甘草黄酮脂质体的制备

1 实验部分
1． 1 仪器与试药 Spectrumlab 54 分光光度计（ 上海棱光技术有限
公司） 。卵磷脂、胆固醇（ 天津市光复精细化工研究 所） ； 甘草黄酮对照品（ 新疆塔里木农业生物研发中 心，批号： 070517） ； 其余试剂为分析纯。 1． 2 方法与结果 1． 2． 1 溶液的制备 精密称取 100 mg 甘草黄酮， 用无水乙醇定容至 100 mL，配成 1 mg·mL － 1 的对照 品溶液。精密称取适量卵磷脂和胆固醇于 1 L 的圆 底烧瓶中，加入 10 mL 乙醚溶解，63 ℃ 减压蒸干， 加入 40 mL 磷酸缓冲盐溶液，旋转 20 min 使其溶 解，放置 3 h 充分水合，得乳白色的空白脂质体混悬 液。精密称取适量卵磷脂和胆固醇于 1 L 的圆底烧 瓶中，加入 10 mL 乙醚，振摇使溶解，再加入甘草黄 酮的无水乙醇溶液，于 63 ℃ 蒸干，然后加入 40 mL 磷酸盐缓冲溶液，旋转 20 min 使其溶解，放置 3 h 充 分水合，即得甘草黄酮脂质体溶液。 1. 2. 2 光谱分析 将甘草黄酮对照品溶液和空白 脂质体溶液分别用无水乙醇稀释后，在 200 ～ 600 nm 进行扫描，甘草黄酮在 286 nm 有最大吸收峰，空白脂 质体对药物无干扰，因此，选择 286 nm 为测定波长。 1． 2． 3 标准曲线的制备 精密量取 1． 0、1． 5、3． 5、 4． 0、4． 5 mL 甘草黄酮对照品溶液，置 10 mL 量瓶 中，用无水乙醇定容，在 286 nm 测定吸光度。以吸 光度为纵坐标、浓度为横坐标回归，得线性回归方 程为： Y = 22． 563X － 4． 1 × 10 － 3 （ r = 0． 9998） ，线性 范围为 0． 01 ～ 0． 045 mg·mL － 1 。 1． 2． 4 包封率的测定方法 精密吸取 1 mL 甘草黄 酮脂质体溶液，于 1 × 104 r·min － 1 离心 30 min ，取 沉淀用无水乙醇定容至 10 mL，依法测得包裹在脂 质体中的含药量（ A1 ） 。精密量取 1 mL 甘草黄酮 脂质体溶液，用无水乙醇稀释至 10 mL，测得溶液中 所含药量（ A2 ） ，包封率 = A1 / A2 × 100% 。
1． 2． 5 甘草黄酮脂质体制备 精密称取 0． 1004 g 卵磷脂和 0． 1006 g 胆固醇，置梨形瓶中，加入 10 mL 乙醚，振摇，再加入 5 mL 甘草黄酮溶液，于 63 ℃ 蒸 干成膜，然后加入 40 mL 磷酸缓冲盐溶液，旋转 20 min 使膜溶解，放置 3 h 充分水合，即得薄膜法制备 样品。精密称取 0． 1003 g 卵磷脂和 0． 1007 g 胆固 醇，置梨形瓶中，加入 10 mL 乙醚，振摇，再加入 2 mL 磷酸缓冲盐溶液，超声 3 min 得乳浊液，37 ℃ 旋 转至胶态，再加入 5 mL 甘草黄酮溶液，63 ℃ 旋转至 干，加入 40 mL 磷酸缓冲盐溶液，旋转 20 min，放置 3 h 充 分 水 合，即 得 逆 相 蒸 发 法 样 品。精 密 称 取 0. 1003 g 卵磷脂和 0． 1005 g 胆固醇于小烧杯中，加 入 10 mL 无水乙醇，搅拌溶解，加入 5 mL 甘草黄酮 溶液，混匀，匀速注入水浴 65 ℃ 40 mL 磷酸缓冲盐 溶液中，慢速搅拌 20 min，水浴保温 50 min，即得乙 醇注 入 法 样 品。 精 密 称 取 0． 1000 g 卵 磷 脂 和 0. 1007 g 胆固醇于小烧杯中，加入 10 mL 乙醚，搅拌 并溶解，加入 5 mL 甘草黄酮溶液，摇匀，匀速注入水 浴 65 ℃ 的 40 mL 磷酸缓冲盐溶液中，慢速搅拌 20 min，水浴保温 25 min，即得乙醚注入法样品。 1． 2． 6 包封率的测定 分别取 1 mL“1． 2． 5”项的 4 种脂质体溶液，按“1． 2． 4”项下方法在 286 nm 测 定吸光度，并计算得甘草黄酮的包封率。薄膜法、逆 相蒸发法、乙醇注入法、乙醚注入法的包封率分别为 80． 8% 、52． 8% 、33． 5% 、74． 8% ，包封率和含药量为 薄膜法 ＞ 乙醚注入法 ＞ 逆相蒸发法 ＞ 乙醇注入法。 可见，用薄膜法制备甘草黄酮脂质体较好。
中图分类号： R94
文献标志码： A
文章编号： 1006 － 0103（ 2010） 04 － 0412 － 02
Study on preparation of Glycyrrhiza flavonoids liposome
LIU Yi1 ，WANG Jian － hua1 ，SUN Yun2
（ 1． TCM Hospital Of Urumqi，Urumqi，Xinjiang，830000 P． R． China； 2． College of TCM，Xinjiang Medical University，Urumqi， Xinjiang，830011 P． R． China）
by thin － film dehydration method was 80． 8% ． CONCLUSION The thin － film dehydration method is simple and replicable，which
could biza flavonoids liposome．
Key words： Glycyrrhiza flavonoids； Liposome； Preparation
CLC number： R94
Document code： A
Article ID： 1006 － 0103（ 2010） 04 － 0412 － 02
《中国药典》收载的甘草有乌拉尔甘草 Glycyrrhiza uralensis Fisch． 、胀果甘草 G． Batal ． 和光果甘 草 G． glabra L． 。甘草的有效成分甘草黄酮具有明 显 的 抑 菌、抗 病 毒、抗 肿 瘤、抗 氧 化、保 肝 等 作 用［1 － 2］，因此，将甘草黄酮制成脂质体，可改善水溶 性、增强靶向性、提高生物利用度。
13． 4
12． 967 ± 1． 752 13． 5 15． 159 ± 3． 584 23． 6
11． 37 ± 3． 89
34． 2 14． 74 ± 4． 95 33． 6
3． 25 ± 0． 99
21． 4 2． 83 ± 0． 61
30． 4
F0 ～ t为 101． 1% ，置信区间为87． 3% ～ 117． 0% ，落在 等效标 准 80% ～ 125% ，经 双 单 侧 t 检 验 为 等 效。 F0 ～ ∞ 为 97． 0% ，置信区间为 82． 9% ～ 113． 4% ，在等 效标准 80% ～ 125% 之间，经双单侧 t 检验为等效。 两种缓释片 Cmax的相对生物利用度为 87． 0% ，置信 区间为 70． 4% ～ 107. 5% ，落在等效标准 70． 0% ～ 143． 0% 之 间，经 双 单 侧 t 检 验 为 等 效。 Tmax 经
profiles after oral administration of two preparation to
Beagle dogs
表 2 Beagle 犬口服两种制剂后盐酸二甲双胍的药动学参数（ 珔x ± s） Table 2 Pharmacokinetic parameters of Metformin hydrochloride
美吡双胍缓释片 RSD / % Triexer
RSD / %
90． 156 ± 14． 817 16． 4 90． 140 ± 20． 737 23． 0
93． 105 ± 16． 961 18． 2 96． 102 ± 18． 361 19． 1
11． 10 ± 2． 03
18． 3 9． 65 ± 1． 29
作者简介： 刘艺，从事医院药学工作。Email： wangjianhua1962@ 163． com
第4 期
刘 艺，等。甘草黄酮脂质体的制备
413
Spectrophotomery at the wavelength of 286 nm． RESULTS The encapsulation efficiency of Glycyrrhiza flavonoids liposome prepared
Wilcocon检验 P ＞ 0． 05，无显著差异。两种缓释片的 MRT0 ～ t经配对 t 检验无显著差异（ P ＞ 0． 05） 。结果 表明： 以 AUC0 ～ t 或 AUC0 ～ ∞ 和 Cmax 为评价指标，两种 缓释片生物等效。 1． 2． 9 体内外的相关性 根据药 － 时数据和 Wagner － Nelson 公式，计算出美吡双胍缓释片中盐酸二 甲双胍在 Beagle 犬体内不同时间的吸收百分数 Fa， 并测出盐酸二甲双胍体外累积释放百分数 Fd。以 Fa 为因变量，Fd 为自变量进行线性回归，回归方程 为： Y = 0． 617X + 50． 088。美吡双胍缓释片中盐酸 二甲双胍在 Beagle 犬的体内吸收与体外释放有良 好的相关性（ r = 0. 9674） 。
Abstract： OBJECTIVE To study on the preparation and characterization of Glycyrrhiza flavonoids liposome． METHODS Glycyrrhiza flavonoids liposomes were prepared utilizing 4 different kinds of methods． The encapsulation efficiency was determined by Visible
华西药学杂志 W C J· P S
2010，25（ 4） ∶412 ～ 413
20
reference drug
15
test drug
C/mg·L-1
10
5
0
20