小鼠的超数排卵
超数排卵处理对小鼠子宫组织结构的影响
超数排卵处理对小鼠子宫组织结构的影响作者：顾红霞，邹晨鹏来源：《畜牧兽医科学》 2018年第13期摘要：研究超数排卵对小鼠子宫组织结构的影响，发现超排处理后子宫壁的结构变化规律，为实际生产中超数排卵提供技术参数。
通过做石蜡切片的方法观察小鼠子宫的变化，首先对一组小鼠进行超数排卵处理后取出小鼠子宫，另一组小鼠不做处理，作为对照组，做好标记，放入福尔马林中固定保存，然后做石蜡切片，完成取材、脱水、透明、浸蜡、包埋、切片、烤片、染色、封片等实验步骤，最后在显微镜下观察子宫内膜、子宫腺、子宫壁等组织的变化，进行综合对照分析。
由于超数排卵激素的作用，会引起子宫内膜发生变化，分泌性内膜的结构特征表现的更为明显，与对照组相比，子宫内膜上皮增生、腺体加长、弯曲增多，子宫内膜的结缔组织和成纤维细胞发育。
关键词：小鼠；超数排卵；子宫内膜；子宫腺中图分类号：S814文献标识码：Bdoi：10.3969/j.issn.2096-3637.2018.13.0060引言子宫是一个中空的肌质性器官，富有伸展性，是胎儿生长发育和娩出的器官。
子宫借子宫阔韧带附着于腰下部和骨盆腔侧壁，大部分位于腹腔内，小部分位于骨盆内，在直肠和膀胱之间，前端与输卵管相接，后端与阴道相通。
子宫阔韧带为宽而厚的腹膜褶，含有丰富的结缔组织、血管、神经及淋巴管，其外侧有子宫圆韧带。
1材料与方法1.1试验材料1.1.1试验组织超数排卵处理后的子宫10个和未经处理的子宫10个。
1.1.2试剂与药品70%、80%、90%、95%酒精及无水酒精、二甲苯、甲醛、苏木素液、1%的盐酸酒精、伊红水溶液、蒸馏水。
1.1.3主要仪器包埋机：型号KD-BM，浙江省金华市利迪仪器设备有限公司生产生产。
切片机：型号RM2235，上海莱卡仪器有限公司生产。
推片机：型号TP-1，上海医疗仪器厂产品。
烘片机：型号KD-H，浙江省金华市利迪仪器设备有限公司生产。
显微镜及图像采集系统：型号OLYMPUS-BH2，沈阳市互利康医疗器械公司。
利用超数排卵方法高效获取小鼠休眠胚胎
【 要 】 目的 为 提 高 小 鼠休 眠 胚 胎 的 制 备 效 率 ， 试 用超 数 排 卵 方 法 获 取 小 鼠休 眠 胚 胎 。方 法 超 ｇ ／ 鼠 摘 尝 ￣１ ，
在 注 射 孕 马 血 清 促 性 腺 激 素 （ Ｍ Ｇ） ， 照 是 否 注 射 抗 孕 马 血 清 （ｎ ．ＭＳ ｅｕ Ｐｓ 后 按 ａｔＰ Ｇ ｓｒｍ或 Ａ Ｐ Ｇ 以 及 注 射 的 不 同 时 ｉ －ＭＳ ） 间 分 为 ５ ： 母 鼠合 笼 前 注 射 Ａ Ｐ Ｓ 、 母 鼠见 栓 后 注 射 Ａ Ｐ Ｓ 在 见 栓 第 四天 卵 巢 摘 除 手 术 后 注 射 Ａ Ｐ Ｓ 组 在 ．Ｍ Ｇ 在 ．Ｍ Ｇ、 —Ｍ Ｇ、 不注射 ＡＰ Ｓ ，Ｍ Ｇ的超 排 组 和 不超 排 组 。 结 果 见 栓后 注 射 抗 Ｐ Ｓ Ｍ Ｇ组 的 平 均 出 胚 数 （ ． ， ） 高 ， 著 高 于 其 ９ ４枚 只 最 显
第 ｌ ５卷
第 ３期
研 究报 告
Ｉ ｌ 、 、 、 ！ 石、
利 用 超 数 排 卵方 法 高效 获取 小 鼠休 眠胚 胎
芦天 罡 ， 和 民 ， 倪 曲杨 燕 ， 雁 伟 ， 鸿 波 ， 丹 华 ， 云 海 赵 张 邵 刘
（ 京
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1动物胚胎工程实验教程小鼠卵的体外成熟与体外受精材料与方法
《动物胚胎工程实验教程》王子玉自编南京农业大学动科院2005年8月实验一小鼠卵母细胞的体外成熟实验一、实验目的熟悉雌鼠的生殖器官的结构特点；掌握小鼠的超数排卵方案；掌握从卵巢上扎取未成熟卵母细胞的方法、卵母细胞的分类方法、体外成熟培养方法及核成熟情况和卵丘扩展程度的观察。
二、实验器材和材料1. 器材及药品体视显微镜，手术器械（眼科剪，眼科镊），1mL注射器，胶头滴管，口吸管，CO2培养箱，水浴锅，移液器，枪头，塑料培养皿，记号笔。
操作液（M2），成熟培养液（M－199），激素（PMSG和HCG），石蜡油。
2．实验动物：3-4周龄昆明系雌性小白鼠，自由采食饮水。
三、实验内容1.小鼠的超数排卵注射剂量皮下或腹腔注射PMSG 10 IU/只小鼠。
注射方法皮下注射：用手指捏住小鼠的头及尾部固定（图1-1），以酒精棉球消毒其背部，提起皮肤，将注射针头平插刺入皮下，将针头微向上挑起不露出针尖时，再注入药物。
随着药物的推入，在皮下可看到鼓起一个小泡，即证实药物确已注入皮下部位。
皮下注射时防止药液从针孔处逸出。
腹腔注射：针头刚进入腹腔后向上挑，防止损伤小鼠腹腔内器官。
注射针头宜选用小号细针头。
注射药物后的小鼠自由饮水、采饲，自然光照。
2.卵巢的采集方法在注射PMSG后46h利用颈椎脱臼法处死小鼠（将供体鼠置于饲养笼上，鼠爪自然抓紧笼上铁支架，此时一只手拉紧鼠尾，另一只手食指与拇指压紧鼠颈部，或用镊子压紧颈部即可致死，此为引颈法。
用75%酒精喷湿鼠全身以消毒并防止毛发飞扬）。
将小鼠头部固定，用力牵拉鼠尾，可感到颈椎部位脱臼的振动；也可用食指和拇指直接掐断颈椎致死。
然后用图钉将小鼠呈仰卧姿势固定于小木板上或鼠解剖台上。
图1－1 小鼠的固定将处死并固定好的小鼠，在下腹部中间剪开1个小口，一只手抓住鼠尾，另一只手抓住切开的皮肤向头部牵拉直至充分暴露腹部（图1-2）。
剪开腹膜，向前方揭去肠胃内脏，即暴露出生殖器官，可在肾脏后方看到两侧呈乳白色的卵巢及与输尿管相平行的两子宫角（图1-3）。
129／J小鼠超排效果的研究
２１ ０ ０年舅ｉ１ ３
１９Ｊ小鼠超排效果 的研 究 ２／
关文怡 曹授俊 齐军晶 （ 北京农业职业学院畜牧兽医系 １２４ ） ０４２
摘要 本试验 分别以近交 系Ｃ ７ Ｌ６ １９ ５Ｂ ／和 ２ Ｈ小鼠为试验 材料 ，研 究注射不 同剂量的Ｐ Ｇ和ＨＣ 对 小鼠超排效果 。 ＭＳ Ｇ
过１ 周的适应性饲 养后 ，按照注 射剂量不 同分别分为Ａ组
（ＭＳ ． Ｕ，ＨＣ ２５ｕ 、Ｂ组 （ＭＳ ．Ｉ Ｐ Ｇ２ Ｉ ５ Ｇ ． ） ｉ Ｐ ６ ５ Ｕ，ＨＣ ． ０ Ｇ５０ Ｉ 、Ｃ （ＭＳ ． Ｕ，Ｈ Ｇ ７５Ｕ ，每 组 ｌ只 。每 只 小 ｕ） 组 Ｐ Ｇ７５ １ Ｃ ． ） Ｉ ０ 鼠腹 腔 注 射 Ｐ Ｇ， 间 隔 ４ ｈ 分 别 注 射 ＨＣ ＭＳ ８后 Ｇ进 行 超 数 排
宁 波 市 激 素 制 品有 限 公 司 ； 其 余 试 剂 除 特 殊 说 明 外 均 为 Ｓｇ （ｉ ａ ｈｍｉ ｌＳ．ｏ ｉ ＭＯ， Ａ 公 司 产 品 。 ｉｍａＳｇ ｅ ｃ ， ｔ ｕｓ ｍ Ｃ ａ Ｌ ， ＵＳ ）
１ 试验方法 ． ４
选用５６ ， 周龄的１９Ｊ 鼠３ 只， 自由采食 － ２， 雌 ０
注 ：相 ｌ 母表 不差 异不 显著 （＞ ．５ ，不 Ｉ 司字 Ｐ Ｏ０ ） 司字母 表示 差异 显著 ｒ＜ ．５ Ｐ Ｏ０ ）
司） ；手 术器械：剪毛剪 、手术剪、镊子等 ；口吸式移卵
管。 Ｉ ． 试 验 试 剂 试 验 超 数 排 卵激 素（ＭＳ ３ Ｐ Ｇ，ＨＣ ） Ｇ 均购 自
剂 量 的Ｐ Ｇ和 Ｈ Ｇ对 小 鼠进 行超 数排 卵试 验 ，并 分 析 获 ＭＳ Ｃ
得卵母细胞 的数量和质量。
ｌ 材 料 和 方 法
小鼠发情周期观察与最佳超排时期的确定
２０北京农学院学报第２０卷１材料与方法１．１实验动物以ＩＣＲ系ＳＰＦ性成熟小鼠（购自北京实验动物中心）为实验动物。
雌鼠体重２９～３２ｇ，雄鼠体重３３～３５ｇ，雌雄分笼饲养在室温、自然光照、自由饮水的条件下，采用全价繁殖颗粒饲料饲养。
经７ｄ的适应性饲养后，按常规方法对雌鼠进行超数排卵处理。
１．２实验方法１．２．１阴道涂片法判断小鼠发情周期及外阴部特点的观察采用阴道涂片方法［２］对小鼠进行发情周期观察。
首先将小鼠保定，翻提起尾巴露出阴道口，观察外阴的变化并记录其特点。
然后右手持滴管吸少量生理盐水滴入阴道口，当稍放松尾部及腰部时，生理盐水即被吸入阴道，稍候三指轻压腰部，黏液随生理盐水流出，吸入滴管中，滴到载玻片上。
待稍干后用酒精（９５％）固定５ｍｉｎ，然后用伊红染液染色１５ｍｉｎ，随后冲片，干燥，镜检。
１．２．２外部观察法确定小鼠发情时期根据阴道涂片结果及小鼠在不同发情周期所表现出的外阴部特点，依次将其分为发情前期（实验１组）、发情期（实验２组）、发情后期（实验３组）、问情期（实验４组）４个实验组别。
发情周期未观察小鼠作为对照组。
１．２．３小鼠超数排卵［３３雌性小鼠于１９：００腹腔注射ＰＭＳＧ（天津实验动物中心，批号：０４３２９）１０ＩＵ／只，间隔４８ｈ腹腔注射ｈＣＧ（国营南京动物激素厂，批号：９８０１０９）１０ＩＵ／只，注射ｈＣＧ后即与公鼠按１：１合笼。
次日８：ｏＯ检查阴栓，凡阴门处有阴道栓，合笼后４７ｈ脱臼处死小鼠，获取２一细胞胚胎。
１．３数据统计采用卡方检验。
２实验结果２．１小鼠阴道涂片上皮细胞变化及外阴部特点观察‘２３见表１和图１、图２。
表１小鼠阴道涂片上皮细胞变化及外阴部特点图１不同发情时期阴道上皮细胞变化２．２不同发情周期小鼠超排效果由表２可知，（１）不同发情周期超排成功率，实验１组、２组和４组极显著高于３组和对照组（Ｐ＜ｏ．０１）。
（２）平均图２不同发情时期外阴部特征每组可用胚胎率，实验ｌ组、２组、４组与对照组无显著差异（Ｐ＞ｏ．０５），但与实验３组差异极显著（Ｐ＜ｏ．０１）。
SPF级小鼠超数排卵效果
以 供 应 ３５ｄ胚 胎 为 需 要 所 用 ， Ｓ Ｆ级 Ｋ 小 鼠使 用 ４～ｌ 周 龄 的 都 可 以 ； 外 ，Ｐ ． 而 Ｐ Ｍ ０ 另 ＳＦ级 小 鼠超 数 排 卵 处 理 仍 宜 在
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２０ ０ ８年 ３月 第 ｌ卷 ８ 第 ３ 期
中 国 比较 医学 杂 志
Ｃ ＮＥ Ｅ Ｊ ＨＩ Ｓ ＯＵＲ ＮＡＬ ＯＦ ＣＯＭＰ ＡＲＡＴ Ｖ Ｉ０ ８ Ｖ １ １ ＮＯ ３ Ｏ ．８ ．
ｓ ａｏ ｅ ｓ ｎ．Ｍ ｅ ｏ ￣ ｄ Ｗ ｅ ｇ ｖ ｕ ｒ ｖ ｌｔｏ ｒ ａｍｅ ｔｔ ａ ｅ ｓ ｐ ｏ ｕａ ｉｎ ｔｅ ｔ ｎ ｏ ＢＡＬＢ ／ ｎ ｅ ｃ ａ ｄ Ｋｍ ｃ ｅ ｒ ｍ ｏ １ ｅ ｓ ｉ ｐ ｎ ｓ ｍｍｅ ｄ ｍｉｅ ａ ｄ ｆｏ ４ ｔ ０ ｗｅ ｋ ｎ ｓ ｒ ｇ， ｕ ｇ ｉ ｒａ ｎ ｗｉｔｒｒｓ ｃｉｅｙ．Ｓｔｔｓｉｓ ｎ ｅ ｅｐ ｔ ｌ ｅ ｖ ａ ｉｔｃ ｗｅ ｄ ｎ ｂ ｓ ｄ ｏ ｈ ｒｔ ｆｖ ｇｉｌ ｐｕ ｄ ｏ ｕａ ｏ ｔ ｅ ｕ ｅ ａ ｄ ｈｅ ｙ ｏ ｍｂ ｏ ｅ ｒ ｏ ｅ ａｅ ｎ ｔ ｅ ａｅ ｏ ａ ｎａ ｌｇ ａ ｖ ｌｔ ｎ， ｈ ｎ ｍｂ ｒ ｎ ｔ ｔｐ ｎ ｉ ｅ ｆｅ ｒ ｙ ａ ｑ ｉ ｄ ｉ ａ ５．Ｒｅ ｕｌ Ｎｏ ｅ ｏ ｈｅ３ ｆｃｏｓｗｅ ｉｖ ｓｉａｅ ａ ｅａ ｆ ｃ ｎ ｔ ｅｒｔ ｆｖ ｉａ ｌｇ ｉ ｐ ｃｆ ａｈ ｇ ｎ ｃ ｕ ｒ ｎ ｄ ｙ３． ｅ ｓ ｔ ｎ ｆｔ ａ ｔｒ ｎ ｅ ｔ ｔ ｄ ｈ ｖ ｎ ｅ ｅ ｔｏ ｅｏ ａ ｎ ｐ ｕ ｎ ｓ ｅ ｉｃ ｐ ｔｏ ｅ — ｇ ｈ ａ ｇ ｌ ｉ ｆｅ ＡＬ ｃ ａ ｄ Ｋｍ ｃ ｒｅ Ｂ Ｂ／ ｎ ｍｉｅ．Ｏｔ ｅｗｉｅ ｔ ｓ ａ ｔｒ ｖ ｅｔｉ ｆｅ ｔｏ ｅｒｔ ｆｅ ｒ ｏｐ ｏ ｕ ｅ ｔｅ ｎ ｍｂ ｒａ ｅ ｔｐ ｈ ｒ ｓ ｈｅｅ ｆｃｏｓｈａ ｅａ ｃ ｒ ｎ ｅ ｃ ｎ ｔ ｅ ｏ ｍｂ ｒ ｄ ｃ ｄ， ｕ ｅ ｎｄ ｔ ｙ ａ ｈ ａ ｙ ｈ ｈ ｅ ｏ ｍｂ ｏ ｉ ｐ ｃ ｃｐ ｔｏ ｅ ｆｅ ｆｅ ｒ ｎ ｓ ｙ ｅ ￣ ａ ｇ ｎ—ｒ ｅＢＡＬ ／ ｎ ｈ Ｂ ｃａ ｄ ＫＭ ｃ ｍｉｅ．Ｃｏ ｃｕ ｉｎ Ｕｓｎｇｓ ｃ ｔｏ ｅ —ｒｅ ＢＡＬ ／ ｃ ｅ ｒ ｍ ｎ ｌｓｏ ｉ ｐ ￣ｃ ｐ ｈ ｇ ｎ ｆｅ ｅ ａ Ｂ ｃ ｍｉｅ ａ ｄ ｆｏ ９ ｇ ｔ ０ ｗｅ ｋ ｎ ｔｅ ｓ ｐ ｒｖ ｌｔ ｎ ｅ ｐ ｒｍｅ ｓ ｍａ ｉｅ ａ ｓｔｓ ｅ ｕ ｅ ｒｅ ｒｏ ｉ ａ ５， ｉｅ ｔｅ ｐ ｐ ｒａ ｅ ｏ ｏ １ ｅ ｓｉ ｕ ｈ ｅ ｏ ｕａｉ ｘ ｉ ｎｔ ｙ ｇｖ ａｉｆ ｄ ｎ ｍｂ ｍｂ ｎ ｄ ｙ ３． ｗｈｌ ｈ ｒ ｅ ｏ ｅ ｉ ｙ ｅ ｇ ｆＫｍ ｃ ｍｉｅ ｒ ｎ ｅ ｒ ｍ ｏ １ ｅ ｓ ａ ｇ ｓｆｏ ４ ｔ ０ ｗｅ ｋ ．Ａｌｏ， ｕ ｒ ｖ ｌｔ ｎ ｔｅ ｔ ｎ ｎ ｓ ｃ ｃｐａｈ ｇ ｎ ｆｅ ｃ ｈ ｕｄ ｂ ｏ ｅ ｉ ｐ ｎ ｒｓ ｓ ｓ ｐ ｏ ｕａｉ ｒ ａｍｅ ｔｉ ｐ ￣ ｔｏ ｅ —ｒ ｅｍｉｅ ｓ ｏ ｌ ｄ ｎ ｎ ｓ ｒ ｇ ｏ ｕｍｍｅ ， ｓｉ ｅ ｏ ｅ ｅ ｉ ｒ ａ ｔ ｃ ｕｄ ｇｖ ｏ ｎ ｅｕ ｔ ｏ ｌ ｉｅ ｙ ｕ ａ ｆ ｅ ｒｓ ｌ ． ｉ
小鼠超数排卵相关问题的探讨
小鼠超数排卵相关问题的探讨刘维俊;高珊;唐菲;张一云;刘牧;薛孝先【期刊名称】《黑龙江动物繁殖》【年(卷),期】2011(019)001【摘要】应用回顾性研究方法,对国内近年小鼠超排中遇到的若干相关问题进行研究和总结.研究探讨了小鼠超排的各个影响方面,包括:环境因素、供体雌鼠个体和遗传差异以及试剂等因素.比较了国内外不同试验室使用不同产品孕马血清(PMSG)、人绒毛膜促性腺激素(hCG)对小鼠超排效果的影响.利用纯度不同的PMSG、hCG 进行小鼠超排试验,结果差异较大.延长超排后采集卵母细胞时间,可用成熟卵母细胞数量相对减少,且不利于体外受精.【总页数】9页(P1-9)【作者】刘维俊;高珊;唐菲;张一云;刘牧;薛孝先【作者单位】海南省药物研究所/海南省实验动物中心,海口市,570216;中国医学科学院,医学实验动物研究所,北京,100021;海南省药物研究所/海南省实验动物中心,海口市,570216;海南省药物研究所/海南省实验动物中心,海口市,570216;中国医学科学院,医学实验动物研究所,北京,100021;中国疾病预防控制中心,北京,100050;内蒙古大学,生命科学院,呼和浩特,010021【正文语种】中文【中图分类】S814.3【相关文献】1.周龄·初始注射时间对小鼠超数排卵的影响 [J], 巩雪洁;臧敦安;许文豪2.中国兔子超数排卵相关问题的研究(一) [J], 刘牧;高珊;孙井江;张建军;刘云波3.中国兔子超数排卵相关问题的研究(二) [J], 刘牧;高珊;孙井江;张建军;刘云波4.小鼠超数排卵和小鼠胚胎体外培养的研究 [J], 张春兰;侯健5.动物科学专业《小鼠超数排卵实验》开放式实验教学课程设计与实践 [J], 倪萌萌;赵佳福;陈祥;龚婷;李辉因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
小鼠超数排卵与早期胚胎体外培养效果研究
江丙农业学报2010，22(12)：144～146A c t a A g r i c uhu r ae J i an gxi小鼠超数排卵与早期胚胎体外培养效果研究林峰，陈玉霞+，孙克宁，杨婷，田晓军(河南农业大学牧医工程学院，河南郑州450002)摘要：为探讨冲胚方法对小鼠超数排卵效果的影响，分别采用子宫切碎法与子宫冲胚法对超排小鼠进行了冲胚。
结果表明：子宫冲胚法的平均采卵数和平均获胚数极显著高于子宫切碎法(P<0．01)，而平均可用胚数显著高于子宫切碎法(P< O．05)，两种方法的平均未受精卵数则差异不显著(P>0．05)，说明冲胚方法对小鼠超数排卵效果的影响显著，且子宫冲胚法明显优于子宫切碎法。
小鼠早期胚胎发育观察结果表明：超排处理后，在公母鼠合笼后76～79．5h采胚，胚胎大多处于桑椹胚期，而在公母鼠合笼后88～91．5h采胚，胚胎大多处于致密桑椹胚期与囊胚期；采用TC M l99+15％胎牛血清培养液对小鼠胚胎进行体外培养是可行的。
关键词：小鼠；超数排卵；早期胚胎；体外培养；冲胚方法中图分类号：Q132．8文献标识码：A文章编号：1001—8581(2010)12—0144—03St udy on E f f ect of Super ovul a t i on and i n vi t r o C ul t ur e of Ear l y Em br yo i n M ous eLI N Fe n g，C H E N Y u—xi a‘，SU N K e—ni ng，Y A N G Ti ng．T I A N X i ao—j u“(C ol l ege of A n i m a l H us ba ndr y a nd V et er i nar y M e di ci ne，H enan A矛c ul t ur al U ni ver si t y．Z he ngzhou450002，C hi na)A bs t r act：I n t hi s paper．t he e ffe c t of dif f erent m e t h ods of c o l l ec t i n g e m br yos on t he s uper ovul at i on of m i c e w a s s t udi ed，and t he e m br yos i n t he suoer ovul at ed m i Ce w er e coll ected by usi ng t he ut erus—m i nc i ng m e t ho d a nd ut er us—col l ect i ng m e t hod re s pec t i ve l y．ne r es ult s show e d t ha t t he aver age num ber of eggs and em bryos obt ai ned by t he ut er us—co l l ect i ng m e t ho d w er e,ext r em el y s ignif i ca ntl y hi gher(P<0．01)t han t hos e obt ai ned by t he ut e r us—m i nci ng m e t hod，an d t he aver age nu m ber of us abl e em bryos obt ai ned by t he u t e r r us—coll ect i ng m e t he d w强si gni f i cant l y hi gher(P<0．05)t han t ha t di d by t he ut erus—m i nc i ng m et hod．ne aver age num be r of an-fe r t i l i zed eggs obt ai ned by t hes e t w o m e t h ods w a s no t s ignif i cant ly di f f er e nt(P>O．05)．So t he s uper ovu l at i on e ffe c t of m i c e W a S s i g-nif i e ant lv i nnue nee d by t he m e t ho d of coll ect ing em bryos．T he obs er vat i on r es ult s of ear l y e m br yos de vel opm ent i ndi cat ed t hat m ost of t he em bryos coll ected76—79．5hour s aft er com bi ni ng cages w e r e at m or ul a s t age．w hi l e m os t of t}l e em bryos coll ected88～91．5 hour s a ft e r com bi ni ng cages w e r e a t com pa ct e d m or u l a s t a ge and bla s t o e yst s t ag e．I t W a S f eas i ble t ha t t he em bryos of m i c e w er e cul t i—vat ed i n vi t ro by usi n g t he m i xed s o l ut i o n of T C M l99and15％F C S．K e y w or ds：M ouse；Sup er ov ul at i on；E ar l y em br yo；I n vi t ro cul t ur e；M e t hod of coll ect ing em bryos雌性哺乳动物一生所产的卵子总数早在其胚胎发育形成卵巢的过程中已被确定，成熟卵子在成年后的发情周期中分别排出，但是单纯依靠动物的自然排卵，一方面所得到的卵母细胞数或胚胎数较少，另一方面又消耗大量的时间和浪费较多的动物．因此为了获取大最的胚胎，多采用超数排卵的方法，即利用外源性促性腺激素诱发多个卵泡同时发育并排出具有正常受精能力的卵子¨。
小鼠生物净化中的动情周期判定及超数排卵
［ 关键 词］小鼠； 动情 周期 ； 阴道 涂 片； 超数 排 卵 ［ 中图分类 号］ Ｑ９ ５ － ３ ３ ［ 文献标 识码 ］ Ｂ 【 文章编 号］１ ６ ７ ４ ５ ８ ｌ ７ （ ２ ０ ｌ ４ ） ０ １ — ０ ０ ５ ６ ． ０ ３
５ ８
实验动物与 比较医学 Ｌ ａ ｂ ｏ ｒ ａ ｔ ｏ ｒ ｙ Ａ ｎ ｉ ｍａ ｌ ａ ｎ ｄ Ｃ ｏ ｍ ｐ ａ ｒ ａ ｔ ｉ ｖ ｅ Ｍｅ ｄ ｉ ｃ ｉ ｎ ｅ
Ｆ ｅ ｂ ． ２ ０ １ ４ ， ３ ４ （ １ ）
雌 性 小 鼠性 成 熟后 ， 生殖 器 官在 激 素 的诱 导下 发 生增 生及 至退化 的周 期性变 化为动 情周 期 。大 多 数 文 献认 为 小 鼠动 情 周期 一般 为 ４ ～ ５ ｄ ，并将 其划 分 为动 情 前 期 、动 情 期 、动 情 后 期 和 间情 期 四个 阶段 ［ １ ￣ 。 目前 ， 文献 上描述 较 多 的判 定小 鼠动情 周 期 的方 法有 外 阴直 接观 察法 、 阴道 栓观 察法和 阴道 脱 落细 胞涂 片法 三种 【 】 。但 实验 中发现 ， 小 鼠动情 周 期各 阶段 的外 阴变化 并如文 献描述 那么 典型而 且 仅 能判断 出小 鼠处 于动情前 期和动情期 （ 雌 鼠接受雄 鼠交 配 ） ， 对 于 需 要 体 外 受 精 的 实 验 并 不 完 全 适 用 。 阴 道 涂 片 法 判 定 小 鼠 的动 情 周 期 简 单 、 准 确 ，大 多数有 关小 鼠生殖 生理 的文献 也都提 及 了这 个 方 法 ，但 对操 作 方法 和 判定 标准 描 述不 够 详尽 。
超 排 诱 导 时期和 增 加小 鼠的排 卵数 具 有指 导 意义 。
昆明鼠超数排卵影响因素研究
Ｐｒ ｇ ｅ ｓ ｉ ｔ ｒｎａ ｙ Ｍ ｅ ｉ ｉ ｅ ｏ ｒ ｓ ｎ Ｖｅ ｅ ｉ ｒ ｄｃｎ
昆 明 鼠超 数 排 卵 影 响 因素 研 究
崔 元 戎 金 辉 杜 春 艳。 ， ， ，王 纯 耀 。 辉 ，张钦 宪 ，陈
摘 要 ： 为探 讨 昆明 鼠超数 排 卵 的最佳 条件 ， 高超排 效 果 ， 提 比较促 性腺 激 素使 用剂 量 、 孕马 血清促 性腺 激素 （ ＭＳ 与人 绒 毛膜促 性腺 激 素 （ Ｃ 注射 间 隔 时 间、 排 小 鼠 所 处发 情 周期 阶段 及 小鼠周 龄 等 因素 Ｐ Ｇ） ｈ Ｇ） 超 对 昆明 鼠超数 排 卵结 果的 影响 。Ｐ Ｇ ８Ｉ ＋ｈ Ｇ ８Ｉ 间 隔 ４ ～ ４ ＭＳ Ｕ Ｃ Ｕ、 ６ｈ ８ｈ注射 组超 排 效 果 最好 ； ３周 龄 、 ８ 周龄 ～ １ Ｏ周龄雌 鼠较 ４周龄 ～７周 龄雌 鼠超 排 效果好 ， 鼠发 情 间期 或 发情 前 期 开始 超 排 的 效 果显 著 高于 小 发 情 周期 的其他 时期 。 关键 词 ： 明鼠 ； 数排 卵 ； 昆 超 激素 剂 量 ； 情周 期 阶段 发
自宁波 市 三 生药 业 有 限 公 司 ；Ｍ２ Ｍ１ 、 ６培 养 基 、 透
明质 酸酶 、 石蜡 油 均为 Ｓｇ ｉｍａ公 司产 品 。 １ １ ２ 仪 器设 备 与 器材 ．． 一次 性 塑料 培 养皿 ， 体视
卵母 细胞 数显 著 高于第 １组与第 ３组 （ １ 。 表 ）
２ ２ 促 性腺 激 素注射 间隔 时间对 超排 效果 的影 响 ． ６ Ｏ只 ８周 龄雌 性 鼠随机 分 为 ３组 ， 分别 于 注射 ８Ｉ ＭＳ 后 ４ 、 ８ ５ Ｕ Ｐ Ｇ ６ ４ 、０ｈ注 射 ８Ｉ Ｃ Ｕ ｈ Ｇ。结 果相 隔 ４ 、 ８ｈ注射 激 素 回收 的卵母 细 胞无 显 著 性差 ６ｈ ４
【小鼠超数排卵试验】小鼠超数排卵
【小鼠超数排卵试验】小鼠超数排卵小鼠是一种使用最为广泛的实验动物，在发育生物学和生殖生物学研究方面，利用小鼠进行有关研究及探索许多理论和实践问题有许多便利之处。
小鼠对超数排卵反应，受体况、年龄、季节、营养状况、激素的种类、剂量等因素的影响。
由于影响因素很多，于是要对每只受体鼠处理后都得到预期的效果是比较困难的。
其影响的关键因素在于个体对药物的反应（敏感性）及年龄等。
我们采用四种方法对小鼠进行超排处理，目的是比较所用的超排效果，为研究山羊、奶牛的超数排卵，胚胎移植提供材料。
一、材料和方法1.实验材料1.1药品FSH（宁波第二激素厂），PMSG（宁波第二激素厂），LH （宁波第二激素厂），HCG（杭州动物药品厂）等。
1.2 实验动物雌性昆明白系性成熟小鼠20只（购自安医动物房）。
2.超排方案将20只母分成4组，每组5只。
2.1方案一给每只小鼠腹腔注射10IU的PMSG，间隔48小时后，再腹腔注射10IU的HCG。
2.2 方案二给每只小鼠腹腔注射5IU的PMSG，间隔48小时后，再腹腔注射5IU的HCG。
2.3 方案三给每只小鼠注射FSH剂量为2IU、2IU、2IU、2IU、1IU、1IU、每次注射间隔12小时，在最后一次注射FSH后12小时，再腹腔注射10IU的LH。
2.4 方案四每次给小鼠注射FSH剂量为2IU、2IU、、1IU，每次注射时间间隔12小时，在最后一次注射FSH后12小时，再腹腔注射5IU的LH。
2.5 采卵最后一次注射激素后4-6个小时，处死小白鼠，剪开皮肤，用眼科镊拉出小白鼠左右两侧子宫和卵巢，把输卵管与子宫、卵巢分离，找出输卵管的膨大部，将孵卵管移到培养皿中。
2.6 显微观察与卵母细胞计数在体视显微镜下，将沉浸在生理盐水中的输卵管的膨大部找出，用胚胎操作针将卵分离出来，再加入透明质算酶（HE液），过2~3分钟进行观察记数。
二、结果1.各组超数结果1.1按方案一超排的5只小白鼠，共回收卵母细胞189枚，平均每只回收卵37.8枚（见表1）1.2 按方案二超排的5只小白鼠，共回收卵母细胞229枚，平均每只回收卵45.8枚（见表2）1.3按方案三超排的5只小白鼠，共回收卵母细胞186枚，平均每只回收卵37.2枚（见表3）表1 方案一超排小鼠的排卵数表2 方案二超排小鼠的排卵数表3 方案三超排小鼠的排卵数1.4按方案四超排的5只小白鼠，共回收卵母细胞178枚，平均每只回收卵35.6枚（见表4）表4 方案四超排小鼠的排卵数2.左右两侧卵巢排卵数差异显著性检验由表5可见|t|0.05（t0.05（8）=2.306，t0.05（8）=3.355），说明采用四种不同的超排方案左右侧卵巢排卵数没有显著差异。
小鼠超数排卵的实验方法
新教参中宜介绍“假减数分裂” 什么叫“假减数分裂”呢?以下就以雄蜂产生精子的过程为例给大家介绍一下。
蜜蜂群体由蜂王、雄蜂和工蜂组成,其中蜂王和工蜂是由受精卵发育而来的,雄蜂是由未受精卵发育而来的。
蜂王和工蜂是二倍体(2n =32),雄蜂是单倍体(n =16)。
雄蜂的假减数分裂过程 雄蜂在产生精子的过程中,它的精母细胞进行的是1种特殊形式的减数分裂。
在减数第1次分裂中,染色体数目并没有变化,只是细胞质分成大小不等的两部分。
大的那部分含有完整的细胞核,小的那部分只是一团细胞质,一段时间后将退化消失。
减数第2次分裂,则是1次普通的有丝分裂,在含有细胞核的那团细胞质中,成对的染色单体相互分开,而细胞质则进行不均等的分裂,含细胞质多的那部分(内含16个染色体)进一步发育成精子,含细胞质少的那部分(也含16个染色体)则逐步退化。
雄蜂的1个精母细胞,通过这种减数分裂,只产生1个精子,精母细胞和精子都是单倍体细胞。
这种特殊的减数分裂称为“假减数分裂”。
陈 维(连云港市东方中学江苏连云港222042) (BH ) 小鼠超数排卵的实验方法 随着基因工程、发育生物学的发展,超数排卵技术应用于生物学的研究和生产养殖中,如何让这些应用性的实验充实教学内容、培养学生的实验动手能力,是值得探讨的问题。
小鼠繁殖快、不受季节影响,是现代生物学中最好的实验材料,现将实验方法简述如下:1 实验材料 材料:5～6周龄的♀鼠。
器具:解剖镜、解剖针、培养皿、剪刀、镊子和注射器。
药品:孕马激素、HCG (人用绒毛膜促性腺激素)、生理盐水。
2 实验方法 选取5～6周龄的健康♀鼠,在下午4～5点时,每只小鼠注射1mL 孕马激素(5单位 mL ),48h 后每只小鼠再注射HCG 1mL (5单位 mL ),然后放入 鼠与之交配,雌雄比例♀2∶ 1。
在15～18h 后取卵,断颈处死小鼠,剪开腹腔,掀开内脏,暴露出子宫,剪取宫颈和卵巢之间的输卵管后,放在盛有生理盐水的培养皿中,在解剖镜下剥去脂肪,用生理盐水清洗3次,找到盘曲状的输卵管上面的透明膨大部分,用解剖针挑破透明膨大部分,游离出多个受精卵细胞。
小鼠发育生物学实验内容
小鼠发育生物学实验内容实验一：小鼠卵母细胞和精子的形态观察一、实验目的：掌握胚胎体外操作工具的制备、小鼠超数排卵方法以及小鼠精子和不同发育阶段观卵母细胞的收集方法，观察精子结构和运动状态，评估精子活力，观察卵母细胞结构，了解体外授精操作过程。
二、操作过程：1 胚胎体外操作工具制备在酒精喷灯上将玻璃管拉成直径1mm的细管，连上乳胶管即可。
2 小鼠的抓去与保定3 收集精子断颈处死公鼠，打开腹腔，找到睾丸和附睾，剪取附睾尾，剪碎，置1.5ml离心管底部，加0.5ml 生理盐水，置37度水浴锅20分钟，用吸管从离心管上部取50微升液体，置细胞计数板，观察精子结构、密度和活力。
精子活力计算公式：精子活力＝视野中直线运动的精子数/视野中总精子数4 收集卵母细胞成熟卵母细胞的收集：母鼠腹腔注射孕马血清促性腺激素PMSG（每只10单位），48小时后再注射人类绒毛膜促性腺HCG（每只10单位），18小时后断颈处死母鼠，打开腹腔，剪下输卵管，用镊子刺破输卵管壶腹部，释放卵母细胞，用透明质酸酶溶液（10毫克/毫升生理盐水）处理卵母细胞以除去颗粒细胞，在实体显微镜下观察卵母细胞的结构。
未成熟卵母细胞的收集：断颈处死性成熟前母鼠，打开腹腔，剪取卵巢，加入1毫升盐水，用刀片或镊子捣碎卵巢，寻找生发泡状态的卵母细胞，观察卵母细胞结构。
5 体外授精将卵母细胞与精子共培养（微滴培养法）（演示）三、实验结果各种精子和卵子的形态绘图；精子活力；精子密度四、实验收获与体会，存在问题和改进意见。
实验二：小鼠早期不同发育阶段胚胎的收集、观察以及胚胎移植一、实验目的：掌握小鼠附植前胚胎收集方法，观察不同发育阶段小鼠胚胎的结构，认识小鼠早期胚胎形态学，并了解体内发育阶段与所处生殖器官位置的关系，了解小鼠胚胎移植的基本原理和操作过程。
二、操作过程：1 小鼠超数排卵程序中午12时腹腔注射PMSG，48小时后腹腔注射HCG并与公鼠合笼交配，次日清晨检查阴道栓，如果发现阴道栓则妊娠0.5天。
影响小鼠超数排卵的若干因素
影响小鼠超数排卵的若干因素李聚学;魏雁;魏庆信;郑新民;曹斌云【期刊名称】《湖北农业科学》【年(卷),期】2004(000)004【摘要】分析了激素剂量、激素注射间隔时间、发情周期、季节和温度等因素对小鼠超排效果的影响.结果表明:PMSG与HCG剂量为10IU时,见栓小鼠平均获卵数(39.6枚),显著高于5IU(27.2枚)和15IU(25.5枚)激素剂量;PMSG与HCG注射间隔时间46h与48h见栓小鼠平均获卵数(分别为35.7枚和38.0枚)差异不显著;当激素注射时间间隔为50h时,见栓小鼠平均获卵数(20.3枚)显著下降;发情周期不同阶段开始超排效果不同,发情前期开始超排,其见栓率(82%)、见栓小鼠平均获卵数(37.9枚)均显著高于其他情期;当环境温度维持在(20±5)℃时,不同季节小鼠超排效果无显著差异;冬季鼠房温度在(20±2)℃时,小鼠超排见栓率(77%)和见栓小鼠平均获卵数(33.2枚)均极显著高于环境温度为(10±2)℃的超排效果.【总页数】3页(P120-122)【作者】李聚学;魏雁;魏庆信;郑新民;曹斌云【作者单位】西北农林科技大学动物科技学院,陕西,杨凌,712100;湖北省农业科学院生物技术研究所,湖北,武汉,430064;湖北省农业科学院生物技术研究所,湖北,武汉,430064;湖北省农业科学院生物技术研究所,湖北,武汉,430064;西北农林科技大学动物科技学院,陕西,杨凌,712100【正文语种】中文【中图分类】S814.4【相关文献】1.影响小鼠超数排卵效果的因素 [J], 孙玉成;张建芳;孟令君;高建明2.影响小鼠胚胎显微注射成功率的若干因素 [J], 张德福;陈茵;王英;王凯;张平;李震3.影响小鼠显微注射胚胎质量的若干因素 [J], 王英;刘丽君4.影响小鼠转基因原核胚体外发育的若干因素 [J], 张德福;陈茵;王英;王凯;张平;李震5.影响昆明小鼠和BALB/c小鼠胚胎干细胞分离、克隆、传代的若干因素 [J], 郭志林;王新庄;王木;张涌;王轶敏因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
小鼠实验胚胎技术
整理版ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
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LIM1基因敲除无脑小鼠
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震颤小鼠与多发性硬化
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震颤小鼠与多发性硬化
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转基因动物、基因敲除动物制作方法和原理
克隆目的基因 构建载体
精子 载体法
雄原核 注射法
胚胎 感染法
• 缺点：相对复杂
存在生物安全性问题 形成嵌合体 后期工作量大
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曲细精管注射法：
将外源基因注射入雄性动物的曲细精 管内，在精原细胞分裂过程中外源基因随 机整合入受体基因组，再通过精卵受精产 生带有外源基因的个体。
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曲细精管注射法流程图
目的基因克隆、纯化
逆转录病毒载体的构建
雄性个体曲细精管注射
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嵌合体动物制作方法：
一、聚合法 1. 胚胎-胚胎：两个8细胞期~桑椹期的胚
胎去透明带后，在植物血凝素的作用下， 互相粘附融合在一起重新形成一个胚胎， 移植后发育成一个个体。
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2. 胚胎-胚胎干细胞：一个8细胞期~桑椹 期的胚胎和多个胚胎干细胞在植物血凝 素的作用下，形成一个融合胚胎，移植 后发育成一个个体。
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胚胎干细胞法特点：
• 优点：可以进行基因定点的敲除和导入
• 缺点：环节多、过程复杂
需要昂贵仪器
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几种对母鼠繁殖有作用的激素A
类别 下
名称
简称
激 激 GnRH
来源
化学特征 生理功能
丘 脑 部 激 素
素 素
素 素 素 OXT ,
作用
几种对母鼠繁殖有作用的激素B
促 性 腺 激 素
促卵泡素 促黄体素 GnRH LH 腺垂体 腺垂体 糖蛋白 糖蛋白
促使卵泡发育和成熟，促 进精子发生 刺激排卵，促进黄体生成， 促进雄激素和孕激素的分 泌 促进泌乳，对某些动物刺 激黄体功能和孕酮的分泌， 增强母性行为 与促卵泡素类似，促进马 属动物辅助黄体的形成
小鼠的超数排卵
不同激素对不同小鼠超排的影响研究
指导老师:刘云海
Hale Waihona Puke 10131乙于昊研究的理论依据
造成超排效果（获卵率和可用的胚胎数）不 稳定的因素主要有两大类：一类是动物因素， 包括个体和遗传的差异、生理和营养状态、 开始超排的日期、季节及其它影响动物的环 境因素；另一类是药物因素，包括激素的半 衰期、激素制剂中的FSH／LH比例、给药途 径、剂量和频率等。
目前的研究进展
参考文献
①杨文胜 倪和民等 母兔超数排卵方法的研究 实验动物 科学与管理 1996. 4 ②徐平 不同日龄与品系小鼠超排卵、体外受精及受孕率的 比较研究 中国实验动物学杂志 2001. 6 ③李秦等 不同激素对哺乳动物超数排卵作用的研究 实验动 物科学与管理 1997.3
实验方法
主要实验内容： 主要实验内容：
实验方法
主要研究方法 c.实验器械
一次性塑料培养皿、显微镜、灭菌手术器械（眼科剪、眼科镊）、？ml 无菌注射器、吸管等。 d.实验步骤 将小鼠分为A、B及对照组三组，A、B每组6只，对照组8只，A组腹腔注 射PMSG + hCG ,B组腹腔注射PSMG + PG F2α ，对照组不作任何处理。 这样的注射一般在每天下午四点左右进行。先注射PMSG（A、C组）、 FSH（B组），在44小时候后注射hCG (B组)和PG F2α（C组）,在注射 组 （ 组 后第二天上午约八点左右将前一天处理过得小鼠处死，打开小鼠腹腔， 取出输卵管及卵巢，撕裂输卵管壶腹部，将胚胎冲出，在显微镜下检查 胚胎、卵巢，计数、记录 。
研究的理论依据
动物的整个生殖活动都是受神经、激素控制的。生殖系统与 神经系统、内分泌系统之间形成一条中枢神经、下丘脑、垂 体、性腺轴。由于这条轴的作用，使动物的生命活动按照严 格的规律有条不紊的进行。中枢神经系统把外界环境刺激传 到下丘脑，使之分泌促性腺释放激素，促性腺释放激素作用 于垂体，促使垂体分泌促性腺激素，促性腺激素即作用于性 腺，使性腺分泌性腺激素。垂体激素可以通过反馈作用调节 下丘脑释放激素的分泌。同样，性腺激素也可以通过反馈作 用调节下丘脑和垂体释放相应的激素。 生殖激素是指与动物性器官、性细胞、性行为等的发生和发 育以及发情、排卵、妊娠、分娩和泌乳等生殖活动有直接关 系的激素。
以小鼠为研究对象，其腹腔注射 以小鼠为研究对象，其腹腔注射PMSG＋hC ＋ G、PMSG＋hCG或PG F2α比较几组注射后排 、 ＋ 或 卵的效果。 卵的效果。
主要研究方法： 主要研究方法：
实验所需要的材料：
a、实验动物：清洁级小白鼠30只 b、实验药品：一定量的孕马血清促性腺激素（PMSG）人类绒毛膜 促性腺激素 (hCG) 前列腺素F2a(PG F2α)需要产地明确。生理盐/水， 75%乙醇、PBS(自配）。
实验方法
实验结果
观察解剖小鼠的卵巢（包括大小、黄体数量） 和胚胎的质量及数量 对观察结果统计分析 比较各组观察结果，找出超排效果较好的一 组
实验讨论
感谢
刘云海老师的指导和大力帮助 袁海滨同学及其他实验室同学 的合作和帮助
促乳素
PRL
腺垂体
糖蛋白
孕马血清 促性腺激 素 人类绒毛 膜促性腺 激素
PMSG
马属动物尿囊绒 毛膜 灵长类胎盘绒毛 膜 子宫及其他
糖蛋白
hCG
糖蛋白
与促黄体素类似
其它
前列腺素
PG
脂肪酸
溶解黄体，促进子宫收缩
目前的研究进展
在目前，关于超数排卵已有一些研究。如杨文胜、倪和民① 等发现采用相同品种、月龄和体重的处女母兔进行超数排卵 试验, 过低或过高剂量的PMSG，显着降低母兔的超排效果， hCG剂量的提高，有助于提高排卵率，获得较多的胚胎。而 徐平②对不同品系及日龄小鼠的超排研究发现，用PMSG和 hCG分别对不同日龄（28日龄、56日龄及112日龄）的ICR、 B6C3F1及C57BL/6J三个品系超排处理后，28日龄小鼠的排 卵数高于56日龄及112日龄的排卵数（P＜0.01）。而这与 Yokoyama与朱士恩研究结果完全相同。在李秦等③研究中， 用PMSG、APMSG、hCG、LHRH等对大鼠、小鼠、豚鼠、 家兔、绵羊、猪、牛等的超排作用系统探索后发现，PMSG 和hCG各5～10IU可使小鼠产生稳定的超排，取卵数达 50±10个。