显微注射技术
活体转化显微注射系统技术参数
活体转化显微注射系统技术参数活体转化显微注射系统是活体转化不可缺少的重要仪器，主要用来进行活体转化，包括拉针系统、倒置微分干涉显微镜、显微操作仪与显微注射仪部分组成，可以配合实验需要，满足活体标本的体外转化等实验要求。
其配置需要满足以下技术规格。
打星号的参数为必须满足项目。
设备用途：该设备用于获取清晰的高质量的微分干涉观察效果，可进行显微注射样品角度调整，并用于活体显微注射操作。
技术规格1光学系统部分1.1*无限远光学系统：采用新无限远光学系统，具有轴向和径向双重色差校正，同时具有反差校正，提高图像衬度。
1.2# 45mm国际标准齐焦距离，具备明场，DIC观察功能，可升级PlasDIC功能。
1.3透射光照明器：高亮度长寿命卤素灯照明。
1.4具备智能光源管理功能：可存贮并自动调用各只物镜的最佳照明条件。
1.5光学部件使用金属镀膜，防霉但不得使用化学药剂。
2主机2.1高级显微镜主机，全金属结构，金字塔形主机结构设计，机械温度稳定性高。
2.2调焦系统:组合式金属结构、精细的粗微调焦系统，谐波齿轮设计的防止调焦下滑机构，不得使用易损的摩擦圈作为松紧调节和防止物台下滑机构。
2.36位编码型DIC物镜转盘。
2.4透射/反射切换、照明强度调节可以通过显微镜机身电动钮控制。
2.5# 高光效的V型光路设计2.6观察镜筒：铰链式双目观察筒，金属罩壳，可360度自由旋转，上下翻转；倾斜45度，视野数≥23mm；2.7目镜：放大倍数10x，高眼点，双目屈光度可调，视野数≥23mm。
2.8聚光镜：万能长工作距离聚光镜（可实现相差，微分干涉，塑料皿微分干涉等观察方式），数值孔径0.55，色差球差校正，工作距离≥26mm；2.9微分干涉部件（DIC），有与不同数值孔径的物镜一一对应的棱镜；2.10滤光片转盘孔位≥6，可放置荧光激发块与微分干涉装置；2.11长寿命高亮度荧光照明装置，灯泡寿命≥2000小时，光纤和灯泡耗材满足3年使用消耗。
显微注射的原理和应用
显微注射的原理和应用1. 引言显微注射是一种在显微镜下使用微量注射器进行精确注射的技术。
它广泛应用于生物医学研究、细胞学、免疫学等领域。
本文将介绍显微注射的原理和应用。
2. 显微注射的原理显微注射主要依赖于显微镜的放大能力和注射器的精确控制。
下面是显微注射的主要原理：1.显微镜放大能力：显微镜可以放大细胞和微生物等微小物体，使得操作者可以清晰地观察到注射器的位置和注射点。
2.注射器：注射器在显微镜下可以用来精确控制和定位注射的物质。
注射器通常包括注射头和注射器身两部分，操作者可以逐渐调整注射器的位置和深度，确保注射的准确性。
3.微量液体：显微注射常用于注射微量液体，如药物、染料、细胞等。
微量液体可以通过注射器的细管道进行精确注射。
3. 显微注射的应用显微注射在生物医学研究、细胞学和免疫学等领域有广泛的应用。
以下是显微注射的一些常见应用：1.细胞注射：显微注射可以用来注射细胞，如注射转基因细胞、注射含有特定蛋白质的细胞等。
这对于研究细胞功能和基因表达具有重要意义。
2.药物注射：显微注射可以用来注射微量的药物，如针对特定细胞的药物、RNA干扰等。
这种精确注射方式可以减少药物的副作用，提高疗效。
3.细胞克隆：显微注射可以用于细胞克隆。
通过注射器将细胞转移至新的培养基中，可以实现细胞的扩增和分离。
4.病理分析：显微注射可以用于病理分析。
通过显微观察和注射组织样品，可以快速获取病理学特征，并便于进一步的分析和诊断。
5.基因编辑：显微注射在基因编辑中起到了重要作用。
通过注射特定的修饰基因编辑工具，如CRISPR-Cas9系统，可以实现基因的精确编辑和改变。
4. 结论显微注射是一种在显微镜下使用微量注射器进行精确注射的技术。
它在生物医学研究、细胞学和免疫学等领域有广泛的应用。
通过显微注射，我们可以实现细胞注射、药物注射、细胞克隆、病理分析和基因编辑等操作，为科研和医学提供了有力的工具。
发育生物学——显微注射
SUBTITLE
01 例子
例子
细胞核转移技术 巨型小鼠
胚胎移植技术
2003
克隆羊多莉
1982
转基因技术
1978
试管婴儿
授课结束
感谢聆听
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PROMOTION/PLANNING SCHEME
汇报人：李婷
日期：2020.10.14
目录
CONTENTS
1
概念及原理
2
目的
3
实验设备
4
例子
01 概念及原理
概念及原理显微注射操作模式图显微注射技术概念及原理
显微注射法（Microinjection）简单来讲就是利用管尖极细 的玻璃微量注射针，将外源基因片段直接注射到原核期胚 或培养的细胞中，然后由宿主基因组序列可能发生的重组、 缺失、复制或易位等现象而使外源基因嵌入宿主的染色体 内，用以研究供体物的功能或者获得转基因动物的技术。
01 目的
概念及原理
显微注射操作模式图
显微注射目的
目的：将外源DNA、RNA或标记物等导入早期 胚胎细胞中，如运用细胞标记技术对胚胎早期卵 裂球分化命运图谱的研究。在小鼠和果蝇中常用 于转基因分析。
01 实验设备
实验设备
倒置显微镜 如右图A
微操作台 如右图B
显微注射器 如右图C
显微注射技术
显微注射在高倍倒置显微镜下，利用显微操作器(Micromanipulator),控制显微注射针在显微镜视野内移动的机械装置，用来进行细胞或早期胚胎操作的一种方法。
操作方法目前，以细胞内微注射和微灌注技术为基础的玻璃针头(GlassNeedle，精细的玻璃微量毛细移液管)的使用，已经在越来越多的实验生物学研究领域中成为一项非常普遍的操作方法，比如在体外受精、转基因中等等。
描述这些技术最恰当的话应当称其为---显微操作，因为这些操作是通过单个的或多个的筒状玻璃微量移液管、精确的定位装置(显微操作器)以及微量注射器或微量灌注器来在单个的细胞上进行的。
显微技术的分类显微操作技术包括细胞核移植、显微注射、嵌合体技术、胚胎移植以及显微切割等，例如多莉羊就是运用细胞核移植技术而成功的；而转基因技术指的是将外源基因导入体细胞并能稳定的嵌入宿主动物的生殖细胞染色体中的一门技术，基因转殖动物被定义为由人为的方式将外源基因引入体内而引起基因改变的动物，并可将遗传特质传递到接续的每一世代中。
应用概述微注射应用的范围非常广泛，从辅助(体外)细胞受精技术至分子和细胞基本组分的转运都需使用这一技术，比较典型的是将某些物质注射进细胞中以操作和/或监测某种特定的存活细胞中的基本机体生物化学状态。
这些可以注射进细胞的物质包括有：各种细胞器、激酶、组织化学标志物(比如辣根过氧化物酶或者荧光黄)、蛋白质、代谢物质、微磁头、离子、抗体、基因、分子生物学的mRNA和DNA等等。
运用这一技术，也可以实现用于单个细胞或一组细胞的较少量(皮升至毫升)药剂或药物的精确输送(微灌注)，例如药理学的药物检验。
转基因动物的制作，可以利用基因微注射(gene microinjection)、胚干细胞(embryonic stem cells,ES cells)、精子载体(sperm vector)、反转录病毒感染(retroviral vectorinfection)及体细胞核移置(somatic cell nucleartransfer)等方法达成，其中显微注射为目前应用最普遍之方法之一。
兰花花粉显微注射技术
兰花花粉显微注射技术兰花花粉显微注射技术是一种基于现代显微技术的高精度研究手段，广泛应用于植物学研究、生物遗传学以及农业育种领域。
本文将从技术原理、应用领域和发展前景三个方面对兰花花粉显微注射技术进行介绍。
一、技术原理兰花花粉显微注射技术基于显微镜和注射系统，将微量的荧光剂、药物或遗传物质注射到兰花花粉中，实现对兰花花粉的外源性控制或遗传改良。
该技术主要包括以下几个步骤：1. 样品准备：选择健康、发育良好的兰花花粉作为研究对象，并进行初步处理，如去除杂质和外膜等。
2. 荧光染色或标记：根据实验需求，选择相应的荧光染料或标记物，对兰花花粉进行染色或标记。
这一步的目的是在显微镜下能够准确观察和记录注射过程。
3. 显微观察：将经过荧光染色或标记的兰花花粉放置在显微镜下，确定注射点和注射目标。
4. 注射操作：使用显微注射系统将荧光剂、药物或遗传物质缓慢注射到兰花花粉中，确保注射的准确性和稳定性。
5. 观察记录：通过显微镜观察和记录注射后的兰花花粉形态、生长和发育情况，以及注射物对其的影响。
二、应用领域兰花花粉显微注射技术在植物学研究、生物遗传学以及农业育种领域有着广泛的应用。
1. 花发育研究：通过注射外源物质，如激素、抗生素等，可以研究花的生长发育过程中的调控机制，揭示植物生长的分子基础，进而提高兰花的繁育效率。
2. 遗传改良：利用兰花花粉显微注射技术，可以将基因导入到兰花花粉中，实现兰花的遗传改良。
通过这种方式，研究者可以增强兰花的耐逆性、花色、形态等特征，推进兰花育种的进程。
3. 细胞生物学研究：通过注射荧光染料或标记物，可以研究兰花细胞的结构、功能以及信号传导等方面的问题，为深入了解兰花细胞活动提供有力的工具。
4. 花粉生物学研究：通过注射技术，可以研究花粉在受精过程中的交互作用，探究花粉和雌配子的亲和性和花粉管的生长规律，对花粉的生物学研究提供了新的手段。
三、发展前景随着兰花花粉显微注射技术的不断完善和应用领域的不断扩大，其在植物学和相关学科研究中的作用将持续增强。
显微注射
[实验目的]1 了解细胞显微注射的基本原理2 掌握细胞显微注射基本技术[实验原理]显微注射技术是利用显微操作系统和显微注射技术将外源目的基因直接注入到受精卵的原核中，使外源基因整合到受体细胞的基因组内，再通过胚胎移植技术将整合有外源基因的受精卵移植到受体动物的子宫内发育，从而获得转基因动物。
它是目前基因转移效率较好的一种基因转移方法，可直接用不含有原核载体DNA片段的外源基因进行转移；外源基因的长度不受限制, 可达100kb ；实验周期相对比较短。
它的不足之处是：需要昂贵精密的设备；显微注射操作复杂，需专门技术人员；导入外源基因整合位点和拷贝数无法控制；常导致插入位点附近宿主DNA 片段缺失、重组等突变，可造成动物严重的生理缺陷。
尽管如此，由于显微注射技术直接对基因进行操作，整合率较高，因而仍是目前建立转基因动物极为重要的方法。
显微注射技术在植物、动物的细胞发育研究的应用，为研究体内生理和体外的生化过程架起桥梁，将特定的分子探针及衍生的细胞间质成分导入活体细胞，为研究控制细胞功能的调控机制提供了新的视野。
[仪器、材料和试剂]（一）仪器和用具：倒置显微镜（如Nikon TMS 和Diaphot 300/2；Zeiss Axiovert 100或135，或Axioskop FS）；Leitz重型基座（用于安放显微镜和微操作仪）；微操作仪：Leitz（手动系统，安在平台上）或Eppendorf 5171（自动轴向微注射系统，可固定在显微镜的载物台上）；微注射器：Eppendorf 5242，也可选用螺旋推柄的玻璃注射器。
拉针仪：水平拉针仪P87型（如Sutter Instrument Co.(Novato,USA)），或垂直拉针仪720型（如David Kopf Instruments(Tujunga,California,USA)。
玻璃注射针头：可购买厂商拉制好的商品，也可用拉针仪自行拉制（可参照[方法与步骤]中的1.1注射针头的拉制）。
转基因动物的技术方法
转基因动物的技术方法根据外源基因导入的方法和对象的不同，转基因动物的技术方法主要有显微注射法、反转录病毒法、胚胎干细胞（embryonic stem cell，ES细胞）法、电脉冲法、精子载体导入法等。
1、显微注射是最常用且成功率较高的方法。
基因显微注射法的特点是外源基因的导入整合效率较高，不需载体，直接转移目的基因，目的基因的长度可达lOOkb（10万个碱基对）。
它可直接获得纯系，所以实验周期短。
但需要贵重精密仪器，技术操作难度大，并且外源基因的整合位点和整合的拷贝数都无法控制，易造成宿主动物基因组的插入突变，引起相应的性状改变，重则致死。
2、反转录病毒感染法该法整合率较高，目的基因不易破坏，多是单拷贝、单位点整合，适合于难以观察到原核的禽类受精卵。
由于病毒衣壳大小的限制，目的基因不宜超过10kb，否则影响活性和稳定。
此外，病毒DNA可能影响外源基因在宿主动物的表达。
3、胚胎干细胞法胚胎干细胞（ES细胞）指从囊胚期的内细胞团中分离出来的尚未分化的胚胎细胞，具有发育全能性，能进行体外培养；扩增、转化和制作遗传突变型等遗传操作。
本法外源基因整合率高，植入囊胚前筛选合适的转化的ES细胞，克服了以前只能在子代选择的缺点，并能充分利用分子生物学发展起来的各种先进方法，是很有前途的技术。
缺点是不易建立ES细胞系。
并且由于通过嵌合体途径，所以实验周期长。
4、电脉冲法电脉冲法（electroporation）又称电穿孔法，是将供体DNA与受体细胞充分混匀，在外界的高电压短脉冲下改变细胞膜结构，使细胞膜产生瞬间可逆性电穿孔，从而使一定大小的DNA可以通过细胞膜进入细胞，运送到细胞核。
5、精子导入法利用精子作为外源基因载体，借助受精作用把外源基因导入受精卵，整合到受精卵的基因组中，称之为精子载体导入法，是构建转基因动物的一种新尝试。
该法简单、方便，依靠生理受带过程，免去了对原核的损伤。
但在实践中成功率较低，对于精子是否可作为外源DNA 载体也存在争论。
经皮附睾穿刺取精术结合单精子卵细胞质内显微注射技术
经皮附睾穿刺取精术结合单精子卵细胞质内显微注射技术背景1985年丹麦C. Y. G. Nordling首次报告了通过经皮附睾穿刺（PESA）技术成功取出精子的情况，这一发现为不育症患者提供了新的治疗方式。
而1992年，Schlegel和Li在经皮睾丸穿刺（TESE）的基础上发明了一种新的技术，经皮附睾穿刺（PESA）技术，成功地把这种普遍用于精液常规检查中的方法开发成为一个新的治疗方案。
在此基础上，单精子卵细胞质内显微注射（ICSI）技术便顺理成章地产生了。
PESA技术PESA技术指的是通过经皮穿刺睾丸或附睾，使用注射器抽出精液，针对一些因为输精管堵塞或其他原因无法正常射精的男性进行治疗。
该技术具有无创伤性、轮廓美观且更加安全的优势，常被用于一些不育症的治疗中。
PESA技术成功地抽出的精子可以很方便的用于辅助生育技术如单精子注射（ICSI）等。
ICSI技术传统的人工授精仅利用精子与卵子在体外的自然结合，但因为许多原因，某些男性患者的精子数量、活力或形态可能不合格，这些情况都不能用传统的人工授精方式实现受孕。
ICSI技术是目前应用最广泛的辅助生殖技术之一，ICSI技术相对于人工授精技术而言，其前期的操作难度相对较大，所以也有人们把它看做是一项“精密手术”。
ICSI技术操作过程中需要使用显微操作系统，医生使用非常精密的显微针将一只精子注入到卵子内，并在注入后使其结合。
结合成功后，置入孵化器中，待24-48小时孵化后，获得有发育潜力的胚胎，胚胎以后可以用于移植等下一步操作。
PESA/ICSI技术的应用PESA技术和ICSI技术的结合，在某些不孕症案例中得到了良好的结果。
该技术可以用于几乎所有精子无法正常射出的男性，如睾丸和附睾切除、先天性纯粹性无精子症、宫颈粘液抗体阳性。
单精子ICSI技术现在是不孕症治疗的热门选择之一。
PESA/ICSI技术的风险由于PESA/ICSI技术涉及到大量的操作，操作结束后可能会出现一些副作用和风险。
显微注射的原理及应用
显微注射的原理及应用引言显微注射是一种常见的实验技术，它通过用显微镜对微小的物质进行观察和操作，使得我们可以在微观层面上进行精确的注射。
本文将介绍显微注射的基本原理以及它在生物学研究、细胞工程和药物传递等领域的应用。
一、显微注射的原理显微注射是通过显微镜来观察和操作微小物质的技术。
它的基本原理如下：1.显微镜放大：显微注射必须使用高放大倍率的显微镜，以便观察到微小的细胞或微粒。
常见的显微镜有光学显微镜、荧光显微镜和电子显微镜等。
2.注射器选择：显微注射使用的注射器通常是细长的玻璃管。
注射器的尖端需要经过特殊处理，以便在操作时能够准确注入物质。
3.操作手法：显微注射需要细致的操作手法。
操作者通常需要通过显微镜观察目标细胞或微粒的位置和形态，并使用注射器轻柔地将物质注入其中。
二、显微注射的应用显微注射在生物学研究、细胞工程和药物传递等领域有着广泛的应用。
1. 生物学研究•遗传学研究：显微注射可以用于将特定基因导入细胞或生物体中，从而研究基因的功能和表达。
•细胞学研究：显微注射可以用于向细胞内注入荧光染料，以研究细胞的结构和功能。
•胚胎学研究：显微注射可以用于胚胎的基因操纵和胚胎干细胞培养等研究。
2. 细胞工程•转基因生物制造：显微注射可用于将外源基因导入细胞或生物体中，用于生产转基因生物。
•细胞修复和重建：显微注射可用于修复损伤细胞或组织，并促进其再生和重建。
3. 药物传递•药物递送系统：显微注射可用于将药物输送到特定的细胞或组织中，提高药物的治疗效果和减少副作用。
•病毒治疗：显微注射可用于将基因治疗载体送入病毒体内，治疗某些遗传性疾病。
结论显微注射是一种通过显微镜观察和操作微小物质的技术，它在生物学研究、细胞工程和药物传递等领域有着广泛的应用。
通过显微注射，我们能够精确地进行细胞操作和药物输送，为科学研究和医疗实践提供了更多的可能性。
复杂条件下斑马鱼幼鱼显微成像与注射技术
成像与注射技术
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目 录
• 引言 • 复杂条件下斑马鱼幼鱼显微成像技术 • 复杂条件下斑马鱼幼鱼注射技术 • 实验结果与分析 • 结论与展望 • 参考文献
01
引言
研究背景与意义
斑马鱼幼鱼在生物学和医学研究中的重要性
斑马鱼是一种常见的模式生物，其幼鱼阶段对于研究发育生物学、神经科学、肿瘤学和药 物筛选等领域具有重要意义。
研究方法
本研究将采用光学显微镜、荧光染料和显微操作设备 等手段，对斑马鱼幼鱼进行显微成像和注射操作。首 先，我们将对斑马鱼幼鱼进行荧光标记，以便在显微 镜下观察其生长和发育过程。接着，我们将通过显微 操作技术，对幼鱼进行显微注射，将荧光染料注入细 胞或组织中，以便观察其分布和动态变化。最后，我 们将利用图像处理和分析技术，对荧光信号进行定量 和定性分析，以评估实验效果。
通过技术升级和改进，提高显微成像系统的性能和稳定性，扩大其应用范围和领域 ，为生物学、生态学、医学等领域的研究提供强有力的技术支持。
06
参考文献
参考文献
参考文献1 作者：张三
标题：斑马鱼幼鱼显微成像技术的研究
THANK YOU
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
注射针头类型
02
注射针头有多种类型，如单针头、多针头等，根据实验需求选
择合适的针头。
注射深度控制
03
注射深度是影响实验结果的关键因素之一，需根据幼鱼的生理
结构精确控制注射深度。
复杂条件下斑马鱼幼鱼注射技术难点
01
02
03
幼鱼游动不定
在显微镜下观察斑马鱼幼 鱼时，其游动不定给注射 操作带来较大难度。
高倍率成像揭示细胞水平细节
显微注射的基本操作方法
显微注射的基本操作方法
1.准备工作：清洗和消毒显微注射器。
2.选取合适的显微注射器：根据操作的需要，选取合适的显微注射器。
常用的有玻璃显微注射器和塑料显微注射器。
3.准备液体：将需要注射的液体准备好并装入注射器中。
4.准备被注射的样本：将需要注射的样本准备好，例如细胞、胚胎等。
5.定位：将样本置于显微镜下进行定位，选取需要注射的部位。
6.调整注射器：用显微镜调整注射器的位置和角度，使其准确地指向需要注射的部位。
7.注射：当注射器和样本在正确的位置时，轻轻推压注射器的活塞将液体注射到目标细胞或胚胎中。
8.观察：注射完毕后，观察样本的状态，以确保注射成功。
9.维护：使用完毕后，将显微注射器清洗干净，消毒并存放。
显微操作技术名词解释
显微操作技术名词解释
显微操作技术是一种通过使用显微镜进行微小尺度物质操作的技术。
以下是几种常见的显微操作技术：
1.显微注射：显微注射是一种利用显微镜实现的微小容器内液滴注射技术。
通过操纵显微镜下的注射器，可以将液体精确地注入到微小容器内，例如细胞或微流体芯片中。
2.显微切割：显微切割是一种通过显微镜引导下的切割工具实现的微小组织或细胞切割技术。
此技术常用于细胞分离、胚胎操作等领域。
3.显微组装：显微组装是利用显微镜下的操作工具将微小物体进行精确组装的技术。
该技术常用于微芯片制造、纳米材料组装等研究领域。
4.显微绘图：显微绘图是一种通过显微镜下的操作工具进行微小尺度图案绘制的技术。
该技术常用于纳米器件的设计和制造等领域。
此外，还有其他一些显微操作技术，如显微操纵、显微测量、显微刻蚀等。
这些技术在微纳米领域的研究中起到了重要的作用。
拓展中的显微操作技术正在不断发展，如通过扫描探针显微镜实现的原子力显微镜操作、通过液力控制的微流体操作等，这些技术提供了更高分辨率和更精确的微小尺度物质操作能力。
显微注射技术
显微注射技术细胞显微操作技术XXX,YYY,ZZZ一、目的要求：1.练习针刺细胞（未受精卵、去卵核、早期胚胎细胞或体外培养细胞）。
2.练习微吸管制备。
3.掌握细胞显微移植技术（细胞核、外源基因）。
二、实验原理：采用显微操作系统（倒置显微镜/体视显微镜+显微操作器）将供体物（基因、细胞核或细胞其他成分）直接注入宿主细胞（去核卵母细胞、胚胎细胞或体外培养的细胞）中，研究供体物的功能或者获得转基因动物的技术。
供体细胞的细胞核移入卵母细胞后，在卵母细胞相关因子的作用下，发生了重编程回复到发育的起点状态。
核重编程的过程就是使在体细胞中被关闭，而在正常胚胎发育中表达的基因重新被激活的过程。
重编程有三种可能的结果：（1）供核基因组完全没有进行重编程，重构胚很快死亡；（2）部分重编程，重构胚在不同的发育阶段死亡；（3）完全重编程，产生正常的克隆动物。
外源基因导入（基因沉默、过表达、转基因动物）：利用显微操作系统将外源目的基因（DNA或RNA）直接注入到受体细胞或受精卵的原核中，使外源基因整合到受体细胞的基因组内，培养/筛选，获得转基因动物/性状分析。
显微注射技术是利用显微操作系统和显微注射技术将外源目的基因直接注入到受精卵的原核中，使外源基因整合到受体细胞的基因组内，再通过胚胎移植技术将整合有外源基因的受精卵移植到受体动物的子宫内发育，从而获得转基因动物。
它是目前基因转移效率较好的一种基因转移方法，可直接用不含有原核载体DNA片段的外源基因进行转移；外源基因的长度不受限制,可达100kb；实验周期相对比较短。
它的不足之处是：需要昂贵精密的设备；显微注射操作复杂，需专门技术人员；导入外源基因整合位点和拷贝数无法控制；常导致插入位点附近宿主DNA片段缺失、重组等突变，可造成动物严重的生理缺陷。
尽管如此，由于显微注射技术直接对基因进行操作，整合率较高，因而仍是目前建立转基因动物极为重要的方法。
显微注射技术在植物、动物的细胞发育研究的应用，为研究体内生理和体外的生化过程架起桥梁，将特定的分子探针及衍生的细胞间质成分导入活体细胞，为研究控制细胞功能的调控机制提供了新的视野。
动物转基因技术的种类
动物转基因技术的种类
动物转基因技术有多种，包括但不限于以下几种：
1.显微注射法：这是最早的动物转基因技术，通过将外源基因直接
注射到受精卵细胞的原核内，然后将受精卵移植到受体母畜子宫内发育，这样分娩的动物体内的每一个细胞都含有新的DNA片段。
这种方法的缺点是效率低、位置效应造成的表达结果的不确定性、动物利用率低等。
2.精子介导的基因转移：这种方法是将精子作适当处理后，使其具
有携带外源基因的能力，然后给发情母畜授精。
在母畜所生的后代中，有一定比例的动物是整合外源基因的转基因动物。
3.逆转录病毒载体法：通过逆转录病毒作为载体，将外源基因插入
到宿主细胞的染色体DNA中，从而获得稳定转基因的表达。
4.胚胎干细胞介导法：通过将外源基因导入胚胎干细胞，然后将这
些干细胞注入到受体动物的胚胎中，从而获得转基因动物。
5.体细胞核移植法：首先在体外培养的体细胞中举行基因导入，筛
选获得带转基因的细胞，然后将带转基因的细胞移植到受体动物的卵母细胞内，再构建成重建胚，最后将重建胚移植到受体动物的子宫内发育，从而获得转基因动物。
6.人工染色体介导的基因转移法：利用人工染色体作为载体，将外
源基因插入到人工染色体中，然后将人工染色体导入到动物细胞中，从而获得转基因动物。
分子生物学实验技术斑马鱼胚胎显微注射实验步骤
斑马鱼胚胎显微注射实验步骤：显微注射是指在显微镜下操作的微量注射技术。
可将细胞的某一部分(如细胞核、细胞质或细胞器)或外源物质(如外源基因、DNA片段、信使核糖核酸、蛋白质等)通过玻璃毛细管拉成的细针，注射到细胞质或细胞核内。
是研究各种生物分子的作用、制作转基因动物、克隆动物等的重要技术。
显微注射应用的范围非常广泛，从辅助（体外）细胞受精技术至分子和细胞基本组分的转运都需使用这一技术，比较典型的是将某些物质注射进细胞中以操作和/或监测某种特定的存活细胞中的基本机体生物化学状态。
这些可以注射进细胞的物质包括有：各种细胞器、激酶、组织化学标志物（比如辣根过氧化物酶或者荧光黄）、蛋白质、代谢物质、微磁头、离子、抗体、基因、分子生物学的mRNA和DNA等等。
运用这一技术，也可以实现用于单个细胞或一组细胞的较少量（皮升至毫升）药剂或药物的精确输送（微灌注），例如药理学的药物检验。
斑马鱼个体小，养殖成本低，能大规模繁殖，胚胎透明，体外发育，肉眼可见，因此斑马鱼胚胎是很好的开展显微注射的材料。
1、主要试剂的配制（1）胚胎培养液的配制称取0.8g NaCl、0.04g KCl、0.00358g Na2HPO4、0.006g KH2PO4、0.144g CaCl2、0.246g MgSO4•7H2O、0.35g NaHCO3、0.06g 青霉素、0.1g 链霉素加入含有800mL 灭菌水的1L烧杯中，搅拌至完全溶解，再用灭菌水定容至1L。
（2）显微注射指示剂的配制称取0.1克酚红溶于5ml灭菌的蒸馏水中，配制成2％的母液。
先用1mm滤膜过滤后，再用0.22mm的滤膜再次过滤，然后储存在-20℃冰箱里备用。
2、显微注射操作（1）注射针头的拉制：装上一根直径为1mm的毛细管，拧紧左右两侧的夹子，做好固定，并使其中间部位对准加热丝。
设定参数为：Heat-600, Pull-55, Velocity-80, Time-10。