小刺猴头菌液体深层发酵浸膏多糖HFP及HFA的抗肿瘤活性_苏玲

中国生化药物杂志 Chinese Journal of Biochemical Pharmaceutics 2012 年第 33 卷第 1 期

1材料 小刺猴头菌液体深层发酵浸膏由吉林大学白求
恩医大制药厂提供。 S180 腹水小鼠购自长春肿瘤研究所； KM 小鼠
购自 吉 林 大 学 实 验 动 物 中 心 （ 动 物 合 格 证 号： 101023） ； 人 肺 腺 癌 细 胞 SPC-A-1、人 胃 癌 细 胞 SGC7901 由吉林农业大学生物物理实验室馈赠； 人 肝癌细胞 SMMC7721 由吉林农业大学生物制药实 验室馈赠。
关键词： 小刺猴头菌； 液体深层发酵浸膏； 多糖； 抗肿瘤活性 中图分类号： Q539； R965 文献标识码： A 文章编号： 1005-1678（ 2012） 01-0020-03
Antitumor activity of polysaccharides from the liquid submerged fermentation extract of H． caput-medusae（ Bull． ∶ Fr． ） Pers
20
中国生化药物杂志 Chinese Journal of Biochemical Pharmaceutics 2012 年第 33 卷第 1 期
小刺猴头菌液体深层发酵浸膏多糖 HFP 及 HFA 的抗肿瘤活性
苏 玲，李雨婷，宋 慧，吕金超
（ 吉林农业大学 生命科学学院，吉林 长春 130118）
摘 要： 目的 对从小刺猴头菌液体深层发酵浸膏中提取的多糖 HFP 及 HFA 的抗肿瘤活性进行初步研究。方 法 MTT 法测定 HFP 和 HFA 对体外培养的人肝癌细胞 SMMC7721、人肺腺癌细胞 SPC-A-1 和人胃癌细胞 SGC7901 的生长情况。预防性及治疗性给 S180 荷瘤小鼠灌服 HFP 和 HFA，测定小鼠瘤重、体重、脾重及胸腺重，并计算抑瘤 率、脾系数及胸腺系数。结果 HFP 和 HFA 对体外培养的 3 种肿瘤细胞均表现出一定的抗肿瘤活性，但 HFP 的抑 制作用好于 HFA。HFP 可抑制小鼠体内 S180 实体瘤的生长，且预防组的抑瘤率高于治疗组，HFP 组的脾系数和胸 腺系数明显高于 CTX 组。结论 HFP 和 HFA 在体外及体内均具有一定的抗肿瘤活性，且 HFP 的作用好于 HFA。
对数生长期的肿瘤细胞以 1 × 105 / mL 的密度 接种于 96 孔细胞培养板，每孔 100 μL，设空白对照 孔、正常对照孔及不同药物浓度试验孔，同时设颜色 对照孔，每组设 6 个平行孔，放入 37 ℃ 、5% CO2 培 养箱中孵育 24 h 后，吸弃上清，在药物试验孔中分 别加入药物浓度为 15． 625，31． 25，62． 5，125，250， 500，1 000，2 000 μg / mL 的培养液 200 μL，正常对 照孔只加细胞和培养液，颜色对照孔不加细胞只加 含不同浓度药物的培养液，空白对照组不加细胞只 加培养液，于培养箱 中 培 养 44 或 68 h，每 孔 加 入 5 mg / mL MTT 溶液 20 μL，37 ℃ 孵育 4 h 后弃去孔 内溶液，每孔加入 DMSO 150 μL 轻度振荡 10 min 使 沉淀完全溶解，用酶标仪在 570 nm 波长测定吸光度 （ A） 值，并设 630 nm 为参考波长。实验重复 3 次， 计算 抑 制 率 （ IC ） 。 IC = 1 － （ A药物 － A颜色对照 ） / （ A正常对照 － A空白对照 ） × 100% 。 2． 3 HFP 体内抗肿瘤实验 2． 3． 1 分组及给药 KM 鼠 80 只，雌性，随机分为 8 组，每组 10 只，即模型对照组、阳性对照组、低剂
RPMI 1640（ Gibco） ； 新生牛血清 （ 杭州四季青 生物工程材料有限公司） ； 胰蛋白酶、MTT （ Amresco） ； 注射用环磷酰胺 （ 上海华联制药有 限 公 司） ； DMSO（ 天津市北联精细化学品开发有限公司） ； 链 霉素、青霉素（ 北京鼎国昌盛生物技术有限公司） 。
收稿日期： 2010-09-25 基金项目： 吉林省科技发展计划项目（ 20060924） 作者简 介： 苏 玲，女，博 士 研 究 生，从 事 多 糖 药 理 学 研 究， Email： huangtugeda@ 163． com； 宋 慧，通信作者，教授，Email： songhuinongda@ 163． com。
量治疗组、中剂量治疗组、高剂量治疗组、低剂量预 防组、中剂量预防组和高剂量预防组。接种 S180 肉 瘤细胞前 5 d，低、中、高预防组分别按小鼠每千克体 重灌服 50，100 和 200 mg HFP，0． 4 mL / 只，连续5 d， 1 次 / d； 其 余 5 组 灌 服 生 理 盐 水 0． 4 mL / 只，连 续 5 d，1 次 / d。实验第 6 天灌胃前，无菌抽取腹腔注 射 S180 肉瘤细胞 7 d 的小鼠腹水，经无菌生理盐水 洗涤，1 000 r / min 离心 5 min，重复 2 次。生理盐水 重悬，台盼兰染色，显微镜下计数活细胞数。调整细 胞浓度为 1 × 107 / mL，混匀，每只小鼠右前肢腋下皮 下注射 0． 2 mL。接瘤后，低、中、高预防组分别按前 述给药方式、剂量继续灌服 HFP 10 d； 低、中、高治 疗组分别灌服 HFP 50，100 和 200 mg / kg； 阳性对照 组灌服 CTX 100 mg / kg； 模型对照组灌服生理盐水； 灌胃体检均为 0． 4 mL / 只，均连续给药 15 d，1 次 / d。 2． 3． 2 S180 肉瘤荷瘤小鼠体重、瘤重、抑瘤率及脾 指数和胸腺指数的测定 各组实验动物自由摄食饮 水，于给药第 1，5，10，15 天，称量并记录体重。末次 给药 24 h 后，断颈处死小鼠。处死前称量各组小鼠 体重并记录，完整剥取右上肢瘤体，称重并记录，并 按下列公 式 计 算 抑 瘤 率。同 时 摘 取 小 鼠 脾 脏 和 胸 腺，分别称重并计算脾系数和胸腺系数。 2． 4 数据处理
数据经 SPSS13． 0 分析，以（ x ± s） 表示，组间采 用 t 检验。 3结果 3． 1 体外抗肿瘤实验
结果见图 1。浓度在 15． 625 ～ 2 000 μg / mL 的 HFP 和 HFA 对 SMMC7721、SPC-A-1、SGC7901 的作用 大体呈剂量依赖关系，但 HFP 的作用效果好于 HFA。 长时间作用普遍好于短时间作用效果。其中 HFP 作 用 SPC-A-1 72 h 时对癌细胞的抑制率达 70． 5% 。 3． 2 体内抗肿瘤实验 3． 2． 1 HFP 对 S180 荷瘤小鼠体重的影响 结果见 表 1。实验第 5 天 CTX 组及低、中、高剂量 HFP 预 防组小鼠体重略有下降，与模型对照组比较有极显 著差异 （ P ＜ 0． 01 ） 。实验第 10 天，低、中、高剂量 HFP 预防组小鼠体重已恢复至模型对照组水平，无 统计学差异（ P ＞ 0． 05） ； CTX 组体重略有回升，但与 模型对照组比较差异仍为极显著（ P ＜ 0． 01） 。至实 验最后 1 d 处死小鼠前称重结果显示，CTX 组体重 仍未恢复至模型对照组水平，统计学差异极显著（ P ＜ 0． 01） 。同时，低剂量 HFP 治疗组小鼠体重与模 型对照组比较，达极显著差异水平（ P ＜ 0． 01） 。
TS100 倒置显微镜（ Nikon） ； DG5032 酶标仪（ 南 京华东电子集团医疗装备有限责任公司） ； CO2 恒温 培养箱（ 德国贺利氏公司） 。 2方法 2． 1 小刺猴头菌发酵浸膏多糖 HFP 和 HFA 的提取
小刺猴头菌发酵浸膏经 95% 乙醇浸泡过夜脱 脂，去除乙醇，加 3 倍体积水溶解，80 ℃ 水浴提取 3 h，去 除 不 溶 物，冷 却，加 入 95% 乙 醇 至 终 浓 度 75% ，4 ℃ 过夜，离心分离沉淀及上清液，浓缩干燥 即为 HFP 和 HFA。 2． 2 体外抗肿瘤实验
SU Ling，LI Yu-ting，SONG Hui，LU Jin-chao （ School of Life Science，Jilin Agriculture University，Changchun 130118，China）
Abstract： Purpose To study the antitumor activity of HFP and HFA from the liquid submerged fermentation extract of H． caput-medusae（ Bull． ∶ Fr． ） Pers． Methods The antitumor activity in vitro was determined by MTT methods． In vivo，S180 mice were intragastrically and administrated prophylactically and remedially and then determined the inhibition ratio and the quotient of spleen and thymus． Results The results showed that HFP and HFA both had the antitumor activies，when they were treated with three cancer cell lines（ SMMC7721，SPC-A-1，SGC7901） ，but HFP outweighed HFA． HFP also inhibited the growth of S180 tumor in vivo． The effects of the prevention groups were better than those of the treatment groups，and the quotietie of spleen and thymus of the HFP group were much better than those of the CTX group's． Conclusion HFP and HFA both had the antitumor activies，and HFP has an advantage over HFA．