野生樱桃李

土壤杆菌的生物学特性
土壤杆菌是一类革兰氏阴性菌， 土壤杆菌是一类革兰氏阴性菌，菌体 呈短杆状， 呈短杆状，0.6~1.0μm×1.0~3.0μm，周生 ， 1~6根鞭毛，严格好气，不生成芽孢。菌 根鞭毛， 根鞭毛 严格好气，不生成芽孢。 落光滑，无色素。最适生长温度25~30℃， 落光滑，无色素。最适生长温度 ℃ 最适pH6.0~9.0。 最适 。
试验方法：Leabharlann 1.选取露地种植的野生樱桃李 选取露地种植的野生樱桃李134株，每 选取露地种植的野生樱桃李 株 株选取生长势相似、粗度约0.2mm左右的新梢 左右的新梢3 株选取生长势相似、粗度约 左右的新梢 用浓度约为10（ 个，用浓度约为 （8 ）cfu•mL-1的发根土壤杆 的发根土壤杆 菌菌悬液在靠近基部处接种， 菌菌悬液在靠近基部处接种，接种方法为注射 注射器针头扎入深度以触及木质部为止， 法，注射器针头扎入深度以触及木质部为止， 接种后用保鲜膜包扎保湿一周， 接种后用保鲜膜包扎保湿一周，一周后揭去保 鲜膜。 鲜膜。 接种人： 接种时间： 接种人：俞镇浩 接种时间：2009.6.27
土壤杆菌属细菌的分类
由染色体上遗传因子决定的表现型性状是 比较稳定的，作为分类学依据更科学。 比较稳定的，作为分类学依据更科学。 Kersters和Deley提出将土壤杆菌属分为四个种： 提出将土壤杆菌属分为四个种： 和 提出将土壤杆菌属分为四个种 放射土壤杆菌(A.radiobacter)、根癌土壤杆菌 放射土壤杆菌 、 (A.tumefaciens)、发根土壤杆菌 、发根土壤杆菌(A.rhizogenes) 和悬钩子土壤杆菌种（ ）；每个种内再 和悬钩子土壤杆菌种（A.rubi）；每个种内再 ）； 根据生理生化性状区分为生物型，例如， 根据生理生化性状区分为生物型，例如，根 癌土壤杆菌(A.tumefaciens)分为生物型Ⅰ、生 分为生物型Ⅰ 癌土壤杆菌 分为生物型 物型Ⅱ、生物型Ⅲ。但这个分类方案仍然有 物型Ⅱ 生物型Ⅲ 缺陷，即相同生物型交叉出现在不同的种内， 缺陷，即相同生物型交叉出现在不同的种内， 引起混乱。 引起混乱。
试验方法：
2.自接种之日起 天后，用游标卡尺测量 自接种之日起60天后 自接种之日起 天后， 肿瘤直径， 肿瘤直径，根据平均瘤径将野生樱桃李对发 根土壤杆菌的抗病性分为0级 免疫)、 级 根土壤杆菌的抗病性分为 级：I(免疫 、1级： 免疫 HR(高抗 、2级：R(抗病 、3级：S(感病 、4级： 高抗)、 级 抗病)、 级 感病)、 级 高抗 抗病 感病 T(易感病 病5个等级。以瘤径大小分级，分级 易感病)病 个等级 以瘤径大小分级， 个等级。 易感病 标准为： 标准为：I=0 0＜HR≤3 3＜R≤5 5＜S≤8 T＞8 ＜ ＜ ＜ ＞ 单位mm。 单位 。 统计人： 统计时间： 统计人：俞镇浩 统计时间：2009.8.28
抗病 型
抗病 高抗 免疫 免疫 抗病 感病 高抗 高抗 感病
1 2 3 4 5 6 7 8 9
10 11 12 13 14 15 16 17 18
19 20 21 22 23 24 25 26 27
28 29 30 31 32 33 34 35 36
表１ 野生樱桃李对发根土壤杆菌的抗性
株号 平均 瘤径 /mm
土壤杆菌的生物学特性
大多数土壤杆菌属的细菌都带有1—3个质 个质 大多数土壤杆菌属的细菌都带有 其中一个大分子质粒控制着致病性， 粒，其中一个大分子质粒控制着致病性，如诱 发寄主形成肿瘤症状的质粒，称为“致瘤质粒 发寄主形成肿瘤症状的质粒，称为 致瘤质粒 ”(tumorin inducing plasmid， Ti质粒 ；诱发寄 质粒)； ， 质粒 主形成“发根 症状的质粒，称为“致发根质粒 发根”症状的质粒 主形成 发根 症状的质粒，称为 致发根质粒 ”(rhizogen inducing plasmid， Ri质粒 。Ti质粒 质粒)。 质粒 ， 质粒 的一段DNA(Transfer DNA,T-DNA)可以转移到寄 的一段 可以转移到寄 主细胞并整合进寄主染色体基因组。 主细胞并整合进寄主染色体基因组。T-DNA上 上 有致瘤基因(oncogenes)和冠瘿碱合成基因 有致瘤基因 和冠瘿碱合成基因 (opine genes)。致瘤基因的表达导致植物细胞 。 内激素失衡而无控制增殖形成肿瘤。 内激素失衡而无控制增殖形成肿瘤。
试验材料：
所用菌株采自北京郊区病桃株根部的 癌瘤，参照王慧敏等方法进行病原菌分离、 癌瘤，参照王慧敏等方法进行病原菌分离、 纯化， 得到22个菌株 个菌株， 纯化， 得到 个菌株， 再经向日葵致病性 鉴定，获得10个毒性菌株 个毒性菌株， 鉴定，获得 个毒性菌株， 其中 Ap10菌 菌 株具强毒性； 株具强毒性； 参照王红艳方法进行分类学 鉴定， 菌株为发根土壤杆菌。 鉴定， Ap10菌株为发根土壤杆菌。繁殖 菌株为发根土壤杆菌 Ap10菌株作为野生樱桃李抗病性鉴定的病 菌株作为野生樱桃李抗病性鉴定的病 原菌。 原菌。 所用野生樱桃李种植于中国农业大学 上庄试验站内。 上庄试验站内。
根癌病的防治措施
根癌菌具有特殊的致病机制， 根癌菌具有特殊的致病机制，一旦有根 癌症状表现即证明T-DNA已经转移到植物的 癌症状表现即证明 已经转移到植物的 染色体上， 染色体上，再用杀菌剂杀死细菌细胞已无 法抑制植物细胞的增生， 法抑制植物细胞的增生，更无法使肿瘤症 状消失。 状消失。因此根癌病的防治必须以预防为 主。
3.00 4.17 0.00 2.18 0.00 4.10 0.00 2.22 5.42
抗病 型
高抗 抗病 免疫 高抗 免疫 抗病 免疫 高抗 易感病
株号
平均 瘤径 /mm
2.16 1.49 2.33 2.86 2.71 2.98 5.80 0.00 4.08
抗病 型
高抗 高抗 高抗 高抗 高抗 高抗 感病 免疫 抗病
根癌土壤杆菌的传播
根癌土壤杆菌是一种土壤习居菌， 根癌土壤杆菌是一种土壤习居菌，细菌在 癌瘤组织的皮层内越冬， 癌瘤组织的皮层内越冬，或在癌瘤破裂时进入 土壤越冬，在土壤中一般能存活1年以上 年以上。 土壤越冬，在土壤中一般能存活 年以上。雨 水和灌溉水是传病的主要媒介。 水和灌溉水是传病的主要媒介。地下害虫如蛴 蝼蛄、线虫等；农事操作如嫁接、移栽、 螬、蝼蛄、线虫等；农事操作如嫁接、移栽、 挖穴施肥等在病害传播上也起到一定作用。 挖穴施肥等在病害传播上也起到一定作用。苗 木带菌、种子带菌是远距离传播的重要途径。 木带菌、种子带菌是远距离传播的重要途径。 目前，果树根癌病在欧洲、北美、 目前，果树根癌病在欧洲、北美、非洲和亚洲 的一些国家与地区普遍发生。在我国， 的一些国家与地区普遍发生。在我国，主要分 布在河北、辽宁、吉林、山东、浙江、 布在河北、辽宁、吉林、山东、浙江、福建和 河南等省区。 河南等省区。
结果与讨论：
表１ 野生樱桃李对发根土壤杆菌的抗性
株号 平均 瘤径 /mm
0.00 2.26 1.68 2.91 1.94 7.99 2.74 1.38 2.05
抗病 型
免疫 高抗 高抗 高抗 高抗 感病 高抗 高抗 高抗
株号
平均 瘤径 /mm
0.78 0.00 1.08 4.08 1.10 2.32 1.48 4.29 1.00
株号
平均 瘤径 /mm
4.56 0.00 3.32 0.00 3.37 0.00 0.00 5.49 5.18
果树根癌病的危害
根癌病主要发生在根颈部， 根癌病主要发生在根颈部，受害部位形成癌 俗称冠瘿瘤。其形状、大小、 瘤，俗称冠瘿瘤。其形状、大小、质地因寄主不 同而异。初生时乳白色或略带红色，光滑、柔软。 同而异。初生时乳白色或略带红色，光滑、柔软。 后逐渐变褐色乃至深褐色，木质化而坚硬， 后逐渐变褐色乃至深褐色，木质化而坚硬，表面 粗糙或凹凸不平。 粗糙或凹凸不平。从病菌侵入到显现病瘤所需的 时间，一般由几周到一年以上。 时间，一般由几周到一年以上。 对于植株生长的影响大小， 对于植株生长的影响大小，取决于病瘤发生 的部位、大小、数量及树龄等因素。 的部位、大小、数量及树龄等因素。发病植株由 于根颈部发生癌变，水分、养分的流通受阻， 于根颈部发生癌变，水分、养分的流通受阻，造 成上部树势衰弱，叶片薄、细瘦、色黄，果实小， 成上部树势衰弱，叶片薄、细瘦、色黄，果实小， 树龄缩短，严重时干枯死亡。 树龄缩短，严重时干枯死亡。苗木受害表现出的 症状特点是：发育受阻，生长缓慢，植株矮小， 症状特点是：发育受阻，生长缓慢，植株矮小， 严重时叶片黄化，早衰。 严重时叶片黄化，早衰。
土壤杆菌属细菌的分类
Sawada和Bouzar根据生物化学和生理学性 和 根据生物化学和生理学性 将土壤杆菌属分为四个种： 状，将土壤杆菌属分为四个种：根癌土壤杆菌 (A.tumefaciens)、发根土壤杆菌 、发根土壤杆菌(A.rhizogenes)、 、 悬钩子土壤杆菌（ 悬钩子土壤杆菌（A.rubi）和葡萄土壤杆菌 ） ）。种内菌株的致病性由所带的质粒 （A.vitis）。种内菌株的致病性由所带的质粒 ）。 决定，如果带Ti质粒就会导致根癌 如果带Ri 质粒就会导致根癌， 决定，如果带 质粒就会导致根癌，如果带 质粒就会引起发根， 质粒就会引起发根，如果不带致病质粒就没有 致病性。目前，这个最新的土壤杆菌分类系统 致病性。目前， 在世界上被广泛采纳。 在世界上被广泛采纳。
土壤杆菌属细菌的分类
土壤杆菌属(Agrobacterium)内种的分类最 内种的分类最 土壤杆菌属 初是以致病性为依据的， 初是以致病性为依据的，没有致病性的称为放 射土壤杆菌(A.radiobacter)；引起根癌的称为根 射土壤杆菌 ； 癌土壤杆菌(A.tumefaciens)；引起发根的称为 癌土壤杆菌 ； 发根土壤杆菌(A.rhizogenes)。但是土壤杆菌的 发根土壤杆菌 。 致病性是由质粒控制的， 致病性是由质粒控制的，质粒可以在有致病性 的菌株和没有致病性的菌株之间转移， 的菌株和没有致病性的菌株之间转移，所以它 决定的性状是不稳定的性状，不宜作为分类依 决定的性状是不稳定的性状， 据。