载紫杉醇超声微泡造影剂对人肝癌细胞株HepG2增殖影响及诱导凋亡作用研究

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顺铂诱导肝癌细胞凋亡的实验研究

顺铂诱导肝癌细胞凋亡的实验研究细胞凋亡作为生物细胞对内外信号刺激的一种反应，在正常细胞的发育过程中精确调控细胞的死亡过程。

肿瘤的发生与正常的细胞凋亡过程被抑制，破坏了细胞增殖与凋亡之间的平衡有一定关系。

顺铂因其可抑制癌细胞的DNA复制过程，抑制癌细胞分裂，而被广泛应用于临床治疗肿瘤。

我们观察了顺铂对肝癌细胞株HepG2凋亡的诱导作用，从而探讨其作用机制。

1 材料与方法1.1、药品和试剂：RPMI-1640培养基（购自Gibco公司），胎牛血清（coring公司），顺铂（Gibco公司），Annexin-V/PI试剂（Invitrogen公司）。

倒置显微镜（尼康TS100F）流式细胞仪（Beckman Coulter公司）。

1.2 方法1.2.1 细胞系及培养：人肝癌HepG2细胞株引自大连医科大学中心实验室。

用含10%胎牛牛血清、100 u/mL 青霉素、100 mg/L 链霉素的RPMI－1640 培养液, 在37 ℃、5% CO2 条件下作常规悬浮培养，每2-3天换液传代培养。

1.2.2 细胞培养及药物处理：取对数生长期细胞，细胞用0.25%胰蛋白酶消化后,配成5×105/L的细胞悬液分别接种于24孔板中培养，24 h细胞贴壁后，弃上清。

实验组分别加入浓度为200μg/mL，100μg/mL，50μg/mL，25μg/mL，12.5μg/mL的顺铂处理细胞，对照组不加药，另设空白对照组（只有培养基，无细胞），每组设置复孔，全湿条件下，37℃、5% CO2 培养箱中培养。

1.2.3 细胞形态学观察：取对数生长期细胞, 以每孔5×105个接种于6孔板中,24 h细胞贴壁后，弃上清。

分别加入不同浓度顺铂处理细胞，每6 h于倒置显微镜下观察活体细胞形态。

1.2.4 流式细胞仪分析细胞凋亡：实验组，对照组和空白对照组细胞培养24h，48h后用0.25%胰蛋白酶消化，PBS漂洗两次，调整细胞浓度至106/mL，取100μl细胞悬液，加入5μl Annexin－V/FITC 10μl及浓度为50μg/mL的PI液10μl，室温避光孵育15分钟后，加入PBS液400μl，用流式细胞仪进行流式细胞术定量检测。

ERK1／2抑制剂PD98059对肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响

１１材料．
人肝癌细胞株Ｈｐ２细胞（三军医ｅＧ第
大学西南医院）ＤＭ培养基、牛血清、蛋白；ＭＥ小胰酶（ｙｌｅ司）ＭＩ’ＤＯ（ｉａ公司）鼠抗ＨＣｏ公ｎ；ｒ、ＭＳＳｍ，Ｉｇ；
１４Ｍｒ比色法及细胞生长抑制曲线．Ｔ取对数生
人单克隆抗体ＥＫ／ＣｌｉａｎＲ１２（ｅＳｎｌｇ公司）ｌｇｉ；
Ｐ９０９ＣｌＳｇａｎ公司）ＳＤ８５（ｅｉｌｇｌｎｉ；Ｐ免疫组化试剂盒、
ＤＢ显色剂（京中杉生物公司）ＡｕｅｊＶＦＣＡ北；ｒｘ／ｎ＇１ｎ及Ｐ试剂盒（京晶美生物有限公司）倒置显微Ｉ北；
镜（ｌｐｌ公司）ＤＮ９０酶标分析仪（Ｏｙｕｍｓ；Ｍ－２６北京普
通路是一条关键的调节细胞增生和凋亡相关的信号
养板、细胞培养瓶（ｏｎ司）Ｃ细胞培养箱Ｃｍｉｇ公；Ｏ
Ｔｅｍｈｒｏ公司）。
１２细胞培养．
人肝癌细胞株ＨｅＧｐ２细胞用含
转导通路。ＭＥＫ是细胞外信号调节激酶（Ｒ）ＰＥＫ的
ＥＫ）Ｒ能被多种生长因子、胞因子及促分裂剂激细
活，因而ＥＫ信号转导通路在细胞的增殖和分化调Ｒ控中发挥重要作用，多种信号交汇点或共同通ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ 是
路。２００８年８月一０９年６月，２０我们采用免疫

Cdk1在HepG2细胞的表达及活性对肝癌细胞凋亡的影响

Cdk1在HepG2细胞的表达及活性对肝癌细胞凋亡的影响李瑞;郑亚莉;周学兵;王炜【摘要】目的观察Cdk1蛋白表达及其活性对肝癌细胞凋亡的影响.方法克隆Cdk1基因质粒和Cdk1siRNA,并将其转染到肝癌HepG2细胞中,另外应用roscovintine(Cdks的抑制剂)刺激细胞,然后给予紫外线(UV)照射.用Western Blot检测转染的Cdk1蛋白的表达,用核素标记测定其活性;用HO 33342(Hoechst 33342)的免疫荧光染色细胞核判断细胞凋亡的情况.分析Cdk1蛋白表达及活性对肝癌细胞凋亡的影响.结果 Cdk1可以在HepG2良好地表达;Cdk1siRNA可以有效地沉默Cdk1的表达;roscovintine可抑制Cdk1的活性;细胞凋亡率在roscovintine刺激细胞时最高比较Cdk1转染细胞组和Cdk1siRNA转染细胞组(P ＜0.01),在Cdk1转染细胞高于Cdk1siRNA转染细胞组(P＜0.01)和空载体转染细胞组(P＜0.05),在Cdk1siRNA转染细胞最低.结论过度表达Cdk1可以增加肝癌细胞死亡,抑制肝癌的增殖.抑制Cdk1活性可更有效增加肝癌细胞死亡,抑制肝癌的增殖,可望成为研究和探讨肝癌靶点之一.【期刊名称】《宁夏医科大学学报》【年(卷),期】2011(033)006【总页数】5页(P521-524,封4)【关键词】Cdk1;siRNA;细胞凋亡;激酶活性【作者】李瑞;郑亚莉;周学兵;王炜【作者单位】宁夏医科大学,银川750004;宁夏回族自治区第一人民医院,银川750021;宁夏医科大学,银川750004;宁夏回族自治区第一人民医院,银川750021【正文语种】中文【中图分类】R735.7细胞的异常生长和凋亡的减低是导致肿瘤发生发展的重要原因。

肿瘤细胞的失控性快速生长是由于细胞周期异常和细胞凋亡下调引起的。

细胞周期素依赖性蛋白激酶(Cdks)在细胞分裂过程中发挥着重要的作用。

格尔德霉素体外抑制人肝癌细胞株HepG2增殖并促进凋亡

ｍａｎｈｅｐａｔｏｍａｃｅｌｌｌｉｎｅｓＨｅｐＧ２．ＭｅｔｈｏｄｓＨｅｐＧ２ｃｅｌｌｓｗｅｒｅｉｎｃｕｂａｔｅｄｗｉｔｈｄｉｆｆｅｒｅｎｔｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓｏｆｇｅｌ — ｄａｎａｍｙｃｉｎｆｏｒ２４ｔｏ７２ｈｏｕｒｓ．ＣｅｌｌｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｗａｓｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄｂｙＭＴｒａｓｓａｙ．ＣｅｌｌａｐｏｐｔｏｓｉｓｗａｓｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙｆｌｏｗｅｙｔｏｍｅｔｒｙｕｓｉｎｇａｎｎｅｘｉｎＶａｎｄｐｒｏｐｉｄｉｕｍｉｏｄｉｄｅ．ＲｅｓｕｌｔｓＧｅｌｄａｎａｍｙｃｉｎｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔｌｙｉｎｈｉｂｉｔｅｄｔｈｅｐｒｄｉ￣ｒａ — ｔｉｏｎｏｆＨｅｐＧ２ｃｅｌｌｓａｔａｄ０ｓｅ — ｄｅｐｅｎｄｅｎｔｍａｎｎｅｒ．Ｗｈｅｎｃｏｍｐａｒｅｄｔｏｔｈｅｃｏｎｔｒｏｌ，ｔｈｅｃｅｌｌｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｗａｓｉｎｈｉｂｉｔ — ｅｄｂｙ２０－３６％，２９．４５％ａｎｄ４２．５２％，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙａｆｔｅｒ４８ｈｉｎｃｕｂａｔｉｏｎａｔｔｈｅｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｏｆ０．２，０．４ａｎｄ０．８

放疗对人肝癌HepG2细胞凋亡及细胞周期的影响

（１７３Ｐ一００２Ｆ一１７０Ｐ一００８。４Ｆ一．３，．４；．０，．４）Ｇｙ照射剂量作用细胞４ｈ后，ｐ８ＨｅＧ２细胞
中Ｂｘ表达显著上调，Ｂｌ２表达明显降低。４Ｘ线照射后培养６，ａ而ｃ一Ｇｙｈ即可观察到Ｇ／Ｍ
过促进Ｂｘ蛋白表达和抑制Ｂｌａｃ２蛋白的表达来诱导肝癌细胞凋亡。Ｇｙ照射引起的Ｇ。一４期
阻滞释放可能与凋亡水平上调有关。
主题词肝肿瘤，验性／疫学细胞凋亡放射疗法细胞周期＠Ｂｘ蛋白实免ａ
摘要
何探ｐ细胞凋亡及细胞周期的影响。方法：用采
６ＭＶ— 射线照射细胞，取ＤＸ提ＮＡ进行琼脂糖凝胶电泳，察细胞发生凋亡的情况，观并采用免疫组织化学染色观察人肝癌细胞株中Ｂｘ和Ｂｌａｃ一２蛋白的表达。同时观察细胞周期改变
ｃｌｌｅ．ｅｈｄｅｌｉｎＭｔｏｓ：ｈｐｔｍａｃｌｌｅ（ｐ）ｗａｒａｉｔｄｗｉｈ６ＶｒｙｉｉｅｅｔｄｓｓｉｉｏｅａｏｅｌｉｎＨｅＧ２ｓｉｄａｅｔＭｒＸ— ａｎｄｆｒｎｏｅｎｖｔ．ｆｒＡｐｐｏｉｏｔｓｓｗａｉｅｔｉｄｂｈｃａｓｃｌ “ ａｄｒａｔｒ（ｌｏｕｌｏｏ — ｉｅｆａｍｅｔ）ｉＤＮＡｓｄｎｉｅｙｔｅｌｓｉａｆｌｄｅ ”ｐｔｅｎｏｉｎｃｅｓｍｅｓｚｄｒｇｎｓｎｇ

维康醇对肝癌细胞增殖抑制和诱导凋亡的作用

维康醇对肝癌细胞增殖抑制和诱导凋亡的作用王艳丽;朱晓琳;段丽丽;陈杰鹏;牛哲峰;曲迎春;丛培芳;李岭;张美侠【摘要】目的研究维康醇对肝癌细胞增殖、细胞周期和细胞凋亡作用的影响.方法以不同浓度维康醇处理对数生长期人肝癌细胞HepG2,利用MTT法测定维康醇对细胞的增殖抑制作用,流式细胞仪PI单染检测细胞周期分布情况的改变,流式细胞仪Annexin V-FITC/PI双标记法检测细胞凋亡率. 结果 MTT结果显示:维康醇对HepG2细胞具有明显的生长抑制作用并呈浓度和时间依赖性.流式细胞术结果显示:30 μmol/L维康醇作用于HepG2细胞48 h后,处于G2/M期的细胞比例显著升高,同时伴随G1/G0期细胞比例下降,与对照组相比差异有统计学意义(P＜ 0.05). Annexin V-FITC/PI染色检测结果显示:30 μmol/L维康醇作用于HepG2细胞48 h后,细胞凋亡率显著升高,与对照组相比差异有统计学意义(P＜0.05).结论维康醇对肝癌细胞有明显的增殖抑制作用,并具有浓度和时间依赖性;维康醇通过引起细胞周期阻滞、诱导细胞凋亡发挥其抗肝癌作用.【期刊名称】《中国医科大学学报》【年(卷),期】2013(042)011【总页数】4页(P999-1002)【关键词】维康醇;肝癌;凋亡;细胞周期【作者】王艳丽;朱晓琳;段丽丽;陈杰鹏;牛哲峰;曲迎春;丛培芳;李岭;张美侠【作者单位】中国医科大学药学院临床药理教研室,沈阳110001;中国医科大学药学院临床药理教研室,沈阳110001;广东汕头保税区双骏生物科技有限公司应用生物技术研究所,广东汕头515071;广东汕头保税区双骏生物科技有限公司应用生物技术研究所,广东汕头515071;中国医科大学药学院临床药理教研室,沈阳110001;中国医科大学药学院临床药理教研室,沈阳110001;中国医科大学药学院临床药理教研室,沈阳110001;四川大学生命科学学院遗传医学研究所,成都610041;中国医科大学药学院临床药理教研室,沈阳110001【正文语种】中文【中图分类】R966肝细胞性肝癌（hepatocellular carcinoma，HCC）是严重威胁人类健康的恶性肿瘤之一，其发病率居全球恶性肿瘤的第6位，死亡率居第3位［1］，5年生存率＆lt;5%［2］。

NS-398诱导肝癌细胞HepG2凋亡的作用机制

等量的培养液，酶标仪上用５０ｎ测定吸光值在７ｍ（。按下式计算药物对肿瘤细胞生长的抑制率：Ａ）肿瘤细胞生长抑制率（Ｒ）＝（一验组Ａ值／胞Ｉ１实细对照组Ａ值）×１０。以药物浓度为横轴，制率０％抑为纵轴，出生长抑制曲线。绘
位细胞凋亡检测法观察细胞凋亡形态学变化；疫细胞化学免分析ＣＸ２ｃＡ一、ＩＰ、ｕｖｉ蛋白变化。结果Ｎ、ＩＰ１抗体购于英国Ａｃｍ公司；位末ＩＰｃＡ一ｂａ原端凋亡检测试剂盒（ＵＥ）于美国Ｐｏｅａ公ＴＮＬ购ｒｍｇ司；Ｐ免疫组化检测试剂盒购于北京中衫金桥生物ｓ
有限公司；ＩＰ试剂盒购于南京凯基生物科技发展有
限公司。
３８对Ｈｐ２细胞株有增殖抑制作用，９ｅＧ流式细胞仪检测用药组凋亡率明显高于对照组。ＴＮＬ染色可见典型的凋亡形ＵＥ态学特征。免疫细胞化学分析表明使用Ｎ一９Ｓ３８后，Ｏ一、ＣＸ２ｃＡ一、ＩＰＳｒｉｉ白表达降低。结论ＩＰ１ＸＡ、ｕｖｖｎ蛋ＣＸ２选择性Ｏ一
１３细胞系．
研究所。１４实验方法．
抑制剂Ｎ一９Ｓ３８对人肝癌细胞株Ｈｐ２有诱导凋亡作用，ｅＧ其机制可能通过抑制ＣＸ２下调ｃＡ一、ＩＰＳｒｉｉＯ一，ＩＰ１ＸＡ、ｕｖｖｎ的表

扶正抑瘤方干预肝癌细胞株HepG2增殖和凋亡的实验研究

胞株。观察中药复方对肝癌细胞的增殖和凋亡的
主动脉取血，００ｒｍ离心１ｎ分离血清，．３０ｐ５ｍｉ，０２２
ａ抽滤除菌，６ｍ５ ℃灭活３ｉ，２ｑ保存备用。０ｍｎ一０Ｃ１４２人肝癌细胞株Ｈｐ２的培养及含药血清．．ｅＧ的干预方法采用含有１ｏｍＬＬ胎牛血清， × ｏ／ｌ
ｍ的Ｍｒ２Ｌ继续培养４ｈ弃上清，入ｌｏＬＴ０，，加ｏ
福建中医学院学报２１年８月第２卷００Ｏ
第４期
ＪｕｎｌｆＦｊｎＵｎｖｒｔｆｏｒａｏｕｉｉｅｓｙｏａｉＴＣＭｇｓ２１，０４Ａｕｕｔ００２（）
・
实验研究・
扶正抑瘤方干预肝癌细胞株ＨｐｅＧ２增殖和凋亡的实验研究
值明显降低（＜００）Ｓ期细胞含量明显减少（＜０Ｏ）ＡｎｘｎＶ＋Ｐ一Ｐ．５，Ｐ．１，ｎｅｉ／Ｉ区域和Ａｎｘ／ＩｎｅｉＶＰ区ｎ
域细胞含量不同程度增多（＜Ｏ０Ｐ．５或Ｐ．１，＜００）以高剂量舍药血清组作用最为明显。
抑瘤方含药血清通过干扰肝癌细胞株ＨｅＧ２Ｓ的合成有效抑制肝癌细胞的生长，ｐ期同时诱导肝癌细胞株ＨｅＧｐ２的早期和晚期凋亡，除增殖过度的肝癌细胞。清

超声微泡造影剂介导mir-199a转染人肝癌HepG2细胞的实验研究

ＳｏｕｔｈｅｒｎＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ５１０２８０，Ｃｈｉｎａ
Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇａｕｔｈｏｒ：ＱＵＡＮＸｉｏｎ一），ｌ
比色鉴定微泡造影剂对细胞的影响程度。结果：ＳＦ６浓度＜１０％时，微泡均不会引起明显的细胞死亡（细胞
存活率＞８０％），３微泡造影剂浓度达２－＂０％时，对细胞的杀伤力明显增强（细胞存活率＜６５％）；通过４组平
Ｅ — ｍａｉｌ：ｑｕａｎｘｉａｎｙｕｅ＠１６３．ｃｏｎ
ＭｅｔｈｏｄｓＭｉｃｒｏｂｕｂｂｌｅ
【Ａｂｓｔｒａｃｔ】ＯｂｊｅｃｔｉｖｅＴｏｅｘｐｌｏｒｅｔｈｅｅｉｆｃｉｅｎｃｙａｎｄｓｔａｂｉｌｉｔｙｏｆｔｈｅｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎｏｆｍｉＲＮＡ一１９９ａｉｎｔｏ
ｍｉｃｒｏｂｕｂｂｌｅｕｌｔｒａｓｏｕｎｄｃｏｎｔｒａｓｔａｇｅｎｔＧＵＯＸｉｎ — ａｒｉｎ，ＲＵＡＮＬｉ，ｐ蚴 Ⅳ Ｘｉａｎ — ｙｕｅ．￥ＺｈｕｊｉａｎｇＨｏｓｐｉｔａｌ，
声造影剂六氟化硫微泡（ＳＦ６）介导ｍｉＲＮＡ一１９９ａ在人肝癌ＨｅｐＧ２细胞中的转染率。将待转染的细胞分为以下５组：质粒组；质粒＋超声组（４亚组）；质粒＋超声＋ＳＦ６组；质粒＋脂质体组；空白对照组。通过ＭＴＹ

重组TRAIL对2种不同癌株凋亡效应的研究

实用临床医学２１０２年第１３卷第６期
Ｐａ￣ａＣｉｉａＭｅｉｎ，０２Ｖｌ３Ｎｏ６ｒｃｃｌｌｃｌｄｃｅ２１，ｏ，ｎｉ１
・
５・
重组ＴＡＩＲＬ对２种不同癌株凋亡效应的研究
王正兵贾筱琴。
Ｐａｔａｌｉｌｄｉｅ２１．ｌ３Ｎｏ６ｒｃｃｌｉｃＭｅ￣ｎ．０２Ｖｏ１．ｉＣｎａ
１．检测方法２
数明显高于ＰＳ对照组，异有统计学意义（＜Ｂ差Ｐ
００）见封三图２重组ＴＡＬ处理的ＨＬ颈癌．５，；ＲＩｅａ宫
ｃｌｉｏ（ｈｂｔａ，ｌ）ｂｔａｏｏｖｏｓｅｅｔｎｔｅｐｏｉｒｔｎｏｅａｃｌ．ｏ．ｅｓｎｖｒｉｉｉｒｒｔ３％，ｕｄｎｂｉｕｆｃｏｒｆａｉｆＬｅｓＣｌ
细胞诱导凋亡作用及对肝癌生长的抑制作用［。本３２
研究继续观察重组ＴＡＬ对７０ＲＩ４２肝癌细胞和Ｈｅａ宫颈癌细胞的抑制活性。Ｌ
收稿日期：０２０ — ４２１— ３１
凋亡检测试剂盒（ｅｄｒｕｔａ，ＡＳａｂｒＢｎｅ，ｓ）ＦＣＣｌｕ流式Ａｒｉｉ细胞仪（国Ｂ美Ｄ公司）ｃｌｕｓ软件（Ｄ公司，，ｅｑｅｔｌＢ用于获取和分析数据）其他试剂均为国产分析纯。，

靶向线粒体的mt-roGFP2荧光探针检测人肝癌HepG2细胞线粒体ROS水平动态变化

靶向线粒体的mt-roGFP2荧光探针检测人肝癌HepG2细胞线粒体ROS水平动态变化刘晓宁;薄惠;刘翠娥【摘要】目的通过靶向线粒体的氧化还原敏感绿色荧光蛋白探针(mt-roGFP2荧光探针)检测人肝癌HepG2细胞(以下称HepG2细胞)线粒体活性氧(ROS)水平动态变化,旨在为以线粒体ROS为靶标的肝癌化疗奠定基础.方法采用无缝克隆技术构建pLenti-CMV-mt-roGFP2-PGK-puro慢病毒载体并测序鉴定.将慢病毒载体pLenti-CMV-mt-roGFP2-PGK-puro与包装质粒pVSVg、pRev和pGag-Pol共转染人肾上皮293T细胞,获得mt-roGFP2慢病毒颗粒,并检测病毒滴度.将制备好的mt-roGFP2慢病毒颗粒感染HepG2细胞,通过荧光显微镜和Western blotting法鉴定观察HepG2细胞roGFP表达情况.将对数生长期稳定表达mt-roGFP2的HepG2细胞(HepG2-mtroGFP2细胞)与MitoTracker线粒体荧光探针共温育,采用激光共聚焦显微镜观察mt-roGFP2荧光探针的亚细胞定位.取对数生长期HepG2-mt-roGFP2细胞先后经0.5 mmol/L过氧化氢(H2O2)和1 mmol/L二硫苏糖醇(DTT)处理,采用尼康A1R激光扫描共聚焦显微镜拍摄同一细胞,Image J软件分析荧光图片.结果成功构建pLenti-CMV-mt-roGFP2-PGK-puro慢病毒载体.制备的mt-roGFP2慢病毒平均滴度为4.04×108 IU/mL.mt-roGFP2荧光探针稳定表达在HepG2细胞中,并正确靶向HepG2细胞线粒体,成功构建HepG2-mt-roGFP2细胞.外源性氧化剂H2O2的加入可导致HepG2-mt-roGFP2细胞线粒体ROS水平明显升高,其荧光比值(405 nm/488 nm)从1.19上升到3.98,加入还原剂DTT可使其荧光比值下降至1.25.结论靶向线粒体的mt-roGFP2荧光探针能够实时动态、可逆地检测HepG2细胞线粒体ROS水平变化并实时成像.%Objective To detect the dynamic changes of mitochondrialROS in human hepatoblastoma HepG2 cell line(hereafter called HepG2 cells) by mitochondria-targeted mt-roGFP2 biosensor, and to lay the foundation for the chemotherapy of liver cancer targeting mitochondrial ROS. Methods The lentivirus vector pLenti-CMV-mt-roGFP2-PGK-puro was constructed by seamless cloning technology, and was identified by DNA sequencing. The lentivirus mt-roGFP2 was prepared by co-transfecting the human embryonic kideny 293T cells with the lentivirus vector pLenti-CMV-mt-roGFP2-PGKpuro and packaging plasmids pVSVg, pRev, and pGag-Pol, and then its virus titer was tested. The expression of roGFP in the HepG2 cells infected by the prepared mt-roGFP2 lentivirus particles was analyzed through fluorescence microscope and Western blotting. The HepG2 cells expressing mt-roGFP2 (HepG2-mt-roGFP2 cells) in logarithmic growth phase were incubated with MitoTracker probe, and then the subcellular localization of mt-roGFP2 biosensor was investigated by confocal laser scanning microscopy. The HepG2-mt-roGFP2 cells in the logarithmic growth phase treated with 0. 5 mmol/L H2O2 and 1 mmol/L DTT were imaged by using Nikon A1R confocal laser scanning system, and the fluorescence images were exported to Image J software. Results The lentivirus vector pLenti-CMV-mt-roGFP2-PGK-puro was successfully constructed. The mean titer of mt-roGFP2 was 4. 04 × 108 IU/mL. roGFP biosencor was stably expressed in the HepG2 cells and correctly targeted to mitochondria, indicating the successful construction of HepG2-mt-roGFP2 cells. The addition of exogenous oxidant H2O2 led to a significant increase of mitochondrial ROS in the HepG2-mt-roGFP2 cells, with the 405nm/488 nm fluorescence ratios ranging from 1. 19 to 3. 98, and the injection of reductant DTT declined the fluorescence ratio to 1. 25. Conclusion The mitochondria-targeted mt-roGFP2 biosensor can real-time and reversibly detect the changes of mitochondrial ROS in the HepG2 cells and display the real-time imaging.【期刊名称】《山东医药》【年(卷),期】2018(058)008【总页数】4页(P14-17)【关键词】肝癌;HepG2细胞;活性氧;线粒体;靶向线粒体的氧化还原敏感绿色荧光蛋白探针【作者】刘晓宁;薄惠;刘翠娥【作者单位】黄河科技学院医学院,郑州 450063;黄河科技学院医学院,郑州450063;黄河科技学院医学院,郑州 450063【正文语种】中文【中图分类】R735.7活性氧(ROS)是生物体内需氧细胞在代谢过程中产生的一系列衍生物，包括等。

22992383_落地生根冻干粉对人癌细胞增殖和细胞凋亡的影响

0引言肿瘤的治疗到目前为止还没有十分令人满意的方法，采用手术、化疗和放疗等方法尽管有一定疗效，但常常对机体产生严重的毒副作用.近年来，中医药在癌症的治疗中已经起着不可忽视的作用.许多中药具有抗肿瘤[1-3]的作用，毒性小于化疗药物，对正常组织细胞伤害小，与化疗药合用具有减毒增效的作用[4].落地生根（Bryophyllum pin ‐natum （L.f.）Oken ）是景天科（Crassulaceae ）落地生根属（Bryophllurn Salisb ）的一种多年生草本植物，在民间又有土三七、叶生根、花蝴蝶、番鬼牡丹或者天灯笼等别名[5].落地生根原产于非洲，现在我国多地区均有栽培，集中分布在云南、福建、台湾及两广地区，主要用于园艺观赏.落地生根价格低廉且易于栽培，全年均可采摘，全草可入药，性酸，苦，寒，归经肺、肾经，具有凉血、解毒消肿、拔毒生肌等功效，民间常用于止刀伤出血、咽喉肿痛、疔疮、溃疡或者中耳炎等[6].药理学研究发现，落地生根具有止血、镇痛、抗炎[7-8]、抗免疫[9]、抑菌[10-11]、抗氧化[12]等药理作用，但其抗肿瘤作用鲜有报道.广西是中草药资源大省，落地生根资源丰富，本课题通过研究落地生根冻干粉对肝癌HepG2细胞、人脑胶质瘤U87细胞和前列腺癌DU145细胞增殖的影响，初步筛选对落地生根敏感的肿瘤细胞，为进一步研究落地生根抗肿瘤作用提供初步实验依据.1材料1.1细胞人肝癌HepG2细胞购于中科院细胞库；人脑胶质瘤U87细胞株和人前列腺癌DU145细胞购于武汉博士德生物工程有限公司.1.2实验试剂与药品DMEM 培养基、RPMI-1640培养基、PBS 、胎牛血清（FBS ）、链霉素和青霉素（PS ）、胰酶均购于上海双洳生物科技有限公司；CCK-8试剂盒和落地生根冻干粉对人癌细胞增殖和细胞凋亡的影响王雪纯，曹旭梅，陆莹，陈丽*（广西科技大学医学部，广西柳州545006）摘要：为初步研究落地生根冻干粉（BPFP ）对人癌细胞增殖的影响，应用CCK-8实验检测不同质量浓度BPFP对人肝癌HepG2细胞、人脑胶质瘤U87细胞和人前列腺癌DU145细胞增殖的影响；用Hoechst 凋亡试剂盒检测不同质量浓度BPFP 对细胞凋亡的影响.实验结果显示：BPFP 对HepG2、U87和DU145细胞生长均有一定的抑制作用；BPFP 作用48h 对HepG2细胞增殖抑制作用明显，抑制率在82%以上，其抑制程度与时间呈依赖性，但与剂量不呈依赖性；质量浓度为150μg/mL 以上作用48h 对U87细胞增殖抑制明显，增殖抑制率大于80%；质量浓度为250μg/mL 作用48h 对DU145增殖抑制作用最强，达到100%.BPFP 作用24h 对HepG2、U87和DU145细胞凋亡均有一定的促进作用.实验结果提示，BPFP 对HepG2、U87和DU145细胞的增殖有抑制作用，可能与BPFP 能促进细胞凋亡有关.关键词：落地生根冻干粉；细胞增殖；细胞凋亡；人肝癌HepG2细胞；人脑胶质瘤U87细胞；人前列腺癌DU145细胞中图分类号：TQ460.7；R285.5DOI ：10.16375/45-1395/t.2021.01.002收稿日期：2020-07-09基金项目：2019年国家级大学生创新创业计划项目（201910594042）；广西自然科学基金项目（2016GXNSFBA380080）资助.*通信作者：陈丽，硕士，副教授，研究方向：天然药物抗肿瘤有效成分筛选及机制研究，E-mail ：******************.第32卷第1期2021年3月广西科技大学学报JOURNAL OF GUANGXI UNIVERSITY OF SCIENCE AND TECHNOLOGYVol.32No.1Mar.2021第1期Hoechst凋亡试剂盒购于上海碧云天生物科技有限公司.落地生根：采自广西壮族自治区柳州市市郊，经广西科技大学医学部天然药物教研室陈君副教授鉴定为景天科（Crassulaceae）落地生根属（Bryo‐phllurn Salisb）落地生根（Bryophyllum pinnatum（L.f.）Oken）.落地生根冻干粉[13]及储备液配制：收集新鲜落地生根500g，洗净晾干后用榨汁机榨汁，汁液冷冻干燥后得冻干粉（BPFP）3.25g.用培养基溶解制成10mg/mL（相当于生药量1538.46mg/mL）的储备液，用时用培养基稀释至所需质量浓度.1.3仪器设备超净工作台（SW-CJ-2FD，苏州净化设备有限公司）；CO2恒温细胞培养箱（144415-20371，美国Thermo公司）；荧光倒置显微镜（TS2-FL ECLIPSE，日本尼康株氏会社）；全波长扫描酶标板（Multiskan GO，美国Thermo公司）；立式高压灭菌器（LDZF-50L-Ⅱ，上海申安医疗器械厂）.2方法2.1细胞体外培养HepG2细胞培养在含10%的胎牛血清、100U/mL链霉素和青霉素的DMEM完全培养基中；U87、DU145细胞分别培养在含10%的胎牛血清+100U/mL链霉素和青霉素的RPMI-1640完全培养基中.细胞置于37℃、5%CO2恒温细胞培养箱中培养，待细胞处于指数增长期且融合度达到80%~90%时，可进行实验操作.2.2CCK-8法[14]检测BPFP对HepG2、U87、DU145细胞增殖的影响分别将对数生长期的HepG2、U87、DU145细胞，按每孔5000~7000个细胞接种于96孔培养板中，每组设4个复孔.待细胞贴壁后，分别用50μg/mL、100μg/mL、150μg/mL、200μg/mL、250μg/mL（分别相当于生药量7.69μg/mL、15.38μg/mL、23.08μg/mL、30.77μg/mL、38.46mg/mL）的BPFP处理24h、48h和72h，然后每孔加入10μL CCK-8试剂培养2h，用酶标仪在450nm处测定OD值，按照式（1）计算BPFP对细胞生长的抑制率.实验重复3次.（1）2.3Hoechst33258染色法[15]检BPFP对HepG2、U87、DU145细胞凋亡的影响为了研究BPFP影响人癌细胞的增殖是否与细胞的凋亡有关，进行了细胞凋亡实验.将对数生长期的HepG2、U87和DU145细胞，按每孔约5000个细胞接种于24孔板，细胞贴壁后分别用50μg/mL、100μg/mL、150μg/mL、200μg/mL、250μg/mL的BPFP处理24h，吸出培养基，按照Hoechst凋亡试剂盒说明操作，每孔加入200μL固定液，固定10min，吸弃固定液，用PBS洗去固定液，避光加入Hoechst33258染色5min，吸弃染色液，用PBS 洗去Hoechst33258，加入1mL PBS，在荧光倒置显微镜下观察细胞凋亡情况.2.4数据处理所有数据均以“均数±标准差”表示，采用SPSS22.0统计软件进行数据处理分析，两组间差异比较采用t检验；采用GraphPad Prism6.0软件进行实验图片处理.3结果3.1BPFP对肝癌HepG2细胞的影响3.1.1BPFP对HepG2细胞增殖的影响图1是不同质量浓度的BPFP分别在24h、48h和72h对HepG2细胞增殖的影响结果.从图1中所显示的数据可看出，各质量浓度BPFP对HepG2作用24h时，细胞生长被抑制，但抑制程度不明显；在作用48h后，各质量浓度BPFP都能明显抑制HepG2细胞生长，但其抑制程度与时间、剂量不呈依赖性.3.1.2BPFP对HepG2细胞凋亡的影响图2是HepG2细胞给予BPFP24h后加入Hoechst33258染色在荧光倒置显微镜下所观察到的结果.Hoechst33258染色后，活细胞形态为圆形或椭圆形的正常蓝色；而凋亡细胞因染色质固缩，其细胞核会呈致密浓染，颜色为亮蓝色.从图2可见，被固定住的细胞都已染色，与空白对照组（0μg/mL）比较，不同质量浓度BPFP处理后的HepG2细胞均不同程度出现亮蓝色荧光，且BPFP 质量浓度越高，蓝色荧光越多且越明显，这提示细胞生长抑制率=对照组OD-实验组OD对照组OD-空白组OD×100%王雪纯等：落地生根冻干粉对人癌细胞增殖和细胞凋亡的影响13第32卷广西科技大学学报3.2BPFP 对人脑胶质瘤U87细胞增殖的影响3.2.1BPFP 对U87细胞增殖的影响图3是不同质量浓度的BPFP 分别处理U87细胞24h 、48h 和72h 后细胞的生长抑制结果.由图3可见，在给药24h 内，BPFP 对U87细胞增殖抑制程度与作用剂量和时间呈依赖性；但在50μg/mL 时在不同时间点对细胞的生长抑制作用都不明显；在100μg/mL 作用72h 和150μg/mL 以上浓度作用48h 时对U87细胞增殖抑制作用明显增强，抑制率达80%以上，250μg/mL 作用72h 抑制率更是达到了100%.3.2.2BPFP 对U87细胞凋亡的影响图4是U87细胞给药24h 后经Hoechst 33258染色在荧光倒置显微镜下观察细胞的结果.随着BPFP 质量浓度的增加，观察到了更多细胞的染色质浓缩、核碎裂和凋亡小体，说明细胞凋亡与质量浓度呈依赖性.3.3BPFP 对前列腺癌DU145细胞增殖的影响3.3.1BPFP 对DU145细胞增殖的影响图5是不同质量浓度的BPFP 处理DU145细胞24h 、48h 和72h 后细胞的生长抑制结果.由图5可见，BPFP 对DU145细胞增殖抑制作用不具有时间图1不同质量浓度BPFP 对人肝癌HepG2细胞增殖的影响Fig.1Anti-proliferation activity of BPFP against HepG2cells图2不同质量浓度BPFP 对HepG2细胞凋亡的影响（200×）Fig.2Induction of apoptosis in HepG2cells by BPFP （200×）BPFP 抑制HepG2细胞增殖可能与其促进细胞凋亡有关.14第1期依赖性，但对剂量具有一定依赖性.200μg/mL 以下质量浓度的BPFP 对细胞增殖的抑制作用都不明显，但质量浓度达到250μg/mL 时对DU145细胞有明显的抑制作用，作用48h 后对DU145细胞生长的抑制率达到了100%.3.3.2BPFP 对DU145细胞凋亡的影响图6是DU145细胞经BPFP 处理24h 并经Hoechst 33258染色后在荧光倒置显微镜下观察的结果.BPFP 在质量浓度200μg/mL 以下观察到的凋亡细胞非常少，但质量浓度在250μg/mL 时亮蓝色荧光明显增强增多，说明凋亡细胞增多.4讨论与结论通过实验发现，BPFP 对HepG2、U87和DU 145细胞的增殖具有不同程度的抑制作用：不同质量浓度的BPFP 处理HepG2细胞48h 后能够明显抑制细胞增殖，平均抑制率为87.33%；BPFP 质量浓度为150μg/mL 及以上作用48h 后对U87细胞增殖抑制作用明显增强，平均抑制率达83.19%；BPFP 质量浓度为250μg/mL 作用DU145细胞48h 后增殖抑制作用达到100%.实验结果表明，落地生根具有抗肿瘤作用，可作为抗肿瘤药物进一步开发和研究.图3不同质量浓度BPFP 对人脑胶质瘤U87细胞增殖的影响Fig.3Anti-proliferation activity of BPFP against U87cells图4不同质量浓度BPFP 对U87细胞凋亡的影响（200×）Fig.4Induction of apoptosis in U87cells by BPFP （200×）王雪纯等：落地生根冻干粉对人癌细胞增殖和细胞凋亡的影响15第32卷广西科技大学学报细胞凋亡是真核细胞重要的生物学现象，在肿瘤治疗中，诱导肿瘤细胞凋亡是重要的治疗策略[16].细胞发生凋亡时，最先改变的是体积缩小，连接消失，胞质密度增加，线粒体膜电位降低，通透性增加，细胞色素C 释放到胞浆，核质浓缩，核膜核仁破碎，DNA 降解为片段，形成凋亡小体[17]，最后被巨噬细胞吞噬.为了解BPFP 抑制肿瘤细胞增殖的作用是否与细胞凋亡有关，本课题用Hoechst33258染色法观察了BPFP 处理3种细胞24h 后的染色情况.Hoechst 33258是一种可以穿透细胞膜的蓝色荧光染料，用于细胞核染色.BPFP 处理3种癌细胞24h 后用Hoechst33258染色，都能不同程度观察到浓缩的核质及凋亡小体，细胞凋亡趋势与细胞增殖抑制率趋势一致.实验结果表明，落地生根能通过促进细胞凋亡而产生抗肿瘤的作用.综上所述，落地生根对HepG2和DU145细胞的增殖抑制作用更为明显，具有潜在的抗肝癌和前列腺癌的作用，可能与BPFP 促进了细胞凋亡有关.下一步，课题组将对落地生根抗肿瘤作用的有效成分进行筛选，对落地生根促进肿瘤细胞凋亡的机制作进一步的研究，同时寻找落地生根对敏感肿瘤细胞的共同作用靶点.图5不同质量浓度BPFP 对人前列腺癌DU145细胞增殖的影响Fig.5Anti-proliferation activity of BPFP against DU145cells图6不同质量浓度BPFP 对DU145细胞凋亡的影响（200×）Fig.6Induction of apoptosis in DU145cells by BPFP （200×）16第1期参考文献[1]ALMOSNID N M，ZHOU X L，JIANG L H，et al.Evaluation of extracts prepared from16plants used inYao ethnomedicine as potential anticancer agents[J].Jour‐nal of Ethnopharmacology，2018，211：224-234.[2]丁华杰，叶云，高强，等.白藜芦醇处理乳腺癌细胞基因表达通路分析[J].广西科技大学学报，2019，30（2）：79-85，92.[3]刘亚娜，王朴，杨映娟.分心木乙醇提取物对人结肠癌HCT116细胞增殖、凋亡和迁移的影响[J].中国细胞生物学学报，2020，42（7）：1163-1170.[4]陈丽，张斌，张艺，等.环磷酰胺联合柿叶乙酸乙酯部位对H22小鼠瘤组织抗氧化能力及Bcl-2，Bax蛋白表达的影响[J].中国实验方剂学杂志，2015，21（15）：120-123.[5]宋立人.中华本草：9卷[M].上海：科学技术出版社，1999.[6]江苏新医学院．中药大辞典：下册[M].上海：上海人民出版社，1977.[7]谢珍连，甘广玉，罗爱月，等.大驳骨和落地生根及其配伍抗炎镇痛的实验研究[J].中国医院药学杂志，2018，38（17）：1792-1795.[8]HANDIQUE C，DUTTA A，LAHKAR M.Evaluationof the antinociceptive potential of ethanolic extract ofleaves of Bryophyllum pinnatum in experimental animals[J].International Journal of Basic&Clinical Pharmacol‐ogy，2015，4（2）：337-341.DOI：10.5455/2319-2003.IJBCP20150436.[9]杨志杰，樊星花，梁宇红.落地生根水提物对H22肝癌小鼠免疫功能的影响分析[J].医药前沿，2019，9（32）：206-208.[10]NNAOMA I E，NNOROM C M，OZURUMBA A，etal.Antimicrobial activity and phytochemical constituentsof methanolic extract of Bryophyllum pinnatum stem bark[J].Journal of Chemical and Pharmaceutical Research，2019，11（4）：60-64.[11]AKINNIBOSUN F I，EDIONWE O.Evaluation of thephytochemical and antimicrobial potential of the leaf ex‐tracts of Bryophyllum pinnatum L.and Citrus aurantifo‐lia Sw.and their synergy[J].Journal of Applied Sciencesand Environmental Management，2016，19（4）：611-619.[12]TATSIMO S J N，TAMOKOU J D，HA VYARIMANAL，et al.Antimicrobial and antioxidant activity ofkaempferol rhamnoside derivatives from Bryophyllumpinnatum[J].BMC Research Notes，2012，5（1）：158.[13]陈颖，伍善广，叶娟，等.α-细辛脑长循环脂质体冻干工艺的研究[J].广西科技大学学报，2018，29（4）：54-58.[14]唐加峰，张滔，黄世莹，等.高三尖杉酯碱对人黑色素瘤A375细胞增殖的影响及机制研究[J].中国药理学通报，2020，36（8）：1100-1105.[15]胡杰，李继鹏，田维娟.雷公藤红素联合顺铂对人急性髓系白血病HL-60细胞增殖、凋亡及侵袭能力的影响[J].中国临床药理学杂志，2020，36（6）：658-660. [16]赵轶峰.miR-433靶向JNK1促进细胞凋亡抑制胃癌细胞增殖和迁移的实验研究[D].天津：天津医科大学，2019.[17]苑辉卿，刘奇迹.医学细胞分子生物学实验[M].3版.北京：科学出版社，2018.The effect of Bryophyllumpinnatum freeze-dried powder on humancancer cell lines proliferationWANG Xuechun,CAO Xumei,LU Ying,CHEN Li*（Medical School,Guangxi University of Science and Technology,Liuzhou545006,China）Abstract:In order to study the effect of Bryophyllumpinnatum freeze-dried powder（BPFP）on the proliferation of human cancer cell lines,CCK-8assay was used to detect the effect of different concentrations of BPFP on the anti-proliferation activity of human cancer cell lines HepG2（liver）U87（glioma）,DU145（prostate）,and Hoechst apoptosis kit was used to detect the effect of BPFP on apoptosis.The experimental results showed that the growth of HepG2,U87and DU145cells were inhibited by BPFP,and the inhibition rate on HepG2was more than82%after48h treatment.The BPFP inhibited the proliferation of HepG2with a dose but not time dependent manner.The inhibition rate on U87was more than80%after48h treatment when the concentration was above150μg/mL after48h treatment.At the concentration of250μg/mL for48h,the inhibition of DU145proliferation王雪纯等：落地生根冻干粉对人癌细胞增殖和细胞凋亡的影响17第32卷广西科技大学学报was the strongest,reaching 100%.The BPFP can induce the apoptosis of HepG2,U87and DU145cells to a certain extent at 24h.The experimental results demonstrated that BPFP can inhibit the proliferation of HepG2,U87and DU145cell lines,which may be related to the fact that BPFP can induce cell apoptosis.Key words :Bryophyllumpinnatum freeze-dried powder （BPFP ）;cell proliferation;apoptosis;human liver cancer HepG2cells;human glioma U87cells;human prostate cancer DU145cells（责任编辑：黎娅）Numerical simulation of flow field characteristics of Helmholtzself-oscillating cavitation deviceWANG Tianyu 1,2,LI Xing 1,2,ZHANG Kunming 1,2,HUANG Yongchun *1,2,YANG Feng 1,2,HUANG Chengdu 1,2（1.Guangxi Key Laboratory of Green Processing of Sugar Resources （Guangxi University of Science and Technology ）,Liuzhou 545006,China;2.School of Biological and Chemical Engineering,Guangxi Universityof Science and Technology,Liuzhou 545006,China ）Abstract :In order to obtain the flow field characteristics of Helmholtz self-oscillating cavitation device,the large eddy model （LES ）and mixture model were utilized to simulate the flow field characteristics with the commercial software Fluent.The cavitation number,the distribution of vapor bubble fraction and the oscillation curve of velocity and pressure in the cavitation region were computed by studying the effect of different operating conditions and structure,and the results were compared with the orifice plate and Venturi tube.The simulation results show when the outlet pressure is constant,the cavitation effect can be improved by increasing the inlet pressure;and the cavitation effect is obviously affected by the construction of the cavitation equipment,except for that under the same conditions,the velocity and pressure curves of orifice plate and Venturi tube are relatively stable,so the cavitation effect is relatively weak,while the organ tube will form strong pressure and velocity oscillation,which makes the cavitation effect of self-oscillation cavitation the best among them.Key words :Helmholtz;self-resonating cavitation device;flow field characteristics;numerical simulation（责任编辑：黎娅）（上接第11页）18。

Src蛋白在肝癌HepG2细胞增殖凋亡中作用的初步研究

Src蛋白在肝癌HepG2细胞增殖凋亡中作用的初步研究毛成毅;郑继军;杜娟;马瑜;林俐;李增鹏;陈芳【摘要】目的研究Src蛋白在人肝癌细胞株HepG2细胞增殖凋亡过程中的作用.方法应用Src蛋白酪氨酸激酶抑制剂PP2不同浓度处理HepG2细胞前后,使用免疫组化、流式细胞术、MTT法检测Src蛋白的表达以及HepG2细胞增殖和凋亡情况.结果 Src蛋白在HepG2细胞中高表达,用不同浓度PP2处理HepG2细胞后,能够显著抑制肝癌HepG2细胞的增殖,增加凋亡.结论 Src蛋白在人肝癌细胞株HepG2细胞的增殖凋亡过程中起着重要作用.【期刊名称】《重庆医学》【年(卷),期】2010(039)001【总页数】3页(P19-20,23)【关键词】肝癌;Src蛋白;细胞增殖【作者】毛成毅;郑继军;杜娟;马瑜;林俐;李增鹏;陈芳【作者单位】第三军医大学大坪医院野战外科研究所,病理科,重庆,400042;第三军医大学大坪医院野战外科研究所,肿瘤中心,重庆,400042;第三军医大学大坪医院野战外科研究所,病理科,重庆,400042;第三军医大学大坪医院野战外科研究所,病理科,重庆,400042;第三军医大学大坪医院野战外科研究所,病理科,重庆,400042;第三军医大学大坪医院野战外科研究所,病理科,重庆,400042;第三军医大学大坪医院野战外科研究所,病理科,重庆,400042【正文语种】中文【中图分类】R735.7原癌基因Src在调节正常细胞的生长、发育、增殖和凋亡等方面发挥着重要作用,其异常表达和肿瘤的发生、发展密切相关。

在人类许多肿瘤中(如结肠癌、乳腺癌和胰腺癌)都存在Src蛋白的过度表达和活化。

肝癌细胞的浸润、转移是临床上治疗肝癌失败的重要因素。

近年来国内外研究表明,许多肝癌组织中存在高度活化的Src蛋白,然而其在肝癌中的作用还未完全阐明[1-3]。

本文中应用免疫组化、流式细胞术以及MTT法检测Src蛋白在HepG2细胞中的表达以及细胞增殖和凋亡情况,同时用特异性Src蛋白酪氨酸激酶抑制剂PP2作用于肝癌细胞株HepG2细胞,研究Src蛋白对肝癌细胞增殖凋亡的影响。

HDACS抑制剂对人肝癌细胞株HepG2作用的研究

１２５免疫细胞化学检测凋亡蛋白＿＿
人肝癌细胞株Ｈｐ２和正常肝细胞Ｌ２购自ｅＧＯ中国科学院上海生命科学研究院。
１１３试剂．．
将细胞爬片取出，丙酮固定后按照免疫组化试
剂盒说明书进行凋亡相关蛋白Ｂｌ２Ｂｘ的免疫组ｃ一、ａ
组蛋白乙酰化状态由组蛋白乙酰基转移酶（ｉｈ— ｓｎｃｔｔｎｆａｅＨＴ）和组蛋白去乙酰化酶ｔｅａｅｖｒｓｒｓ．Ａｓｏｌａｅ（ｉｏｅｄａｅｙａｅＨＡＳ之间的活性竞争决定。ｈｓｎｅｃｔｌｓ，ＤＣ）ｔ研究表明去乙酰化异常与多种恶性肿瘤的发生有
化染色。每张片子随机选取１０个高倍视野，运用ＩａｅＰｏＰｕ（Ｐ软件分析凋亡相关蛋白表达的累ｍｇｒｌｓＰ）Ｉ
ＬＤＭ培养基、牛血清（国Ｇｂｏ公司） — ＭＥ胎美ｉｃ；
新生小牛血清（成都市华星生物化学制品厂）ＭＴ、；Ｆ
ａｄｄＴ－ｉｔｉｋｅｄｌｅｉｇ（ＵＥ）ａｄｉｍｕｏｙｏｈｍｉｒｅｅｃｎｕｔｂｅｖｅａｅａｏｆｔＵＰｂｏｉｎｃｎｂｌＴＮＬ，ｎｅｎａｎｍｎｃｔｃｅｓｙｗｒｏｄｃｅｔｏｓｒｅｔｌｒｔｎｏｔｄｏｈｔｉｃｌｌｅｐｏｆｒｔｎａｏｏｉａｄａ０ｔｓ —ｅａｅｒｔｉｏｅＧｎ０ｆｒｒａｄｗｔＳ．ｅｕｓ（ｅｎｒｌｅａｉ，ｐｔｓｎｐｐｏｉｒｌｄｐｏｅｎｆｐ２ａｄＬ２ａｔｅｔｉＴＡＲｓｌ：１ｌｉｉｏｓｓｔＨｅｔｅｈｔ）

微泡造影剂及超声促进绿色荧光蛋白质粒在人肝癌细胞HepG2内表达的实验研究

２００３０２，Ｃｈｉａｎ
【ｂｔａｔＡｓｃ】ＯｂｅｔｅｔｉｅｔａｈｔｅｕｒｓｕｄａｄｍｉｏｕｂｅｃｎｒｓａｅｔｏｏｕｏｌｉｐｏｅｇｕａｓｃｉｔｒｊｃｖｏｎｓｇｔｗｅｒｈａｏｎｎｃｂｂｌｏｔｔｇｎｎＶｅｃｕｄｍｒｅｅｔｎｆｔｎｉｏｉｖｉｅｈｒａＳｖｒｅｏｎ
ｆｕｔｒｕ．ｎｌｔｎＵｒｓｕｄａｄｍｉｒｂｂｌｏｔａｔｇｎａｍｐｏｅｔａｓｅｔｎｅｆｉｎｙｗｉｉｏｏｎｏｈｐｔａｃｎｍａｏｒｈｇｏｐＣｏｃｕｉｈａｏｎｎｃｏｕｂｅｅｎｒｓａｅｔｃｎｉｒｖｒｎｆｃｉｆｃｅｃｔｌｓｍｅｉｔｅａｉｃｒｉｏｏｏｉｈｐｃ
【关键词】微泡造ＵｌｒｓｕｄａｄｍｉｒｂｂｌｏｔａｔａｅｔｉｒｖｄｐｔａｏｎｎｃｏｕｂｅｃｎｒｓｇｎｍｐｏｅＥＧＦＰ－ｒｎｆｃｉｎｉｔｅｌＨｅＧ２ｉｉｏｅｐｒｍｅｔｓｕｙＮ１ｔａｓｅｔｎｏｃｌｏｐ：ｎｖｔｘｅｉｎｔｄｒＺＨＥｎ，ＡＮＧＷｅ — ｉｇＺＮＧＹｉｇＷｎｐｎ，ＨＡＯＰｎ，ｉｇＺＨＡＯＹｉｗｎｅａｔｎｆＵｌａｏｎ，ｈｎｓａｐｉｌｆＦｄｎＵｎｖｒｉＳａｇａ — ｅＤｐｒｍｅｔｔｓｕｄＺｏｇｈｎＨｏｓａｕａｉｅｓｔｈｎｈｉｏｒｔｏｙ

放疗对人肝癌细胞株HepG_2凋亡的诱导作用

1480 表达 , 抑制细胞色素 c 的释放及 Ca spase 的激活来对抗过氧化氢诱导的 PC 12 的凋亡。王汉民等
[7 ] [8]
陕西医学杂志 2008 年 11 月第 37 卷第余绍祖 , 等 . 用ESR 研究川芎嗪对人多形
研究发
核白细胞呼吸爆发氧化代谢的影响 [ J ] . 卒中与神经疾病, 2002, 9 ( 1) : 9212.
△河北省承德市科学技术指导计划项目 (2 00 61 00 5) 3 承德医学院附属医院放、化疗科
现, 急性肾 I�R 损伤时肾小管上皮细胞凋亡数增多, B cl22, B ax 蛋白表达增强 , B cl22 � B ax 比值下降 , 肾功能恶化。预防性使用川芎嗪能明显改善肾功能 , 减少肾小管上皮细胞凋亡, 并下调 Bax 蛋白表达 , 增强 B cl22 蛋白表达, 使B cl22� B ax 比值增高。本实验发现假手术组脊髓B ax、 2 2 基因表达基本呈阴性 , 模型组可见大 B cl 量细胞凋亡, B ax 蛋白在缺血组织中大量表达, B cl22 由表达较低, 两者比例失调。川芎嗪对明显抑制脊髓缺血再灌注后B ax 的表达 , 促使 Bcl22 蛋白表达上调, 提示川芎嗪可能通过调节凋亡相关蛋白B cl22� B ax 的表达而保护脊髓神经细胞 , 抑制凋亡的发生。参考文献
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《2024年黄芩苷镁盐对HepG2细胞增殖、迁移与凋亡影响研究》范文

《黄芩苷镁盐对HepG2细胞增殖、迁移与凋亡影响研究》篇一摘要：本文旨在探讨黄芩苷镁盐对HepG2细胞增殖、迁移及凋亡的影响。

通过细胞培养实验和流式细胞术等手段，研究黄芩苷镁盐对HepG2细胞的生物学行为的影响，为进一步了解黄芩苷镁盐的药理作用及在肿瘤治疗中的应用提供理论依据。

一、引言黄芩苷是一种天然植物成分，其药理作用广泛。

黄芩苷镁盐作为黄芩苷的衍生物，在抗肿瘤、抗炎等方面展现出独特的作用。

HepG2细胞作为人肝癌细胞系，是研究药物对肝癌影响的重要模型。

因此，本研究选取HepG2细胞为研究对象，探讨黄芩苷镁盐对其增殖、迁移及凋亡的影响。

二、材料与方法1. 材料黄芩苷镁盐、DMEM培养基、胎牛血清、MTT试剂、Annexin V-FITC/PI试剂等。

HepG2细胞株。

2. 方法（1）细胞培养：HepG2细胞的培养条件为37℃、5% CO2的培养箱中，用含10%胎牛血清的DMEM培养基培养。

（2）药物处理：将黄芩苷镁盐以不同浓度梯度加入HepG2细胞中，进行细胞增殖、迁移及凋亡的实验。

（3）MTT法检测细胞增殖：通过MTT法检测不同浓度黄芩苷镁盐处理后HepG2细胞的增殖情况。

（4）流式细胞术检测细胞迁移与凋亡：利用流式细胞术检测黄芩苷镁盐处理后HepG2细胞的迁移和凋亡情况。

三、实验结果1. 细胞增殖实验结果黄芩苷镁盐在低浓度时对HepG2细胞的增殖有一定的促进作用，随着浓度的增加，细胞的增殖受到抑制，呈现明显的剂量依赖性。

2. 细胞迁移实验结果黄芩苷镁盐处理后，HepG2细胞的迁移能力受到抑制，且随着浓度的增加，抑制作用更加明显。

3. 细胞凋亡实验结果黄芩苷镁盐处理后，HepG2细胞的凋亡率增加，且随着浓度的增加，凋亡率逐渐升高。

流式细胞术检测结果显示，黄芩苷镁盐诱导了HepG2细胞的早期和晚期凋亡。

四、讨论本研究结果表明，黄芩苷镁盐对HepG2细胞的增殖、迁移及凋亡具有显著影响。

在低浓度时，黄芩苷镁盐促进HepG2细胞的增殖；而随着浓度的增加，细胞的增殖受到抑制，迁移能力降低，同时诱导细胞凋亡。

紫杉醇与白藜芦醇联合用药对人肝癌细胞HepG-2活性的影响

紫杉醇与白藜芦醇联合用药对人肝癌细胞HepG-2活性的影响耿文峰;伍春莲;陈杨琼;张思楠;孙警辉【摘要】作为两种较常见的抗癌药物，紫杉醇与白藜芦醇在临床试验中均证实具有良好的抗癌效果．本文意在研究紫杉醇与白藜芦醇单独及联合用药时对人肝癌细胞HepG-2活性的影响，探索两种药物联合应用时的药效变化．实验中通过CCK．8法测定了不同浓度的紫杉醇和白藜芦醇单独及联合用药时对人肝癌细胞HepC-2的活性影响，计算出其抑制率和半抑制率浓度，并通过金氏修正公式进行药效判定．结果发现当紫杉醇和白藜芦醇单独用药时，两者对HepG-2细胞的生长均有较高的抑制作用，在设定的药物浓度范围内，前后两者的抑制率分别达到了45．81％-81．80％和34．43％-93.60％，并且呈现出明显的剂量依赖性．当二者联合作用时，紫杉醇与白藜芦醇分别在在5—20umol／L以及100—1000umol／L的浓度范围内呈现出相加效果，且药品的半抑率制浓度均出现不同程度的降低，分别由单独用药时的1．47和122．07umol／L下降至联合作用时的0．65和42．41umol／L．据此判断，紫杉醇与白藜芦醇联合作用确实可显著增强药物对HepG-2细胞的抑制作用．二者具有相加抗肿瘤效果．%Paclitaxel and resveratrol are two common anti-cancer drugs that have proved effective in clinical trials. In this study, we investigated the independent effect of the two drugs as well as their combined effect on the viability of HepG-2 cells, trying to elucidate the joint effect of the two drugs. The independent and combined effects of the two drugs on HepG-2 at various concentrations were measured by CCK-8 assay; inhibitory rates and IC50 were calculated and efficacies were judged according to the Revised Jin'sFormula. Both paclitaxel and resveratrol showed strong inhibitory effect on HepG-2 cells and at the tested concentration the inhibitory rates were up to 45.81% - 81.80% and 34.43% -96.30% respectively, showing an obvious dose-dependency. The two drugs showed combined effects when used together at the concentration of 5 -20 umol/L for paclitaxel and 100 - 1000umol/L for resveratrol. And their IC50 were also decreased from 1.47umol/L and 122.07umol/L when used independently to 0. 65umoL/L and 42.41 umol/L when used together. Our results confirmed that combination use of paclitaxel and resveratrol can significantly enhance their anti-cancer effect, that is to say, the two drugs have synergy effect.【期刊名称】《西华师范大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2012(033)003【总页数】5页(P261-264,269)【关键词】紫杉醇;白藜芦醇;人肝癌细胞HepG-2;CCK-8【作者】耿文峰;伍春莲;陈杨琼;张思楠;孙警辉【作者单位】西华师范大学生命科学学院西南野生动植物资源保护教育部重点实验室,四川南充637009;西华师范大学生命科学学院西南野生动植物资源保护教育部重点实验室,四川南充637009 三峡库区生态环境与生物资源省部共建国家重点实验室,重庆北培400715;西华师范大学生命科学学院西南野生动植物资源保护教育部重点实验室,四川南充637009;西华师范大学生命科学学院西南野生动植物资源保护教育部重点实验室,四川南充637009;西华师范大学生命科学学院西南野生动植物资源保护教育部重点实验室,四川南充637009【正文语种】中文【中图分类】R151当今社会，随着环境污染的日益加剧，人类的生活环境正不断恶化，与致癌因素的接触越发频繁，癌症的发病率也随之逐年升高.肝癌是死亡率仅次于胃癌和食道癌的人类第三大常见恶性肿瘤，在临床上一般多采取手术、放化疗与中药结合的方法进行治疗，但晚期患者因癌细胞扩散而治愈率较低，因此不断寻求新的更有效的肝癌治疗方法和抗肝癌药物配方成为了现今医学界面临的首要课题之一.紫杉醇(taxol，以下简称TAX)是红豆杉属植物产生的一种复杂的次生代谢产物，也是目前所知的惟一种可以促进微管聚合和稳定已聚合微管的药物.据相关研究表明:细胞在接触紫杉醇后会在细胞内积累大量的微管，这些微管的积累干扰了细胞的各项生理功能并阻断了细胞的正常有丝分裂进程［1］，可以使细胞的生长趋于停滞，因而具有良好的抗癌功效.相关实验研究［2］表明:紫杉醇对多种体外培养的肿瘤细胞特别是肝癌细胞均具有较强的生长抑制作用，但紫杉醇与其它药物联合抗肝癌的研究目前却鲜有报道［3］.本实验以人肝癌细胞HepG-2作为研究对象，结合另一种常规化疗药物［4］白藜芦醇(resveratrol，以下简称RES)，通过CCK-8法检测紫杉醇和白藜芦醇单独以及联合用药时对人肝癌细胞HepG-2的抑制作用，并通过金氏修正公式定量分析两种药物合用时的相互作用效果，以求了解紫杉醇与白藜芦醇联合用药的特性以及应用于临床的可行性.细胞:人肝癌细胞株HepG-2(购于川北医学院生化与分子免疫研究所).试剂:RPMI1640培养基(购于Gibco公司，美国);胎牛血清(购于杭州四季青生物制品公司，中国);双抗(青霉素，链霉素，购于Gibco公司，美国);胰蛋白酶(购于Amresco公司，美国);TAX(HPLC≥99%)和RES(HPLC≥98%)，均购于瑞芬思公司，中国;CCK-8(购于Dojindo化学研究，日本).仪器:自动酶标仪(购于Thermo公司，美国)，倒置显徽镜(购于Olympus公司，日本)，CO2培养箱(购于Sanyo公司，日本).1.2.1 细胞培养将人肝癌细胞HepG-2培养于含有10%的灭活的胎牛血清(fetalbovine serum，FBS)、100U/mL青霉素、100μg/mL链霉素、pH7.4的RPMI-1640完全培养液中，于37℃、5%CO2培养箱中进行培养.细胞贴壁生长，每3－4d分瓶一次，取处于对数生长期的细胞进行试验.1.2.2 CCK-8法测定药物对细胞活性的影响实验前用胰酶将处于对数生长期的HepG-2细胞进行消化处理，并吹打成均匀悬液，以5×104个/mL的浓度接种于96孔板中，每孔100μL培养液.经过24h后，依次加入不同浓度的药物进行试验，包括TAX单独用药组、RES单独用药组和TAX、RES联合用药组.使TAX单独用药组的最终浓度依次为1、2、5、10和20μmol/L，RES单独用药组的最终浓度依次为50、100、200、500和1000μmol/L，联合用药组的最终浓度分别为 TAX(1、2、5、10、20μmol/L)+RES(200μmol/L)和 RES(50、100、200、500、1000μmol/L)+TAX(5μmol/L)，对照组不加药物，每组浓度均设5个平行孔.于37℃、5%的CO2培养箱内培养24h，弃上清，而后向每孔中依次加入10μl的CCK-8溶液，将96孔培养板放在培养箱内继续孵育4h.用酶标仪测定各孔在450nm处的吸光度，细胞生长抑制率=(1－实验组OD值/对照组OD值)×100%.实验重复3次，结果取平均值.1.2.3 数据统计根据公式lgIC50=Xm-I〔(P-(3-Pm-Pn)/4〕计算TAX和RES的半抑制率浓度(其中Xm:lg最大剂量;I:lg(最大剂量/相临剂量);P:阳性反应率之和;Pm:最大阳性反应率;Pn:最小阳性反应率).关于两种药品联合作用时的药效在本次实验中采用金氏修正公式:q=E(A+B)/(EA+EB－EAⅹEB)进行求算.公式中分子代表实测合并效应，分母是期望合并效应.若计算结果q＜0.85则表示两药相互拮抗;q＞1.15表示两药具有协同作用;q=0.85－1.15表示两药作用相加.由图1可知:用不同浓度(1，2，5，10，20μmol/L)的TAX单独作用于HepG-2细胞24h，5种浓度的药品对肿瘤细胞的生长均具有明显的抑制作用，且抑制率的大小随药物浓度的增加而增加.计算发现，TAX的半抑制率浓度为1.47μmol/L.RES对HepG-2细胞的生长也具有类似的作用规律，24h后，其半抑制浓度为122.07μmol/L(图 2).由图3、图4可知联合用药组在实验中对肿瘤细胞的抑制作用也表现出了明显的浓度依赖性，两组药品的半抑制率浓度分别达到了0.65μmol/L和42.41μmol/L.通过进一步对比发现与对应浓度的单独用药组相比，联合用药组对细胞的抑制率明显增加:TAX(1、2、5、10、20μmol/L)+RES(200μmol/L)联合用药组作用24h后，其对 HepG-2细胞的抑制率为58.99% －89.53%，明显高于TAX单独作用时的45.81% －81.80%，TAX的半抑制浓度也由单独用药时的1.47μmol/L 下降至联合作用时的0.65μmol/L.同样，RES(50、100、200、500、1000μmol/L)+TAX(5μmol/L)联合用药组的抑制率(61.71% －97.61%)也明显高于同浓度下RES单独用药组的抑制率(34.43% －93.60%)，其半抑制浓度则由122.07μmol/L下降到了更小的42.41μmol/L.两药合用时，按金氏公式计算q值，判断两药之间是拮抗、相加或协同.详见表1、表2.结果表明当TAX的浓度处于1－2μmol/L之间时其与200μmol/L的RES联合作用表现为拮抗，作用效果优于单体而弱于两者之和，而在5－20μmol/L范围内时则表现为相加.RES则是在50μmol/L时与TAX联合作用表现为拮抗，而在100－1000μmol/L时表现为相加.由此判断，紫杉醇与白藜芦醇联合作用确实可显著增强药物对HepG-2细胞的抑制作用.肝癌作为目前世界上最常见的恶性肿瘤之一，其死亡率在所有消化系统相关的癌症中居于第三位，在我国每年因肝癌而致死的病患总数高达11万人，占全世界因肝癌死亡人数的45%.肝癌一般具有恶性度高、病情发展快等特点，病人早期身体往往不会感觉到明显的不适，但一旦出现症状就诊，就已属于中晚期，且治疗难度大、疗效差，术后5年生存率极低，一般病人发病后生存的时间仅为6个月左右，人称“癌中之王”，是一种非常可怕危险的恶性疾病.对于进展期肝癌，联合化疗是目前最常见的治疗手段之一［5］，但是许多患者往往会因耐受不住化疗对机体的毒副作用而选择放弃治疗，甚至更有身体状况不佳的患者会出现因化疗而加速死亡的现象.因此，不断寻求新的更有效的肝癌治疗方法和抗肝癌药物配方成为了现今医学界面临的首要课题之一.紫杉醇作为目前世界上最热门也是最昂贵的广谱抗癌药物之一因其独特的抗癌机制和明显的药物疗效［6，7］，已经引起了科学界的广泛重视.而白藜芦醇作为目前临床中最常用抗肿瘤药物之一，也具有极好的抗癌功效.本实验通过对紫杉醇和白藜芦醇联合抗癌的研究，初步探索了两种药物单独及联合作用时的药效变化，以期减少化学抗癌药物的用量，降低其对机体的毒副作用.本研究结果表明，紫杉醇和白藜芦醇单独用药时均可抑制人肝癌细胞株HepG-2的生长，并且呈现出明显的剂量依赖性.当二者联合作用时，紫杉醇与白藜芦醇分别在在5－20μmol/L以及100－1000μmol/L的浓度范围内呈现出相加效果，且药品的半抑率制浓度均出现不同程度的降低，说明两种药联合作用比单独作用具有更好的抗癌疗效.作用 24h 后，TAX(1、2、5、10、20μmol/L)+RES(200μmol/L)、RES(50、100、200、500、1000μmol/L)+TAX(5μmol/L)联合用药组中TAX和RES的半抑制浓度分别由单独用药时的1.47和122.07μmol/L下降至联合作用时的0.65和42.41μmol/L，明显降低了紫杉醇和白藜芦醇的用量及毒副作用，达到了预期效果，证实了多种单体药物联合抗癌的可行性.目前有关抗癌药物联合用药的研究，俨然已成为当今分子生物学领域和药物学领域一个新的研究热点，近年来相关研究表明多种类黄酮混合物联合用药时可显示出明显的加合效果［8，9］，但有关紫杉醇类化合物与其它药物联合抗肝癌的研究目前却鲜有报道.因此本研究成果对目前临床相关药物的筛选及应用具有十分有效地指导意义，也为肝癌新综合治疗方案的出现提供了理论基础.【相关文献】［1］SYMMANS W F，VOLM M D，SHAPIRO R L，PERKINS A B，KIM A Y，DEMARIA S，YEE H T，MCMULLEN H，ORATZ R，KLEIN P，FORMENTI S C，MUGGIA F.Paclitaxel-Induced Apoptosis and Mitotic Arrest Assessed by Serial Fine-NeedleAspiration:Implications for Early Prediction of Breast Cancer Response to Neoadjuvant Treatment［J］.Clin Cancer Res，2000，6(12):4610－4617.［2］余元龙，季明芳，何洁冰，李晓玲.紫杉醇对肝癌细胞增殖抑制和诱导凋亡的效应研究［J］.中华实验外科杂志，2004，21(7):877－878.［3］潘洪明，费洪新，黄小义.紫杉醇与白藜芦醇联合应用对人胃癌MGC803细胞作用的研究.中华中医药杂志(原中国医药学报)，2008，23(9):815－817.［4］KIMURA Y，OKUDA H.Resveratrol Isolated Form Polygonum Cuspidatum Root Prevents Tumor Growth and Metastasis to Lung and 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紫杉醇脂质体联合卡培他滨对中晚期宫颈癌患者的临床有效性研究

紫杉醇脂质体联合卡培他滨对中晚期宫颈癌患者的临床有效性研究发表时间：2020-07-15T05:10:23.643Z 来源：《健康世界》2020年5期作者：杨丽丽[导读] 目的：分析紫杉醇脂质体联合卡培他滨对中晚期宫颈癌患者的临床有效性。

曲靖市妇幼保健院云南曲靖 655000摘要：目的：分析紫杉醇脂质体联合卡培他滨对中晚期宫颈癌患者的临床有效性。

方法：将于2019年1月至2019年10月我院收治的中晚期宫颈癌患者有60例作为观察对象，随机分为观察组：中晚期宫颈癌患者30例，对照组：中晚期宫颈癌患者30例，对观察组给予紫杉醇脂质体联合卡培他滨治疗，对照组患者实施紫杉醇脂质体联合顺铂治疗，对比观察两组患者治疗效果和不良反应的发生情况。

结果：观察组患者治疗有效率明显高于对照组患者治疗有效率（P<0.05），观察组患者不良反应发生率明显低于对照组患者不良反应发生率（P<0.05）。

结论：中晚期宫颈癌患者应用紫杉醇脂质体联合卡培他滨治疗，安全性较高，效果显著，值得借鉴。

关键词：紫杉醇脂质体；卡培他滨；中晚期宫颈癌；临床有效性本次将于2019年1月至2019年10月我院收治的中晚期宫颈癌患者有60例作为观察对象，分析紫杉醇脂质体联合卡培他滨对中晚期宫颈癌患者的临床有效性，报道如下。

1.资料与方法1.1一般资料选取2019年1月至2019年10月我院收治的中晚期宫颈癌患者有60例作为研究对象，纳入标准：确诊为宫颈癌且癌症分期为Ⅱ-Ⅳ期，能与医患人员正常沟通，无语言障碍；经家属及本人同意，并签订知情同意书。

排除标准：合并其他恶性肿瘤的患者，有精神障碍无法配合调查研究。

按随机法分配，将患者分为观察组与对照组，每组30例。

观察组：腺癌12例、鳞癌10例、鳞腺癌8例，平均年龄（46.8±2.6）岁；对照组：腺癌14例、鳞癌10例、鳞腺癌6例，平均年龄（46.2±2.5）岁；两组患者的一般资料，差异无统计学意义（P＞0.05），两组患者的年龄及病程资料，差异无统计学意义（P＞0.05），资料具有可比性。

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ＩｈｂｔｏｎｏｔｓｓＩｄｃｉｎｏｐｔｍａＣａｃｎｍａＣｅｌＳｒｉｐｎｉｉｉｎａｄＡｐｐｏｉｎｕｔｏｆＨｅ￣ｏｒｉｏｌｔａｎＨｅＧ２
Ｌｉｏ，ＫａｇＪａｕＹａｎｕｎ，ＷｕＸｉｏｉｇ。ｅｌａｌｎｔａ
基金资助：金项目：庆市自然科学基金重点项目（Ｓｃ，．基重ＣＴＮｏ
２０Ｂ０４；国家 “ ６ ”计划（．０６０５Ａ５２）８３Ｎｏ２０ＡＡ０ＺＦ）２４０；国家自然科
学基金重点项目（ｏ３４０３）Ｎ．０３２０作者单位：０００重庆市，庆医科大学第二附属医院消化内科４０１重（瑶、康娟、吴小翎、王珏）刘；重庆医科大学超声影像学研究所（王志刚、汪朝霞、李攀）通讯作者：吴小翎Ｅｍａ：ｃｗｕｉｏｉｇｙｈｏｃｉｑｘａｌ＠ａｏ．ｎｌｎ
超声微泡造影剂作为一种新型药物载体，可以使治疗药物具有更高的靶向性和杀伤性，在发挥药物作
资料与方法
用同时降低其治疗过程中的不良反应。本实验中，在我
们用脂质微泡为载体，将紫杉醇包裹入微泡，制作成载紫杉醇超声微泡造影剂［，以人肝癌ＨｅＧ１］ｐ细胞株
亡。
结论
超声辐照紫杉醇微泡造影剂对人肝癌细胞株Ｈｐ长有明显抑制作用，并诱导细胞凋亡。ｅＧ生
关键词
超声造影剂微泡紫杉醇细胞凋亡肝癌
ＰａｌｔｘｌＬｏｄｅｌｒｓｕｎｎｔａｔＡｇｎｓｆｏｉｅａｉｎｃｉａｅａｄＵｔａｏｄＣｏｒｓｅｔｏｒＰｒｌｆｒｔｏ
增殖影响及诱导凋亡作用研究
刘瑶康娟吴小翎王志刚汪朝霞李攀王珏
摘要
～～一一一兰一一～． ∞一～ｍ～～一一＝Ｍ、～．～
目的探讨超声辐照紫杉醇微泡造影剂对人肝癌细胞株ＨｅＧ。殖抑制的影响和诱导凋亡作用。ｐ增方法体外培养肝癌细胞，将细胞分４组，即空白对照组，紫杉醇组，超声空白微泡组，声载紫杉醇微泡组。ＭＴ法观察超Ｔ
ＤｅａｒｍｅｆＧａｔｏｎｔｒｌｇｙ，ＳｅｏｆｌｅｏｐｉａｌｏｐｔｎｔｏｓｒｅｅｏｏｃｎｄＡｆｉｉｄＨｓｔｆＣｈｏｎｉｇａｔｇｑｎＵｎｉｒｉｙｏｆＭｅｉａｌＳｃｅｅｓ，Ｃｈｏｖｅｓｔｄｃｉｎｃｎｇｑｎｇ４０１０Ｃｈｉｉ００ｎａ
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中国超声医学杂志２００８年
第２４卷第８期
ＣｉｅｅＪＵｌａｏｎｄＶｏ２Ｎ２０ｈｎｓｔｓｕｄＭｅ１４ｒｏ８０８
载紫杉醇超声微泡造影剂对人肝癌细胞株ＨｅＧｐ
为材料，究载紫杉醇超声微泡造影剂抑制ＨｅＧ细研ｐ
１．材料与仪器人肝癌ＨｅＧ。胞株由重庆医科大学病毒性肝ｐ细
炎研究所提供。载紫杉醇超声微泡造影剂和非载药超
声微泡造影剂由重庆医科大学超声影像学研究所提
不同处理组不同时间点对细胞生长的影响，ＡｎｅｉＦＴ荧光染色检测其对诱导细胞凋亡作用。ｎｘｎＶ— ＩＣ
结果超声载紫杉醇微泡组对细胞的增殖抑制作用强于其他处理组及对照组；声载紫杉醇微泡组能够诱导肿瘤细胞发生凋超
胞生长和诱导其凋亡的作用，以探讨载紫杉醇超声微泡造影剂的应用价值。
供。杉醇注射液（紫海南海药股份有限公司）ＤＮＡ荧。
光染料（ｎｘｎＶＦＴＡｎｅｉ — ＩＣ试剂盒）购自生物晶美公司。ＧＺ型超声基因转染治疗仪（庆医科大学超声ｃＺ重
影像学研究所研制）。Ｍｏｅ酶标仪，流式细胞仪。ｄｌ
２．实验方法
（）胞培养１细
人肝癌ＨｅＧ细胞培养于含１ｐ０
新生牛血清的ＲＰ１４ＭＩ６０的培养液中，置于孵箱，在３Ｃ，５Ｃ饱和湿度下培养。７Ｏ。（）细胞分组及处理实验前将生长状态良好的２
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中国超声医学杂志２００８年
第２４卷第８期
ＣｉｅｅＪＵｌａｏｎｄＶｏ４ｈｎｓｔｓｕｄＭｅｌｒ２
０８
Ｈｐ胞以１１／接种于６板，实验时取ｅＧ细 × ０个ｍｌ孔