聚乙二醇伴随式离子交换层析分离重组乙肝病毒表面抗原

［L O R］ ［?］
［E］ 亲水性羟基化合物作为保护剂奠定了理论基础 。
该理论认为： 羟基化合物在蛋白质水溶液中优先与 水分子结合而不是与蛋白质结合； 羟基化合物表面 的水分子有序排列， 使溶液的热力学性质改变， 松散 的蛋白质趋向于变紧凑， 此作用有可能防止蛋白质 变性。亲水性羟基化合物曾被应用于提高蛋白质在 凝胶过滤层析、 离子交换层析、 -5&+%0, ; 亲和层析等 ［?D， 在蛋白 纯化步骤中蛋白之间的分离度 ??］。因此， 质分离纯化过程中亲水性羟基化合物可作为纯化伴 侣， 在伴随式分离纯化过程中提高纯化过程的分辨 率和样品分离度。以前我们对基因工程细胞表达的 人肿 瘤 坏 死 因 子 （ 791#, V91&5 W%65&$0$ S#6+&5， 三聚体） 、 血红蛋白分离的研究表明， 在离子 "VWS， 交换层析过程中加入亲水性羟基化合物 -). 能稳 定多 聚 亚 基 蛋 白 的 生 物 结 构 和 提 高 活 性 回 收
中图分类号
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生 物 工 程 学 报 !"#$%&% ’()*$+, (- .#(/%0"$(,(12
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［?C，?A］ 率 。
， 已投入生产。但是， 生产
上采用的多步层析纯化工艺的活性回收率常常不到 如何通过下游分离纯化过程提高目的 CDM 。因此， 蛋白抗原的回收率， 是生产安全、 有效、 低成本乙肝 疫苗的关键所在。 从 *7H 细胞表达的 78$;: 的分离纯化工艺由 疏 水 相 互 作 用 （ 7>/5&!"&206 (,+%5#6+0&, 、 离子交换层析 （ (&,<)=6"#,:% *"5&1#+&:5#!">，7(*） 、 凝胶过滤 （ .%3 S03+5#+0&,，.S） *"5&1#+&:5#!">，()*）
白的分离纯化中作用显著， 不仅能有效分离目的蛋 白和浓缩样品， 单步活性回收率往往更能高达 EDM 以上。但对于分子量超过 CDDD KT 的 78$;: 蛋白颗 粒而言， 在离子交换介质上的交换容量剧烈下降， 更 为严重的是， 亚基之间主 78$;: 属于多聚亚基蛋白， 要靠非共价键相互作用， 在分离纯化过程中，!7、 温 度、 液体剪切力、 缓冲盐种类和浓度的变化、 尤其是 吸附<洗脱等过程常常造成亚基之间的解离和立体 结构的变化， 导致生物学活性丧失， 致使 ()* 的单步 是整个层析纯化工艺的瓶 回收率往 往 不 到 UDM ， 颈。如何在 ()* 纯化过程中保持 78$;: 的结构稳定 性和提高 78$;: 的活性回收率是提高整个层析纯 化工艺的关键。近年来亲水性多羟基化合物 （蔗糖、 甘油、 葡萄糖、 海藻糖、 聚乙二醇等） 作为稳定剂对蛋 白质结构具有稳定作用。在理论上， V01#$"%’’ 等人 为应用 的优先水化理论 （ -5%’%5%,+0#3 ">/5#+0&, +"%&5>）
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聚乙二醇伴随式离子交换层析分离重组乙肝病毒表面抗原
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闭静秀" ， 周卫斌" ， 李 岩" ， 黄永东" ， 张 焱" ， 董爱华! ， 苏志国""
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北京 " ) 中国科学院过程工程研究所生化工程国家重点实验室， 石家庄 ! ) 华北制药集团新药中心， $%$$$$
［Q］ 。离子交换层析在一般基因工程蛋 层析集合而成
本文通过选择聚乙二醇 （ -).） 添加到层析流动 相中提高离子交换层析对 78$;: 和杂蛋白的分离 度， 研究了 -). 的分子量和浓度对 78$;:、 牛血清白 蛋白 （ 8F;） 在 78$;: 离子交换层析过程中保留时间 和分离度的影响， 非常重要的探索是利用分子排阻 色谱 联 用 多 角 度 激 光 散 射 技 术（ $0X% %=639$0&, 6"5&1#+&:5#!"><193+0#,:3% 3#$%5 30:"+ $6#++%50,:， F)*< 在线监测 78$;: 在纯化过程中的颗粒大小、 J;YYF） ［?P， ?L］ 均一性和分子量变化 ， 从而为探讨大分子、 多聚 亚基蛋白在层析过程的活性丧失机理和优化层析工 艺打下基础。
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生物工程学报
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