实验六 甘草中总黄酮的提取和检测
甘草中金属元素与总黄酮含量测定与抗氧化研究
第28卷,第3期光 谱 实 验 室Vol.28,No.3 2011年5月Chinese J ournal of Sp ectroscop y L abor atory May,2011甘草中金属元素与总黄酮含量测定与抗氧化研究张雷 韩丽琴 a 董顺福a 刘建华a(吉林医药学院附属医院 吉林省吉林市华山路81号 132013)a(吉林医药学院化学教研室 吉林省吉林市吉林大街5号 132013)摘 要 对中草药甘草中金属元素与总黄酮含量进行测定,并对其清除超氧自由基进行研究。
测定结果显示,甘草中含有丰富的金属元素和黄酮类化合物,其中总黄酮为16.42%,金属元素含量为铁>锌>锰>铜,对超氧自由基具有一定的清除作用。
实验结果为研究甘草治疗呼吸系统疾病及清除自由基提供了有用的数据。
关键词 甘草;总黄酮;金属元素;抗氧化中图分类号:O657.31;O657.32 文献标识码:A 文章编号:1004-8138(2011)03-1258-031 引言甘草为豆科甘草属植物,是常用中药之一。
近年来研究发现,甘草黄酮类化合物具有抑菌、抗真菌、增强机体免疫功能、抗氧化、抗肿瘤、保肝等广泛的药理作用[1]。
为探讨甘草中总黄酮的相关作用及其与治疗呼吸系统疾病的功效关系,对甘草中金属元素和总黄酮进行测定及抗氧化研究。
2 实验部分2.1 试剂与仪器甘草,市售。
HNO3,HClO4均为优级纯;M g、M n、Zn、Fe标准储备液(国家标准溶液,浓度为1mg·mL-1,国家钢铁材料测试中心);使用液:Cu为50 g·mL-1;Mn、Zn、Fe均为50 g·mL-1;芦丁标准品(F20050930,北京国药集团化学试剂有限公司)。
其他试剂均为分析纯。
实验用水为去离子高纯水(R>106 )。
HG-9600A型原子吸收分光光度计(沈阳分析仪器厂),附80586计算机及FAAS软件处理系统;UV-1200型紫外分光光度计(北京分析仪器厂)。
甘草有效成分的提取分离实验方案
甘草有效成分的提取分离实验方案实验目的：通过对甘草中甘草黄酮、甘草酸和甘草多糖的提取分离，进一步理解他们的理化性质，并且初步掌握提取分离的方法。
实验原理：黄酮类化合物则泛指两个苯环（A环与B环）通过中央三碳相互联接而成的一系列化合物。
根据中央三碳的氧化程度、是否成环、B 环的联接位点等特点，可将该类化合物分为多种结构类型。
代表化合物有甘草黄酮、甘草素、异甘草素、甘草甙、异甘草甙、甘草查尔酮等。
甘草中已经发现的黄酮类化合物有一百多种，本实验只对其进行粗提，并且测定其总含量。
甘草酸是一类三萜类皂苷，主要以甘草酸钾、钙盐的形式存在，是甘草次酸的二葡萄糖醛酸甙，含量在4-20%之间；甘草酸水解脱去糖酸链变形成了甘草次酸。
超临界CO2萃取甘草总黄酮的萃取率是1. 35%，含量32. 45%，是索氏提取法提取甘草总黄酮的提取率的2.2倍，索氏提取溶剂用量是超临界CO2萃取的6倍。
本实验采取超临界CO2萃取法提取甘草黄酮。
【1】大孔树脂适于物质水溶液的分离纯化，超临界C02萃取提取的甘草总黄酮中乙醇含量过高，即使对萃取液进行浓缩处理，其中乙醇的含量仍然很高，所以大孔树脂的吸附、解吸附的效果不好。
萃取液浓缩近干加入水后，所要分离的物质析出变混浊，也不适合用大孔树脂进行分离纯化。
与大孔树脂层析比较，硅胶柱层析可以更有效的分离纯化甘草黄酮。
使用硅胶柱层析可以有效地使甘草黄酮类物质的含量达到55%以上，收率1. 12%，符合国家中药二类新药的原料要求。
【1】综合考虑，本实验选择硅胶柱层析对甘草黄酮进行分离纯化。
甘草酸和甘草次酸的极性比黄酮类物质的极性大，更易溶于极性大的低浓度乙醇中，采用85%乙醇作为夹带剂，使得在二氧化碳超临界萃取甘草黄酮类物质过程中，大部分甘草酸和甘草多糖仍然留在残渣中。
鉴于甘草酸和甘草多糖都溶于水的性质，本实验采用超声或微波辅助法对它们同时进行提取[3]。
对于提取后的甘草酸和甘草多糖的分离，可查阅到的方法包括醇沉酸沉法[3]。
甘草超滤液中总黄酮络合萃取
甘草超滤液中总黄酮络合萃取目录一、项目背景与研究目的．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．21.项目背景介绍．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．32.研究目的及意义．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．3二、甘草超滤液的制备．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．41.甘草原料的选取与处理．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．52.超滤膜的选择及预处理．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．53.超滤操作过程与参数设置．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．6三、总黄酮的络合萃取原理．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．71.总黄酮的概述．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．82.络合萃取原理介绍．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．83.适用于甘草超滤液的萃取剂选择．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．9四、实验材料与方法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．101.实验材料．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．11（1）甘草超滤液．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．12 （2）萃取剂及其他试剂．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．132.实验方法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．14（1）总黄酮含量的测定．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．14 （2）络合萃取实验操作．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．15五、实验结果分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．161.总黄酮萃取率的测定结果．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．172.不同条件下萃取效果的比较．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．18（1）不同萃取剂浓度的影响．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．19（2）不同萃取温度的影响．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．20六、讨论与优化建议．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．211.实验结果的讨论．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．22（1）实验数据与理论预期的对比．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．23（2）实验过程中可能存在的误差分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．232.对实验操作的优化建议．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．24（1）针对实验条件的优化建议．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．25（2）针对实验流程的优化建议．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．27七、结论与展望．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．28一、项目背景与研究目的（一）项目背景甘草，学名Glycyrrhiza uralensis，是一种在传统中医药中广泛使用的草药，其根部被广泛应用于缓解喉咙痛、咳嗽、胃溃疡等多种疾病。
实验六 甘草中总黄酮的提取和检测
内
分光光度法测定原理
蒙
图 1 甘草中总黄酮的提取工艺流程图
古
分光光度法既能进行定性又能进行定量测定， 它是根
科
技 大
学
易行、比较常用的溶剂提取法来进行有效成分的提取。溶剂提取法按其实现方式
量。本实验选用为芦丁标准品（纯度大于95%） 。
图 2 铝离子与黄酮形成的络合物结构 Fig.2 Structures of Al3+-flavone complexes
实验六
一、实验目的和要求
甘草中总黄酮的提取和检测
1．熟悉甘草中总黄酮的提取方法和工艺； 2．掌握分光光度法测定物质含量的方法。 二、实验原理 甘草黄酮是从特定品种甘草中提取的天然美白剂，它能抑制酪氨酸酶的活 性，又能抑制多巴色素互变和 DHICA 氧化酶的活性，是一种快速、高效、绿色 的美白祛斑化妆品添加剂。 甘草黄酮易溶于有机溶剂， 根据活性成分的特性，本实验主要采用了简单
蒙
古
科
技 大
学
6 提取液 甘草中总黄酮的含量
5.0 —— 总黄酮的重量 100% 银杏叶的干重
1.0 ——
思 考 题
1．所示回流提取法的原理是什么? 2．分光光度法测定的原理是什么? 3．造成实验测得总黄酮含量偏低的原因有哪些?
内
蒙
古Leabharlann 科技 大学
滤纸包好， 置于 500mL 索氏提取器中， 加入 400mL 无水乙醇提取至流出液无色， 大约 4h 后取出提取液，自然冷却备用。 2．甘草中总黄酮的测定 (1)标准溶液的配制 将芦丁标准品于 120℃下干燥至恒重，精确称取芦丁标准品 10.00mg 置于
科
技 大
学
50mL 容量瓶中， 加入适量 60%乙醇溶液， 在 50℃的水浴中加热溶解， 自然冷却， 用 60%乙醇溶液定容至刻度，即得浓度为 0.20mg/mL 的芦丁标准溶液。 (2)标准曲线的制作 取 10 mL 具塞比色管 6 支，分别准确吸取芦丁标准溶液 0.0mL、1.0 mL、2.0 mL、3.0 mL、4.0 mL、5.0 mL 于 10 mL 具塞比色管中。然后各加入 30%乙醇补 充至 5.0 mL，加入 5%的 NaNO2 溶液 0.6mL，摇匀，放置 6min 后加入 10%的 Al （NO3） 摇匀， 再放置 6min， 加入 1mol/LNaOH 溶液 4mL， 用 30% 3 溶液 0.6mL， 乙醇定容，摇匀，放置 15min。在紫外-可见光分光光度计上，先取两个 1cm 比 色皿加空白溶液，在 510nm 波长处调零。取出一个比色皿，加入不同浓度的溶 液，再在 510nm 波长处测定吸光度 A。以黄酮含量为横坐标，吸光度 A 为纵坐 标，绘制标准曲线。 (3)甘草提取液中总黄酮含量的测定
甘草提取黄铜实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的本实验旨在学习甘草中黄酮类化合物的提取方法，通过溶剂提取、分离纯化等步骤，获得甘草黄酮粗品，并对其理化性质进行初步分析。
二、实验原理甘草中含有丰富的黄酮类化合物，具有多种生物活性。
本实验采用溶剂提取法，利用有机溶剂（如甲醇、乙醇等）提取甘草中的黄酮类化合物，再通过有机溶剂萃取、浓缩等步骤进行分离纯化。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：甘草粉末（市售）甲醇（分析纯）乙醇（分析纯）氯仿（分析纯）碳酸氢钠（分析纯）石英砂烧杯蒸馏装置漏斗滤纸烧瓶恒温水浴锅紫外-可见分光光度计2. 实验仪器：上述实验材料所列仪器四、实验步骤1. 甘草粉末的制备：将甘草粉末过筛，取40目筛的粉末备用。
2. 甘草黄酮的提取：（1）取10g甘草粉末，加入100mL甲醇，在恒温水浴锅中回流提取2小时。
（2）提取液过滤，滤液浓缩至约10mL。
3. 甘草黄酮的分离纯化：（1）将浓缩液转移至分液漏斗中，加入等体积的氯仿，充分振荡，静置分层。
（2）分取氯仿层，加入5g碳酸氢钠，充分振荡，静置分层。
（3）分取水层，用氯仿萃取2次，合并氯仿层。
（4）将氯仿层浓缩至约1mL，加入适量乙醇，溶解，转移至50mL容量瓶中，用乙醇定容。
4. 甘草黄酮的鉴定：（1）取适量甘草黄酮溶液，在紫外-可见分光光度计上测定其吸收光谱。
（2）与标准黄酮溶液进行比较，确定甘草黄酮的吸收峰。
五、实验结果与分析1. 甘草黄酮的提取率：根据实验结果，甘草黄酮的提取率为1.5%。
2. 甘草黄酮的理化性质：（1）甘草黄酮的吸收光谱：在紫外-可见分光光度计上，甘草黄酮的吸收峰位于278nm和355nm。
（2）甘草黄酮的性状：甘草黄酮为黄色粉末，无臭，味苦。
六、实验讨论本实验采用溶剂提取法提取甘草黄酮，操作简便，提取率较高。
通过有机溶剂萃取、浓缩等步骤，可获得较纯的甘草黄酮粗品。
实验结果表明，甘草黄酮具有良好的理化性质，具有进一步研究开发的潜力。
七、实验总结本实验成功地从甘草中提取了黄酮类化合物，并对甘草黄酮的理化性质进行了初步分析。
甘草中黄酮的纯化方法和含量测定
甘草中黄酮的纯化方法和含量测定
李俊松;徐德生;冯怡;陈丽华
【期刊名称】《中成药》
【年(卷),期】2007(029)007
【摘要】目的:研究聚酰胺富集甘草中黄酮的工艺参数,同时建立其含量测定方法.方法:以二氢黄酮类化合物在碱性条件下转化为查尔酮类的量作为指标,以柚皮苷为对照品,经聚酰胺吸附柱富集后,采用碱性比色法显色、测定.结果:纯化工艺条件为甘草聚酰胺比2:1(g/g),树脂径高比1:7,用5倍量柱体积70%乙醇洗脱,甘草黄酮洗脱率在90%左右;含量测定平均加样回收率为98.81%(RSD=2.00%).总固物中黄酮含量可达45%.结论:本法富集、纯化甘草总黄酮可行;甘草黄酮含量测定方法稳定,可靠.
【总页数】4页(P997-1000)
【作者】李俊松;徐德生;冯怡;陈丽华
【作者单位】上海中医药大学,上海,201203;上海中医药大学,上海,201203;上海中医药大学,上海,201203;上海中医药大学,上海,201203
【正文语种】中文
【中图分类】R284.2
【相关文献】
1.几种甘草黄酮含量测定方法的比较与评价 [J], 王勇;赵海燕;封琳;马永平
2.甘草地上部分总黄酮含量测定方法的筛选 [J], 程新宇;韩亚男;康雪芳;侯俊玲;王
文全
3.甘草中总黄酮含量测定的方法学研究 [J], 马玲;安瑜;王坤;李巍;小池一男;王英华
4.甘草细胞培养物黄酮含量测定方法的建立 [J], 王磊;杨英;周圆圆;敖明章;余龙江
5.甘草总黄酮含量测定方法研究 [J], 冯薇;王文全;赵平然
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甘草总黄酮的微波提取及含量测定
4
作者简介: 孙 萍 (19662) , 女 (汉族) , 江苏靖江人, 现任石河子大学师范
5 6
学院讲师, 主要从事微波技术在药物合成提取中的应用研究.
0. 200 0. 200 0. 200
0. 370 5 0. 369 7 0. 368 4
99. 20 98. 80 98. 15
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© 1995-2005 Tsinghua Tongfang Optical Disc Co., Ltd. All rights reserved.
时珍国医国药 2003 年第 14 卷第 5 期
L ISH IZH EN M ED IC IN E AND M A T ER IA M ED ICA R ESEA RCH 2003 VOL. 14 NO. 5
甘草总黄酮的微波提取及含量测定
孙 萍1, 李 艳1, 成玉怀2
(1. 石河子大学师范学院, 新疆 石河子 832002; 2. 石河子大学药学院, 新疆 石河子 832002)
1999, 30 (8) : 5892589. [ 7 ] 韩公羽, 沈企华. 植物药有效成分的研究与开发[M ]. 杭州: 杭州大
学出版社, 1991: 942102.
( 临床报道(
桂枝茯苓胶囊治疗药物流产后子宫出血 90 例
种丽群
(江苏省常州市中医医院 213003)
摘要: 目的: 观察桂枝茯苓胶囊对药物流产后子宫出血的疗效。方法: 在用米非司酮做药物流产 180 例中, 随机选取 90 例
G ly cy rrh iz a g labra L. by M icrow ave techn ique, and determ in te the con tea t w ith co lo rim etry. Results: T he ch rom oco con ten t of G ly cy rrh iz a g labra L. is 1. 721% , recovery ra te is 98. 26%. Conclusion:M icrow ave T echn ique is first app lied in ex tracting ch rom oco of G ly cy rrh iz a g labra L. T he reaction sp eed is fa ster and the resu lt is sa tisfacto ry.
甘草总黄酮和总皂苷成分的提取工艺及其含量分析
２ １２标准曲线 的制备 黄酮标准 曲线 ：精 密吸取 ．． 甘草 苷储备 液 ００ ，０ １ ． ，０４ ． ， ．ｍ ．５ ． ，０２ ． ，０ ６ ０ ８ Ｌ 依 次置 于 １ ｍ ０ Ｌ的容 量 瓶 中 ，各 加 入 ７ ％ 甲 醇溶 液 ０
［ 基金项 目］ 国家 自然科学基金项 目（０ ７ ３８ ； ３ ５２ ２ ） 高等学校博 士点科研基金项 目（０ ５０ ６ ０ ） ２ ００ ２ ０６ ［ 通讯作者 ］
药 材 质量 。
［ 关键词 ］ 甘草 ；总黄酮 ；总皂苷 ；正交试验 ；含 量测定
甘草是 常用 中药材 ，具有 补 脾益 气 ，清热解 毒 ， 祛痰 止咳 ，缓 急止 痛 ，调 和诸 药 的功能 ¨ ，在 医疗 、 食 品 、化妆 品 等行 业 中的 应用 广 泛 。甘 草 黄 酮 和皂 苷是基 本结构 不 同 的两类 化 合 物 ，也 是 甘 草具 有 多 种药 理作用 的物质 基础 ，在甘 草药 材 中的含 量较 高 ， 但在不 同 品种 、不 同产 地 甘 草药 材 中 的含量 差 异 较
大 ，以往测定 甘 草 总黄 酮 和 总皂 苷 含 量 常 以不 同 的
醋酸 、高氯 酸等试 剂均 为分析 纯 。
不 同 品 种 和 不 同 产 地 野 生 甘 草 药 材 ，甘 草
Ｇｙｙｒｉ ｒｌ ｓ ｉ ｈ 集 自西 北 地 区 （ 疆 、 ｌｃｒ ｚ ｕａｅ ￣Ｆｓ ．采 ｈａ ｎ ｃ 新 甘 肃） ，中西 部地 区 （ 内蒙古 、 宁夏 、陕 西 ） ，东 北地 区 （ 林 、 龙江 ） 等地 ，每 区取样 ５份 ；在 新 疆采 集 吉 黑
甘 草 Ｇｙｙｒｉ ｒｌ ｓ ｉ ｈ 、光果 甘草 Ｇｙｙｒｉ ｌ ｒ ｚ ｕａｅ ｉＦｓ ． ｃ ｈａ ｎｓ ｃ ｌ ｒ ｚ ｃ ｈａ
栽培甘草中总黄酮的含量测定
第 31 卷第 12 期 2006 年 6 月
Байду номын сангаас中国中药杂志
China Journal of Chinese Materia Medica
Vol1 31, Issue 12 June, 2006
量测定是以芦丁为对照 品, 按药典 以比色法测定。 由于甘草中的黄酮类成分主要为二氢黄酮( 如甘草 苷、甘草素) 、查耳酮( 如异甘草苷、异甘草素) 、黄酮 类, 因此以芦丁为对照品测定甘草总黄酮含量可能 会有偏差。同时文献[ 5] 认为以芦丁为对照品, 采用 比色法测定总黄酮的方法专属性差。在此情况下, 利用二氢黄酮在 10% KOH 溶液的碱性条件下转化 为查耳酮的特性, 而且通常具有 4c- 羟基查耳酮在碱 性条件下最大吸收移至 400 nm 左右的特点, 以甘草 苷为对照品, 采用比色法测定了不同产地、不同生长 年限甘草中总黄酮的含量。结果发现该方法灵敏、 方便, 可较准确地测定甘草中总黄酮的含量。 1 仪器与试药
1998, 24( 4) : 20. [ 3] 李 强, 任 茜. 乌 拉尔甘 草黄 酮类 成分 的质 量评 价. 中 药
材, 1990, 13( 7) : 32. [ 4] 张爱华, 彭国平, 文红梅, 等. 甘草与附子配 伍煎液的甘草黄 酮
含量测定. 中成药, 1999, 21( 4) : 196. [ 5] 郭亚健, 范 莉, 王晓 强, 等. 关于 NaNO2- Al ( NO3) 3-N aOH 比 色
时, 研究还 发现甘草黄酮类成 分具有抗氧化、抗病 毒、抗炎、抗溃疡作用[ 1] 。因此作者对栽培于内蒙古 杭锦旗、赤峰、甘肃酒泉不同年限的甘草中的总黄酮
含量进行了测定, 了解不同生长年限的人工栽培甘 草中黄酮类成分含量变化规律, 以指导人工栽培甘 草的合理应用。
甘草总黄酮的提取
甘草总黄酮的提取工艺研究摘要：目的：用正交法研究提取甘草中的甘草总黄酮类化合物最佳提取工艺。
方法：选取乙醇浓度、提取时间、温度、料液比个主要影响因素，采用正交法，以甘草总黄酮类化合物得率作为检测指标。
结果：应用酸溶碱沉法获得甘草总黄酮类化合物的最佳提取工艺是：75%的乙醇，提取2h，酸沉PH 为2.5，液料比为20:1。
结论：该方法提取率高，稳定性好，操作简便，适合工业化生产。
关键词：甘草甘草总黄酮正交设计提取工艺甘草为双子叶植物豆科甘草，胀果甘草，或光果甘草的根及根茎。
始载于《神农本草经》，列为上品。
甘草性平，味甘，归十二经。
有解毒、祛痰、止痛、解痉以至抗癌等药理作用。
在中医上，甘草补脾益气，滋咳润肺，缓急解毒，调和百药。
临床应用分“生用”与“蜜炙”之别。
生用主治咽喉肿痛，痛疽疮疡，胃肠道溃疡以及解药毒、食物中毒等；蜜炙主治脾胃功能减退，大便溏薄，乏力发热以及咳嗽、心悸等。
甘草是我国传统常用中草药之一，也是我国重要的植物资源[1]。
甘草黄酮类成分是甘草中最重要的活性成分之一，具有抗氧化、抗肿瘤、增强心血管功能、增强免疫力等作用[2-5]。
因此，开展甘草的深加工，使甘草资源得以充分利用，增加资源的附加值，前景十分可观。
为此，笔者以甘草为对象，研究了甘草黄酮的乙醇回流提取工艺，单因素试验确定各因素对提取工艺的影响，正交试验确定甘草黄酮提取的最佳工艺条件。
1、仪器与试药1.1仪器:烧杯、容量瓶、移液管、玻璃棒、量筒、回流装置、滤纸、HH24数显恒温水浴锅、分析天平、AB1042N电子天平、布氏漏斗、SHZ2C型循环水多用真空泵1.2试剂:甘草，市售;试剂:蒸馏水、氢氧化钠、盐酸2、方法与结果在利用碱溶酸沉法从甘草中获得甘草总黄酮的过程中，我们通过预试验发现影响提取得率的主要因素为乙醇浓度、提取时间、温度、料液比。
故选择乙醇浓度(A)、提取时间(B)、酸沉pH值(C)、料液比(D)作为考察的四个因素，各取三个水平(见表1)，以甘草总黄酮得率(%)为考察指标。
甘草黄酮高效提取
甘草中黄酮的分离纯化方法
大孔吸附树脂柱层析分离纯化甘草黄酮 本实验采用AB-8型号的大孔吸附树脂。
装柱：充分吸胀的树脂在搅拌下倒入层析柱 (80×1500 mm)中，装柱后液体必须高于树脂20～ 40mm。
上样：将甘草乙醇提取物加适量去离子水稀释 后上样至经过预处理的AB-8大孔吸附树脂柱，调节 柱层析流出速度大约15mL·min-1，流出液收集备 用。
综合考虑确定最佳提取条件为 A3B2C3D3，即提取时间 60min，料液比 1∶15， 提取温度 70℃，提取次数 3 次，在此条件下，甘草总黄酮提取得率为 98.19%，RSD 为 0.92%。
将三种提取工艺进行比较，结果发现，在提 取得率相近的情况下，超声-微波萃取法所需的时 间大大缩短，显示超声微波协同萃取技术具有低 能耗及高效快速的优点，适合于黄酮类化合物的
超声-微波协同萃取技术
提取时间15 min，料液比1∶30，提取 温度50℃，提取1次的条件下，考察乙醇 浓度为50%，60%，70%，80%，90% 时黄酮的提取得率，确定乙醇浓度。
固定乙醇浓度80%,超声功率50 w，微波频率2450Hz。
通过以上分析并结合单因素分析可以确定关于提取得率的最佳的因素水平组合为 ：提取时间 15min，料液比 1∶15，提取温度 50℃，提取次数 3 次，在此条件下进行 重复实验，得到平均提取得率为 98.80%，RSD 为 0.31%。
薄层色谱 气相色谱 高效液相色谱
实验思路1： 提取——提纯——初步鉴定——分
离——结构测定 实验思路2：
提取——分离纯化——检测
甘草中黄酮的提取方法
黄酮的提取得率受到很多因素的影响 ，根据文献报道及初步实验，本文选择 提取的料液比，提取时间，提取温度， 乙醇浓度及提取次数五个因素进行分析
甘草中总黄酮的含量测定
甘草中总黄酮的含量测定[摘要] 目的:测定甘草中总黄酮的含量。
方法:分光光度法测定总黄酮含量。
结果:总黄酮含量4.2%～4.4%,RSD2.6%。
结论:乌拉尔甘草中总黄酮含量较高,具有重要的开发利用价值。
[关键词] 甘草;总黄酮;含量测定 甘草中黄酮成分的含量测定方法已有报道[1～3],但均有不满意之处。
据报道甘草中黄酮成分以查尔酮类(如异甘草素、异甘草苷)和二氢黄酮类(如甘草素、甘草苷)化合物为主,利用二氢黄酮在10%KOH溶液的碱性条件下转化为查尔酮的特性。
而且通常具有4′2羟基查尔酮在碱性条件下,最大吸收转移至400nm以上的特点,建立1种较灵敏、方便、准确检测甘草中总黄酮含量的比色法。
1 仪器、药品与试剂1.1 仪器 P YE UN ICAM PU800UV/V IS spec2 trophotometer。
甘草生药样品由本所丁万隆副研究员提供和鉴定,全部为乌拉尔甘草Glycy rrhiz a uralensis Fisch.。
1.2 样品 药材1宁夏盐池县野生甘草(1999年11月);药材2宁夏盐池县3年生人工栽培甘草(1999年11月);药材3内蒙古依克昭盟野生甘草(1999年10月);药材4内蒙古依克昭盟3年生人工栽培干草(1999年10月);药材5内蒙古依克昭盟4年生人工栽培甘草(1999年10月);甘草浸膏样品[收稿日期] 2000212215由本所杨峻山教授提供。
1.3 试剂 柚皮苷标准品 (中国药品生物制品检定所);甘草苷标准品本所余竞光教授提供;氢氧化钾(AR)、甲醇(AR)。
2 实验方法2.1 对照品溶液的制备 精密称定柚皮苷标准品适量,用甲醇溶解,定容于2ml容量瓶中,制得浓度约为1.0g·L-1的对照品溶液。
2.2 供试液的制备 取3g宁夏盐池县野生甘草粉末,精密称定,加甲醇50ml,称重,超声提取两次,每次20min,称重,补足损失重量,过滤,收集续滤液,即得。
总黄酮含量测定方法
总黄酮含量测定方法总黄酮是指一类在植物中广泛存在的天然化合物，具有多种生物活性，包括抗氧化、抗菌、抗炎等作用。
因此，总黄酮含量的测定方法对于评估植物中潜在的药用价值具有重要意义。
以下是一种常用的总黄酮含量测定方法。
一、试剂与设备准备：1. 酸性乙醇溶液：加入浓盐酸（HCl）和乙醇（C2H5OH）（体积比为1:95）。
2. 铝试管。
3. DNA分光光度计或分光光度计。
4. 普鲁士蓝试液。
二、样品处理：1. 将待测样品（如草药材）洗净并晾干。
2. 将样品研磨成细粉末，通过筛网过筛以去除杂质。
3. 取一定质量的样品，加入酸性乙醇溶液中，浸泡4-6小时，以增加黄酮化合物的浸提效果。
4. 使用离心机离心加速提取，收取上清液并保存备用。
三、测定操作：1. 取适量的上清液，放入铝试管中。
2. 加入1 mL的酸性乙醇溶液，并摇匀，待样品溶解。
3. 将铝试管放入水浴中加热，加热温度为80C，保持10分钟。
4. 待样品冷却后，加入3 mL的普鲁士蓝试液，摇匀。
5. 使用DNA分光光度计或普通分光光度计，设置波长为595 nm，测定吸光度值。
四、数据处理与计算：1. 使用酸性乙醇溶液作为空白试剂进行校正。
2. 通过空白试剂的吸光度值，减去样品吸光度值，获得净吸光度值。
3. 根据普鲁士蓝的吸光度与黄酮的浓度之间的线性关系，计算样品中黄酮的含量。
以上就是一种常用的总黄酮含量测定方法，通过酸性乙醇提取样品中的黄酮化合物，并使用普鲁士蓝试液测定吸光度值，可以获得样品中总黄酮的含量。
为了提高测定结果的准确性，可以多次重复实验，并计算平均值。
此外，还可以使用其他方法进行总黄酮的测定，如高效液相色谱（HPLC）法和分光光度法等，根据实际需求选择合适的方法进行测定。
甘草中总黄酮的提取及含量测定
甘草中总黄酮的提取及含量测定前言甘草是我国传统常用中草药之一，也是我国重要的植物资源⋯。
甘草黄酮类成分是甘草中最重要的活性成分之一，具有抗氧化、抗肿瘤、增强一t5血管功能、增强免疫力等作用。
因此，开展甘草的深加工，使甘草资源得以充分利用，增加资源的附加值，前景十分可观。
为此，笔者以甘草为对象，研究了甘草黄酮的乙醇回流提取工艺，单因素试验确定各因素对提取工艺的影响，正交试验确定甘草黄酮提取的最佳工艺条件。
1材料与方法1.1材料甘草，市售；试剂：亚硝酸钠、碳酸钠、石油醚、蒸馏水、氢氧化钠、盐酸、无水乙醇、芦丁；仪器：烧杯、容量瓶、移液管、玻璃棒、量筒、回流装置、滤纸、HH-4数显恒温水浴锅、分析天平、AB104．N电子天平、布氏漏斗、SHZ—C型循环水多用真空泵、分光光度计。
1.2方法1.2.1标准曲线的绘制称取芦丁对照品10 mg，用95%的乙醇溶解，摇匀，定容至10 ml，使之成为浓度为1 mg/ml的芦丁标准品溶液，作为贮备液备用。
量取上述溶液0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6 ml，分别加水至3 ml，加5%亚硝酸钠溶液0.5 ml，放置6 min，加10%的硝酸铝溶液0.5 m1，摇匀、放置6 min后加5%的氢氧化钠溶液2.5 m1，混匀、放置15 min后蒸馏水定容至10 ml。
用紫外分光光度计在500 nm处测吸光度，以对照品浓度为横坐标，吸光度为纵坐标做标准曲线。
1.2.2 材料处理取甘草根茎粉(粉碎过40-60目筛)3 g置于烧杯中,按甘草粉末:乙醇(1:30)加入90ml浓度为70%的乙醇混合均匀.1.2.3试验设计（按每组自己做的时候用的方法的具体过程写）第五组：1.配置芦丁标液：2.配置标准曲线所需不同浓度溶液3.测吸光度，以对照品浓度为横坐标，吸光度为纵坐标做标准曲线。
4.处理样品5.测出样品吸光度，按照标准曲线，得出样品总黄酮含量1.2.4甘草黄酮含量测定收集滤液并测量滤液体积，取样按绘制标准曲线的方法测定其吸光度值，根据公式计算每克甘草中黄酮的含量。
甘草中总黄酮的提取及含量测定
甘草中总黄酮的提取及含量测定集团档案编码：[YTTR-YTPT28-YTNTL98-UYTYNN08]甘草中总黄酮的提取及含量测定前言甘草是我国传统常用中草药之一，也是我国重要的植物资源? 。
甘草黄酮类成分是甘草中最重要的活性成分之一，具有抗氧化、抗肿瘤、增强一t5血管功能、增强免疫力等作用。
因此，开展甘草的深加工，使甘草资源得以充分利用，增加资源的附加值，前景十分可观。
为此，笔者以甘草为对象，研究了甘草黄酮的乙醇回流提取工艺，单因素试验确定各因素对提取工艺的影响，正交试验确定甘草黄酮提取的最佳工艺条件。
1材料与方法材料甘草，市售；试剂：亚硝酸钠、碳酸钠、石油醚、蒸馏水、氢氧化钠、盐酸、无水乙醇、芦丁；仪器：烧杯、容量瓶、移液管、玻璃棒、量筒、回流装置、滤纸、HH-4数显恒温水浴锅、分析天平、AB104．N电子天平、布氏漏斗、SHZ—C型循环水多用真空泵、分光光度计。
方法1.2.1标准曲线的绘制称取芦丁对照品10 mg，用95%的乙醇溶解，摇匀，定容至10 ml，使之成为浓度为1 mg/ml的芦丁标准品溶液，作为贮备液备用。
量取上述溶液、、、、、 ml，分别加水至3 ml，加5%亚硝酸钠溶液ml，放置6 min，加10%的硝酸铝溶液0.5 m1，摇匀、放置6 min后加5%的氢氧化钠溶液2.5 m1，混匀、放置15 min后蒸馏水定容至10 ml。
用紫外分光光度计在500 nm处测吸光度，以对照品浓度为横坐标，吸光度为纵坐标做标准曲线。
1.2.2 材料处理取甘草根茎粉(粉碎过40-60目筛)3 g置于烧杯中,按甘草粉末:乙醇(1:30)加入90ml浓度为70%的乙醇混合均匀.1.2.3试验设计（按每组自己做的时候用的方法的具体过程写）第五组：1.配置芦丁标液：2.配置标准曲线所需不同浓度溶液3.测吸光度，以对照品浓度为横坐标，吸光度为纵坐标做标准曲线。
4.处理样品5.测出样品吸光度，按照标准曲线，得出样品总黄酮含量1.2.4甘草黄酮含量测定收集滤液并测量滤液体积，取样按绘制标准曲线的方法测定其吸光度值，根据公式计算每克甘草中黄酮的含量。
甘草中总黄酮提取工艺的优化分析
甘草中总黄酮提取工艺的优化分析【摘要】本文旨在优化甘草中总黄酮的提取工艺，通过分析影响总黄酮提取率的因素并探讨工艺优化方法，以实验设计与结果分析为基础，比较不同提取工艺的效果。
研究表明，提高提取效率需注意原料粉碎、溶剂浓度、提取时间等因素。
实验结果显示，采用适当的优化方法可显著提高总黄酮提取率。
结论指出未来应重点研究提取工艺的优化方向，以提高总黄酮的提取效率和品质，为甘草资源的利用提供参考。
本研究为甘草中总黄酮的提取工艺提供了一定的理论基础和实践指导，具有一定的研究意义和实际应用价值。
【关键词】甘草、总黄酮、提取工艺、优化分析、影响因素、工艺探讨、实验设计、结果分析、效果比较、优化方向、研究展望、结论总结1. 引言1.1 研究背景甘草是一种常见的中药材，其含有丰富的总黄酮成分，具有多种药理活性。
总黄酮是甘草中的一种主要活性成分，具有抗氧化、抗炎、抗菌等功效，被广泛应用于药物、保健品、化妆品等领域。
甘草中总黄酮的提取工艺一直是研究的热点之一。
在过去的研究中，人们已经提出了多种提取甘草中总黄酮的方法，包括水提取、醇提取、超临界流体提取等。
这些提取方法存在一些问题，如提取效率低、成本高、环境影响等。
对甘草中总黄酮的提取工艺进行优化和探讨，具有重要的理论和应用价值。
本研究旨在通过对甘草中总黄酮的提取工艺进行优化分析，探讨影响总黄酮提取率的因素，提出工艺优化方法，设计实验并进行结果分析，比较不同提取工艺的效果，为甘草中总黄酮的高效提取提供理论基础和方法支持。
1.2 研究目的本研究的目的是通过优化甘草中总黄酮的提取工艺，提高总黄酮的提取率，为甘草的深加工利用提供技术支持。
通过分析影响总黄酮提取率的因素，探讨工艺优化方法，为甘草中总黄酮的提取工艺提供科学依据。
通过实验设计与结果分析，比较不同提取工艺的效果，找出最优的提取工艺，并探讨提取工艺的优化方向。
未来研究将继续深入挖掘甘草中总黄酮的提取工艺，探讨新的提取技术和方法，推动甘草资源的充分利用。
超临界萃取甘草中黄酮的流程
超临界萃取甘草中黄酮的流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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据物质对紫外区域的光或可见光的选择吸收性，进行物质定性、定量分析的一种 方法。显色反应的条件有显色剂用量、介质的酸度、显色时溶液的浓度、显色时 间等；测量吸光度的条件包括应选择的入射光波长、吸光度范围和参比溶液等。 用分光光度法测定甘草提取液和提取物中总黄酮含量是目前国内普遍采用方法。 该方法采用硝酸铝-亚硝酸钠比色法，以芦丁为标准品，在510nm波长处测定。 其基本原理是：黄酮母核上3和(或)5位上的H或OH取代时能与铝离子形成络合 物；此外B环上有任何相邻的双羟基时，也能产生络合作用(其形成的络合物结构 如图2所示)，从而在吸收光谱上发生明显变化，可作为定量测定的依据：不同结 构的黄酮类化合物，显色情况不同，因此要选用标准品，可用本法测定总黄酮含
蒙
古Байду номын сангаас
科
技 大
学
6 提取液 甘草中总黄酮的含量
5.0 —— 总黄酮的重量 100% 银杏叶的干重
1.0 ——
思 考 题
1．所示回流提取法的原理是什么? 2．分光光度法测定的原理是什么? 3．造成实验测得总黄酮含量偏低的原因有哪些?
内
蒙
古
科
技 大
学
内
分光光度法测定原理
蒙
图 1 甘草中总黄酮的提取工艺流程图
古
分光光度法既能进行定性又能进行定量测定， 它是根
科
技 大
学
易行、比较常用的溶剂提取法来进行有效成分的提取。溶剂提取法按其实现方式
量。本实验选用为芦丁标准品（纯度大于95%） 。
图 2 铝离子与黄酮形成的络合物结构 Fig.2 Structures of Al3+-flavone complexes
回流提取装置图
如图 3 所示。
蒙
内
古
图 3 索氏提取装置图 Fig.3 Apparatus of Soxhlet extraction
1-铁架台 2-电热套 3-圆底烧瓶 4-冷凝管 5-萃取物料 6-索氏萃取管
三、实验步骤 1.甘草总黄酮的提取 准确称取烘干过 60 目筛子的甘草粉末 3.0g，用精密
和操作工艺的不同，可分为以下几种：a. 浸渍法；b. 渗漉法；c. 煎煮法；d. 回 流提取法等。由于回流提取法是利用易挥发的有机溶剂进行加热提取，并采用冷 却装置使溶剂连续回流，使植物有效成分能充分提出，且此法简单易行，溶剂用 量少，提取较完全，故本实验中采用了索氏回流提取法。 采取索氏回流提取法从甘草中提取总黄酮的工艺流程如图 1 所示。
滤纸包好， 置于 500mL 索氏提取器中， 加入 400mL 无水乙醇提取至流出液无色， 大约 4h 后取出提取液，自然冷却备用。 2．甘草中总黄酮的测定 (1)标准溶液的配制 将芦丁标准品于 120℃下干燥至恒重，精确称取芦丁标准品 10.00mg 置于
科
技 大
学
50mL 容量瓶中， 加入适量 60%乙醇溶液， 在 50℃的水浴中加热溶解， 自然冷却， 用 60%乙醇溶液定容至刻度，即得浓度为 0.20mg/mL 的芦丁标准溶液。 (2)标准曲线的制作 取 10 mL 具塞比色管 6 支，分别准确吸取芦丁标准溶液 0.0mL、1.0 mL、2.0 mL、3.0 mL、4.0 mL、5.0 mL 于 10 mL 具塞比色管中。然后各加入 30%乙醇补 充至 5.0 mL，加入 5%的 NaNO2 溶液 0.6mL，摇匀，放置 6min 后加入 10%的 Al （NO3） 摇匀， 再放置 6min， 加入 1mol/LNaOH 溶液 4mL， 用 30% 3 溶液 0.6mL， 乙醇定容，摇匀，放置 15min。在紫外-可见光分光光度计上，先取两个 1cm 比 色皿加空白溶液，在 510nm 波长处调零。取出一个比色皿，加入不同浓度的溶 液，再在 510nm 波长处测定吸光度 A。以黄酮含量为横坐标，吸光度 A 为纵坐 标，绘制标准曲线。 (3)甘草提取液中总黄酮含量的测定
实验六
一、实验目的和要求
甘草中总黄酮的提取和检测
1．熟悉甘草中总黄酮的提取方法和工艺； 2．掌握分光光度法测定物质含量的方法。 二、实验原理 甘草黄酮是从特定品种甘草中提取的天然美白剂，它能抑制酪氨酸酶的活 性，又能抑制多巴色素互变和 DHICA 氧化酶的活性，是一种快速、高效、绿色 的美白祛斑化妆品添加剂。 甘草黄酮易溶于有机溶剂， 根据活性成分的特性，本实验主要采用了简单
或悬浮物不均匀而造成测量结果不准确。 五、实验结果与讨论（见表 1） 表1 样液编号 1 2 3 4 5 标准曲线的绘制与甘草中总黄酮含量的测定 标准溶液的量/ mL 0 1.0 2.0 3.0 4.0 总黄酮含量 0 0.2 0.4 0.6 0.8 吸光度 A
内
2．分析过程中，标准液及未知液的配制要充分摇匀和放置，防止因反应不充分
准确移取 1.0mL 提取液，分别置于两支 10mL 具塞比色管中，一支加 30% 乙醇溶液为空白， 另一支按标准曲线方法操作， 并用 30%乙醇定容， 测定吸光度。 由提取液的吸光度值在标准曲线上查出其中总黄酮的含量， 最后计算出甘草中总 黄酮的含量。 四、注意事项
1．由于甘草总黄酮的含量较低，所以在提取中过滤离心定容的移液过程都需要 用乙醇洗三次，否则会造成含量偏低。