土壤中分解尿素的细菌的分离与计数学案(完美修改)

土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
一、研究思路
1、筛选菌株
(1)实验室中微生物筛选的原理：人为提供有利于生长的条件(包括营养、温度、pH等)，同时或其他微生物生长。

(2)选择培养基：在微生物学中，将允许种类的微生物生长，同时或其他种类微生物生长的培养基，称作选择培养基。

（3）尿素可以为农作物提供肥，但是只有被分解成之后，才能被植物吸收利用。

（4）以土壤中能分解尿素的细菌为研究对象，要达到的两个主要目的是：
①；②。

（5）PCR（）是一种在体外将。

此项技术的自动化，但是在合成的过程中需要在93℃的条件下，所以要求使用耐高温的
2、统计菌落数目
（1）测定微生物数量的常用方法有和。

（2）稀释涂布平板法统计样品中活菌的数目的原理
当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。

通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活细菌。

为了保证结果准确，一般设置个平板，选择菌落数在的平板进行计数，并取。

统计的菌落数往往比活菌的实际数目低，因此，统计结果一般用菌落数而不是活菌数来表示。

3、设置对照
设置对照的主要目的是排除实验组中对实验结果的影响，提高实验结果的。

二、实验设计
实验设计包括，所需、、用具和药品，具体的以及时间安排等的综合考虑和安排。

关于土壤中某细菌的分离与计数实验操作步骤如下：
1．取样：从肥沃、湿润的土壤中取样。

应先 3 cm左右，再取样，将样品装入事先准备好的中。

2．制备：准备牛肉膏蛋白胨培养基和选择培养基
3．样品的和微生物的与观察
4．细菌的计数
当菌落数目稳定时，选取菌落数在的平板进行计数。

在同一稀释度下，至少对3个平板进行重复计数，然后求出，并根据平板所对应的稀释度计算出样品中细菌的数目。

三、结果分析与评价
1、对分离的菌种作进一步的鉴定，还需要借助的方法。

2、在细菌分解尿素的化学反应中，细菌合成的将尿素分解成了。

氨会使培养基的碱性，PH 。

因此，我们可以通过检测培养基变化来判断该化学反应是否发生。

3、在以为唯一氮源的培养基中加入指示剂。

培养某种细菌后，如果PH 升高，指示剂将变，说明该细菌能够。

巩固练习
1．PCR技术要求使用耐高温的DNA聚合酶，这种酶要能忍受93℃左右的高温。

如果请你来寻找这种耐高温的酶，你会去哪里寻找………………………………………( )
A．土壤中 B．海水中 C．热泉中 D．冷库中
2．下列能选择出分解尿素的细菌的培养基是………………………………………( )
A．KH2PO4、Na2HP04、MgS04·7H20、葡萄糖、尿素、琼脂、水
B．KH2PO4、Na2HP04、MgS04·7H20、葡萄糖、琼脂、水
C．KH2PO4、Na2HP04、MgS04·7H20、尿素、琼脂、水
D．KH2PO4、Na2HP04、MgS04·7H20、牛肉膏、蛋白胨、琼脂、水
3．某同学在稀释倍数为106的培养基中测得平板上菌落数的平均值为234，那么每克样品中的菌落数是(涂布平板时所用稀释液的体积为0.1mL)…………………………( )
A．2.34×108 B．2.34×109 C．234 D．23.4
4．在做分离分解尿素的细菌实验时，A同学从对应106培养基上筛选出大约150个菌落，而其他同学只选择出大约50个菌落。

A同学的结果产生原因可能有…………………( )
①由于土样不同②由于培养基污染③由于操作失误④没有设置对照
A．①②③ B．②③④ C．①③④ D．①②④
5．关于土壤取样的叙述错误的是………( )
A．土壤取样，应选取肥沃、湿润的土壤 B．先铲去表层土3cm左右，再取样
C．取样用的小铁铲和信封在使用前不用灭菌 D．应在火焰旁称取土壤
6.下列关于从土壤中分离细菌的操作步骤中，正确的是…………( )
①土壤取样②称取10g土壤取出加入盛有90mL无菌水的锥形瓶中③吸取0.1mL进行平
板涂布④依次稀释至101、102、103、104、105、106、107稀释度
A．①→②→③→④ B．①→③→②→④ C．①→②→④→③ D．①→④→②→③7.下列关于测定土壤中细菌数量的叙述，正确的是……………( )
A．一般选用103～107倍的稀液分别涂布
B．测定放线菌的数量，一般选用103、lO 4和105倍稀释
C．测定真菌的数量，一般选用103、104和105倍稀释
D．当第一次测量某种细菌的数量，可以将101～107倍的稀释液分别涂布到平板上培养
8.下列关于微生物的培养叙述错误的是( )
A．细菌一般在30～37℃的温度下培养1～2 d
B．放线菌一般在25～28℃的温度下培养5～7 d
C．霉菌一般在25～28℃的温度下培养3～4 d
D．不同种类的微生物，一般需要相同的培养温度和培养时间
9.下列操作需要在火焰旁进行的一组是( )
①土壤取样②称取土壤③稀释土壤溶液④涂布平板⑤微生物的培养
A．①②③④⑤ B．②③④⑤④⑤ C．③④⑤ D．②③④
10.土壤取样时最好选择哪种环境中的土壤做分离细菌的实验…( )
A．街道旁 B．花盆中 C．农田中 D．菜园里
11、土壤中的细菌能分解尿素，是因为它们能合成一种( )
A．尿素酶B．脲酶C．蛋白酶 D．肽酶
12、在培养基中加入尿素(惟一氮源)，以分离出能分解尿素的细菌，这种加入尿素的培养基在功能上属于( )
A ．选择培养基
B ．固体培养基
C ．液体培养基
D ．半固体培养基
13、测定土壤中细菌数量一般选用104、105和106倍的稀释液进行平板培养，而测定真菌的数
量一般选用102、103和104倍稀释，其原因是( )
A ．细菌个体小，真菌个体大
B ．细菌易稀释，真菌不易稀释
C ．细菌在土壤中数量比真菌多
D ．随机的，没有原因
14、用来判断选择培养基是否起到了选择作用需要设置的对照是( )
A ．未接种的选择培养基
B ．未接种的牛肉膏蛋白胨培养基
C ．接种了的牛肉膏蛋白胨培养基
D ．接种了的选择培养基
15、通常用来作为菌种鉴定的重要依据是( )
A ．菌落
B ．细菌形态
C ．细菌体积
D ．细菌结构
16、在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，培养能分解尿素的细菌后，指示剂的颜色是( )
A ．蓝色
B ．红色
C ．黑色
D ．棕色
17、在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时又能抑制或者阻止其他种类微生物生长的培养基称做( )
A ．鉴别培养基
B ．加富培养基
C ．选择培养基
D ．基础培养基 18、在寻找目的菌株时，要根据它对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找，下列不．
属于厌氧细菌生存环境的是( )
A ．土壤深层
B ．人或动物体内寄生
C ．真空
D ．池塘淤泥
19、下列是关于检测土壤中细菌总数实验操作的叙述，其中错误的是( )
A ．用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培养基，经高温、高压灭菌后倒平板
B ．取104、105、106倍的土壤稀释液和无菌水各0.1 mL ，分别涂布于各组平板上
C ．将实验组和对照组平板倒置，37 ℃恒温培养24～48小时
D ．确定对照组无菌后，选择菌落数在300以上的实验组平板进行计数
20、可以鉴定出分解尿素的细菌的方法是( )
A ．以尿素为惟一氮源的培养基中加入二苯胺试剂
B ．以尿素为惟一氮源的培养基中加入酚红指示剂
C ．以尿素为惟一氮源的培养基中加入苏丹Ⅲ试剂
D ．以尿素为惟一氮源的培养基中加入双缩脲试剂
21、在做土壤中分解尿素的细菌的分离与计数实验时，甲组实验用氮源只含尿素的培养基，乙组实验用氮源除尿素外还含硝酸盐的培养基，其他成分都相同，在相同条件下操作，培养与观察，则乙组实验属于( )
A ．空白对照
B ．标准对照
C ．相互对照
D ．条件对照
22．可用于菌落数目统计的培养基是（ ）
A ． 固体培养基
B ．液体培养基
C ．半固体培养基
D ．天然培养基
23．产生标准菌落的细菌的最初数目和培养基分别是（ ）
A ．一个细菌 液体培养基
B ．许多细菌 液体培养基
C ．一个细菌 固体培养基
D ．许多细菌 固体培养基
24. 培养基中浓度过高抑制微生物生长的原因是（ ）
A ．含热量太多
B ．会使微生物失水
C ．导致微生物休眠
D ．培养基中的碳源和氮源比例失衡
25．不同种类的细菌菌落表现为不同的特征，下列属于菌落特征的是（ ）
（1）菌落大小（2）菌落形状 （3）菌落的隆起程度 （4）菌落的颜色 （5）菌落的透明度
A ．（1）（2）（3）
B ．（2）（3）（4）
C ．（1）（3）（4）
D ．（1）（2）（3）（4）（5）
26．某同学在10、100、1000倍稀释液的平均菌落数为2760、295、46，则菌落总数为( )
A．27600 B．29500 C．46000 D．37750
27．将某种细菌接种到彻底灭菌的固体培养基上，经过一段时间后能得到（）A．无一定形态的群体 B．菌丝 C．单个细菌 D．菌落
28．某同学在做微生物实验时，不小心把圆褐固氮菌和酵母菌混在一起。

该同学设计下面的实验，分离得到纯度较高的圆褐固氮菌和酵母菌。

(1)实验原理：圆褐固氮菌是自生固氮菌，能在无氮培养条件下生长繁殖而酵母菌则不能；青霉素不影响酵母菌等真菌的生长繁殖，而会抑制圆褐固氮菌的生长繁殖。

(2)材料用具：(略) (3)实验步骤：
①制备两种培养基，将两种培养基各自分成两份，依次标号A、a和B、b。

②，并在25 ℃条件下培养天。

③分别从A、B培养基的菌落中挑取生长良好的菌并分别接种到a、b培养基中，适宜条件下培养3～4天。

(4)请问答：
①本实验中，配制的分离用的培养基成分特点：A、a是培养基，B、b是
培养基，根据上述原理配制的培养基属于__________培养基。

②根据所需目的配制上述培养基时除营养要协调外还应注意。

③实验步骤中第③步的目的是。

④圆褐固氮菌与酵母菌在结构上的主要差异为。

⑤青霉素抑制圆褐固氮菌等细菌的生长繁殖，其作用机理是破坏或抑制其细胞壁的形成。

请据此推测不影响酵母菌等真菌生长繁殖的原因是。

29.有些细菌可分解原油，从而消除由原油泄漏造成的土壤污染。

某同学欲从受原油污染的土壤中筛选出高效降解原油的菌株。

回答问题：
（1）在筛选过程中，应将土壤样品稀释液接种于以为唯一碳源的固体培养基上，从功能上讲，该培养基属于培养基。

（2）纯化菌种时，为了得到单菌落，常采用的接种方法有两种，即和。

（3）为了筛选出高效菌株，可比较单菌落周围分解圈的大小，分解圈大说明该菌株的降解能力。

（4）通常情况下，在微生物培养过程中实验室常用的灭菌方法有灼烧灭菌、和。

无菌技术要求实验操作应在酒精灯附近进行，以避免周围环境中微生物的污染。