犬同期发情与超数排卵

犬的同期发情与超数排卵技术
一超数排卵
一头优良母畜的卵巢内有成千上万个生殖细胞，但在一个正常性周期内只有几个卵同时发育，最终只有一个或几个卵泡成熟并排卵，而像牛这样的单胎动物，只有一或两个卵泡成熟排卵，而其他卵泡会逐渐闭锁、死亡。

因此，一头良种母牛一生也只繁殖十多个后代，大部分时间用于妊娠和哺乳。

如果能让良种母畜卵巢上更多的卵泡成熟排卵，进而利用生产力低下的同种母畜进行“借腹怀胎”，那么优良母畜可以获得后代的数目至少增加几倍到几十倍。

应用外源促性腺激素诱导卵巢多个卵泡发育，并排出具有受精能力卵子的方法，称为超数排卵(superovulation)，简称“超排”。

超数排卵技术既是重要的发情调控技术，又是胚胎移植的重要组成部分，其目的是为了得到更多的胚胎。

诱使单胎家畜产双胎也是超数排卵的目的之一。

其实犬是多胎动物没必要超数排卵。

（藏獒除外）
(一)超数排卵原理
雌性哺乳动物发育到胚胎后期，卵巢中生殖细胞的数量急剧增加，形成大量的卵原细胞，其中有一部分进一步发育为初级卵母细胞。

动物出生后，卵细胞的数量就不再增加，但储存数量相当可观。

随着年龄的增长，这些卵细胞不断退化，到性成熟时大部分已消失，但卵巢上仍有相当数量的卵原细胞和初级卵母细胞存在。

例如，狗有70万个，年轻母牛有5万～7．5万个，大鼠可达26万个。

正常情况下，动物卵泡的生长发育呈现卵泡波的特征：即一组卵泡被征集发育，其中一个或数个确立为优势化卵泡继续生长发育，并明显抑制其余卵泡，使之生长减弱，最终导致闭锁。

而卵泡的这种征集是由于获得了对促性腺激素的反应能力。

因此，家畜在一个性周期会同时有一组卵泡开始发育，但最后只有一部分卵泡发育成熟。

兔、猪可以有几个到十几个，牛一般只有一个卵母细胞成熟而从卵巢中排出，其他卵泡则成为闭锁卵泡，所以，卵巢中有大量的卵细胞并未得到利用。

用人工的方法，例如注射某些激素，可以促使更多的卵泡相继生长并成熟、排卵，这就是超数排卵的基础。

可以对卵巢产生作用并能引起卵子成熟和排卵的激素主要有：孕酮、雌二醇，促卵泡激素(FSH)、促黄体激素(LH)、促性腺激素释放激素(GnRH)等。

这些激素对卵巢的作用有相同之处，但也有差别。

有研究表明，人为地升高FSH的浓度将导致被征集卵泡体积变大、数目增多。

因此，在动物发情周期的一定阶段注射外源FSH或PMSG(孕马血清促性腺激素)就可以使更多的卵泡同时发育为优势化卵泡，之后，再在内源及外源促黄体素及雌激素的作用下全部排卵。

1927年，首先发现了超数排卵现象，即在小鼠和大鼠上做了垂体前叶组织的肌肉埋植实验，结果从输卵管中回收了60多个卵，大约是正常数的4～5倍。

1930年，Cole和Hart发现孕马血清可使未成熟的大鼠超数排卵，以此奠定了超数排卵的基础，至今仍在家畜中广泛应用。

此后的大量研究证明，引起家畜超数排卵的物质是与生殖生理有关的激素或促激素，并且较深入地了解了引起卵成熟和排卵的机理，使超数排卵技术广泛应用于家畜繁殖。

各类激素和促性腺激素虽然都具有独特的生理功能，但他们都不是单独影响机体，而是相互促进、相互制约。

FSH的主要功能是促进卵泡的生长及发育，再加上少量的LH就能进一步刺激卵泡生长、成熟和产生雌激素。

性腺分泌的雌激素再刺激垂体，使LH的分泌量增加，在大量的LH和少量的FSH 的作用下引起卵巢排卵。

在LH的刺激下，黄体生成、发育并分泌孕酮。

孕酮刺激子宫内膜生长，为胚胎的着床和维持妊娠创造条件。

在这一过程中，雌激素的参与同样也是不可缺少的。

各类激素的协调作用，促使家畜完成繁衍后代的功能。

诱导家畜超数排卵都要注射外源激素，其目的也是人工使动物体内的激素水平达到阈值，从而诱发卵的成熟和排放。

(二)超数排卵的方法
(1)FSH超排法在发情周期(发情当天为0d)第5～9d中的任意一天开始肌内注射FSH。

可选用国产纯化FSH1～3mg，其他厂家的FSH80～100IU，分8次用减量法或等量法肌内注射。

通常，在注射开始后第3d早晚，各肌内注射一次前列腺素(氯前列烯醇0．1mg／次)，也可仅注射一次前列腺素。

约48h后供体母犬发情。

观察到供体母犬发情后，按常规输精对超排供体牛输精需2～3次，间隔12h输精，仅1次输精时约在发情静止后18～24h。

每次用2份剂量；鲜精用10×106～50×106个活精子。

(2)PMSG超排法在发情周期第7～11d中的任意一天肌内注射1次即可，总量为500～850IU。

或按每千克体重5IU左右确定PMSG总剂量，在注射PMSG后48h及60h，分别肌内注射PGF2α1次，剂量0．1mg／次。

由于PMSG分子量较大，在体内半衰期长，而且易使母畜体内产生抗体，影响卵泡的发育。

故不少人在使用PMSG后2～3d再注射抗PMSG抗体(anti—PMSG)，以缩短其起作用时间(母牛出现发情后12h再肌内注射PMSG抗体，剂量以能中和残留的PMSG活性为准)。

(3)PVP(polyvinylpyrrolidone，聚乙烯吡咯烷酮)+FSH法FSH的超排效果虽然优于PMSG，但因其半衰期短，必须进行多次注射方能起作用，程序繁琐。

由于PVP 是大分子聚合物(分子量为40000～700000)，用PVP作为FSH的载体，和FSH混合后注射，可使FSH缓慢释放，从而延长FSH的作用时间，一次性注射FSH即可达到超排的目的，便于在生产中推广应用。

(4)CIDR结合外源促性腺激素法CIDR(孕酮阴道硅胶栓)是20世纪80年代开发的促动物发情产品，由新西兰InterAg公司生产。

使用CIDR可以将母犬的同期发情和超数排卵结合起来，使超排程序不受供胚犬发情周期等因素影响(发情当天除外)，超排效果可靠，同期发情时间一致，便于受体犬同步发情处理和新鲜胚胎移植。

如CIDRd-FSH+PG法，在供体阴道内放入第1个CIDR，10d后取出，同时放人第2个CIDR，5d后开始注射FSH，或给供体放入第1个CIDR后4～7d开始注射FSH，连续递减剂量注射3d(8次)，在第7次注射FSH时取出CIDR，同时注射PG(前列腺素)，一般在取出CIDR后24～48h发情。

二同期发情
一、同期发情的定义和意义
(一)同期发情的定义使一群母畜在同一时期内发情并排卵的技术，称为同期发情(synchro —nizationofestrus)，也叫发情同期化(estrussynchronization)。

同期发情是表面现象，而同期排卵(synchronizationofovulation)则是同期发情的内在表现和本质。

在畜牧生产中，诱导一批母畜在同一周或数天内同时发情，也可称为同期发情；在胚胎移植过程中，使用冷冻精液配种和新鲜胚胎移植时，一般要求发情差异时问不超过1天。

因此，必须严格控制同期发情的效果和准确性；如果使用冷冻胚胎移植，就不一定需要进行同期发情。

(二)同期发情的意义同期发情技术在现代畜牧生产中具有以下意义：
1．有利于推广人工授精技术常规的人工授精需要对每头母畜进行发情鉴定，这对于群体较大的规模化养殖场来说费时费力，不利于推广。

而利用同期发情技术结合定时输精技术(TimedArtificialInsemination，TAD就可以省去发情鉴定这一中间步骤，减少因暗发情造成的漏配，提高畜牧生产效率。

2．便于畜牧生产管理，提高效率现代畜牧业生产是规模化的养殖，利用同期发情技术，可以实现同期配种、妊娠、分娩、育肥、出栏。

集中安排生产活动，提高生产效率，降低生产成本，同时可以批量化出栏，提高商品群的整齐度，便于销售。

3．提高低繁殖率畜群的繁殖率对于低繁殖率的畜群，比如我国南方地区的黄牛和水牛，其繁殖率一般低于50％，这些畜群中的部分个体因饲养水平较低、使役过度等原因往往在分娩后很长一段时间内不能恢复正常的发情周期，因而对其进行诱导同期发情、配种、受孕，可以提高繁殖率。

4．同期发情是胚胎移植技术的基础采用新鲜胚胎移植时，一个供体可以获得十多枚胚胎，这就需要一定数量与供体母畜同期发情的受体母畜。

此外，有时候胚胎的生产和移植不在同
一个地点进行，也需要异地受体与供体发情同期化，从而保证胚胎移植的成功进行。

二、同期发情技术原理与所用激素
(一)同期发情技术原理母畜在一个发情周期中，黄体期占整个发情周期的70％左右，如牛的黄体期约为15d。

黄体分泌的孕酮对卵泡发育成熟有很强的抑制作用。

只有黄体溶解消退后，孕酮水平下降，卵泡才能发育至成熟阶段，母畜才能表现发情并排卵。

因此，控制母畜黄体期的消长，是控制母畜同期发情的关键。

在自然状态下，单个母畜的发情是随机的，在一个大群体的未孕成年母畜中，每天有1／21左右的母畜表现发情。

人为地控制母畜卵巢上黄体的消长就可以改变这种发情的随机性，使一群家畜按照人们的意愿发情和排卵。

人工延长黄体期或缩短黄体期是目前进行同期发情所采用的两种技术途径。

1．延长黄体期的同期发情方法对一个群体的母畜同时用孕激素进行处理，处理期间母畜卵巢上的周期性黄体退化。

由于外源激素的作用，卵泡发育受到抑制而不能成熟。

如果外源孕激素处理的时间过长，则处理期间所有母畜的黄体都会消退并且无卵泡发育至成熟。

所有母畜同时解除孕激素的抑制，则可在同一时期发情。

目前，多采用孕激素处理9～12d，处理后不能使全部母畜的黄体消退，因此可以在孕激素处理开始时给予一定剂量的雌激素，以加速黄体溶解，缩短黄体期，提高孕激素处理结束后卵泡发育的同期率。

2．缩短黄体期的同期发情方法消除母畜卵巢上黄体最有效的方法是利用前列腺素及其类似物(PGs)。

母畜用PGs处理后，黄体消退，卵泡发育成熟，从而发情。

各种家畜对PG的敏感程度不一样，羊的黄体必须在上次排卵后第4d才能对PG敏感，牛的黄体必须在上次排卵后第5d才对PG敏感，猪的黄体必须在上次排卵后第10d以上才对PG敏感，故一次PG处理后绵羊、山羊、牛、猪的理论发情率分别为13／17、13／21、16／21、11／21。

使用PG两次处理法，可以克服一次处理中有部分母畜不能同期发情的不足，通常在第一次处理后9～12d再做第二次处理，用于牛和羊的同期发情，可以获得较高的同期发情率和配种受胎率。

(二)同期发情所用激素
1．抑制卵泡发育的激素抑制卵泡发育的激素有孕酮、甲孕酮、氟孕酮、氯地孕酮、甲地孕酮及18一甲基炔诺酮等。

这类药物的用药期可分为长期(14--21d)和短期(8～12d)两种，一般不超过一个正常发情周期。

2．溶解黄体的激素前列腺素F2α(PGFzα)及其类似物(如氯前列烯醇)均具有显著的溶解黄体作用，在用于同期发情处理时，只限于处在黄体期的母畜有效。

3．促进卵泡发育、排卵的激素在使用同期发情药物的同时，如果配合使用促性腺激素，则可以增强发情同期化和提高发情率，并促使卵泡更好地成熟和排卵。

这类药物常用的有PMSG、hCG、FSH、LH、GnRH和氯地酚等。

三、各种家畜的同期发情与定时输精
同期发情的原理在各种家畜都是通用的，但是不同畜种间、不同生理阶段使用不同激素处理所要求的剂量不尽相同，因此应具体加以分析。

1．孕激素阴道栓使用PRID或CIDR放置阴道栓，4～7d后撤栓。

大多数母畜在撤栓后第2～4d内发情，可以在撤栓后第56h定时输精。

也可以在撤栓后第2～4d内加强发情观察，对发情者进行适时输精，受胎率更高；利用兽医B超，实时检测卵泡发育，当有大卵泡发育时，肌注GnRH，2h后人工授精。

2．PG处理法
(1)PG一次处理法肌内注射6mg的PGFzα，大多数在处理后第2～5d内发情，然后进行发情鉴定，适时输精。

(2)PG二次处理一定时输精法由于一次处理后，仅有70％左右的母犬有反应，因此可以在第一次处理后间隔7d再用同样的剂量处理一次，80～82h后定时输精，可获得54％的
情期受胎率。

3．孕激素一PG法先用孕激素通过阴道栓处理3d，处理结束时注射PG，母犬一般可在处理结束后2～3d内发情并排卵。

其理论依据是：经过孕激素处理5d后，处理排卵后3d内的母犬其黄体已经至少发展了3d，这时对PG已经敏感，此时再用PG处理后可以获得较高的发情率和受胎率。

高庆华等利用孕激素海绵栓一PMSG-PG法处理受体犬同期发情率达到75％，48h同期率达到62．15％，受胎率达到44．14％。

4．PRID-PGF2．-PMSG法第1d用PRID处理，第4d注射25mgPGFzα，第3d撤除阴道栓，撤栓的同时肌内注射500IU的PMSG，撤栓后56h定时输精。

配种后35d妊娠诊断的受胎率53．8％，配种24d和35d之间的胚胎死亡率为13．2％
5．PRID-PGF2．一GnRH法第1d用PRID处理，同时注射100pgGn—RH；第4d撤除阴道栓，撤栓的同时注射500pgPGF2α；第5d注射25µgGnRH，16～24h后定时输精。

配种后8d 妊娠诊断的受胎率44．7％。

6．CIDR-F4-PGF2α法为了防止CIDR处理时间缩短而造成受胎率和同期发情率降低，在CIDR-E2处理4d后，用PGFz。

处理以确保黄体退化，以提高发情效果，并在撤除CIDR后次日，再注射少量的雌激素(Ez)，以通过下丘脑一垂体的反馈调节，促使垂体释放LH，诱发排卵，从而实现24h后定时输精。

7．GnRH-PG-GnRH定时输精法
该法又叫Ovsynch(OVS)。

在第od注射25ugGnRH，第4d注射10µgPGFz。

，第5d注射同样剂量的GnRH，然后16～18h后定时输精，受胎率可达50％左右。

理论上讲，人工授精的最佳时机应在排卵前8～16h，Ovsynch法可控制排卵发生在GnRH二次处理后的36h内。

所以多数学者认为，在GnRH二次处理后12～20h内人工授精最好。

8．Heatsynch法在第od注射25µgGnRH，第4d注射10mgPGFzα，第5d注射0.3mgECP，然后在48h后定时输精。

参考文献
[1]杨利国主编．动物繁育新技术．北京：中国农业出版社，2009
[2]钟孟淮主编．.动物繁殖与改良．北京：中国农业出版社，2009。