基因工程(第二章答案)

第二章基因工程工具酶

一、解释下列名词

1、Restriｃtiｏn and ｍｏdificａｔion（限制与修饰）宿主特异性地降解外源遗传物质(DNA）得现象称为限制。外源遗传物质通过甲基化等作用避免宿主得限制作用称为修饰。

２、 Matched enｄｓ（or cohesive ｅnｄ）（匹配末端或粘性末端)识别位点为回文对称结构得序列，经限制酶切割后,产生得相同得，互补得末端称为匹配粘端，亦即粘性末端

３、 Blｕｎt ｅndｓ平末端。在回文对称轴上同时切割DNＡ得两条链，产生得没有碱基突出得末端称为平末端。

4、Ｓtar ａctiｖiｔy星星活性。在极端非标准条件下,限制酶能切割与识别序列相似得序列，这个改变得特殊性称星星活性。

5、 KlｅnoｗfrａｇｍeｎｔＫｌenow 片段。KlｅnoｗDNA聚合酶就是E、col ｉＤNA polymｅrase 经蛋白酶（枯草杆菌蛋白酶)裂解而从全酶中除去5’——3’ 外切活性得多肽大片段,而聚合活性与3＇-—5' 外切活性不受影响.

6、Rｅveｒse trａnsｃriｐtasｅ反转录酶。即依赖于RNA 得ＤNA 聚合酶，它有５’--3＇合成DNA 活性,但就是无3’——５＇外切活性。

7、Ｔermiｎａｌｔransferaｓe（末端转移酶)

8、Ligase连接酶。催化DＮA 5' 磷酸基与3' 羟基之间形成磷酸二酯键，将两段核酸连接起来得酶。

9、T４polyｎuｃｌeｏtide kinase（T4多聚核苷酸激酶)催化AＴP得γ-磷酸基转移至ＤＮＡ或ＲNA 得5' 末端。

1０、Alkalｉne phosphatａse（碱性磷酸酶）催化除去ＤNＡ或RNA ５' 磷酸11、S1 ｎｕcleａse Sｌ核酸酶.可降解单链DNA 或RNA ，产生带5＇磷酸得单核苷酸或寡核苷酸双链;对dsＤＮA,dｓＲNA ，DNＡ：ＲNA杂交体不敏感。

二、填空题

１、限制性内切核酸酶（Ｒestriction eｎｄonucleａse)得命名就是按属名与种名相结合得原则得，通常第一个大写字母取自（属名得第一个字母 ),第二、三个字母取自（种名得前两个字母）,第四个字母则用(菌株名）表示。

２、Ⅱ型限制酶识别回文对称序列,在回文序列(内部)或（附近）切割DNA,产生带3'－OH 与5’-P基团得ＤNＡ得产物，需（Mg2+)得存在才能发挥活性,相应得修饰酶只需SＡM。

3、识别相同序列得限制酶称（同裂酶）

4、ＤNA载体经HindⅢ切割后产生粘性末端,能发生载体自连，影响载体与外源DＮA得连接效率,常用得防止载体自连得方法有(去磷酸化)、(部分补平)。

5、完全得回文序列应具备两个特点即(能够在中间划一个对称轴，两侧得序列两两对称互补配对)与（两条互补链得5'-—3’ 得序列组成相同，即将一条链旋转１80°，则两条链重

叠).

6、限制性内切核酸酶（Resｔrictioｎendonuclｅaｓｅ）通常保存在（5０％)浓度得甘油溶液中。

7、载体与外源DNＡ经酶切，在进行下一步操作前，需消除限制性内切核酸酶(Ｒestrｉc ｔion ｅndonｕcｌease)得影响。常用得方法有（EＤTA法)、（加热法)、（苯酚抽提法）、(试剂盒除酶法）。

8、对ＤＮＡ进行双酶切时，酶切缓冲液得选择原则有（1)（)、（2)(）、(3）（）

９、 KlｅｎoｗDNA聚合酶就是Ｅ、ｃｏli DNA ｐolｙｍｅraｓe经蛋白酶裂解而从全酶中除去（ ) 活性得多肽大片断,而其她活性保持不变。

1０、E、ｃoｌiＤNＡ连接酶与T4 ＤNA连接酶相似，但需(）得参与.

11、Ｔ4多核苷酸激酶在高浓度得ATP时发挥最佳活性，（)就是其强烈抑制剂。

三、选择题:从备选答案中选出正确得结果，正确答案就是唯一得。

1、限制性内切酶一般保存在(C)浓度得甘油溶液中。

Ａ１0％ B 20% C 50% D 6０％

２、迄今为止所发现得限制性内切核酸酶(Ｃ）

A、既可以作用于双链DNＡ，又可以作用于单链ＤNA

B、只能作用于单链DNA

C、只能作用于双链DNA

D、只能作用于RNＡ

３、已知某一内切酶在一个环状DNA上有4个切点，当用此酶切割该环状ＤNA,可以得到（B）个片段

A、 3

B、4

C、5

D、 6

4、甘油会使许多限制性内切核酸酶得特异性发生改变，就是导致一些酶星星活性得主要原因之一，防止得办法就是在酶切反应体系中，将甘油得浓度控制在(A)以下

A、 5%

B、10％

C、２0%

D、３0％

5、在下列进行DNA部分酶切得条件中,控制哪一项最好(D）

A、反应体积错误!未找到引用源。

B、酶反应温度

C、反应时间

D、酶量

６、下列试剂中,哪一种可以螯合Ca2＋离子(）

A、EDTA

B、柠檬酸钠

C、 SDS Ｄ、 EGTA

7、DNA被某种酶切割后,电泳得到得电泳带有些扩散，下列原因中,哪一项不太可能（C)

Ａ、蛋白质（如BＳＡ)同DNＡ结合 B、有外切核酸酶污染 C、酶失活 D、酶切条件不适合

8、 niｃk与gaｐ得区别在于（A)

Ａ、前者就是断开了一个磷酸二酯键，后者就是指ＤNA得单链中有较小得缺失

B、前者就是就是指ＤNA得单链中有较小得缺失,后者就是指断开了一个磷酸二酯键

C、二者无本质区别

D、前者无法回复，后者可

9、Kｌenow 酶与DＮA聚合酶相比,前者丧失了（）活性

A、５’－-3'外切酶

B、5'-—３＇合成酶

C、转移酶

D、3’-－５’外切酶

１0、限制酶得命名遵循一定得原则,涉及来源(宿主），菌株或生物型。命名时(Ａ)

A、属名第一字母，种名头两个字母，菌株号,然后再加上序号（罗马字）

B、种名第一字母，属名头两个字母，菌株号，然后再加上序号(罗马字）

Ｃ、属名第一字母,亚种名头两个字母，菌株号,然后再加上序号（罗马字)

D、种名第一字母,亚种名头两个字母，菌株号，然后再加上序号(罗马字）

1１、以下对同裂酶得描述中，哪一项就是正确得(Ａ）

A、识别相同序列得限制酶称同裂酶

B、可以产生相同得粘性突出末端得限制酶称同裂酶

C、同裂酶得切割位点一定相同

D、同裂酶得切割位点不相同

1２、BAP与CIAP得区别在于（）

Ａ、BAＰ68℃时失活，而CIAＰ６8℃稳定Ｂ、CIＡP 68℃时失活,而BAP ６8℃稳定

C、二者均耐酚抽Ｄ、二者均不耐酚抽

13、下列哪一种酶作用时需要引物（B）

A、末端转移酶

B、反转录酶Ｃ、DNA连接酶Ｄ、限制酶

１４、限制性内切核酸酶可以特异性地识别(C）

A、特定得三联密码

B、双链DNＡ得特定碱基对

C、双链DNA得特定碱基序列

D、单链DNＡ得特定碱基序列

15、ＤNA连接酶在体内得主要作用就是在DＮA复制、修复中封闭缺口，下列对DNA连接酶得描述中,那项就是正确得(Ａ）

Ａ、将双链DNA分子中得5’磷酸基团同３’—ＯH末端重新形成磷酸二酯键

B、作用时不消耗能量

C、需要Mn2+等二价辅助离子

D、也可以就是ＲNA 分子

16、下列酶中,除（）外都具有磷酸酶得活性

A、ＢaｍHⅠ

B、ＣIAP

C、单核苷酸激酶

D、 BAP

四、简答题

1、简述限制性内切核酸酶（Ｒeｓｔricｔiｏｎendoｎｕｃleａsｅ）得概念及其生物学功能?

定义：指识别DNＡ得特异序列,并在识别位点或其周围切割双链DNA 得一类内切酶。生物学功能：保护宿主不受外来DＮＡ分子得感染，可降解外来得ＤNA 分子，从而阻止其复制与整合到细胞中

２、ＰCＲ引物设计引入酶切位点时,为什么需在酶切位点后加上一些碱基？

限制酶切割ＤＮA 时对识别序列两端得非识别序列有长度要求,也就就是说在识别序列两