细胞周期的检测方法

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检测细胞周期的方法

1. 流式细胞术：

PI能够插入双链DNA中。它被活细胞排斥但能穿透正在死亡或已经死亡的细胞的细胞膜。

(1) 收集细胞（1～5）×10 6个，500～1000r/min离心5min，弃去培养液。

(2) 3ml PBS洗一次。

(3) 离心去PBS，加入冰预冷的70％的乙醇固定，4℃，1h。

(4) 离心弃去固定液，3ml PBS重悬5min。

(5) 400目的筛网过滤1次，500～1000r/min离心5min，弃去PBS。

(6) 用1ml PI染液，4℃避光30min。

(7) 流式细胞仪检测：PI用氩离子激发荧光，激发光波波长为488nm，发射光波波长大于630nm，产生红色荧光，可分析前散射光对侧散射光的散点图及PI荧光的直方图。

2. 高内涵分析

PI ,即碘化丙锭,可以与细胞内DNA 结合后能被激发产生荧光,通过高内涵检测到的与DNA 结合的PI 的荧光强度可以反映了细胞内DNA 含量的多少。由于细胞周期各时相的DNA 含量不同,通常正常细胞的G1/ G0 期具有二倍体细胞的DNA 含量(2N) ,G2/ M 期具有四倍体细胞的DNA 含量(4N) ,而S 期的DNA含量介于二倍体和四倍体之间。因此,通过高内涵拍照，利用图像分析软件可以将细胞周期各时相区分为G1/ G0 期,S 期和G2/ M 期,并可通过软件计算各时相的百分率。

细胞周期的概念

通常，在发现细胞增殖有差异后，可以通过检测细胞周期来找出产生差异的原因，比如S、G2和/或M期的细胞减少，而大多数细胞停滞在G1期，那就说明可能是G1/S检验点出现了异常，这对研究深入了解生物的生长发育和控制肿瘤生长等有重要意义。细胞周期的检测方法是简便直观的碘化丙啶（Propidium Iodide,PI）染色-流式分析法。

碘化丙啶(Propidium Iodide,PI)与双链DNA结合后可以产生荧光，并且荧光强度和双链DNA的含量成正比，因此可以用流式细胞仪对细胞进行DNA含量测定，由于细胞周期各时相的DNA含量不同，根据DNA含量的分布情况，可以将细胞周期各时相区分为G1/G0期、S期和G2/M期，获得的流式直方图对应的各细胞周期可通过特殊软件计算各时相的细胞百分率（图2），进而分析细胞周期是否正常。

流式细胞检测服务之细胞周期

流式细胞仪分析DNA（细胞周期）

通过核酸染料标记DNA，并由流式细胞仪进行分析，可以得到细胞各个时期的分布状态，计算出G0/G1%，S%及G2/M/%，借此可以了解细胞的增殖能力，在肿瘤病理学研究中，通常以S期细胞比率作为判断肿瘤增殖状态的指标。

正常细胞具有较恒定的DNA含量，而细胞癌变过程中结构和/或染色体的异常是很常见的。这种变化在流式分析中以DNA倍体指数的形式表现出来，这一指数对于肿瘤的早期诊断，交界瘤、间叶组织肿瘤的良恶性判断提供了重要的辅助指标。

细胞周期操作步骤：

1. 收获细胞于流式管中，加入3-4ml的PBS清洗细胞。

2. 1000rpm离心10分钟，弃上清。

3. 逐滴加入5ml或更多预冷的70-80%的乙醇，涡旋混匀细胞，4°C避光过夜（>18小时）。

4. 1000-1500rpm 离心细胞10分钟，弃上清。之后清洗细胞2次以去除所有的乙醇。

注：第一次用1x PBS，第二次用染色液（货号：554656）。

5. 细胞染色：每管样本需10^6细胞。具体操作如下：

1) 对于PI/RNase 染色，将细胞重悬于0.5 mL PI/RNase 染色液（货号：550825）。

2) 对于7-AAD染色，将细胞重悬于0.1 mL 染色液（货号：554656），同时加入20 μL7-AAD 染色液（货号：559925）

6. 室温避光孵育15分钟。

7. 分析前4°C避光保存样本。1小时之内上流式细胞仪检测。

正常细胞周期分析

细胞周期检测所需产品：

使用说明：

DNA染料，尤其是PI，具有较强的粘性。样本上机检测之后，应遵照仪器说明书仔细清洗流式细胞仪，以免对下一位操作者结果造成影响。固定好的细胞可保存长达12个月(储存于70-80% 的乙醇，置于-20°C保存).

PI染色检测细胞周期实验步骤

细胞周期是细胞分裂和增殖的过程，通常可以通过PI（propidium iodide）染色来检测。PI是一种DNA结合染料，能够与DNA结合形成荧光化合物，通过检测荧光信号的强度可以推断细胞处于细胞周期的哪个阶段。以下是PI染色检测细胞周期的实验步骤：

材料和试剂：

1.培养皿：可容纳细胞的培养皿。

2.培养基：细胞所需的培养基。

3. Propidium iodide（PI）：DNA结合染料。

4. RNase A：消化RNA的酶，可用于将RNA从细胞样品中降解。

5.细胞刮板：用于收集细胞。

6.离心管：用于离心细胞样品。

7.显微镜幻灯片：用于观察染色后的细胞。

步骤：

1.准备培养皿：在培养皿中加入适量的培养基，使其能够完全覆盖细胞。

2.培养细胞：将需要检测细胞周期的细胞加入培养皿中，按照细胞的培养要求进行培养，培养至细胞密度适合进行实验。

3.收集细胞：用细胞刮板或其他方法，将细胞从培养皿中收集到离心管中。

4.细胞固定：将收集到的细胞进行固定，可以使用70%乙醇或其他细

胞固定剂进行处理，固定时间通常为30分钟。

5.细胞孵育：将固定的细胞在4℃下孵育过夜，以保证细胞完全固定。

6. 细胞溶解：在离心管中加入RNase A（最终浓度一般为1mg/ml），以降解细胞中的RNA，避免对细胞周期分析结果的干扰。

7. 细胞染色：在离心管中加入适量的PI溶液（一般最终浓度为

50μg/ml），将PI与DNA结合，产生荧光信号。

8.染色孵育：将含有PI的细胞溶液在4℃下孵育30分钟至1小时，

利用流式细胞仪分析细胞存活率、细胞周期、ROS

1测定细胞存活率

1.1取对数生长期的细胞,均以4×105/mL密度接种于6孔细胞培养板上；

1.2培养过夜后，用相应药物处理细胞；

1.3 消化收集细胞,包括培养液中悬浮的死细胞；

1.4 300g离心5 min，去上清；

1.5 加1mL PBS缓冲液重悬细胞，再次离心去上清

1.6 最后重悬细胞于含5 μg/mL碘化丙啶(propidium iodide, PI)的PBS缓冲液中(PI buffer：3.4 mM 柠檬酸钠(Trisodium Citrate), 9.65 mM NaCl, PI 20 mg/mL, 0.03% Nonidet P-40 , 配于H2O中)；

1.7 避光冰上孵育10 min,上流式细胞仪测定细胞存活率。

2测定细胞周期

2.1取对数生长期的细胞,均以4×105/mL密度接种于6孔细胞培养板上；

2.2培养过夜后，用相应药物处理细胞；

2.3 消化收集细胞，包括培养液中悬浮的死细胞；

2.2 收集的细胞经PBS缓冲液洗一次后，去上清，将细胞逐滴加入70%预冷的乙醇中，4℃避光固定30 min；

2.3 加BSA，离心去上清，重悬细胞于PBS缓冲液，再次离心，去上清；

2.4 重悬细胞于含100 unit/mL RNA酶的PBS缓冲液中，避光37℃处理30 min；2.5 加2 mg/mL PI至终浓度50 μg/mL，避光孵育30 min，过滤后上流式细胞仪分析。

3测定胞内ROS的积聚

3.1取对数生长期的细胞,均以4×105/mL密度接种于6孔细胞培养板上；

细胞周期流式检测方式

细胞周期的流式检测方式

细胞周期（cell cycle）是指细胞从一次割裂完成开始到下一次割裂终止所经历的全进程，分为G0/G1期、S期、G2/M期。在科研实践中，很多实验具有对细胞群体的周期散布进行检测的需求。细胞群体周期测定的方式有很多种，最经常使用的是PI（碘化丙啶）渗入DNA进行染色，然后通过流式细胞仪检测PI从而测定细胞群体的周期散布。

因此，下面笔者要紧通过BD（Becton＆Dickinson）公司生产的BD FACSCalibur流式细胞仪测定PI标记的细胞群体为例，对细胞周期的流式检测方式进行论述。

一、PI染色步骤概略

一、单细胞悬液离心，1500rpm , 5min，弃上清。

二、PBS 1ml离心，弃上清。

3、70%酒精2ml，4℃，30min，离心，弃上清液。

4、PBS 1ml离心，弃上清。

五、RNase A的PBS溶液(20ug/ml)，500ul，37℃，30min，离心弃上清。

六、PBS 1ml离心，弃上清。

7、PI的PBS溶液(50ug/ml)，500ul，室温避光孵育30min。

八、吹打混匀，300目筛网过滤至流式管中，4℃保留，待测。

二、Calibur仪器设置及数据搜集

1、依次打开Calibur机械电源、电脑开关和CellQuest Pro软件，按快捷键Command+B连机，按快捷键Command+一、二、3、4调出Detectors/Amps面板、Threshold面板、Compensation 面板和Status面板，软件的操作界面如图1所示。

图1. Cell Quest Pro软件操作界面

细胞周期检测介绍

全心全意就为医生服务，一心一意只为造福医生

细胞周期检测的原理：

PI法是经典的周期检测方法。PI为插入性核酸荧光染料，能选择性的嵌入核酸DNA和RNA双链螺旋的碱基之间与之结合，其结合的量与DNA的含量成正比例关系，用流式细胞仪进行分析，就可以得到细胞周期各个阶段的DNA分布状态，从而计算出各个期的百分含量。PI染色后，假设G0/G1期细胞的荧光强度为1，那么含有双份基因组DNA的G2/M期细胞的荧光强度的理论值为2，正在进行DNA复制的S期细胞的荧光强度为1-2之间。

实验步骤：

1. 细胞培养:六孔板种下细胞，每孔1.5*10^6个,细胞处于生长对数期,50-80%贴壁后换含药培养液（三复孔）,处理相应时间后，收细胞检测(单次流式细胞仪检测，1份样品细胞数量约106)

2. 细胞处理：胰酶消化含血清培养基中和，2000 rpm 5 min，用预冷PBS重悬洗涤，小心地吸去上清,残留约50ul,不要倾倒;

3. 细胞固定：1ml PBS充分重悬，成单细胞，轻轻边vortex，边缓慢滴加3ml预冷的无水乙醇，至终浓度75%，4度静置过夜（18-24h），-20度长期保存一个月（预约流式细胞仪）

4. 将过夜固定好的细胞用预冷PBS 洗两次，2000rpm 5min去除PBS 后加入200 ul PBS(约400ul)，为减少细胞损失可用1.5ml离心。移至1.5ml EP管中, 轻轻弹击离心管底，以适当分散细胞，避免细胞成团。加入20 μLRNase（储存浓度25 mg/mL，PBS 稀释成1mg/ml，工作浓度50ug/ml），重悬细胞，37 ℃水浴消化30 min；加入PI 20ul至终浓度50ug/ml（储存液浓度25mg/ml, PBS稀释1mg/ml加入10ul）锡箔纸包住，避光4度染色30min，24h内上机检测。充分混匀细胞，用200 目滤网过滤后，便可利用流式细胞仪进行细胞周期。

PI染色法测细胞周期

结果解读
正常细胞周期
异常细胞周期
影响因素
正常的细胞周期中，各期细胞所占比例应符合一定的规律，如G1期细胞比例较高，S期和 G2/M期比例较低。
如果出现异常的细胞周期分布，可能提示细胞增殖异常或癌变等情况。例如，S期细胞比例异常增高可能提示DNA复制异常或肿瘤生长。
细胞周期的测定结果可能受到多种因素的影响，如细胞培养条件、染色方法、抗体质量等。因此，在结果解读时应综合考虑各种因素，并结合其他生物学指标进行综合判断。
固定细胞
用70%的酒精将细胞固定，以保持细胞的形态和结构。
PI染色
制备PI染液
将PI染料溶解在缓冲液中，制备成适当浓度的染液。
染色细胞
将固定好的细胞与PI染液混合，使染料充分进入细胞。
洗涤细胞
用缓冲液洗涤细胞，去除多余的染料。
荧光显微镜观察
制备细胞涂片
将染色后的细胞涂布在载玻片上，形成单层细胞。
干燥细胞
让涂片自然干燥，以便更好地观察染色效果。
荧光显微镜观察
使用荧光显微镜观察涂片，记录不同时期细胞的染色情况。
04
结果分析
细胞周期各期的划分
G1期
细胞开始生长，DNA合成前期，细胞体积逐渐增大。
S期
DNA复制期，细胞核内DNA含量加倍。
G2期

细胞实验技术之细胞周期检测

导读细胞周期是指细胞分裂结束到下一次细胞分裂结束所经历的时间，它代表着生命从一代向下一代传递的连续过程，与前几期我们介绍过的细胞学实验（细胞增殖、克隆形成等）一样，细胞周期也是评价细胞增殖功能的重要实验。流式细胞仪是检测细胞周期最常用的方法，然而我们会碰到细胞量不够、细胞碎片太多等原因，导致实验一次次重复，本文就一起看看如何把细胞周期的数据变的更加漂亮，准确！

一、细胞周期简介

主要分为以下2大过程：

1.分裂间期：间期又分为三期、即DNA合成前期（G1期）、DNA合成期（S期）与DNA合成后期（G2期）；

2.分裂期M期：细胞分裂期，指细胞分裂开始到结束。

细胞周期图（来自网络）

•注：G0期是指某些细胞在分裂结束后会暂时离开细胞周期，停止细胞分裂；但在一定适宜刺激下，又可进入周期；

•因为分裂间期持续的时间远远比分裂期持续时间长，在一个正常细胞周期中，分裂间期时间会占整个细胞周期的90%～95%；

•不同类型细胞的G1期时间长短不同，所以其细胞周期时间存在差异。如：人类胃上皮细胞为24小时，骨髓细胞为18小时，HeLa细胞为21小时。

二、常用的实验方法

细胞周期常用检测方法有流式检测法、BrdU(5-溴脱氧尿嘧啶核苷)

掺入法及同位素标记法等，其中流式检测法因适用于大量样品检测，可快速分析单个细胞的多种特性，是目前最为常用的测定细胞周期的一种方法，下面就详细介绍如何利用流式细胞仪进行周期分析。

1. 流式检测的实验原理

由于细胞周期各时相的DNA含量不同，因此，可通过特异性与DNA结合染料来检测细胞内的DNA含量来测定细胞周期。流式中常用碘化丙啶(Propidium，简称PI)与DNA结合，其荧光强度与DNA 含量成正比。因此，通过流式细胞仪对细胞内DNA含量进行检测，同时获得的流式直方图对应的各细胞周期可通过特殊软件计算各时相的细胞百分率。

细胞周期标准操作规程

细胞周期是细胞从分裂到完成再次分裂的一个周期，在细胞生物学研究中是一个重要的研究对象。为了能够准确地研究和观察细胞周期，科研人员需要遵循一系列的操作规程。下面是细胞周期标准操作规程的详细说明：

一、准备实验材料：

1. 细胞培养基和试剂：选择适合细胞生长和分裂的培养基，如DMEM或RPMI 1640培养基，并根据需要添加相应的补充物和试剂，如FBS、L-谷氨酰胺、激素等。

2. 细胞株：选择适合的细胞株，如HeLa、CHO或HEK293等。

3. 细胞培养器具：包括细胞培养瓶、离心管、培养皿、显微镜片等。

4. 实验仪器：包括培养箱、离心机、显微镜等仪器。

二、细胞培养与维护：

1. 细胞培养器官消毒：使用70%酒精将培养器官表面进行消毒处理，以确保无菌环境。

2. 细胞传代：将细胞转入新的培养瓶中，根据细胞倍增情况调整细胞密度，通常在细胞密度达到80%时进行传代。

3. 培养液更换：根据实验需要，定期更换培养液，以维持细胞的生长和稳定环境。

三、样品制备：

1. 细胞准备：根据实验需要，将需要观察的细胞转入适当的培养器皿中，保证细胞的充分生长和附着。

2. 细胞处理：根据实验设计，添加适当的药物或诱导剂对细胞进行处理，如添加细胞周期调控剂。

3. 细胞采集：根据需要，使用离心机将细胞离心沉淀，然后去除上清液，最后将细胞沉淀用适量的缓冲液悬浮备用。

四、细胞周期监测：

1. 细胞周期检测：根据实验需要，选择适当的方法和试剂对细胞周期进行监测，如细胞染色、流式细胞术、蛋白质检测等。

2. 数据采集：使用相应的仪器和软件进行数据采集和分析，记录细胞周期的相关参数，如G1期的长度、S期的进程等。

PI染色法检测细胞周期

实用文档

PI染色法检测细胞周期

一．实验原理及试剂配置

1.实验原理

P I , 即碘化丙锭，可以与细胞内DNA 和RNA 结合，采用RNA酶将RNA 消化后, 通过流式细胞术检测到的与DNA 结合的P I 的荧光强度直接反映了细胞内DNA含量的多少。由于细胞周期各时相的DNA 含量不同, 通常正常细胞的G 1/ G 0 期具有二倍体细胞的DNA 含量( 2N) ,而G 2/ M 期具有四倍体细胞的DNA 含量( 4N) ,而S 期的DNA含量介于二倍体和四倍体之间。因此，通过流式细胞术P I染色法对细胞内DNA 含量进行检测时，可以将细胞周期各时相区分为G 1/ G 0 期，S 期和G 2/ M 期，并可通过特殊软件计算各时相的百分率。值得注意的是，PI不能通过细胞膜完整的细胞(如活细胞和早期凋亡细胞) ,在标本制备时, 必须先用乙醇或其他破膜剂增强细胞膜的通透性, 才能使P I进入细胞内与细胞内的核酸结合。乙醇通常为终浓度为70 %的冷乙醇。

2.试剂配制

RNase A，注意分装保存，防止反复冻融。

PI 购自Sigma公司货号P-4170，通常用过滤除菌的PBS配置成500μg/ml的储液避光保存备用，细胞染色时用PBS稀释到50μg/ml。

二．实验步骤

1.细胞的收集：将处理好的细胞样品组用含EDTA的0.25%胰酶消化细胞呈单细胞悬液，

DMEM+10%FBS终止消化后，200g离心3min沉淀细胞。

2.细胞的固定：将离心收集的细胞用500μL预冷的PBS悬起，200g离心3min沉淀细胞，

细胞周期检测方法

细胞周期检测是指利用特定的实验方法和技术来研究和分析细胞的生命周期和不同阶段的变化。细胞周期是指细胞从一个时间点开始进行DNA复制，到下一个DNA复制结束之间的时间段。细胞周期检测方法可以帮助我们了解细胞的增殖、分化和死亡过程，并在生物医学研究中发挥重要作用。本文将介绍几种常用的细胞周期检测方法。

一、流式细胞术

流式细胞术是一种常见的细胞周期检测方法，通过利用细胞在流式细胞仪中流动时吸收和散射光的不同特性来分析细胞的周期。在流式细胞术中，可以使用DNA 染料（如普罗津红或荧光素）将细胞的DNA染成不同浓度的颜色，根据DNA 含量的不同来分析细胞处于不同的细胞周期阶段。此外，流式细胞术还可以利用蛋白标记和单克隆抗体来检测特定细胞周期蛋白的表达水平。流式细胞术准确、快速、灵敏，可以同时检测大量的细胞，因此被广泛应用于细胞周期的研究和生物医学领域。

二、免疫荧光染色法

免疫荧光染色法是一种利用免疫学技术和荧光探针对特定蛋白进行定位和分析的方法。在细胞周期检测中，可以利用特定蛋白的表达来反映细胞处于不同的细胞周期阶段。例如，细胞周期蛋白D（Cyclin D）在G1期表达增加，在细胞周

期的S期和G2期表达较低。通过使用与Cyclin D特异性结合的荧光探针，可以在细胞中观察和分析Cyclin D的表达情况，从而判断细胞处于细胞周期的哪个阶段。

三、细胞核酸染色法

细胞核酸染色法主要利用染色剂（如乙锭、Hoechst33342等）染色DNA分子，观察和分析细胞核的形态和DNA含量的变化来判断细胞的细胞周期阶段。在染色前后使用不同颜色的荧光染料来观察和分析细胞核的变化。通过测量细胞核中DNA含量的变化，可以确定细胞处于细胞周期的哪个阶段。此外，细胞核酸染色法还可以与流式细胞术或免疫荧光染色法相结合使用，进一步提高细胞周期的检测准确性和灵敏度。

流式检测细胞周期protocol

PI染色检测细胞周期

1、HepG2细胞培养至70%左右，细胞铺板（60mm小皿），8万/皿，饥饿48小时，加药处理96h（加药组10万/皿）

2、收集培养基，2ml胰酶消化细胞，新培养基3ml重悬，收集细胞悬液，1000rpm，5min离心

3、弃去上清，加入1ml预冷的PBS充分重悬细胞，转移到1.5ml的EP管

4、混匀，4°，600g，5min离心

5、弃去上清，用250ul预冷的PBS重悬细胞，充分重悬，加入至750ul冰浴的无水乙醇，轻轻吹打混匀；

6、用封口膜封口，—20°，4h，最好过夜，可在—20°保存1w左右；

7、染色：

㈠、除去封口膜，加入500ulPBS重悬细胞，4°，600g，5min离心；

㈡、弃去上清，加入1ml预冷的PBS洗涤一次；

㈢、同上离心，弃去上清；

㈣、每管加入200ul PBS +2ul RnaseA（100µg/ml）溶液缓慢充分混匀后，室温，避光孵育30min, 再加2.5ul PI(250µg/ml)，室温避光15min；

㈤、24h内流式检测。

试剂：RnaseA，beyotime,10mg/ml,ST576

PI, beyotime,20 mg/ml,ST512

细胞周期的检测和控制

细胞是生命的基本单位，其周期性地进行增生和分裂。细胞周期是一个复杂、精细的过程，需要一系列细胞内调控机制的协作来维持。细胞周期的检测和控制对于维持正常的细胞生长和发育，以及预防癌症等疾病具有非常重要的意义。

细胞周期分为四个阶段，G1、S、G2和M期。每个阶段都有不同的生化和遗传学事件发生。细胞周期的控制主要是通过蛋白激酶调节，包括蛋白激酶依赖的G1/S过渡、S期和G2/M期过渡和有丝分裂前期(Prophase)期至有丝分裂的细胞周期进程中。

细胞周期的调控是一个复杂的过程，包括许多因素。其中与谷氨酰胺(Glutamine)的供应和代谢密切相关。另外，细胞周期的调节主要涉及到如下几个因素：

1. 细胞周期调控蛋白

细胞周期调控蛋白主要包括两类：Cyclin和CDK(Cyclin Dependent Kinase)。Cyclin是CDK的配体蛋白，通过结合CDK来调节细胞周期。随着细胞周期进行，Cyclin和CDK的表达量都会发生变化，进而改变细胞周期的进程。

2. 细胞周期检查点

细胞周期检查点是一个分子机制，用于检测和纠正细胞生命周期中遇到的DNA损伤和其它异常情况，从而避免细胞周期的异常分裂和突变。主要包括G1

检查点、S检查点和G2检查点。检查点可以弥补一些错误，确保细胞能够正常进入下一阶段的阶段。

3. 细胞外环境的影响

细胞外环境可以通过一系列信号传递机制，影响细胞周期的进程。例如，细胞功能活性因子、细胞生存信号、膜受体等物质和机制，都能够影响细胞周期。

4. 细胞凋亡

当细胞周期受到极端的损伤无法自我修复时，细胞就会进入细胞凋亡过程。这是一种自我调节的机制，可以帮助细胞早日停止生长和分裂，从而防止一些细胞病变的发生。

5 6 PI法细胞周期检测

细胞周期检测（PI 法）
一、实验方法原理细胞周期（cell cycle)：是指细胞从前一次分裂结束起到下一
次分裂结束为止的活动过程，通常由 G0/G1 期、S 期、G2 期和 M 期组成。G1 期：细胞开始 RNA 和蛋白质的合成，但 DNA 含量仍保持二倍体。S 期：DNA 开始合成，这时细胞核内 DNA 的含量介于 G1 期和 G2 期之间。当 DNA 复制结束成为 4 倍体时，细胞进入 G2 期。G2 期的细胞继续合成 RNA 及蛋白质，直到进入 M 期。因此，单纯从 DNA 含量无法区分 G2 期和 M 期。一旦有丝分裂发生，细胞分裂成两个细胞，这两个细胞或者进入下一个细胞周期，或者进入静止期（G0 期），而 G0 期从 DNA 含量上同样无法与 G1 期区分。因此，整个复制周期可以描述为 G0/G1、S、G2/M 期。通过核酸染料 PI 标记 DNA,并由流式细胞仪进行分析，可以得到细胞各个时期的分布状态，计算出 G0/G1%、S%、G2/M%，了解增殖能力，在肿瘤病理学研究中，通常以 S 期细胞比率作为判断肿瘤增殖状态的指标。
货号
PBS
Байду номын сангаас
自配
2. 试剂配制 10XPBS 液体配方（0.1MPBS pH 7.4）以 1L 量为例： NaCl 80g Na2HPO4·12H2O 32.3g NaH2PO4·2H2O 4.5g （十二水合磷酸氢二钠和二水合磷酸二氢钠）加双蒸水 900mL 左右，用 HCl/NaOH 调 pH 至 7.4，最后定容为 1000mL。使用时用去离子水稀释成 1XPBS 3.仪器设备

检测细胞周期的方法

细胞周期是细胞的一个重要生命周期阶段，包括细胞的增殖和分裂过程。细胞周期的检测方法主要包括直接观察法、细胞计数法、细胞染色法、蛋白质检测法等。以下将详细介绍这些方法及其优缺点。

1. 直接观察法：

直接观察法是通过显微镜观察细胞形态和结构的变化来判断细胞周期的进程。通过观察细胞的形态变化，如细胞大小、形状、染色体构象等，可以初步判断细胞处于哪个周期。这种方法简单方便，但只能对有核细胞进行观察，且对于快速增殖的细胞不够敏感。

2. 细胞计数法：

细胞计数法是通过对大量细胞进行统计，根据细胞数量的变化来推测细胞周期的进程。可以通过细胞计数仪或显微镜进行计数，计算不同阶段的细胞比例。这种方法适用于标记有核细胞或细胞核。但此方法无法判断具体是哪个细胞周期阶段和细胞死亡。

3. 细胞染色法：

细胞染色法是通过特定染色剂染色，观察染色结果来判断细胞周期的进程。常用的染色方法包括苏木精-伊红染色法、Geimsa染色法、草铥酸盐-吉姆萨染色法等。通过这些染色方法，可以看到细胞和细胞核的结构变化，如染色形态、核分裂消失和再出现、染色体过程等。虽然这种方法对于辨别不同细胞周期阶段有很

高的准确性，但是染色过程会对细胞造成损伤，有时甚至对细胞结构和细胞器的形态有一定干扰。

4. 蛋白质检测法：

蛋白质检测法是通过检测细胞周期与特定蛋白质表达之间的关系来判断细胞周

期的进程。细胞周期的不同阶段通常伴随着特定蛋白质的表达和活化，通过检测这些蛋白质的表达水平可以推测细胞的周期分布情况。常用的方法包括免疫荧光染色、免疫组织化学染色和Western blot等。这些方法可以定量分析特定蛋白质的表达水平，提供一种精确迅速的数据分析手段。但是该方法需要有特异性高的抗体和相关试剂的支持，且需要一定的实验技术和设备。