实验革兰染色细菌基本形态特殊结构
3实验三细菌革兰氏染色
实验三细菌革兰氏染色及特殊结构观察一、实验目的：1、了解革兰氏染色法的原理，并熟练掌握其操作步。
2、了解革兰氏染色法在细菌分类鉴定中的重要性。
3、通过革兰氏染色进一步理解细菌细胞壁的结构特点。
4、巩固在油镜下观察微生物的个体形态。
5、学习并掌握芽孢染色法。
6、学习并掌握微生物涂片、染色的基本技术和无菌操作技术。
二、主要仪器设备及材料：1、菌种：大肠杆菌，枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis），金黄色葡萄球菌斜面2、试剂：草酸铵结晶紫染色液，路哥氏（Lugol）碘液，95%乙醇，0.5%番红染色液，香柏油，二甲苯，生理盐水，5%孔雀绿3、仪器与材料：生物显微镜，载玻片，盖玻片，酒精灯，火柴，小试管（75mm×10mm），烧杯（300mL），滴管，接种环，擦镜纸，镊子，电炉三、原理：微生物的细胞小且透明，在普通光学显微镜下不易识别，必须对它们进行染色，使经染色后的菌体与背景形成明显的色差，从而能更清楚地观察到其形态和结构。
因此，微生物染色技术是观察微生物形态结构的重要手段。
革兰氏染色反应是细菌分类和鉴定的重要性状。
它是1884年由丹麦医师Gram创立的。
革兰氏染色法（Gram stain）不仅能观察到细菌的形态，而且还可将所有细菌区分为两大类：染色反应呈蓝紫色的称为革兰氏阳性细菌，用G+表示；染色反应呈红色（复染颜色）的称为革兰氏阴性细菌，用G-表示。
细菌对革兰氏染色的不同反应，是由于它们细胞壁的成分和结构不同而造成的。
革兰氏阳性细菌的细胞壁主要是由肽聚糖形成的网状结构组成的，在染色过程中，当用乙醇处理时，由于脱水而引起网状结构中的孔径变小，通透性降低，使结晶紫-碘复合物被保留在细胞内而不易脱色，因此，呈现蓝紫色；革兰氏阴性细菌的细胞壁中肽聚糖含量低，而脂类物质含量高，当用乙醇处理时，脂类物质溶解，细胞壁的通透性增加，使结晶紫-碘复合物易被乙醇抽出而脱色，然后又被染上了复染液（番红）的颜色，因此呈现红色。
细菌的形态构造和观察--项目实训：革兰氏染色法
脱色：95%乙醇脱色20-30s, 至乙醇液不呈紫色
复染：番红复染1min,用水冲 洗
干燥后镜检
八、项目实训：革兰氏染色法
３ 染色结果
八、项目实训：革兰氏染色法
４ 染色影响因素
➢ 掌握好乙醇脱色程度，若脱色过度，则阳性菌被误染为阴性菌；而脱色不够时， 阴性菌被误染为阳性菌；
➢ 菌龄也影响染色结果，若细菌培养时间太长，已死亡或自溶，导致细胞壁通透性 的改变而呈现假阴性反应。
Gˉ菌：肽聚糖层薄，交联松散，乙醇脱色不能使其结构收缩，因其含脂 量高，乙醇将脂溶解，缝隙加大，结晶紫-碘复合物溶出细胞壁， 酒精将细胞脱色，细胞无色，沙黄复染后呈红色。
项目一 细菌的构造和形态观察
八、项目实训：革兰氏染色法
１ 基本原理
八、项目实训：革兰氏染色法
２ 操作步骤
涂片、干燥、固定
初染：草酸铵结晶紫染色 1min,用水冲洗
微生物学基础
原核微生物的构造和形态观察
项目一 细菌菌鉴定的重要方法，可将全部细菌分成革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌两大类； ➢ 革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌的细胞壁化学组成和结构不同： G+ 菌：细胞壁厚，肽聚糖含量高，交联度大，当乙醇脱色时，肽聚糖因 脱水而孔径缩小，故结晶紫-碘复合物被阻留在细胞内，细胞不能 被酒精脱色，仍呈紫色。
实验一：细菌基本形态与结构
操作原则：无菌操作（烧灼灭菌）
Aseptic area 10-20cm
外焰 内焰 焰芯
细菌涂片的制备
器具：接种环（上）和接种针（下）
2—5mm
柄约22cm
5—8cm
金属柄约14.5cm
绝缘柄 约7.5cm
安装环(针)的螺口(约8mm)
细菌涂片的制备
菌液采取法
三、实验器材
示教玻片、显微镜、擦镜纸、 香柏油、二甲苯
四、实验步骤
（一）普通光学显微镜 的使用
显微镜的构造 （1）支持部分：镜臂、镜筒、精细调节 （2）放大部分：接目镜、接物镜 （3）照明部分：反光镜、取光器、滤光
镜
（一）普通光学显微镜的使用
1、油镜的使用方法 （1）低倍镜观察 （2）光圈调最大 （3）标本上滴加香柏油0.5-1滴 （4）转换油镜头浸入油滴中
幽门螺杆菌
（三）细菌的特殊结构观察
芽胞示教片：破伤风梭菌。 鞭毛示教片：变形杆菌。 荚膜示教片：肺炎双球菌。
产芽芽孢胞细菌的种类
芽孢 菌体 （营养细胞）
破伤风梭菌×1000
鞭毛
变形杆菌鞭毛×1000
细菌荚膜示意图
荚膜的观察：
负染色
细菌标本染色检查法
细菌染色
活菌染色
死菌染色
（一）普通光学显微镜的使用
2、使用完毕显微镜及标本片的处理 （1）油镜用过后，应立即用擦镜纸
将镜头和玻片擦拭干净 （2）如油渍已干，须用擦镜纸蘸少
许二甲苯溶液拭去油渍，再用干擦镜 纸拭净镜头
油镜的使用与保护
1.原理 2.方法
（二）细菌的三种基本形态
球菌：双球菌、链球菌、葡萄球菌 杆菌：球杆菌、链杆菌、分支杆菌 螺形菌：霍乱弧菌、螺杆菌
实验一油镜的使用`革兰染色及特殊结构的观察
实验一油镜的使用、革兰染色及特殊结构的观察细菌个体微小，必须借助显微镜来观察其形态结构。
但是活细菌为无色半透明状态，在普通光学显微镜下不易观察清楚，常用染色的方法使细菌着色，使之与背景形成鲜明对比，再在显微镜下观察，可清晰的看到细菌的形态、大小、排列和某些特殊结构。
观察细菌的形态与结构是进行细菌鉴别的方法之一。
目的和要求：1、熟悉显微镜油镜的使用方法。
2、学习使用显微镜油镜观察细菌的特殊结构3、学习革兰染色法实验材料：标本片、显微镜、香柏油、擦镜纸、二甲苯。
实验原理：使用油镜时，需在玻片上滴加香柏油。
这是因为油镜的放大倍数较高，而透镜很小，光线通过不同密度的介质物体（玻片→空气→透镜）时，部分光线会发生折射而散失，进入镜筒的光线少，视野较暗，物体观察不清。
如在透镜与玻片之间滴加和玻璃折射率（n=1.52）相仿的香柏油（n=1.515），则使进入油镜的光线增多，视野亮度增强，物象清晰。
实验方法及注意事项：1、用油镜时，勿将镜臂弯曲倾斜，以免油滴或菌液流淌外溢，影响观察造成污染。
2、用低倍镜对光，自然光线用平面镜（光源不宜采用直射日光，因直射日光的强度太大容易刺激眼睛），人工光源用凹面镜，同时调节集光器和光圈以获得最适亮度。
染色标本油镜检查时，应将光圈完全打开，集光器上升至载物台相平，使光亮度很强。
3、标本片放在载物台上，用标本推进器或压片夹固定。
4、低倍镜找出标本的范围，然后在待检部位上加一滴香柏油，转动镜头转换器，将油镜头置于工作位置，从侧面观察并缓慢转动粗调节器，使油镜头浸没在油滴内，当油镜头几乎接触玻片时停止转动，然后眼睛移至目镜，缓慢向上移动粗调节器（只应上升，不能下降，以免压碎标本和损坏镜头），待看到模糊物象时，再用细调节器转动至物象完全清晰为止。
5、观察完毕，取下标本片，立即用擦镜纸顺一个方向旋转擦拭镜头上的油。
若油已干，应先用二甲苯滴在擦镜纸上擦净镜头，再用另一干净擦镜纸拭去镜头上沾有的二甲苯。
细菌的形态学检查
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革兰染色法
结晶紫、碳酸钠初染，30秒 碘液媒染30秒
丙酮酒精数滴，脱色约5秒
碱性复红液2~3滴，5秒钟
待干，镜检。
注：每一步均需 细流水冲洗。
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• 油镜观察结果1000倍
放大倍数：10×100
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• 白色念珠菌革兰染色1000倍
放大倍数：10×100
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革兰氏染色意义：
注明 菌名：大肠杆菌 染色法： 放大倍数：10×100
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细菌形态示意图绘图要求
绘细菌的
形态 排列 染色性 特殊结构
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1.涂片
① 接种环置于酒精灯的外焰中烧灼灭菌。
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（二）细菌涂片标本的制备
1.涂片
② 取1~2环生理盐水（NS)置于载玻片上，接种 环用火焰烧灼灭菌。
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（二）细菌涂片标本的制备
1.涂片
③ 小指和手掌小鱼肌侧拔掉棉塞，并烧灼试管口灭菌。 用已灭菌冷却的接种环伸入试管中取适量菌，注意勿使沾 有菌液的接种环触及试管壁及试管口。
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（二）细菌涂片标本的制备
3.固定
目的：使细菌蛋白变性，菌 体牢固黏附于玻片上，还可杀 死细菌。
玻片有菌膜一面向上，在火焰的外焰钟摆 样速度通过三次，时间约3秒钟。
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革兰染色法操作步骤：
• 初染 媒染 脱色 复染
初染（结晶紫.碳酸钠） 媒染（碘液）
脱色（95%乙醇） 复染（复红）
• 玻璃折射率： n=1.52
• 香柏油折射率： n=1.515
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二、细菌标本染色检查法
革兰氏染色的实验报告（共9篇）
革兰氏染色的实验报告(共9篇)革兰氏染色实验报告革兰氏染色法的原理及其练习摘要：革兰氏染色反应是细菌重要的鉴别特征，所以学习微生物学，进行革兰氏染色实验是很重要的。
为保证染色结果的正确性，采用规范的的染色操作方法是十分必要。
本实验主要对大肠杆菌（Escherichia coli）、金黄色葡萄球菌（Staphyloccocus aureus Rosenbach）、枯草杆菌（Bacillus subtilis）进行革兰氏染色，观察它们的染色特征，辨别是革兰氏阴性还是阳性，从而掌握其染色方法。
染色方法与过程很清晰，但实验结果中金黄色葡萄球菌(S.aureus Rosenbach）多组呈现假阴性。
本实验的主要目的是熟悉并掌握革兰氏染色方法及原理，但要想做出很好的染色得多加练习。
本实验还可以锻炼显微镜操作技术和无菌操作技术。
关键词：革兰氏染色大肠杆菌(E.coli) 金黄色葡萄球菌(S. aureus Rosenbach) 枯草杆菌(B.subtilis)引言革兰氏染色是微生物学中最重要的鉴别染色方法，它可以直接将细菌分为革兰氏阴性和革兰氏阳性。
革兰氏染色法可将细菌分为革兰氏阳性（G+）和革兰氏阴性（G-）两种类型，这是由这两种细菌细胞壁结构组成与结构的差异所决定的。
经过一定的染色过程后，革兰氏阳性的细菌会因为细胞壁肽聚糖的含量高，脂质含量低而保持第一次染色的蓝紫色。
革兰氏阴性细菌细胞壁的脂质含量高，乙醇处理时脂质溶解，蓝色被洗脱，复染后变为红色。
革兰氏染色原理很简单，染色时需注意要注意使用处在活跃生长期的细菌，涂片不宜过厚，严格控制脱色时间。
大肠杆菌(E.coli)是革兰氏阴性细菌，金黄色葡萄球菌(S. aureus Rosenbach)与枯草杆菌(B.subtilis)都是革兰氏阳性细菌，染色后在显微镜下容易区别。
同时它们的形态各异，可以根据具体颜色和形态差异来判断染色是否成功。
本实验还涉及到高倍油镜的使用。
实验2 细菌的染色和形态观察
微生物学实验二
细菌的染色和形态观察
（验证性实验）
微生物学教研室 郭棵棵
实验内容
上节课实验结果观察
显微镜油镜头的使用与保护
示教：细菌的基本形态与特殊结构的观察
操作：单染色、革兰染色 材料：葡萄球菌、大肠杆菌肉汤培养物 载玻片 2张 /人 1支/6人
教学目标
了解：
1.显微镜油镜镜头的使用与保护
革兰染色的原理：
等电点学说
化学学说 通透性学说
等电点学说：
革兰阳性菌的等电点（PI 2-3)比革 兰阴性菌的等电点(PI 4-5)低，在pH=7 的染液中，革兰阳性菌所带的负电荷比 阴性菌多，因而摄取碱性染料比较多且 牢固，不易被酒精脱色。
化学学说 ：
革兰阳性菌的细胞内含有某些特殊化 学物质，一般认为是核糖核酸镁盐，能与 染料和碘液结合成为稳定的化学物，不易 被酒精溶解脱色。
思考题
1. 革兰染色的过程如何？
2. 有时候革兰阳性菌被染成革兰阴性菌的色调，
这是为什么？
革兰染色的步骤
1：制片 3：固定 2：干燥 4：染色： 初染：结晶紫 1分钟
媒染：碘液
脱色：95%酒精
1分钟
半分钟
复染：稀释复红
半分钟
革兰染色结果判断
紫
球
碘
阳
酒
杆
红,
阴,
一
阳
一
紫
半
阴半Leabharlann 红脑 淋 卡，白 抗 胞 除外
革兰氏染色的意义：
将细菌分为革兰阳性、阴性两大类。
分析细菌的致病性。 指导临床用药。
革兰染色法过程
1、涂片：先在玻片上放一滴生理盐水，然后刮取菌 苔在盐水中乳化，涂成直径约为0.5cm 的膜。 2、干燥：在远离火焰上方微微烘干。 3、固定：火焰固定。 4、革兰染色过程： 初染：结晶紫 1分钟 媒染： 碘液 1分钟 脱色： 95%酒精 半分钟 复染： 稀释复红 半分钟 5、镜检：阳紫阴红 球阳杆阴
细菌的形态结构实验图片
特殊组分
革兰阳性菌
磷壁酸(teichoic acid) 磷壁醛酸
特殊蛋白： A蛋白、M蛋白
Wall teichoic acid
(LTA)
微孔蛋白
革兰阴性菌
外膜
（outer membrane）
脂蛋白
LIPID BILAYER
脂质双层
脂多糖LPS
脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）
物质，为疏水性多糖或蛋白质的多聚体，用理 化方法去除后并不影响菌细胞的生命活动 ≥0.2μm荚膜，＜ 0.2μm 微荚膜 化学组成：多糖/多肽 形成条件：营养丰富 染色：不易着色，负染（墨汁）
鞭毛（flagellum）
概念：许多细菌菌体上附有细长并呈波状 弯曲的丝状物。鞭毛长5~20μm，直径 12~30nm
（1）脂质A（lipid A） 为一种糖磷脂，由D-氨基葡萄糖双
糖组成的基本骨架，不同细菌骨架 一致。 内毒素毒性与生物学活性成分 无种属特异性
（2）核心多糖（core polysaccharide）
位于脂质A的外层 有属特异性，同一属细菌相同
（3）特异多糖（specific polysaccharide）
或称胞质膜（cytoplasmic membrane）， 细胞壁内侧，包绕细胞质
结构：磷脂、蛋白质
不含胆固醇
功能
中介体（mesosome） 是部分细胞膜内陷、 折叠、卷曲形成的囊 状物，多见于革兰阳 性细菌
细胞质（cytoplasm）
细胞膜包裹的溶胶状物质，或称原生质（protoplasm）， 由水、蛋白质、脂类、核酸及少量糖和无机盐组成，其中 含有许多重要结构。
最外层，由数个至数十个低聚糖 （3~5个单糖）重复单位所构成的 多糖链。
细菌与真菌学实验
细菌与真菌学实验细菌与真菌学实验实验⼀细菌形态结构观察【⽬的】1、了解细菌的基本形态和特殊结构观察法2、明确细菌特殊结构在医疗实践中的意义3、细菌不染⾊标本的观察⽅法4、观察活细菌的形态及运动情况【材料】⾰兰染⾊标本⽚：1、球菌：葡萄球菌、链球菌、脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌。
2、杆菌：伤寒沙门菌、⼤肠埃希菌、炭疽芽胞杆菌、枯草芽胞杆菌。
3、螺形菌：霍乱弧菌或⽔弧菌。
细菌特殊结构标本⽚：1、鞭⽑:变形杆菌、霍乱弧菌2、荚膜:肺炎链球菌、产⽓荚膜杆菌3、芽孢：破伤风杆菌、炭疽杆菌细菌动⼒观察材料：1、菌种：普通变形杆菌、表⽪葡萄球菌。
2、变形杆菌和表⽪葡萄球菌8～12min⾁汤培养物。
3、其他：凹玻⽚、盖玻⽚、凡⼠林、⽛签、接种环、酒精灯、⾹柏油、⼆甲苯、擦镜纸⼀细菌形态结果观察1、使⽤油镜观察上述⾰兰染⾊标本⽚：认识细菌的三种基本形态。
注意观察各菌的形态、⼤⼩、排列⽅式及染⾊性等特点。
2、使⽤油镜观察细菌的特殊结构标本⽚：（1）荚膜：肺炎链球菌经⾰兰染⾊后，呈⽭头状成双排列，菌体四周有不着⾊的透明圈（既荚膜）；肺炎链球菌与产⽓荚膜杆菌的荚膜（荚膜染⾊法），注意观察菌体及荚膜的颜⾊及两者的形态特点。
（2）鞭⽑：变形杆菌与霍乱弧菌的鞭⽑（鞭⽑染⾊法），注意观察菌体和鞭⽑的颜⾊、鞭⽑的长短、数⽬及在菌体上的位置。
（3）芽胞：破伤风梭菌及炭疽杆菌芽胞（芽胞染⾊法），注意观察菌体、芽孢的形态、颜⾊及芽孢在菌体中的位置。
⼆、细菌不染⾊标本观察法（动⼒观察法）1、悬滴法图2－1－1（1）取⼀张洁净盖玻⽚，⽤⽛签涂少许凡⼠林于盖玻⽚的四个⾓处。
（2）⽤接种环取3～4环普通变形杆菌或表⽪葡萄球菌液体培养物于盖玻⽚中央。
（3）把凹玻⽚凹⾯朝下盖在盖玻⽚上，使凹窝中央正对菌液（见图2－1－1）。
（4）迅速翻转凹玻⽚，使粘附在凹玻⽚上的盖玻⽚朝上。
（5）先⽤低倍镜观察，再换⾼倍镜观察。
图2－1－1悬滴法普通变形杆菌有鞭⽑，运动活泼，可向不同⽅向迅速运动。
细菌的基本形态和特殊结构实验报告
细菌的基本形态和特殊结构实验报告实验目的：1.了解普通细菌的基本形态和特殊结构。
2.掌握观察细菌的方法。
3.熟悉细菌的培养方法。
4.学会用染色方法观察细菌。
实验原理：细菌是一类原核生物，大小约为0.2-10微米。
细菌中最常见的形式为球形、棒状、螺旋形、弓形等。
在地球上生存的细菌种类极其丰富，有自主营养型的、异养型的、革兰阴性菌、革兰阳性菌、光合菌等等。
普通细菌的基本形态球菌形态球菌也叫球形菌、特别是那些属球菌属（Streptococcus/Lactococcus/Lactobacillus）又称链球菌、乳球菌、乳酸链球菌，这些菌都为革兰阳性菌。
棒菌形态棒菌也叫肠杆菌，由于其在某些环境中生长如同一杆形状而得名，是细菌界中最常见的形态。
由于其形状较为均匀，因此被普遍用于研究细菌的结构、生长、代谢、遗传等。
弯曲菌形态弯曲菌是一类长条形螺旋状的细菌，细菌基本形态呈螺旋形或弯曲形。
由于其形态特殊，因此被当做一个独立的菌科。
其中最著名的便是霍乱弧菌，能引起厉害的肠道感染。
特殊结构包括外壳、荧光素、鞭毛及粘附物等。
外壳：有些细菌在其外表提供了保护机制，减少其在生存环境中的受到损害。
如表皮葡聚糖盖层、链霉素盖层等，这些保护机制可以让细菌在环境中进行多种代谢。
荧光素：一些病毒和细菌以其特殊的发光方式和色彩进行鉴别。
比如立克次氏体，可经由时间依赖的酸性条件来发光。
鞭毛：某些细菌具有鞭毛，这些鞭毛可以有很强的维度力，并引导它们自己的运动方向。
粘附物：有些病毒和细菌将粘附物固定在其表面，从而让它们更具机械强度和化学亲和性。
实验步骤：1. 准备物质所需物品：含有细菌的平板（革兰阳性细菌 / 革兰阴性细菌）。
2. 观察细菌使用显微镜进行观察，观察细菌的大小和形态。
3. 细菌的培养将含有细菌的平板进行培养，并观察培养过程中细菌的增殖情况。
4. 细菌的染色使用不同染色法（如革兰染色）染色观察，进一步了解细菌的基本结构和特殊结构。
细菌形态与结构的检查法[技巧]
![细菌形态与结构的检查法[技巧]](https://img.taocdn.com/s3/m/fa965d68a36925c52cc58bd63186bceb19e8ed6e.png)
细菌形态与结构的检查法细菌形态与结构的检查法[适用对象] 中医学（骨伤方向）、针灸推拿学专业[实验学时] 3学时一、实验目的1、学会显微镜油镜的使用和保护方法。
2、认识细菌的基本形态和特殊结构(荚膜、鞭毛、芽胞)。
3、掌握革兰氏染色方法。
4、了解细菌的动力。
二、实验原理1、显微镜油镜的使用原理: 观察细菌必须用放大1 000倍左右的油镜。
油镜的透镜极小，工作焦距最短,光线通过玻璃和空气，由于介质密度不同发生折射，射人镜筒的光线极少，视野暗、物象不清晰。
如在玻片与镜头（透镜）之间加上折光率和玻片（n=1.52）相近的香柏油（n=1.515）就可减少光线的折射，加强视野的亮度，获得清晰的物像。
2、革兰染色法的原理：主要是革兰阳性菌与革兰阴性菌细胞壁有差异，另外革兰阳性菌的等电点比革兰阴性菌低，与碱性染料的亲和力强。
三、仪器设备1、显微镜2、细菌标本片：(1)葡萄球菌(革兰染色)(2)大肠杆菌(革兰染色(3)霍乱弧菌(革兰染色)(4)伤寒杆菌(鞭毛染色)(5)肺炎球菌(荚膜染色(6)破伤风杆菌(芽胞染色)萄球菌、绿脓杆菌的琼脂斜面18～24小时培养物。
4、染色液有结晶紫、碘液、95％酒精、稀释石炭酸复红。
四、相关知识点细菌是一类体积微小的单细胞原核细胞型微生物，活的菌体小而透明，当把细菌悬浮于水滴内，用普通光学显微镜观察时，由于菌体和背景没有显著的明暗差，因而难以看清它们的形态，更不易是别其结构，所以，用普通光学显微镜观察细菌时，往往要先将细菌进行染色，借助于颜色的反衬作用，可以更清楚地观察到细菌的形状及某些细胞结构。
因此，为了研究细菌的形态特征和鉴别不同类群的细菌，细菌的染色及形态构的观察是位生物学实验中十分重要的基本技术。
五、实验步骤显微镜油镜的使用显微镜使用方法①将显微镜平稳的安放在试验台适宜处②用低倍镜对光，调节反光镜，天然光源用平面反光镜，人工光源或光线较弱使用凹面反光镜。
检查染色标本要用强光，应将聚光器升到最高，光圈完全开大；若检查未染色的活体标本则用弱光，聚光器适当下降，光圈适当缩小。
细菌特殊形态_实验报告
一、实验目的1. 学习并掌握细菌特殊形态的观察方法。
2. 了解细菌特殊结构的功能及其在微生物学研究中的应用。
3. 通过观察不同细菌的特殊形态，加深对细菌分类和鉴定的认识。
二、实验原理细菌特殊形态是指细菌除基本形态（如球状、杆状、螺旋状）外的其他形态，如丝状、分支状、放射状、束状等。
这些特殊形态可能与细菌的生长环境、生存策略、繁殖方式等因素有关。
观察细菌特殊形态有助于微生物学研究和细菌分类。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 细菌培养物：包括球状、杆状、螺旋状等基本形态的细菌。
- 特殊形态细菌培养物：丝状、分支状、放射状、束状等。
- 革兰氏染色液、酒精、水、甘油、载玻片、盖玻片、显微镜等。
2. 实验仪器：- 普通光学显微镜- 高倍显微镜- 烧杯、酒精灯、酒精棉球、镊子等四、实验步骤1. 制备细菌涂片：- 将培养好的细菌用无菌镊子取出，轻轻涂抹在载玻片上。
- 待涂片干燥后，滴加革兰氏染色液，染色约1分钟。
- 用水洗去染色液，滴加碘液，染色约1分钟。
- 用水洗去碘液，滴加酒精脱色，观察细菌颜色变化。
- 用水洗去酒精，滴加复染液（如番红染液），染色约1分钟。
- 用水洗去复染液，用甘油封片。
2. 观察细菌特殊形态：- 使用高倍显微镜观察载玻片上的细菌。
- 仔细观察细菌的形态，记录其特殊结构。
3. 数据分析：- 对观察到的细菌特殊形态进行分类和描述。
- 分析特殊形态与细菌生存环境、繁殖方式等因素的关系。
五、实验结果与分析1. 实验结果：- 观察到的细菌特殊形态包括丝状、分支状、放射状、束状等。
- 丝状细菌：形态细长，具有分支，如放线菌。
- 分支状细菌：形态呈分支状，如葡萄球菌。
- 放射状细菌：形态呈放射状，如放线菌。
- 束状细菌：形态呈束状，如螺旋菌。
2. 分析：- 细菌的特殊形态与其生存环境和繁殖方式密切相关。
- 丝状细菌的分支形态有利于其在土壤等复杂环境中生长。
- 分支状细菌的放射状生长方式有利于其在食物链中占据有利位置。
《医学微生物学》微生物的形态检查实验
《医学微生物学》微生物的形态检查实验[目的]1．掌握显微镜油镜的使用和保护。
2．掌握细菌的基本形态和特殊结构。
3．掌握细菌涂片标本的制备及革兰染色的步骤，判断革兰染色性及明确其临床意义。
4．了解特殊结构的染色方法。
5．了解放线菌和霉菌的形态。
6．了解放线菌和霉菌的形态观察方法。
[内容]一、显微镜油镜的使用方法（一）普通光学显微镜的接物镜有高倍镜、低倍镜和油镜三种，检查微生物最常用者为油镜，在使用前首先要识别油镜头，在油镜头上常有下列标记：（1）放大倍数是90×或100×。
（2）油镜头前端有一白圈。
（3）物镜的前面透镜最小。
（4）刻有“油”或外文“HI”（Homogene Immersions）, “Oil Immersion”等字样。
（二）使用方法（1）使用显微镜时，必须端坐，坐凳和桌面高度配合适宜，显微镜应直立在桌上。
把显微镜的电源线插在适当的电源插座中。
（2）把照明器的开关移到“ON（开）”的位置，滑动光亮控制钮以获得适宜的照明亮度。
集光器越靠近载物台平面，则光线越强；光圈放得越大，光线也越强。
检查染色标本时，光线应强，光圈应放大，集光器要抬高。
检查未染色标本时光线宜较弱，此时应适当缩小光圈，降低集光器。
（3）染色标本上加一小滴香柏油，油勿过多，更勿将油涂开。
（4）置标本于载物台上。
弹簧夹固定，将待检部分移至接物镜下。
（5）转动接物镜旋转盘，使油镜头对准标本。
眼睛从侧面看着，转动粗调节器，使载物台逐渐上升，直至油镜头侵没入油滴内（上升程度是使油镜头几乎与标本接触，但两者切勿相碰！）然后眼睛转到目镜处，一面观察，一面调节粗调节器使载物台缓慢下降，待获得模糊物象时，再换用细调节器调节至物象清晰为止。
调节时千万不可使用强力将载物台任意上升，以至压碎标本玻片，甚至将贵重的油镜头损坏。
观察标本时，两眼应同时睁开，调节视度圈，使其与瞳距基本一致。
（6）观察完毕，转动粗调节使载物台下降，取下标本片，用滴加有乙酸乙酯的擦镜纸将油镜头的油擦净，再用干净的擦镜纸将镜头擦净（7）显微镜见图1-1二、革兰染色法[原理]革兰染色的原理可能与下列因素有关：1．革兰阳性菌等电点（PI2~3）比革兰阴性菌的等电点（PI4~5）低。
细菌的革兰氏染色实验报告
细菌的革兰氏染色实验报告实验名称：细菌的革兰氏染色实验
实验目的：通过细胞壁结构的不同，观察细菌的革兰氏反应，了解细菌的形态特征及分类情况。
实验原理：细菌细胞壁的结构不同，根据革兰氏染色方法可分为革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌，其中革兰氏阳性菌在染色后呈紫色，革兰氏阴性菌在染色后呈红色，通过观察染色后的细菌颜色能够大致了解细菌的分类情况。
实验材料：
1. 革兰氏染色试剂（含靛派液、碘酒、脱色剂、碱性洗涤液）
2. 外部消毒液、无菌采样棒、无菌平板
3. 革兰氏阳性菌（如金黄色葡萄球菌）
4. 革兰氏阴性菌（如大肠杆菌）
实验步骤：
1. 将需要实验的细菌分别接种于无菌平板上。
2. 用外部消毒液将无菌采样棒消毒并晾干。
3 .取一个无菌采样棒分别在革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌的菌落上轻轻刮取，避免沾到无关菌种。
4. 将采样棒沾有菌落的一端放入一滴靛派液中浸润，再在菌液上加2-3滴碘酒，静置1分钟，使靛派液和碘酒渗透到其内部。
5. 倒掉靛派液和碘酒，用脱色剂加水洗涤液一一洗去染色剂，每次洗涤2-3秒，规定洗4次，每次可以轻轻甩去液体。
6. 最后观察染色后的细菌颜色，革兰氏阳性菌为紫色，革兰氏阴性菌为红色。
实验结果：本次实验观察到革兰氏阳性菌（金黄色葡萄球菌）染后呈紫色，革兰氏阴性菌（大肠杆菌）染后呈红色。
实验结论：通过细菌的革兰氏染色实验，发现革兰氏阳性菌在染色后呈紫色，革兰氏阴性菌在染色后呈红色，这种染色方法为快速鉴别大肠杆菌等革兰氏阴性菌和金黄色葡萄球菌等革兰氏阳性菌提供了简单、快捷的方法。
实验一显微镜的使用、细菌形态和结构观察与革兰氏染色法
实验一显微镜的使用、细菌形态和结构观察与革兰氏染色法一、显微镜的使用普通光学显微镜是一种精密的光学仪器。
以往最简单的显微镜仅由几块透镜组成，而当前使用的显微镜由一套透镜组成。
普通光学显微镜通常能将物体放大1500—2000倍。
（一）显微镜的构造普通光学显微镜的构造可分为两大部分：一为机械装置，一为光学系统，这两部分很好的配合，才能发挥显微镜的作用。
1、显微镜的机械装置显微镜的机械装置包括镜座、镜筒、物镜转换器、载物台、推动器、粗动螺旋、微动螺旋等部件（1）镜座镜座是显微镜的基本支架，它由底座和镜臂两部分组成。
在它上面连接有载物台和镜筒，它是用来安装光学放大系统部件的基础。
（2）镜筒镜筒上接接目镜，下接转换器，形成接目镜与接物镜（装在转换器下）间的暗室。
从物镜的后缘到镜筒尾端的距离称为机械筒长。
因为物镜的放大率是对一定的镜筒长度而言的。
镜筒长度的变化，不仅放大倍率随之变化，而且成像质量也受到影响。
因此，使用显微镜时，不能任意改变镜筒长度。
国际上将显微镜的标准筒长定为160mm，此数字标在物镜的外壳上。
（3）物镜转换器物镜转换器上可安装3—4个接物镜，一般是三个接物镜（低倍、高倍、油镜）。
Nikon显微镜装有四个物镜。
转动转换器，可以按需要将其中的任何一个接物镜和镜筒接通，与镜筒上面的接目镜构成一个放大系统。
（4）载物台载物台中央有一孔，为光线通路。
在台上装有弹簧标本夹和推动器，其作用为固定或移动标本的位置，使得镜检对象恰好位于视野中心。
（5）推动器是移动标本的机械装置，它是由一横一纵两个推进齿轴的金属架构成的，好的显微镜在纵横架杆上刻有刻度标尺，构成很精密的平面座标系。
如果我们须重复观察已检查标本的某一部分，在第一次检查时，可记下纵横标尺的数值，以后按数值移动推动器，就可以找到原来标本的位置。
（6）粗动螺旋粗动螺旋是移动镜筒调节接物镜和标本间距离的机件，老式显微镜粗螺旋向前扭，镜头下降接近标本。
新近出产的显微镜（如Nikon显微镜）镜检时，右手向前扭载物台上升，让标本接近物镜，反之则下降，标本脱离物镜。
微生物形态和结构观察
第二部分微生物形态和结构观察个体形态和细胞结构是微生物的重要特征，也是识别和鉴定微生物的主要依据之一。
微生物个体微小，要研究它们的形态和结构，通常需要显微镜；在许多情况下，还需要对标本进行染色。
学习和掌握形态学观察技术，对于研究、开发和利用微生物具有重要意义。
实验1 细菌染色和形态结构观察细菌的基本形态主要有球状、杆状和螺旋状。
在适宜的生长条件下，细菌细胞一般在幼龄阶段呈现特定形态。
但若培养条件发生变化或培养物老龄化，菌体形态会出现异常。
细菌个体微小且无色透明，对光线的吸收和反射与水溶液差别不大，直接在显微镜下观察，不易看清它们的真实面目。
对菌体进行染色，可以增加反差，显现细菌的一般结构和特殊结构。
染色技术是微生物形态学研究的重要手段，它可分为简单染色、鉴别染色和特殊染色三种类型。
一、简单染色法（一）目的要求1、学习细菌涂片的基本技术。
2、掌握细菌简单染色法。
3、熟练显微镜油镜的使用技术。
（二）基本原理简单染色是采用一种染料使细菌着色的染色方法。
微生物细胞含有蛋白质、核酸等两性电解质，在酸性溶液中离解出碱性基团而带正电荷，在碱性溶液中离解出酸性基团而带负电荷。
细菌的等电点为pH2～5。
在中性（pH7）、碱性（pH>7）或偏酸性（pH6～7）溶液中，细胞的等电点低于溶液的pH值，因此菌体一般带负电荷。
因为电离后碱性染料带正电荷，可与菌体内的负电荷结合，所以在细菌学研究中大多采用碱性染料进行染色。
常用的碱性染料有碱性复红、蕃红、结晶紫、孔雀绿、美蓝等。
（三）实验器材1、菌种：牙垢细菌。
2、染色液(1瓶/组)：石炭酸复红染色液。
3、仪器及相关用品(1套/组)：显微镜，香柏油，二甲苯，擦镜纸。
4、其它用品(1套/组)：蒸馏水，载玻片，盖玻片，吸水纸，酒精灯，火柴，接种环，镊子，无菌牙签。
（四）实验程序简单染色的操作过程如图4-1所示。
图4-1 细菌的简单染色与显微镜观察1、涂片：取一片洁净无油污的载玻片（通常保存于盛有酒精的广口瓶内，用镊子取出载玻片，在酒精灯上引燃载玻片表面的酒精，冷却后即可使用），在中央滴一小滴蒸馏水，用无菌牙签取少许牙垢，与水滴混匀，涂成薄层（直径约为10mm）。
细菌的革兰氏染色和形态观察
二、实验原理---简单染色
细菌的细胞小而透明，在普通的光学显微镜下不 易识别，必须对它们进行染色。利用单一染料对 细菌进行染色，使经染色后的菌体与背景形成明 显的色差，从而能更清楚地观察到其形态和结构。 此法操作简便，适用于菌体一般形状和细菌排列 的观察。
常用碱性染料进行简单染色，这是因为在中性、碱性或弱酸性溶液中， 细菌细胞通常带负电荷，而碱性染料在电离时，其分子的染色部分带正 电荷，因此碱性染料的染色部分很容易与细菌结合使细菌着色。经染色 后的细菌细胞与背景形成鲜明的对比，在显微镜下更易于识别。常用作 简单染色的染料有美蓝、结晶紫、碱性复红等。当细菌分解糖类产酸使 培养基pH下降时，细菌所带正电荷增加，此时可用伊红、酸性复红或刚 果红等酸性染料染色。
二、实验原理---革兰氏染色
当用结晶紫初染后，像简单染色法一样，所有细菌都被染成初染剂的蓝紫色。碘作为媒染剂， 它能与结晶紫结合成结晶紫一碘的复合物，从而增强了染料与细菌的结合力。当用脱色剂处 理时，两类细菌的脱色效果是不同的。革兰氏阳性细菌的细胞壁主要由肽聚糖形成的网状结 构组成，壁厚、类脂质含量低，用乙醇(或丙酮)脱色时细胞壁脱水、使肽聚糖层的网状结构 孔径缩小，透性降低，从而使结晶紫-碘的复合物不易被洗脱而保留在细胞内，经脱色和复染 后仍保留初染剂的蓝紫色。革兰氏阴性菌则不同，由于其细胞壁肽聚糖层较薄、类脂含量高， 所以当脱色处理时，类脂质被乙醇(或丙酮)溶解，细胞壁透性增大，使结晶紫-碘的复合物比 较容易被洗脱出来，用复染剂复染后，细胞被染上复染剂的红色。。
干燥
2.革兰氏染色
涂片：取清洁玻片一块，在玻 片两端1/4处下面用记号笔分别 标明S和E（见图示），并滴一 滴蒸馏水，分别将金黄色葡萄 球菌和大肠杆菌涂布在相应的 区域内。
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【操作步骤】 革兰染液染色
初染 媒染 脱色 复染
冲洗
冲洗
冲洗
结晶紫 1’ 1’
冲洗
碘液 1’
95% 乙醇 30”
复红
滤纸干燥
油镜观察
革兰染色
甲 菌
＋ ＋ 紫色（ G ） 紫色（ G ）
初染
媒染
脱色
革兰氏染色步骤示意图 乙醇 稀释复红 结晶紫 碘液
乙 菌 红色（G-）
复染
革兰染色步骤示意图
【结果】
实验内容
油镜的使用与保护 细菌染色标本观察 （革兰染色法） 细菌基本形态观察 （球菌、杆菌、螺形菌） 细菌特殊结构观察 （荚膜、鞭毛、芽胞）
一、普通光学显微镜的使用
显微镜的构造图 油镜头的辨认 油镜的使用方法 显微镜的维护
一、油镜的使用与保护 1.原理
2.方法
四，细菌的三种基本形态
鞭毛
变形杆菌鞭毛×1000
细菌荚膜示意图
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
荚膜的观察：
负染色
三，细菌标本染色检查法
细菌染色
活菌染色
死菌染色
正染色
负染色
普通染色
特殊染色
简单染色法
复杂染色法
芽孢染色法
荚膜染色法
细胞壁染色法
抗酸染色
革兰氏染色
革兰染色法
由丹麦医生Hans Christian Gram于1884年创立。
【菌种】大肠杆菌+葡萄球菌
5—8cm
金属柄约14.5cm
绝缘柄 约7.5cm
安装环(针)的螺口(约8mm)
细菌涂片的制备
菌液采取法
细菌涂片的制备
菌液采取法
【操作步骤】
一、细菌涂片的制备
一般制备涂片包括涂片、干燥、固定三步。
涂片 干燥 固定
固定的目的：
使细菌的细胞凝固，使菌体与玻片粘
得更牢固； 可改变菌体对染料的通透性； 加热固定可杀死细菌，比较安全。
【试剂】生理盐水、革兰染液
【其他材料】酒精灯、接种环、玻片、吸水纸、显微镜等 【方法】1、细菌涂片标本的制片 2、革兰染液染色 3、油镜下观察结果
操作原则：无菌操作（烧灼灭菌）
Aseptic area 10-20cm
外焰 内焰
焰芯
细菌涂片的制备
器具：接种环（上）和接种针（下）
2—5mm 柄约22cm
显微镜下的杆菌
弧菌
霍乱弧菌
Figure 3 - Gram stain of Gram – Cholera cells
五，细菌的特殊结构观察
芽胞示教片：破伤风杆菌。 鞭毛示教片：变形杆菌。 荚膜示教片：肺炎双球菌。
产芽孢细菌的种类 芽胞
芽孢 菌体 （营养细胞）
破伤风梭菌×1000
球菌：葡萄球菌。
杆菌：大肠杆菌。
螺形菌：霍乱弧菌。
细菌的三种基本形态示意图
⊕
葡萄球菌：
Figure 1 - A Gram stain of Gram + Staphylococcus cells.
杆菌(bacillus)
Figure 2 - Gram stain of Gram - E. coli cells
细菌被染成紫色者，称为革兰阳性菌； 而细菌染成红色者，称为革兰阴性菌；
阳性菌——紫色
阴性菌——红色
实验报告
简要写出革兰染色原理、操作步骤， 绘制革兰染色镜下细菌图 绘制细菌的基本形态及其特殊结构图