恶性血液病细胞遗传学检测的标准方法及流程(精)
细胞遗传学实验技术标准操作规程（SOP）
细胞遗传学实验技术标准操作规程（SOP）细胞遗传学实验技术标准操作规程（SOP）外周⾎培养及染⾊体的识别 (2)⽩⾎病⾻髓及外周⾎染⾊体 (7)外周⾎细胞脆性位点检测技术 (9)⼈⽺⽔细胞培养收获操作程序 (11)绒⽑细胞培养和染⾊体分析 (13)⾼分辨染⾊体操作⽅法和识别 (15)GII式显带法 (21)N式显带法 (21)R(反式)显带法 (23)姐妹染⾊单体互换（SCE）技术 (23)荧光原位杂交操作程序 (25)附:细胞遗传学实验试剂配制标准操作规程（SOP） (27)天平称量操作规程 (27)药匙处理操作规程 (27)PBS配制规程 (28)胰酶配制规程 (28)培养基配制规程 (29)1N HCL配制规程 (29)1N N A OH配制规程 (29)外周⾎培养及染⾊体的识别1. 原理：外周⾎中的淋巴细胞⼏乎都是处在G0期或G1期，⼀般情况下是不分裂的。
当在培养基中加⼊植物⾎凝素（Phytohaemagglutinin PHA）时，这种⼩淋巴细胞受到刺激后转化为淋巴母细胞，并开始进⾏有丝分裂。
经过短期培养后，⽤秋⽔仙素处理就可获得⼤量中期分裂相的细胞，制⽚后可以清楚地对染⾊体进⾏观察与分析。
2. 外周⾎培养与收获操作步骤：2.1 采⾎：⽤20:1肝素（0.4%）温润⽆菌注射器抽取外周⾎5ml（注意：消毒时需脱碘）。
2.2. 种⾎：将注射器搓捏，使⾎样混匀，在⽆菌条件下，⽤7号针头垂直种⾎0.3ml±抗凝⾎（成年男⼦28滴，成年⼥⼦30滴左右，⼉童32滴）⾄外周⾎培养基内。
2.3. 培养：将培养瓶放⼊37℃恒温箱中培养68-72⼩时，注意第⼆观察培养液有⽆凝⾎、溶⾎或长菌的现象，可每天培养液摇⼀摇，以便细胞可获得充分的营养，但⼀般情况下可不摇。
2.4. 制⽚过程：2.4.1. 加秋⽔仙素：在培养完成前2-3⼩时，加⼊浓度为20ug/ml的秋⽔仙素2-3滴（7号针头竖滴）后，继续培养2-3⼩时。
细胞遗传学染色体诊断操作程序
4.3.3 校准程序
4.4 CO2培养箱
4.4.1 厂商及型号：
4.4.2 操作步骤：按Mode键至set灯亮，然后按左右箭头选择，设定温度，按上下箭头输入数值，然后按Enter键确认。最后按Mode键至Run灯亮（指示机器在运行状态）。
4.6.2.2 将样品放到载物台上
4.6.2.3 转动物镜转换器，使观察所需放大倍数的物镜转进光路。
4.6.2.4 调节目镜瞳间距
4.6.2.5 调节目镜屈光度
4.6.2.6 移动样品调节视野坐标，对样备
4.7.1.1 取出培养标本，用吸管将培养细胞液移至10ml刻度离心管，离
4.2.7 质控品
4.3 低速离心机
4.3.1 厂商名及型号：长沙平凡仪器仪表有限公司 型号：TD25-WS
4.3.2 操作步骤
4.3.2.1 打开仪器开关，按“功能”键，选择转速功能，按“▲”或“▼”
键，调整转速至2000r/min。选择时间功能项，按“▲”或“▼”键，调整时间至5min，按“确认”功能键。
4.1.6 标本处理方法
4.1.6.1 外周血和脐血培养 接种后的培养瓶置于37℃培养箱中培养68-72小时，并注意观察培养过程中有无凝血，溶血和细菌污染现象。在培养结束前2-3小时，加入20μg/ml的秋水仙素7号针头2-3滴，轻轻摇匀，继续培养至72小时。
4.1.6.2 羊水细胞接种和培养 将采集羊水的离心管2管各10ml置于离心机中离心1500rpm，10min。进入预先消毒的无菌室中，在超净工作台内进行接种。用吸管轻轻吸去羊水离心管上清液。约保留2.5ml，用吸管打散细胞，移至25㎝²方形带气孔的一次性无菌培养瓶中，再加入约3ml羊水培养基。每份标本接种2瓶，瓶口和瓶盖过火后盖上，标注上编号和患者名字。将培养瓶放入37℃CO2培养箱中，调节CO2浓度至5％，接种5天开始观察细胞贴壁情况，观察到细胞克隆间隔有1-2个克隆间隔的距离，细胞圆而透亮，即可开始换液。弃去旧培养液，加入新培养液5ml。换液后，隔天观察，当细胞生长旺盛，出现许多透亮而圆形饱满的细胞时（一般为10天左右），可收集细胞进行染色体制备。
基因检测实验室遗传疾病筛查结果判读及上报流程
基因检测实验室遗传疾病筛查结果判读及上报流程本文档旨在介绍基因检测实验室的遗传疾病筛查结果判读及上报的流程。
以下是详细的步骤和注意事项：1. 实验室遗传疾病筛查结果判读1.1 确认样本信息：在开始判读之前，请仔细核对样本的相关信息，包括受检者姓名、出生日期、性别等。
确保信息的准确性对于后续的判读工作至关重要。
1.2 遗传疾病基因检测结果分析：将基因检测得到的结果进行分析。
根据所采用的遗传疾病筛查方法（如全外显子测序、SNP芯片等），分析检测结果中的遗传变异信息。
1.3 判读遗传疾病风险：根据遗传变异的类型和已知相关疾病的数据库，判读受检者的遗传疾病风险。
可以使用在线遗传疾病数据库、专业软件或遗传疾病专家的指导进行判读工作。
1.4 确定遗传疾病筛查结果：在进行遗传疾病风险分析之后，根据判读结果确定受检者所携带的遗传疾病风险。
结果可以分为阳性（具有遗传疾病风险）、阴性（无遗传疾病风险）或者无法确定（需进一步验证或分析）等。
2. 遗传疾病筛查结果上报流程2.1 书面报告编制：将遗传疾病筛查结果整理成书面报告。
报告应包括受检者信息、实验室检测方法、遗传疾病风险判读结果等内容。
2.2 报告审核：由专业人员对编制好的书面报告进行审核，确保报告准确、完整并符合相关法律、行业标准。
2.3 报告发送：将审核通过的书面报告发送给遗传疾病筛查的申请单位或个人。
可以通过邮寄、电子邮件等方式发送报告。
2.4 保密与隐私保护：在整个上报流程中，要保证受检者的个人信息及遗传疾病数据的保密和隐私保护。
严格遵守相关法律法规，并采取技术和管理措施确保数据的安全性。
请注意，本文档旨在提供一般性的指导，具体的实验室遗传疾病筛查结果判读及上报流程可能因实际情况而有所不同。
在操作过程中应遵循相关的法律法规及实验室内部的操作流程。
血液及骨髓微生物学检验标准操作规程
血液及骨髓微生物学检验标准操作规程1 检验目的培养分离出临床患者的血液及骨髓中致病微生物并鉴定。
为临床诊断提供病原学依据。
2 检验原理根据微生物的生长的特点，在体外给微生物提供适宜的温度、湿度、营养等条件。
通过培养得到微生物，再通过仪器的生化试验或血清免疫等方法鉴定出致病菌。
3样品采集及运送3.1样品类型：血液及骨髓3.2标本采集3.2.1采集指征可以感染患者出现以下一种或几种特征时，可以考虑采集血培养：发热≥38℃，低温≤36℃。
寒战，白细胞增多（计数>10.0×109/L，特别是有核左移时）或减少（计数<3.0×109/L）皮肤黏膜出血，昏迷，多器官衰竭，血压降低，C反应蛋白、降钙素、1，3-β-D葡聚糖升高及突发急性呼吸、体温和生命体征改变。
3.2.2采血时间在患者接受抗生素治疗之前，患者寒战或者发热初期采血。
超过发热峰值后，病原菌会逐渐被机体免疫系统清除，从而降低检出率。
如果同其他项目一起，先采血培养。
特殊情况见“9常规情况处理”3.2.3采血部位采集外周静脉血，不建议采用动脉血或者通过血管内导管采血。
只有怀疑导管相关性血流感染时，可分别通过导管和外周静脉血采取相同量的血标本。
多次血培养阴性，仍发热不退或全身感染症状明显但不能明确感染来源时，可考虑采集骨髓标本。
3.2.4消毒首先采用75%酒精消毒穿刺部位皮肤，待干30秒以上，用安尔碘由内向外画圆消毒，直径3cm以上。
待干后，可进行静脉穿刺采血。
对碘过敏者可用75%酒精消毒60秒，待酒精挥发干燥后采血。
血培养瓶口用75%乙醇消毒干燥60秒。
3.2.5采血量、采血瓶、采集套数注：对感染性心内膜炎和真菌败血症应多次采集。
3.2.6用无菌注射器穿刺取血后勿换针头，直接注入血培养瓶并颠倒混匀防凝固，不可使用抗凝血。
3.2.7收集了血液标本的血培养瓶应立即送实验室，室温放置不要超过2小时。
不可放冰箱储存。
4 试剂及仪器4.1革兰染液、氧化酶试剂、触酶试剂、血琼脂平板、巧克力平板、麦康凯平板等。
细胞遗传学检查
1960年Nowell 和Hungerford发现了慢性粒细胞白血病特异性染色体异常，即Ph染色体，从此推动了细胞遗传学在肿瘤细胞学上的广泛应用，促进了血液肿瘤分子生物学的发展。
血细胞染色体检验主要包括染色体非显带技术、染色体显带技术、染色体高分辨技术、姐妹染色单体互换技术、染色体脆性部位显示技术、早熟凝集染色体技术、染色体原位杂交技术(FISH)。
【临床意义】细胞染色体检验是恶性血液病研究不可缺少的方法。
染色体异常，特别是染色体易位，常涉及癌基因易位，新产生的融合基因及其产物在肿瘤的发生、发展中起着重要的生物学作用。
特异染色体异常同肿瘤细胞的形态学、肿瘤的预后及疗效判断等有密切的联系，临床上已用于疾病的诊断、分型、治疗方案的选择，在预后判断和微小残留病灶的检测等方面，发挥着重要作用。
１、在白血病诊断和分型中的应用常规显带技术可在50%～80%急性髓细胞白血病(AML)中发现克隆性染色体异常。
如t(8;21)(q22;q22) 异常绝大多数见于AML-M2型。
t(15;17)(q22;q12) 目前仅见于AML-M3型，可作为M3诊断的标准。
2、在白血病预后判断、指导治疗中的作用 AML中具有t(15;17)，inv(16)，t(8;21)异常的患者对治疗反应良好，缓解期较长，而具有-5、-7、+8及t(9;22)的AML患者则预后较差。
3、鉴别白血病微小残留病灶在微小残留病灶的检测中，FISH技术的灵敏性要远远超过常规技术，通过设计多种探针直接对中期和间期染色体进行检测，可发现各种染色体数目异常或结构异常，达到在103个细胞中检出一个异常细胞的水平。
当临床及形态学还没有复发的证据时，检测到原已消失的克隆性染色体异常和/或新的克隆性染色体异常时，往往预4、在骨髓增生异常综合征(MDS)中的应用染色体异常见于40%～80%的MDS，常表现为染色体的丢失、部分缺失，亦可见染色体增加和结构异常如-7、-17、-Y、5q-、7q-以及+8、+11和t(3;3)(q21;q26)、t(5;17)(q32;q12)等。
2021版CSCO恶性血液病诊疗指南更新要点(全文)
2021版CSCO恶性血液病诊疗指南更新要点（全文）一、原发性系统性淀粉样变性01治疗前评估实验室检查：增加：垂体功能；肾上腺功能（2类）骨髓检查：增加：DWI-MRI（3类）影像学检查：增加：心肌活检+刚果红染色；肾穿刺活检+刚果红染色（2类）；穿刺活检组织质谱分析（3类）02器官缓解和进展标准增加器官功能进展标准：心脏、肾脏、肝脏、外周神经。
03新诊断的治疗对于适合移植的患者：增加：达雷妥尤单抗+硼替佐米+环磷酰胺+地塞米松（1A类）；删除：硼替佐米+马法兰+地塞米松，来那度胺+环磷酰胺+地塞米松，来那度胺+地塞米松，马法兰+地塞米松。
对于不适合移植的患者：增加：达雷妥尤单抗+硼替佐米+地塞米松（1A类）；伊沙佐米+来那度胺+地塞米松（3类）；删除：来那度胺+环磷酰胶+地塞米松，来那度胺+地塞米松。
04移植和巩固治疗增加“心脏移植（3类），肾脏移植（3类）”；删除“异基因移植”。
05复发治疗增加“达雷妥尤单抗+硼替佐米+地塞米松（1A类）、卡非佐米+地塞米松（2类）、伊沙佐米+来那度胺+地塞米松（2A类）、Bcl-2抑制剂维奈克拉（2A类）、泊马度胺+地塞米松（2类）”。
二、华氏巨球蛋白血症（WM）01治疗前评估血常规检查：添加“手工”；免疫学检测⑤：添加“HIV”；基因及遗传学检查：添加“6q-/MYB”。
02分期和预后添加“修订的国际WM预后积分系统（rIPSSWM）”，详见下图。
03治疗一线治疗选择：添加“伴有症状性高黏滞血症、冷球蛋白血症的患者，建议先行血浆置换2-3次，后续以化疗，并避免直接应用利妥昔单抗（R）化疗。
”首选方案：修改为“①BR；②伊布替尼±R或泽布替尼单药；③RCD；④VRd”；其他方案：增加“伊沙佐米+利妥昔单抗+地塞米松”。
三、骨髓增生异常综合征（MDS）01治疗前评估实验室检查Ⅰ级推荐增加“网织红细胞计数”“促甲状腺激素（TSH）乳酸脱氢酶（LDH）如临床有提示则进行人类免疫缺陷病毒（HIV）检测”由Ⅲ级推荐调整为Ⅱ级推荐增加“影像学检查”：“T2*磁共振显像（MR1），心、肝脏铁过载评估”骨髓形态学检查规范各染色中英文名称，更正CD41为CD42b细胞遗传学检查增加Ⅲ级推荐“染色体微阵列（CMA）”分子学检查：“对造血干细胞移植候选患者考虑人类白细胞表面抗原（HLA）配型”由Ⅲ级推荐调整为Ⅰ级推荐02治疗有症状血小板减少或粒细胞减少：Ⅰ级专家推荐增加“临床试验”；Ⅱ级专家推荐增加“艾曲泊帕、罗米司亭”；Ⅲ级专家推荐增加“临床试验；选择合适患者进行allo-HST"。
血液病细胞分子遗传学检测中国专家共识2013年版
ＫＣｌ进行低渗处理（骨髓细胞３。最后加入新鲜配制的固定液（甲 醇：冰醋酸＝３：１）进行预固定及固定，收获的染色体标本悬液 于２～８℃保存备用。 ４．染色体标本显带：将染色体标本悬液用新鲜配制的固 定液重新固定、吹打混匀，采用气干法或火焰烧灼法滴片。 将制备的玻片置于ｐＨ ６．５—６．８的Ｅａｒｌｅ’Ｓ溶液恒温水浴加热
用２ ｅｅＬ的无菌肝素钠抗凝剂０．２ ｍＩ湿润内壁（注意不能超 量，较多肝素反而会导致白细胞聚集）。将取出的骨髓迅速 转移至含ＲＰＭＩ １６４０完全培养液［培养液含２０％胎牛血清或 新生牛血清、少量肝素钠和青霉素、链霉素］的无菌培养瓶内 送检。 ４．标本标记和申请单：装标本的容器应标记患者姓名、 床号及其他必要信息。染色体显带核型分析及ＦＩＳＨ检查申 请单至少应包含以下信息：患者基本信息及联系方式；住院 号或门诊号、送检日期；送检医生、送检单位及联系方式；患 者主诉、病史、体检、治疗相关重要信息；重要的实验室检测 结果以及检测要求（如ＦＩＳＨ检测靶点或探针名称、丝裂霉素 断裂试验等）；提供患者的初步诊断，以便实验室技术人员在 进一步的标本处理中根据患者可能的诊断给予合适的培养 条件。 ５．标本运输：取出的新鲜标本应于室温条件下尽快（２４ ｈ内）送至实验室进行处理，夏季和冬季应采取措施防止运 输过程中标本温度过低或过高，标本不能与冰块或冰袋直接 接触。如果无条件将标本放在含ＲＰＭＩ １６４０完全培养液容 器中送检，而是置于肝素抗凝管或注射器内送检，建议最迟
Ｓｐｅｃｔｒｕｍ Ｏｒａｎｇｅ／Ｔｅｘａｓ Ｒｅｄ、Ｓｐｅｃｔｒｕｍ
贫血患者外周血标本在加入ＰＨＡ的同时需要加入丝裂霉素 共同孵育；ＣＬＬ患者外周血标本在培养时加入未甲基化胞嘧 啶鸟嘌呤二核苷酸寡脱氧核苷酸（ＣｐＧ—ＯＤＮ）和美洲商陆素 （ＰＷＭ）等刺激培养７２ ｈ可提高异常核型检出率；淋巴结活 检标本应于无菌条件下剪碎研磨、过滤成单个细胞后进行培 养；多发性骨髓瘤患者的骨髓标本可用ＣＤｌ３８磁珠分选联 合间期ＦＩＳＨ（Ｉ．ＦＩＳＨ）或胞质轻链免疫荧光结合ＦＩＳＨ（ｃｌｇ— ＦＩＳＨ）技术提高染色体异常检出率；浆膜腔积液需离心、弃 上清，调整细胞密度为（１～２）Ｘ１０６／ｍｌ进行培养。 ３．收获染色体标本：细胞培养结束前，加入秋水仙胺处 理１ ｈ，以增加中期分裂象（ＣＬＬ患者及检测体细胞染色体异 常的患者，秋水仙胺处理时间可延长至３．５ ｈ）。随即以
血液病资料-细胞遗传学
恶性血液病的细胞遗传学中国医学科学院中国协和医学大学血液学研究所血液病医院刘世和一、背景染色体开展历史染色体检查在恶性血液病中的应用价值国内外开展动态染色体分析开展历史1960-1971：非显带时期1971-1980：显带、高分辨1980-至今：与分子生物学相结合时期，分子细胞遗传学〔FISH〕意义诊断与分型疗效判断验证移植成功与否或确定白血病的复发及其来源。
预后分析与指导治疗查找新的致病基因，讨论发病机制国内外开展动态国外：广泛开展，白血病与淋巴瘤必查工程国内：相对薄弱原因技术劳动强度大价格患者经济开展染色体检查要素技术合理的价格规模化：降低本钱，进步效率，缩短报告时间二、人类细胞遗传学命名根据1995版人类细胞遗传学国际命名体制，正常核型男：46，XY；女：46，XX。
异常核型包括体质性和获得性：体质性异常；获得性异常表1 核型命名常用的缩写符号染色体倒位〔inv〕指同一染色体上的两个断点之间的片段发生180º旋转，如发生于单一臂内称为臂内倒位，发生于两臂称臂间倒位。
染色体重复〔dup)在一个染色体的某一位点上重复一段染色体片段。
插入〔ins〕* 包括2个染色体之间的插入和一个染色体内的插入。
2个染色体之间的插入为插入易位，承受插入片段的染色体总是列于前面，而提供易位片段的染色体列于次。
* 一个染色体内的染色体插入可分为正向插入与反向插入。
等臂染色体〔iso)指一条染色体含有完全一样的臂。
易位〔t〕：至少2个染色体之间发生的遗传物质的互换。
平衡易位和不平衡易位两条染色体之间的易位描绘方式为按染色体由小到大的排列顺序易位：3个染色体以上罗伯逊易位〔rob)发生于D组或/和G组端着丝粒染色体易位，为两个长臂对接。
Rob(14;21)缺失〔del〕在某一个染色体上丧失部分遗传物质；分为中间缺失和末端缺失，如5q-增加〔add)表示在某一染色体上获得来源不明的遗传物质，通常代表在染色体的末端增加。
遗传病的实验室诊断方法 细胞遗传学
一、遗传学的专科实验室检测分析？二、细胞遗传学（ 3 ）其他。
染色体分析可发现非常多的染色体异常结构。
异常结构的染色体个体常是不能生存，染色体异常是自发流产的重要的原因，因此需要用正确的态度对待妊娠当中发生的流产事件。
如果在孕早期、孕中期对胎儿进行检测会发现孕早期染色体的异常率非常高。
因此在生育过程中流产如果不是突然的外力作用，而是胎儿或者其他因素的作用，应考虑到染色体异常。
图 1 染色体异常患儿图 2 为染色体异常患儿图 1 和图 2 为染色体异常患儿的特殊面容，即世界脸。
染色体异常患者罹患白血病的风险也会大大提高。
异常染色体核型中染色体是 47 条，27号染色体是三条而不是两条，此病也称为 21 三体综合征，但是唐氏综合征 21 号染色体不一定是三条，有时可以看到正常的 21 号染色体是两条，还有一部分发生易位，此为不平衡易位导致的 21 号染色体长臂在别处和别的染色体结合，称为易位型的 21 三体。
宿主父图 4 染色体不分离图 4 所示第二次减数分裂虽然发生了姐妹染色体单体分裂，但是因为前面的同样染色体。
没有分裂，结果造成配子多出一条 21 号染色体。
第一次减数分裂形成的配子如果再进行分裂，如果是精子它可能少 1 条，不是 23 条，而是 22 条。
它跟正常的配子结合，就会形成少 1 条 21 号染色体的个体，此类个体生存能力很差，胚胎时即可能流产。
另一部分是第一次减数分裂是正常的，第二次减数分裂时姐妹染色单体没有分开，结果造成 1 个配子多出 1 条 21 号染色体。
其他染色体异常、数目异常的机理也大概相同。
减数分裂过程中同样染色体之间或者是一部分要发生互换，因此它可以是 1 个精母细胞或者是卵母细胞，精母细胞会产生 4 个不同的染色体。
原来是 1 个父源、 2 个母源的，还有父源和母源混合起来形成的 1 个，所以形成了很多不同的染色体，加上常染色体各自不同的父源、母源的互相之间重新组合，形成不同的配子。
多重巢式RT_PCR检测90例恶性血液病常见染色体融合基因分析.
融合基因阴性, 2例次融合基因阳性而性染色体F I SH 阴性。
性染色体F I SH 检测只能间接推断BCR /ABL量的多少, 故仅用性染色体F I SH 进行MRD 检测有其局限性。
融合基因阳性提示患者体内存在BCR /ABL阳性细胞, 但不能确定其是否具有增殖能力。
本组患者在移植后2～6个月融合基因阳性率最高, 7例复发病例中6例发生在移植后的3～4个月。
Radich [5]认为BCR /ABL融合基因≥2次阳性者其复发的风险为78%, 1次阳性者为22%, 多次检测阴性者为3%。
所以移植后只有动态监测BCR /ABL融合基因才能预示疾病的变化。
综上所说, CC 异常表明疾病复发, 但其敏感性低。
性染色体F I SH 只能研究异性间移植, 且间接推测MRD 。
融合基因能准确反映体内MRD, 但阳性并不代表具有增殖力, 只有动态监测价值更大。
参考文献1李建勇, 过宇, 薛永权, 等1双色荧光原位杂交技术在异性间造血干细胞移植中的应用. 中华血液学杂志, 2000, 21:4292430. 2李建勇, 潘金兰, 吴亚芳, 等. 间期荧光原位杂交技术检测急性粒2单核细胞白血病inv (16 . 中华血液学杂志, 2002, 23:30232.3O lavarria E, O tt m ann OG, DeiningerM , et al . Res ponse t o i m atinib in patients who relap se after all ogeneic ste m cell trans p lantati on f or chr onic myel oid leukem ia . Leuke m ia, 2003, 17:170721712. 4De wald G W , Schad CR, Christensen ER,et al . The app licati on of fluorescent in situ hybridizati on t o detect MBCR /ABLfusi on in variant Ph chr omos omes in C ML and ALL. Cancer Genet Cyt ogenet, 1993, 71:7214.5Radich JP . Molecular measurement of m ini m al residual disease in Philadel phia 2positive acute ly mphoblastic leukae m ia . Best Pract Res Clin Hae mat ol, 2002,15:912103.(收稿日期:2005206221(:李敬东作者单位:430030武汉, 华中科技大学同济医学院附属同济医院血液科通信作者:黄梅, E mail:huang mei@medmail. com. cn多重巢式黄梅李春蕊周剑峰张义成邓金牛刘文励细胞遗传学检测有助于恶性血液病的诊断、评估预后、指导最佳治疗方案的选择。
基因检测标准化操作流程
基因检测标准化操作流程
基因检测是一种用于检测个体基因组中特定基因或基因组序列的技术，可以帮助人们了解自己的遗传信息，预测疾病风险，指导个性化治疗等。
然而，由于基因检测技术的复杂性和多样性，标准化操作流程对于确保检测结果的准确性和可靠性至关重要。
基因检测标准化操作流程包括以下几个关键步骤：
1. 样本采集：首先，需要采集来自被检测个体的生物样本，通常是唾液、血液或组织样本。
样本采集的质量和准确性对后续的检测结果至关重要。
2. 样本处理：采集到的样本需要进行处理，包括提取DNA或RNA等核酸物质。
样本处理的过程中需要遵循严格的操作规程，以确保提取到的核酸质量和纯度符合检测要求。
3. 实验操作：在进行基因检测实验时，需要按照标准化的实验操作流程进行。
这包括PCR扩增、测序、基因芯片分析等步骤，每一步都需要严格控制实验条件和操作流程，以确保结果的准确性和可重复性。
4. 数据分析：得到实验数据后，需要进行数据分析和解读。
这包括对基因序列、变异位点等信息进行比对和分析，以确定个体的基因型和可能的遗传风险。
5. 结果报告：最后，需要将分析结果整理成报告，向被检测个
体提供详细的基因检测结果和解读。
报告中需要包括检测方法、结
果解读、可能的遗传风险等信息，以帮助个体理解自己的遗传信息。
在整个基因检测标准化操作流程中，严格遵循操作规程、保证
实验条件的稳定性和结果的准确性是至关重要的。
只有通过标准化
操作流程，才能确保基因检测结果的可靠性和可信度，为个体提供
准确的遗传信息和健康指导。
血液病检查流程
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在进行血液病检查之前，需要进行充分的准备工作。
各种血液病细胞遗传学异常(潘金兰)
各种血液病中细胞/分子遗传学异常简介苏州大学附属第一医院江苏省血液研究所潘金兰染色体基本概念•染色体(chromosome):可染色的小体。
1988年Waldeyer 提出。
•基本结构：DNA+组蛋白高度螺旋化。
间期：染色质(DNA解螺旋成细丝，不易着色）。
中期：染色体(DNA高度螺旋化，易着色)。
•染色体：遗传物质-基因载体(基因直线排列于染色体上)。
•染色体研究是临床遗传学研究的基础(染色体改变导致基因改变)。
19501960197019801990细胞遗传学发展简史确定染色体46条(1956)应用于血液学(1958) CML发现Ph染色体非显带时期G、R等各种显带技术，肿瘤和遗传学疾病核型异常FISH中期间期多色FISH显带时期CGH高通量芯片技术：aCGH, aSNP20001960s/染色体+医学核型命名(基本)•核型按照人类细胞遗传学国际命名体制《AnInternational System for Human CytogeneticNormenclature ISCN 2013》描述.•核型描述可分简式和繁式。
常用简式。
46，XY：一个染色体数目为46的正常男性核型；47，XY，+8：一个染色体数目为47的超二倍体男性核型，增加了一条8号染色体；46，XY，t(9;22)(q34;q11)：染色体数目为46的假二倍体男性核型，其中有一个涉及9和22号染色体的相互易位。
•常用缩写符号：p短臂、q长臂、t易位、del缺失、inv倒位、ins插入、der衍生染色体、dup重复、mar标记染色体、r环状染色体、i等臂染色体。
FISH的定义•该技术是20世纪80年代初期在细胞遗传学、分子生物学和免疫学相结合的基础上发展起来的一种荧光原位杂交技术，是一门分子细胞遗传学技术。
FISH为细胞遗传学和分子生物学的结合。
•为细胞遗传学和分子生物学之间架起了桥梁。
•使基因异常在显微镜下就能被看到，因而极大地提高了染色体分析的敏感性、准确性和可靠性，成为细胞遗传学的重要补充。
细胞遗传学实验室诊断技术简介1
具有分裂能力的细胞：即有核的活细胞
实验室常用的具有分裂能力的细胞
外周血淋巴细胞 骨髓细胞 羊水细胞 绒毛膜细胞 实质性活检组织细胞：如皮肤成纤维细胞 癌细胞
进入母体循环的胎儿淋巴细胞 (1/5 000-1/20 000)
影响因素：环境温度、湿度，玻片洁净度， 滴片距离及角度等。
滴片后需将标本片进行干燥处理：80℃2h
染片：
37℃0.025%胰蛋白酶显带（30~50秒）
2~5% Giemsa 染液染片5~10分钟
核型分析： 镜下分析5个、计数20个中期细胞分裂
相（400条带 ISCN2005）
细胞收获是一个连贯性的过程，既要求准 确掌握收获的时机，又要求有理想分散和 形态的染色体。
临床大夫B超定点，无菌操作，将先抽出2ml羊水 丢弃（防止母体细胞污染），再换用20 ml无菌 注射器抽取羊水20ml，抽取出的羊水应为清亮透 明呈淡黄色。即刻送检培养。
生物安全柜内无菌操作，将羊水注入无菌离心管 中，离心分离细胞（1500rpm8分钟），弃上清 留0.5~1ml，将沉淀细胞吹打混匀，制成细胞悬 液。
收获的效果直接影响染色体的分析结果。
故要求细胞遗传工作人员一定要有高度的 “三心”：责任心、细心、耐心。
分子细胞遗传技术
近10年来发展起来的一门新学科，已进入 临床应用。
最常用的技术有：荧光原位杂交（FISH）、 SKY、CCK、CGH等。
QFQ Q
GTG G
RHG R
CBG
C
处理方法 染色方法
荧光 氮介喹丫因染液
胰酶 高温加热 氢氧化钡
血液细胞形态学检查标准操作程序
血液细胞形态学检查标准操作程序一．目的：指导血液细胞形态学的检查。
二．该SOP变动程序：本操作程序的改变，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报下述人员批准：专业负责人、科主任。
三．具体内容（一）原理：将血液制成细胞分布均匀的薄膜涂片，用瑞氏—吉姆萨复合染料染色后，在光学显微镜下油镜观察各类细胞的形态特征及数量变化，对血液系统及某些感染疾病有辅助诊断及疗效观察等意义。
（二）标本要求：1.采血后推制厚薄适宜的血膜片，血膜应呈舌状，头、体、尾清晰可分。
2.推好的血膜应在空气中晃动，以促使其快干，以免细胞变形缩小。
（三）试剂准备：瑞氏—吉姆萨复合染液。
（四）仪器、器材要求：显微镜、洁净载玻片。
（五）操作具体步骤：1.染色：平置玻片于染色架上，滴加染色液3～5滴，使其迅速盖满血膜约1min后，滴加缓冲液5～10滴，轻轻摇动玻片或对准血片吹气，与染液充分混合，10～20min后用水冲去染液待干。
2.选择涂片细胞分布厚薄适宜、染色良好的区域在油镜下观察各类细胞的形态及数量变化。
（六）结果判断1.红细胞：正常形态呈双凹圆盘状、无核、平均直径7.2μｍ，染粉红色，外周血中无有核红细胞、异常形态红细胞量小于1％。
2.白细胞：正常外周血中白细胞分为中性杆状核粒细胞占1％～5％，中性分叶核粒细胞占50％～70％，嗜酸性粒细胞占0.5％～5％，嗜碱性粒细胞占0～1％，淋巴细胞占20%～40%，单核细胞占3%～8%，无幼稚细胞。
3.血小板：正常形态呈椭圆形及不规则形，无核、胞质中有嗜苯胺蓝颗粒，直径约2～4μｍ，多为2μｍ左右，呈单个或成堆分布。
（七）干扰因素1.涂片要新鲜，涂片自然晾干后立即进行染色，如特殊情况下，一般不超过一周，否则，细胞蛋白质变性，使染色偏碱。
2.染色时间长短除与气温有关外，也与细胞增生情况、各批染液的性能有关，故要求将染色中的涂片在显微镜下观察，待颗粒清楚、核浆分明，着色满意后才终止染色，冲洗晾干待检。
血细胞形态学检测标准操作程序
血细胞形态学检测标准操作程序1.检验目的对在自动化检测中由于各种原因可能出现的结果偏差进行核查和纠正，确保血液自动化检测结果的准确性，确保为临床提供准确可靠的检测结果。
2.检测原理与方法将一小滴血液均匀的涂在玻片上，呈单层紧密分布，制成血膜片，用瑞氏-姬姆萨染液染色，在显微镜下观察其血细胞数量和形态的改变。
3.标本ETDA-K2抗凝血或新鲜外周血。
4.试剂4.1瑞氏-姬姆萨染液A液，瑞氏-姬姆萨染液B液。
4.2储存条件：5~30℃室温环境，相对湿度不大于80%，避光保存。
有效期24个月。
4.3以上所有试剂每瓶试剂开封后应注明启用日期、失效期（开瓶后6个月，或有效期内使用完）并附签名。
5.环境和安全5.1实验室及工作人员一般安全防护措施见《安全手册》5.2血液样本溢出后，由工作人员立即用0.2%过氧乙酸溶液或75%酒精溶液对污染环境进行消毒。
5.3如操作人员的皮肤或衣物上沾到了血液及废液。
应立即用0.2%过氧乙酸溶液或75%酒精溶液消毒处理，再用肥皂水、清水进行冲洗。
如果眼睛中溅入血液及废液，用大量清水冲洗并采取必要的医疗措施。
5.4在仪器转动过程中，勿触及样本针、移动的传输装置等，避免造成人身伤害。
禁止触摸血液细胞分析仪密封面板内的电路。
5.5如血液样本采用开盖程序测试，开盖时应防止气雾胶污染环境。
5.6与血液样本接触的一切器皿、仪器组装/拆卸组合零件都应视为污染源，因此操作人员应采取必要的保护性措施如穿戴保护性外套、手套等。
不小心接触了这种污染源时，应立即用清水冲洗被污染区域并用0.2%过氧乙酸溶液或75%酒精溶液进行消毒处理。
5.7对突发传染性疾病的血液样本的防护应启动特殊的安全防护程序。
6.操作步骤6.1血涂片制备本室采用人工推片染色。
如特殊情况采用楔形技术制备血涂片。
在玻片近一端1/3处，加一滴（约0.05ml）充分混匀的血液，握住另一张较狭窄的、边缘光滑的推片，以30º～45º角使血滴沿推片迅速散开，快速、平稳地推动推片至玻片的另一端（见图2）。
恶性血液病细胞遗传学检测的标准方法及流程(精)
J Diagn Concepts Pract 2009,Vol.8,No.4恶性血液病进行细胞遗传学检测的重要性包括常规核型分析和荧光原位杂交(FISH 分析在内的细胞遗传学检测在恶性血液病的诊治中发挥着越来越重要的作用。
①其有助于恶性血液病的诊断、鉴别诊断和分型。
2001年世界卫生组织(WHO 发表了关于淋巴和造血系统肿瘤的新分型,将t(8;21、t(15;17、inv(16和del/t(11q23作为4种急性髓系白血病(AML 亚型的诊断标志,以上4种亚型均伴有不同再现性遗传学异常[1]。
②其有助于判断恶性血液病患者的预后。
如按照核型可将AML 患者分为低危、中危和高危3个不同的预后等级[2]。
③其有助于医师选择合适的治疗方案,特别是在发展针对不同遗传学亚型的个体化靶向治疗中,如费城(Ph 染色体(+的慢性髓系白血病(CML 可采用酪氨酸激酶抑制剂伊马替尼治疗,伴t (15;17的急性早幼粒细胞白血病(APL 可采用全反式维甲酸和三氧化二砷治疗。
可见,目前细胞遗传学检测已成为恶性血液病诊治中必不可少的重要手段。
采用标准的细胞遗传学检测方法的必要性以往,国际上关于细胞遗传学检测的方法缺少一致认可的准则。
而最近,欧洲细胞遗传学协作组提出了恶性血液病细胞遗传学检测标准方法的建议[3]。
笔者结合多年的实践经验,对其作了必要的修订和补充。
只有采用标准的细胞遗传学检测方法,才能既保证检测结果的准确可靠和检查的经济、省时,又可避免不必要的检查和不恰当的治疗。
根据恶性血液病的类型采用不同的细胞遗传学检测方法及流程由于恶性血液病的类型不同,其细胞对于培养条件的要求也不相同,且其各自具有不同的特征性遗传学异常,如进行FISH 检测时要求采用不同的探针,故应根据恶性血液病的类型采用不同的细胞遗传学检测标准方案。
慢性淋巴细胞白血病(CLL 、CML 、慢性骨髓增生性疾病(CMPD [骨髓增殖性肿瘤(MPN ]、AML 、急性淋巴细胞白血病(ALL 、骨髓增生异常综合征(MDS 、淋巴瘤和多发性骨髓瘤(MM 的细胞遗传学标准检测方法及流程分别见图1~8。
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J Diagn Concepts Pract 2009,Vol.8,No.4
恶性血液病进行细胞遗传学检测的重要性包括常规核型分析和荧光原位杂交(FISH 分析在内的细胞遗传学检测在恶性血液病的诊治中发挥着越来越重要的作用。
①其有助于恶性血液病的诊断、鉴别诊断和分型。
2001年世界卫生组织(WHO 发表了关于淋巴和造血系统肿瘤的新分型,将t(8;21、t(15;17、inv(16和
del/t(11q23作为4种急性髓系白血病(AML 亚型的诊断标志,以上4种亚型均伴有不同再现性遗传学异常[1]。
②其有助于判断恶性血液病患者的预后。
如按照核型可将
AML 患者分为低危、中危和高危3个不同的预后
等级[2]。
③其有助于医师选择合适的治疗方案,特别
是在发展针对不同遗传学亚型的个体化靶向治疗中,如费城(Ph 染色体(+的慢性髓系白血病(CML 可采用酪氨酸激酶抑制剂伊马替尼治疗,伴t (15;17的急性早幼粒细胞白血病(APL 可采用全反式维甲酸和三氧化二砷治疗。
可见,目前细胞遗传学检测已成为恶性血液病诊治中必不可少的重要手段。
采用标准的细胞遗传学检测方法的必要性以往,国际上关于细胞遗传学检测的方法缺少一致认可的准则。
而最近,欧洲细胞遗传学协作组提出了恶性血液病细胞遗传学检测标准方法的建议[3]。
笔者结合多年的实践经验,对其作了必要的修订和补充。
只有采用标准的细胞遗传学检测方法,
才能既保证检测结果的准确可靠和检查的经济、省
时,又可避免不必要的检查和不恰当的治疗。
根据恶性血液病的类型采用不同的
细胞遗传学检测方法及流程
由于恶性血液病的类型不同,其细胞对于培养条件的要求也不相同,且其各自具有不同的特征性遗传学异常,如进行FISH 检测时要求采用不同的探针,故应根据恶性血液病的类型采用不同的细胞遗传学检测标准方案。
慢性淋巴细胞白血病(CLL 、CML 、慢性骨髓增生性疾病(CMPD [骨髓增殖性肿瘤(MPN ]、AML 、急性淋巴细胞白血病(ALL 、骨髓增生异常综合征(MDS 、淋巴瘤和多发性骨髓瘤(MM 的细胞遗传学标准检测方法及流程分别见图1~8。
细胞遗传学检测方法中涉及的10个关键问题在细胞遗传学检测中需注意的10个问题。
①细胞遗传学检测的标本除CLL 患者可采用外周血细
胞外,大多数恶性血液病要求采用骨髓细胞进行检测。
只有当患者的外周血白细胞计数>10000/mm 3,且含有10%以上的幼稚或原始细胞时,方可考虑采用外周血作为检测标本。
淋巴瘤患者则应取受累淋巴结作为检测标本,当疾病晚期侵犯骨髓时则可采用骨髓细胞检测。
②标本采集量视细胞密度而定,细胞密度越低,则需采集的标本量越多。
一般要求·专家来信·
恶性血液病细胞遗传学检测的标准方法及流程
薛永权
(苏州大学附属第一医院血液科
江苏省血液研究所,江苏苏州215006
关键词:恶性血液病;细胞遗传学;
诊断
中图分类号:R446.11+3
文献标识码:A
文章编号:1671-2870(200904-0390-03
编者按:近期有关专家来信提示本刊,有关论文中涉及恶性血液病细胞遗传学检测方法及结果的描述存在一些错误或不规范之处。
为使相关临床医师和科研人员进一步了解和掌握血液病细胞遗传学的检测方法及流程,提高科研及写作能力,我刊特邀请苏州大学附属第一医院血液科、江苏省血液研究所薛永权教授撰写“恶性血液病细胞遗传学检测的标准方法及流程”一文,并予刊出,旨在规范恶性血液病的细胞遗传学检测方法及流程。
390··
诊断学理论与实践2009年第8卷第4期图3
CMPD 或MPN 细胞遗传学检测的标准方法及流程
图4MDS 细胞遗传学检测的标准方法及流程
至少采集5~10mL 骨髓或外周血,应用肝素抗凝后,于24h 内送实验室检测。
③培养基中应含20%的小牛血清,还需加入抗生素,若能加入胸腺嘧啶则培养效果更佳。
④应同时行2份或更多的培养,以便进行不同时间的培养(24、48或72h 和加入不同的刺激因子,但除CLL 患者的标本外,其余均不应加入植物血凝素(PHA ,以免干扰分析结果,除非在需证实或排除体质性异常的情况时。
⑤培养基接种细胞数应控制在1×106/mL ~3×106/mL 。
⑥秋水仙酰胺处理样本的终浓度为
0.05~0.1μg/mL ,时间控制在0.5~2h ,通常为1h ,必要时可延长至24h 。
⑦核型分析通常采用G 或R 显带技术。
良好的带型对确保核型分析的准确、可靠至关重要。
⑧每例
分析的细胞数视有无核型异常而定,核型异常时需分析10~20个细胞,无核型异常时则至少需分析
20个细胞才能确定为正常核型。
⑨根据核型分析结果,加行必要的FISH 或反转录聚合酶链反应(RT -PCR 。
如AML 需按不同的形态学亚型、ALL 需按不同的免
疫学亚型选择相应的FISH 探针进行检测。
近来发现,2%的B 系急性淋巴细胞白血病(B -ALL
患儿有21号染色体内的AML1基因扩增,提示预后不良,可采用ETV6-AML1或AML1FISH 探针检测该基因。
20%的T 系急性淋巴细胞白血病(T -ALL 患者有隐匿性t(5;14(q35;q32,可导致TLX3异常表达,9%~30%的T -ALL 患儿有因1p32隐匿性缺失导致的SIL -TAL1融合基因,6%的T -ALL 患者有
9q34染色体外基因扩增导致的NUP214-ABL1融
合基因。
此外,CDKN2A 的隐匿性缺失也较常见(21%的B -ALL 和50%的T -ALL 患者可见[4,5]。
上述异常均可选用相应的FISH 探针进行检测。
当存在≥3种独立畸变的复杂核型异常时,可用多色
FISH (M -FISH 或光谱核型分析(SKY 进行检测。
⑩按照《ISCN(2005》的规定报告核型分析结果。
图1CML 细胞遗传学检测的标准方法及流程图2
CLL 细胞遗传学检测的标准方法及流程
391··
J Diagn Concepts Pract 2009,Vol.8,No.4
图7淋巴瘤细胞遗传学检测的标准方法及流程
图8MM 细胞遗传学检测的标准方法及流程
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tumors;pathology and genetics of tumors of haemato -poietic and lymphoid tissues[M].Lyon:IARC press,2001.[2]
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[5]Sulong S,Moorman AV,Irving JA,et al.A comprehen -sive analysis of the CDKN2A gene in childhood acute lymphoblastic leukemia reveals genomic deletion,copy number neutral loss of heterozygosity,and association with specific cytogenetic subgroups[J].Blood,2009,113(1:100-107.
(收稿日期:2009-04-11
(本文编辑:褚敬申
图5AML 细胞遗传学检测的标准方法及流程图6ALL 细胞遗传学检测的标准方法及流程
392··。