前结核病防治工作Ｉｆｌ发挥着巨大的作用，但就目前技术而古‘，其阳性率仅３０％左右，在临床上作一Ｉ一囚仍然存在７０％的假阴性率，涂阴肺结核仍是诊断与鉴诊断ｔｌ・的难点。

也是造成误诊、漏诊、过诊、延迟诊断的重要原阒，为结核病控制带来隐患值得霞视。

造成涂阴肺结核的原闪考虑主要有以下两方面原冈：１．４．１操作过程的规范性常用的萋尼抗酸染色操作繁琐。

染色加热时易产生气溶胶；技术要求较高，油镜观察视野范围小，镜枪时问长。

检验人员易疲劳。

同时对于涂片中存在的少量细菌难以发现』一。

应注意以下几点。

７ｌ：先进行集菌。

若条件允许可先对标本进行离心。

离心沉淀集菌涂片法的最适离心条件为离心力≥３０００ｒ／ｒａｉｎ。

离心时｜’ＨＪ为１５ｉｎｉｒｌ…Ｊ。

留取离心后的沉渣进行涂片，若无离心设备叮先将标本静置３０ｍｉｎ左右后留取沉淀物进行涂片。

每一个标本用一张玻片涂，如痰液有血液时要取血液部分。

如有脓痰时耍取脓液部分…总之要取有特征的部分：如没有特殊的部分时把标本搅拌均匀取・部分。

痰涂片要厚薄适宜。

涂一个椭圆。

四周留１．５ｃｍ的边，并用蜡笔把痰液圈起。

痰片干燥同定后就町以开始染色，用萎尼抗酸染液。

第一部分加入染液并加热玻片，到玻片冒出热烟为止，如冬天隔一段时问还可加热一次。

以提高抗酸杆菌的着色。

后两部分要注意冲洗时要小流水冲洗，以免把痰标本冲掉。

用油镜镜检时要选涂片均匀，染色效果好的区域按一定的路径不重复的镜检。

作为检验人员的操作，只要加强管理。

加强学习都能很好的掌握。

１．４．２细菌变异在药物诱导，免疫因子作用及自身生活周期中，结核分枝杆菌可能发生结构变异。

如结核分枝杆菌Ｌ型虽保留ｒ原菌的部分生物学特性与致病性，但与原菌义自‘很大的不同。

分枝杆菌Ｉ。

型对染料的拒染力比原菌更强，分枝杆菌Ｉ，型可能是结核病恶化和复发的原因之一。

冈此，加强分枝杆菌Ｉ。

型的榆测对ｒ解分枝杆芮的变异规律、提高结核病的细菌学诊断率、判断结核病的预后并最终控制结核病有重要意义。

２目前痰涂菌检测进展２．１央层杯法检测痰抗酸杆菌（ｃｅｎｔｒｉｆｕｇｉｎｇｔｈｅｌｉｑｕｏｒｅｄｓｐｕｔａａｎｄｃｏｌｌｅｃｔｉｎｇｂａｃｔｅｒｉａ）。

９］２．１．１力‘法夹层杯法检测痰抗酸杆菌的原理是使用特制的痰液消化液，并结合高速震荡，使痰标本允分液化ｆ『Ｉｉ有利于其巾的抗酸杆菌沉淀于特制的彭氏灾层杯底部的菌膜上，再进行染色、读片。

（１）试剂和仪器：由大骑医学新技术有限公删提供试剂盒、夹层杯、ＴＱ一１２自动离心涂片机、ＫＰ一１快速十片机。

（２）夹层杯法留痰方法：留取晨痰、即时痰或２４ｈ痰均叮，但总量小大于３０ｍ１，尽量取分别代表２４ｈ内各个时段的痰最好。

置于闭：断的无菌标本杯中待检。

（３）夹层杯法操作方法：①取相当丁标本２倍的痰消化液加入痰标本杯内。

使之充分混匀，倒人夹层杯内震荡１０ｒａｉｎ，如痰液过丁黏稠可适当延长时问。

使其允分液化。

②置于ＴＱ一１２自动离心涂片机卜，４０００ｒ／ｒａｉｎ。

离心１５～２０ｍｉｎ。

③弃其上清液，再放置５～１０ｒａｉｎ。

然后加入石碳酸溶液。

置酒精灯热染５～１０ｒａｉｎ．用缓慢水流冲洗。

以防将菌膜冲脱。

④加入３％盐酸脱色１～２ｒａｉｎ。

水冲洗。

⑤加入美蓝复染１～２ｍｉｎ。

水冲洗．将夹层杯放入烤片机２ｒａｉｎ烤下。

⑥用取片针在标今杯底部门陷处将内层底片顶起。

２．１．２评价比原米的涂片法收集抗酸杆菌的范围更广泛。

更完伞，其枪杳结果更具有代表性。

克服厂原来采集的标本范围比较局限、不一定具自－Ｊ＇泛代表性的弊端。

原力‘法取材量相对较少，而实际卜涂片采用的痰液也不一定是分泌自结核病灶的局部。

即便是来源自病灶局部分泌的痰液，涂片所涂抹的那一部分标本也小一定会具有代表性，从而可能影响了其阳性率。

火层杯法正是弥补了上述痰检方法的不足。

ｕｒ以使所留取标本更具广泛性、代表性。

和传统涂片法相比，更容易发现结核菌。

所需设备简单，价格相当于原涂片法。

便于基层开展。

同时，该检测方法收集标本的条件、标本量、染色温度、夹层杯菌膜而移｛、油镜每个视野的实际面积均容易被“标准化”。

而便于大规模开展时的质量临控。

同时。

还叮以通过抗酸杆菌自动阅片机、计算机报告系统“ｏ准确计算出每毫升所含细菌浓度。

所以，是一种町能具有推广价值的检测方法。

２．２金胺“（）”荧光染色法（Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｓｔａｉｎｏｆａｕｒａｍｉｎｃ（））Ｌ６Ｊ２．２．１方法荧光染色液的配制染色液：金胺“（）”１ｇ溶于９５％乙醇１００ｍｌ中，加５％石炭酸液９００ｍｌ混匀即可。

脱色剂：３％盐酸酒精。

复染剂：高锰酸钾０１５ｇ，溶十１００ｍｌ蒸馏水。

将痰液涂片用荧光染色液染１０ｒａｉｎ，水洗后用３％的盐酸酒精脱色１～２ｍｉｎ，至外观无黄色为止，水洗后加复染剂ｌ～２ｒａｉｎ，水洗，晾干待检。