肥胖儿童ApoE基因多态性与其血脂PCR_RFLP分析
载脂蛋白E基因多态性与脑血管病的关系
载脂蛋白E基因多态性与脑血管病的关系厉永伟;贺侠;张玲晓;李锋;张德忠【期刊名称】《心脑血管病防治》【年(卷),期】2001(1)3【摘要】目的探讨载脂蛋白E(APOE)基因多态性与脑血管病(CVD)的关系.方法应用聚合酶链反应一限制性长度多态性技术(PCR-RFLP),检测30例脑出血(CH)及63例脑梗死(CI)患者的APOE基因型,并与66名同龄健康对照组比较.结果 CH组APOE基因型ε4及ε4携带者的频率明显高于对照组(P＜0.05),ε3及ε3/3频率显著低于对照组(P＜0.01);CI组APOE基因型ε3/4明显高于对照组(P＜0.05).结论APOE基因ε3/4与CI的发生相关,等位基因ε4可能是CVD的一种遗传易感因子,ε3/3可能与CVD的保护有关.【总页数】3页(P17-19)【作者】厉永伟;贺侠;张玲晓;李锋;张德忠【作者单位】浙江省青田县人民医院;浙江省青田县人民医院;浙江省青田县人民医院;浙江省青田县人民医院;浙江省青田县人民医院【正文语种】中文【中图分类】R3【相关文献】1.载脂蛋白E基因多态性与脑血管病关系的研究进展 [J], 敬淮淞;陈礼刚2.青海世居藏族载脂蛋白E基因多态性与脑血管病的关系☆ [J], JIWeizhong;WU Shizheng;HOU qian;DONG Jingjing.3.中国人载脂蛋白AIV基因多态性分布及其与缺血性脑血管病的关系 [J], 于丽天;李丽;王兴宇;刘力生4.载脂蛋白E基因多态性与脑血管病及血脂水平易感性的关系 [J], 黎洁;高海凤;曹亦宾5.载脂蛋白(a)基因多态性与缺血性脑血管病的关系 [J], 于丽天;李丽;王兴宇;刘力生因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
包头市肥胖儿童的ApoE基因多态性研究
２ Ａ ３～ ， Ｂ染色 ， ５ｍ ４ ｈ Ｅ 紫外 下 观 察 条 带 。Ｅ ／ ２ ２基 因
型 为 ９ 、 ｌｂ ， ２ ３型 为 ９ 、１４ ｐ Ｅ ／ １ ８ ｐ Ｅ ／ １８ 、８ｂ ， ３ ３为 ９ 、８ １４ ｂ ， ３ ４为 ９ 、 ２ ４ ｐ Ｅ ／ ｐＥ／ １ ７ 、 ８ ｂ ， ２ ４为 ９ 、 １ ７ 、 ８ ｂ ， １ ８ 、 ２ ４ ｐ
公 司 ） Ｐ Ｒ扩增试 剂 （ ，Ｃ 大连宝 生物公 司） 。
１２ 研究 对象 ． 根 据 《 国学 龄 儿 童 青少 年 Ｂ 超 中 ＭＩ
重、 肥胖 筛 查分 类 标 准 》 择本 市 两 所 中学 肥胖 儿 童 选
２ １ Ｐ Ｒ产 物 电泳 扩增 出预 期 ２ ４ ｂ ． Ｃ ４ ｐ大小 Ａ ｏ ｐＥ
验。
２ 结 果
数 据 应 用 Ｓ Ｓ Ｉ． Ｐ Ｓ １ ５软 件 进 行 分
ｐ Ｒ ２ Ｄ Ａ ＭｓＩｍ ｒｅ （ 京 ＴＡ Ｇ Ｎ Ｂ Ｏ Ｅ Ｈ Ｂ ３ ２ Ｎ ／ ｐ ａｋ ｒ 北 ＩＮ Ｅ ＩＴ Ｃ
析， 分类 资料 用 频 数 表 示 ， 类 资 料 组 问 比较 用 ｘ检 分
态性与儿童肥胖有一定关系 。 关键词 肥 胖 儿 童 ； ｐＥ基 因 ； Ａｏ 多态 性
人 类 载脂 蛋 白 Ｅ（ ｐ Ｅ） 因位 于 １ Ａｏ 基 ９号 染 色体 ， 具有 明显 的基 因遗 传 多 态性 。Ａ ｏ ｐ Ｅ有 ３种 主 要 的异 构体 ， Ｅ 、 ３ Ｅ 它们 分 别 由一 个 基 因位 点 的 ３个 即 ２ Ｅ 、４， 等位基 因 ￡ 、 ３ ￡ ２ ８ 、４编码 。Ａ ｏ ｐ Ｅ是 血 清 中主要 载脂 蛋 白之 一 ， 与 机 体 脂 质 代 谢 及 调 节 胆 固 醇 平 衡 川 。 参 Ａｏ ｐ Ｅ三种 异构体 与 受体 的亲 和力 不 同而影 响脂 代 谢 ， 从 而不 同程度 地影 响血脂 水平 。高 血脂 可 以引发动 脉 粥样 硬化 、 血压 、 心病 、 高 冠 肥胖 等慢 性疾 病 ， 有潜在 具
RFLP名词解释
RFLP名词解释RFLP是限制性片段长度多态性（Restriction Fragment Length Polymorphism）的缩写，是一种分子生物学技术，常用于分析DNA样本中的基因型。
下面对RFLP进行详细解释，包括其原理、应用和优缺点。
RFLP技术是基于DNA序列的差异来检测个体间的基因型差异。
它利用了DNA序列中的限制性内切酶剪切位点的多态性，通过对DNA样本进行酶切和凝胶电泳，分析得到的DNA片段长度的差异来判断个体的基因型。
RFLP技术的原理如下：1. 获取DNA样本：从个体的细胞中提取DNA样本，可以通过多种方法如血液、唾液、组织样本等获得。
2. DNA酶切：用特定的限制性内切酶对DNA样本进行酶切。
限制性内切酶是一种具有特异性的酶，它会识别和切割特定的DNA序列。
如果个体的DNA序列中存在特定的切割位点，则酶切会产生不同长度的DNA片段。
3. 凝胶电泳：将经过酶切的DNA样本加载到凝胶电泳槽中，经过电场离子迁移，分离出不同长度的DNA片段。
4. 可视化和分析：通过染色或探针杂交等方法，对电泳结果进行可视化，并进行分析确定DNA片段的长度。
RFLP技术得以应用于诸多领域，具有以下几个主要的应用方面：1. 遗传病分析：RFLP技术可以用于检测导致遗传病的基因突变。
通过分析DNA序列中的限制性内切酶位点是否发生改变，可以确定个体是否携带突变基因，并判断其患病风险。
2. 亲子鉴定：利用RFLP技术可以对个体的DNA样本进行比对，确定亲子关系。
通过对父母和子女DNA样本的酶切和电泳分析，可以判断是否存在一致的DNA片段长度，从而确定亲子关系。
3. 种群遗传学研究：通过对不同个体的DNA样本进行RFLP 分析，可以判断不同个体之间的基因型差异，从而对种群内的遗传多样性进行研究，了解不同种群的遗传背景及遗传演化。
4. 进化与系统发生关系研究：RFLP技术可以用于研究不同物种或亚种之间的进化关系。
rflp原理
rflp原理RFLP原理。
RFLP（Restrition Fragment Length Polymorphism）是一种分子生物学技术，它是利用限制性内切酶切割DNA，通过分析DNA的特定序列长度差异来进行基因分型和遗传多态性研究的方法。
RFLP 技术在基因组学研究、疾病诊断和法医学鉴定等领域有着广泛的应用。
首先，RFLP技术的原理是基于DNA序列的差异性。
DNA序列中存在着许多的限制性内切酶切位点，当DNA经过限制性内切酶的切割作用后，会产生不同长度的DNA片段。
这些不同长度的DNA片段就构成了RFLP技术的研究对象。
而DNA序列的差异性来源于基因组中的多态性位点，即在不同个体中，同一位点上的DNA序列存在着不同的碱基组成，从而导致了限制性内切酶切割后的DNA片段长度差异。
其次，RFLP技术的步骤包括DNA提取、限制性内切酶切割、电泳分离和杂交探针检测。
首先是DNA提取，从样本中提取出待研究的DNA，然后通过限制性内切酶切割，将DNA切割成不同长度的片段。
接着是电泳分离，将切割后的DNA片段进行电泳分离，根据不同长度的片段在凝胶中的迁移速度来进行分离。
最后是杂交探针检测，将特定的DNA探针与目标DNA片段进行杂交，通过探针的特异性结合来检测目标DNA片段的存在与否。
再次，RFLP技术的应用非常广泛。
在基因组学研究中，RFLP技术可以用于构建遗传图谱、进行基因定位和克隆等研究。
在疾病诊断中，RFLP技术可以用于检测遗传病变和基因突变，对于一些遗传性疾病的诊断具有重要意义。
在法医学鉴定中，RFLP技术可以通过DNA指纹分析来进行个体识别和亲子鉴定，为司法鉴定提供了可靠的技术手段。
最后，RFLP技术虽然在过去曾经是基因分型和遗传多态性研究的主要方法，但随着PCR技术和基因芯片技术的发展，RFLP技术的应用逐渐减少。
然而，RFLP技术仍然具有一定的优势，例如在一些特定的基因分型和遗传多态性研究中，RFLP技术仍然是不可替代的。
黎族心脑血管疾病患者载脂蛋白E基因多态性与血脂的关系
黎族心脑血管疾病患者载脂蛋白E 基因多态性与血脂的关系王永卿周凯玲姚敏符先先郑青钟祥旭（海口市人民医院，海南海口570208）〔摘要〕目的研究海南黎族人群心脑血管疾病载脂蛋白E （ApoE ）基因多态性与血脂的关系。
方法应用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性（PCR-RFLP ）技术检测心脑血管疾病患者150例（高血压50例，脑梗死50例，冠心病50例）ApoE 基因多态性分布，同时测定血清总胆固醇（TC ）、甘油三酯（TG ）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C ）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C ）、载脂蛋白A （ApoA ）、载脂蛋白B （ApoB ）、脂蛋白a （LPA ）成分。
结果ε2与ε3基因型比较有LDL-C /HDL-C 、ApoB /ApoA 、LPA 三项有统计学差异、ε3和ε4比较各项指标均无统计学差异。
结论降低LPA 数值以及ApoB /ApoA 和LDL-C /HDL-C 比值可能是ε2对心脑血管的保护机制。
〔关键词〕心脑血管疾病；载脂蛋白E ；基因多态性；血脂；黎族〔中图分类号〕R34〔文献标识码〕A〔文章编号〕1005-9202（2012）08-1570-02；doi ：10.3969/j.issn.1005-9202.2012.08.007载脂蛋白E （ApoE ）是血浆中重要的载脂蛋白之一。
人群中具有三种纯合子基因型ε2/2，ε3/3，ε4/4和三种杂合子基因型ε2/3，ε3/4，ε2/4。
近年研究表明，ApoE 结构与功能异常同高脂血症、动脉粥样硬化（AS ）形成及其严重程度密切相关。
本研究旨在探讨心脑血管疾病ApoE 基因多态性与血脂的关系。
1材料与方法1.1研究对象均为海南中部各市县世居黎族人群150例，其中高血压患者50例，脑梗死患者50例，冠心病患者50例，年龄40 70岁，平均（62.3ʃ7.81）岁，男女各半。
高血压患者符合1999年WHO 高血压病诊断标准，排除继发性高血压、严重肝肾功能障碍及甲状腺疾病患者。
ApoE基因多态性与脂质代谢的相关性
1. 3 统计学处理 计量资料用 x ± s 表示，组间比较用方差 分析或 t 检验。组间基因型构成比、等位基因频率的比较用 χ2 检验。对有相关趋势的变量进行相关分析。用 SPSS10. 0 软 件处理。基因频率计算采用基因平衡法〔4〕。
1 材料与方法 1. 1 研究对象 CHD 组 88 例，按 WHO1979 年制定的诊断 标准确诊为 CHD，均来自我院老年病科与心血管内科门诊和 病房的潍坊地区汉族人，其中男性 56 例，女性 32 例，平均 年龄 （ 56. 7 ± 8. 1） 岁，均排除家族性高胆固醇血症、脂肪 肝、糖尿病、甲状腺疾病、肾脏疾病、严重高血压和肝脏疾 病； 对照组 75 例，为我院体检健康成人，其中男 48 例，女 27 例，其平均年龄 （ 56. 2 ± 9. 7） 岁。 1. 2 标本采集及检测 1. 2. 1 标本采集 抽取空腹 12 ～ 14 h 肘静脉血 4 ml 分装， 其中 3 ml 于普通抗凝试管中分离血清，3 h 内送检血脂，余 1 ml置 0. 5% EDTA 抗凝管中 － 20℃ 冷藏保存同批待测基因型。 1. 2. 2 PCR 及主要试剂 所使用的 ApoE 的基因位点引物按 Tasi 等〔2〕报道设计并使用由上海生物工程技术服务有限公司 提供的合成引物一对。引物序列为： 上游引物 5'-ACAGAATTCGC CCCGGCCTGGTACAC-3'， 下 游 引 物： 5'-TAAGCTTGGCACGGCTGTCCAAGGGA-3'。 1. 2. 3 目的 DNA 片段的 PCR 扩增及 PCR 产物检测 参照改 良 HixsonJE 法进行 PCR 扩增〔3〕； 硝酸银 （ 0. 1% ） 染色检测 ApoE 基因 PCR 产物 （ 244 bp） ； 限制性内切酶 （ HhaI） 酶切：
《2024年载脂蛋白E基因多态性与2型糖尿病及血脂异常的相关性》范文
《载脂蛋白E基因多态性与2型糖尿病及血脂异常的相关性》篇一一、引言随着现代生活方式的改变和人口老龄化的加剧，2型糖尿病（T2D）和血脂异常的发病率逐年上升，成为全球性的健康问题。
遗传因素在糖尿病和血脂异常的发病机制中起着重要作用。
其中，载脂蛋白E（ApoE）基因多态性被广泛研究，与多种代谢性疾病的发病风险密切相关。
本文旨在探讨ApoE基因多态性与2型糖尿病及血脂异常的相关性。
二、ApoE基因多态性概述ApoE是一种重要的载脂蛋白，参与胆固醇和脂质代谢的调节。
ApoE基因位于染色体19p13.3，具有多种等位基因变异，其中ε2、ε3和ε4是最常见的多态性类型。
不同基因型影响ApoE的表达水平和功能，进而影响个体的脂质代谢和心血管健康。
三、ApoE基因多态性与2型糖尿病的相关性大量研究表明，ApoE基因多态性与2型糖尿病的发病风险相关。
例如，一些研究发现ε4等位基因的携带者更容易出现胰岛素抵抗和糖尿病症状。
这可能是由于ε4等位基因影响了胰岛素的敏感性和分泌功能。
此外，ApoE基因多态性还可能影响其他与糖尿病相关的生物标志物，如血糖、血脂等。
四、ApoE基因多态性与血脂异常的相关性ApoE在脂质代谢中发挥重要作用，因此其基因多态性对血脂水平有显著影响。
研究表明，不同ApoE基因型的人群在总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）和高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）等血脂指标上存在差异。
例如，ε4等位基因携带者通常具有较低的HDL-C水平和高LDL-C水平，这可能增加心血管疾病的风险。
五、研究方法本研究采用病例对照研究设计，收集了T2D患者和健康对照者的ApoE基因型数据以及血脂和血糖等生化指标数据。
通过统计分析方法，探讨ApoE基因多态性与T2D及血脂异常的相关性。
六、结果与讨论1. 结果a) ApoE基因型在T2D患者和健康对照组之间的分布存在显著差异。
b) ε4等位基因与较高的T2D发病风险相关。
c) 不同ApoE基因型在血脂指标（如总胆固醇、LDL-C和HDL-C）上存在差异。
载脂蛋白E基因多态性对高脂血症痰瘀互阻证患者血脂浓度及应证方药调脂疗效的影响
载脂蛋白E基因多态性对高脂血症痰瘀互阻证患者血脂浓度及应证方药调脂疗效的影响赵丹丹;杨惠民;宋剑南;金红;牛晓红;陈冰【期刊名称】《中医杂志》【年(卷),期】2007(48)10【摘要】目的探讨中国北方汉族人群载脂蛋白E基因多态性对高脂血症痰瘀互阻证血脂浓度及应证方药(调脂通脉颗粒)调脂疗效的影响。
方法172例高脂血症痰瘀互阻证患者随机分为治疗组(调脂通脉颗粒)和对照组(血脂康胶囊),观察症状、体征(证候积分)和血脂浓度的变化,应用PCR-RFLP技术进行ApoE基因型测定。
结果调脂通脉颗粒调脂疗效与血脂康相当,两组差异无显著性意义(P>0.05),但在证候积分改善上治疗组显著优于对照组(P<0.01);携带ApoEE3/3和E3/4基因型高脂血症痰瘀互阻证患者的低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)浓度明显高于E2/3基因型者(P<0.05或P<0.01);E3/4型患者对应证方药在LDL-C浓度的改善上较E2/3和E3/3型明显(P<0.01)。
结论高脂血症痰瘀互阻证患者ApoE基因第4外显子不同基因型个体对应证方药调脂作用的敏感性不同,表明遗传因素在其中发挥着重要作用。
【总页数】4页(P931-934)【关键词】载脂蛋白E;基因多态性;高脂血症;痰瘀互阻证【作者】赵丹丹;杨惠民;宋剑南;金红;牛晓红;陈冰【作者单位】中国中医科学院中医基础理论研究所;北京中医药大学东直门医院【正文语种】中文【中图分类】R587.2【相关文献】1.不同证型高脂血症患者血脂康调脂疗效差异及与ApoE基因多态性的相关性研究[J], 蒋卫民;方祝元;陈晓虎;顾萍2.载脂蛋白A5、C3基因多态性对高脂血症痰瘀互阻证血脂浓度的影响 [J], 赵丹丹;金红;宋剑南;陈冰;牛晓红;杨惠民3.载脂蛋白E基因多态性对高脂血症患者血脂浓度及应证复方中药调脂疗效的影响[J], 赵丹丹;杨惠民;宋剑南;金红;牛晓红;陈冰4.载脂蛋白E基因多态性与高脂血症痰瘀证患者血脂水平关系的研究 [J], 梁晋普;杨惠民;盛彤;韩丽蓓;袁玉娇;牛晓红;金红5.祛痰化瘀解毒方药对高脂血症痰瘀互阻证患者单核细胞亚群异常的影响 [J], 马雅銮;王亚红;韩俊燕;郝禹;陈冰;宋剑南;韩俊阁;尚涛;徐丽丽;王宪波;曾辉因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
ApoE基因多态性与中国人2型糖尿病及其心血管并发症的关系
(P=0.0021)相关，携带ε4等位基因的个体具有较高的TC及LDL-C水平，而携带ε2等位基因的个体
具有较低的TC及LDL-C水平。ApoE基因多态性与2型糖尿病伴高血压无相关(P=0.111)。携带ε4等
ntrols by polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphiom (PCR-RFLP).Results The frequencies
of ε3,ε2 and ε4 alleles in these two groups were respectively 0.844, 0.093 and 0.063, and 0.867, 0.083 an
助，其中甘油三酯(TG)，总胆固醇(TC)，高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)及低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C
)用脂法测定；血ApoA1，ApoB和Lp(a)用酶联免疫吸附测定(ELISA)方法。高血压诊断按WHO标准，冠心
in Chinese Zheng Yiman,Sun Rong,Li Xiaoying,et al.Shanghai Institute of Endocrinology,Rui Jin Hospital,Shanghai Seco
nd Medical University,200025
【Abstract】 Objective Studying the relationship betweem the polymorphism of apolipoprotein E (ApoE) gene
and type 2 diabetes mellitus and its cardiovascular complications. Methods Using apolipoprotein E (ApoE) gene as
rflp
【仪器设备】
恒温箱
电泳装置
微量离心机
微量移液器（1～20?l和20～200?l）
0.5ml Eppendorf 管
紫外线观察装置及照相设备
3 操作程序
将纯化的并经自然干燥的PCR产物（1?g）加17?l TE缓冲液或无菌水（内含RNase A），使DNA完全溶解。在冰上用微量移液器依次加入酶解缓冲液2?l和限制性内切酶3U（1?l）。将清洁、干燥、灭菌的Eppendorf管编号。加样后，小心混匀，置于37℃水浴中（一般情况），酶解2～3h，然后向每个小管中分别加入1/10体积的酶反应终止液，混匀以停止酶解反应。各酶解样品于4℃中贮存备用。
2．促进异源种质的转移和利用
原始种和野生种含有大量的遗传变异，它们是品种改良的目标基因的来源。但是，野生种和栽培种杂交困难，且杂种常部分或全部不育，即使获得可育杂种，也难以保证目标性状基因已成功地转移到了栽培品种中，从而限制了野生种的利用。Nilliams等（1990）利用体பைடு நூலகம்胞融合的RFLP标记相结合的方法，开辟了利用RFLP从野生和原始种质中获得有用基因的新领域。
DNA多态性根据其产生的方式基本上有两种：一是碱基对突变类型，即限制性内切酶识别位点上发生了单个碱基替换（转换或颠换），使原有切点消失或产生新的切点；另一类是结构重排型，这是由DNA内部发生较大的顺序变化所引起的；引起这种变化的原因包括两个方面：一是DNA顺序发生了突变，如缺失、倒位或插入等；二是近年来发现的高变区。高变区由多个串联重复顺序组成，一般位于基因附近。不同个体高变区的串联重复顺序的拷贝数相差悬殊，高变区长度变化很大，从而使高变区两侧限制性内切酶识别位点的固定位置随高变区而发生相对位移。对于DNA的检测，用限制性内切酶种类越多，对基因结构的了解就越精细。在实际的操作过程中碰到的最大问题就是高等植物的染色体太大太复杂了，如果用限制性内切酶降解，很难在琼脂糖凝胶上看到DNA片段的多态性，通常我们看到的都是弥散状的DNA（因为条带太多太密集了）。解决这一问题时人们自然想到了Southern杂交，将琼脂糖凝胶中的DNA转移到硝酸纤维素膜（或其他膜）上，然后再用标记的克隆基因作探针进行杂交，经放射自显影后即可在X光片上看到DNA多态性了。
rflp标记的名词解释
rflp标记的名词解释RFLP是"Restriction Fragment Length Polymorphism"（限制性片段长度多态性）的缩写，是一种基因分型技术，用于研究DNA序列的差异性。
通过观察DNA片段的长度变化，RFLP可以帮助人们了解基因座在个体之间的多态性，从而提供了一种分子遗传分析的方法。
一、RFLP的原理RFLP技术基于DNA序列的变异，而DNA的变异表现为序列中的一处或多处核苷酸序列发生突变。
这些变异会导致限制性内切酶切割DNA序列时产生不同的片段长度。
通过将DNA进行限制性内切酶消化，再通过凝胶电泳技术分离DNA片段，并通过特定的探针杂交以检测特定的片段，就可以确定个体之间的差异。
二、RFLP技术的应用1. 生物学研究：RFLP技术被广泛应用于生物学研究中，特别是用于研究种群遗传学、亲子关系以及进化等方面。
通过分析特定基因座的RFLP分型，可以推测个体或群体之间的亲缘关系、种群的遗传多样性以及基因座的分布情况，为生物学研究提供了宝贵的遗传数据。
2. 遗传疾病检测：RFLP技术在遗传疾病的检测与诊断中也有重要的应用。
许多遗传疾病与特定的基因突变有关，通过分析这些突变引起的RFLP变异，可以确定某些疾病的患病风险。
例如，围绝经期乳腺癌与BRCA1基因的RFLP分型相关，通过进行RFLP分析，可以预测遗传性乳腺癌的风险。
三、RFLP的优缺点1. 优点：RFLP技术在技术成熟的同时，具有高度可靠性和准确性。
通过分析特定基因座的RFLP分型，可以得出有关个体间遗传关系、多态性以及基因特征等信息。
此外，RFLP技术还具有较高的灵敏度，能够检测到充分稀释的DNA样本。
2. 缺点：然而，RFLP技术也存在一些局限性。
首先，该技术要求大量的DNA 样本，通常需要提取和纯化大量高质量的DNA，这在某些情况下可能是困难的。
此外，从样本收集到结果分析需要较长的时间，限制了该技术应用于实时或紧急情况的能力。
ApoE基因多态性与血脂、氧化低密度脂蛋白、糖尿病足的相关性分析-
ApoE基因多态性与血脂、氧化低密度脂蛋白、糖尿病足的相关性分析*目的：评价载脂蛋白E（ApoE）基因多态性与血脂、氧化低密度脂蛋白（oxLDL）及2型糖尿病（T2DM）患者发生糖尿病足（DF）的相关性，为DF 的早期基因诊断提供循证医学的证据。
方法应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性检测70例T2DM患者（40例DF患者，30例无慢性并发症患者）和48例健康对照者的ApoE基因多態性，比较T2DM患者中并发DF（DF组）与无慢性并发症DM（DM对照组）患者及健康组的ApoE基因型分布和等位基因频率，并利用Logisitic回归分析ApoE基因多态性与DF之间的相关性。
结果：DF 组ε3/4基因型和ε4等位基因均高于其他两组；ε2/4、ε3/4两组TCH、LDL、oxLDL、HbA1C均明显高于ε2/3、ε3/3两组，HDL则低于上述两组；各等位基因之间比较：ε4组TCH、LDL、oxLDL、HbA1C均显著高于ε2、ε3两组，ε2组TG明显高于ε3、ε4两组；ε3/4基因型和ε4等位基因与发生DF明显相关。
结论ApoE 基因多态性与T2DM患者DF的发生相关，基因型ε3/4和等位基因ε4可能是T2DM患者并发DF的危险因子，其机制可能通过血脂代谢紊乱及促进脂质氧化而影响DF的发生。
载脂蛋白E（ApoE）基因具有明显的遗传多态性，ApoE基因多态性已被证实是冠心病的易患因素[1-2]。
氧化低密度脂蛋白（oxLDL）亦被认为是冠心病、动脉硬化（AS）的发病机制之一[3]。
近年来不少研究证实，ApoE基因多态性与冠心病、脑梗死、糖尿病（DM）伴肾病也密切相关[4-6]，但与oxLDL、糖尿病足（DF）是否相关尚少见报道。
本研究通过分别检测DF患者、无慢性并发症DM患者以及健康对照者的ApoE基因多态性、oxLDL，研究两者之间及与2型糖尿病（T2DM）患者发生DF的相关性，试图从遗传基因角度探讨DF的早期发现及防治，现报告如下。
ApoE基因的检测方法
GCGC CGCG
E2/E2：A E2/E3：A,D,E E2/E4：A,B,C,D E3/E3：E,D E3/E4：B,C,D,E E4/E4：B,C,D
• Q-PCR
F
probe
probe
R
TT
TC
CC
TT
E2/E2(TT/TT) E2/E3(TT/TC) E2/E4(TC/TC)
TC
---
E3/E3(TT/CC) E3/E4(TC/CC)
ApoE的检测方法
TGC，cys
codon：112/158
CGC，arg
112
158
ε2
TGC
TGC
cys
cys
ε3
TGC
CGC
cys
arg
ε4
CGC
CGC
arg
arg
E2(T/T) E3(T/C) E4(C/C)
E2(T/T)
E2/E2(TT/TT)
E3(T/C)
E4(C/C)
E2/E3(TT/TC) E2/E4(TC/TC)
CC
---
---
E4/E4(CC/CC)
Roche SNP Genotyping Introduction融解曲线Biblioteka 析的原理融解曲线分析的结果判读
单色荧光对ApoE分型
双色荧光对ApoE分型
codon：112
codon：158
E3/E3(TT/CC) E3/E4(TC/CC)
E4/E4(CC/CC)
• 测序 • ARMS-PCR • PCR-SSCP • PCR-RFLP • Q-PCR
P1 P2 5'
• ARMS-PCR
中国福建人群载脂蛋白E基因多态性、血脂及胃癌相关性研究开题报告
中国福建人群载脂蛋白E基因多态性、血脂及胃癌相关性研究开题报告题目：中国福建人群载脂蛋白E基因多态性、血脂及胃癌相关性研究研究背景和意义：胃癌是全球最常见的癌症之一，中国是胃癌发病率最高的国家之一。
胃癌具有高发病率、高死亡率和高残疾率等特点，严重影响人民的健康和生命质量。
调查研究显示，胃癌的发生和发展与多种因素有关，包括遗传因素、环境因素和生活习惯等。
载脂蛋白E（ApoE）是一种重要的脂质运载蛋白，主要负责胆固醇的代谢和转运。
然而，ApoE基因存在多态性，不同基因型的人群胆固醇代谢和转运能力有所不同。
已有研究表明，ApoE基因多态性与血脂水平异常及相关疾病如冠心病、糖尿病等存在密切关系。
然而，目前对于中国福建人群ApoE基因多态性与胃癌的相关性研究尚不充分。
因此本研究旨在探讨中国福建地区ApoE基因多态性与胃癌发生的关系，为胃癌的预防和治疗提供理论依据。
研究内容和方法：1. 研究对象：选择中国福建地区胃癌患者100例和健康对照组100例作为研究对象。
2. 数据采集和处理：收集研究对象的基本信息、生活习惯、疾病史和家族史等资料，并采集血液样本进行基因分型和血脂水平检测。
3. 基因多态性分析：采用PCR法和限制性片段长度多态性分析技术（PCR-RFLP）对ApoE基因的ε2、ε3和ε4等位基因进行分型。
4. 血脂水平检测：采用化学发光法检测血清中总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇和高密度脂蛋白胆固醇水平。
5. 数据分析：采用SPSS 22.0统计软件进行数据分析，比较不同基因型和血脂水平的差异性，并进行相关性分析。
研究预期结果：1. 了解中国福建地区ApoE基因多态性和血脂水平情况。
2. 探究ApoE基因多态性与胃癌的相关性，初步发掘影响胃癌发生的遗传因素。
3. 提供胃癌的预防和治疗相关理论依据，有助于制定针对性的干预措施。
载脂蛋白E基因多态性对广西红水河流域长寿人群血脂水平的影响
载脂蛋白E基因多态性对广西红水河流域长寿人群血脂水平的影响魏贞;吕泽平;潘尚领;刘承武;罗桓;胡才友;彭均华【期刊名称】《实用医学杂志》【年(卷),期】2014(30)1【摘要】目的:探讨载脂蛋白E(ApoE)基因多态性与广西红水河流域长寿人群血脂水平及长寿的相关性.方法:采用PCR-RFLP技术对该地区521名壮族长寿老人(≥90岁,长寿组)和496名普通健康人(40 ～69岁,对照组)进行ApoE基因分型,并检测血压、血糖及血脂(TC、TG、HDL-C和LDL-C)等指标.结果:(1)在研究人群中,ApoE基因型频率以E3/3为最高,E2/3、E3/4次之,E2/2、E4/4最低;长寿组等位基因ε2和基因型E2/X的频率均高于对照组,而ε4和E4/X的频率均低于对照组,这些趋势无性别差异.(2)长寿组的TC、HDL-C和LDL-C水平均高于对照组,而TG 水平低于对照组;组内分析发现,无论是长寿组或对照组、男性或女性,当基因型从E2/X向E3/3和E4/X变化时,血清TC及LDL-C水平逐渐增加,而TG水平逐渐减少.结论:广西红水河流域长寿人群富集ApoE优势基因型,并与血脂水平密切相关,可能是该流域长寿现象的分子遗传学基础之一.【总页数】4页(P55-58)【作者】魏贞;吕泽平;潘尚领;刘承武;罗桓;胡才友;彭均华【作者单位】530021 南宁市,广西医科大学基础医学院病理生理学教研室;530021 南宁市,广西壮族自治区江滨医院神经内科;530021 南宁市,广西医科大学基础医学院病理生理学教研室;530021 南宁市,广西医科大学基础医学院病理生理学教研室;530021 南宁市,广西医科大学基础医学院病理生理学教研室;530021 南宁市,广西壮族自治区江滨医院神经内科;530021 南宁市,广西医科大学基础医学院病理生理学教研室【正文语种】中文【相关文献】1.广西红水河流域长寿人群CETPTaqIB基因多态性、血脂水平及相关性分析 [J], 王菲;黄龄瑾;尹瑞兴;潘尚领;吕泽平;刘承武;胡才友;彭均华;罗晓秋;庞国防;卢少华;吴华裕2.APOC1基因rs4420638对广西红水河流域长寿人群血脂水平的影响 [J], 卞张亚;蔚开慧;彭均华;丁一;孙鹏;陈宁园;杨晴;潘尚领;刘承武3.广西红水河流域长寿人群PPARD+294T/C基因多态性与血脂水平的相关性分析[J], 杨铭;吕泽平;罗桓;胡才友;杜丽丽;宋臻;肖丽萍;刘承武;罗晓秋4.HBB rs35755129基因多态性与广西红水河流域长寿人群血糖血脂水平的相关性[J], 李琪琪; 潘尚领5.广西红水河流域长寿人群MTHFR C677T基因多态性与血脂水平的相关性 [J], 杜丽丽;吕泽平;刘承武;罗桓;胡才友;杨铭;宋臻;彭均华;罗晓秋;周小玲;尹瑞兴;潘尚领因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
健康儿童载脂蛋白E遗传表型测定与血脂水平的关系
健康儿童载脂蛋白E遗传表型测定与血脂水平的关系柳方娥【期刊名称】《中国当代儿科杂志》【年(卷),期】2001(3)6【摘要】目的探讨健康儿童载脂蛋白E(ApoE)遗传表型分布、等位基因频率分布及ApoE遗传多态性对血脂水平的影响。
方法 90例健康儿童禁食 1 2h ,采静脉血。
采用等电聚焦电泳法测定ApoE遗传表型并推断出其基因型 ,氧化酶法测定血清胆固醇 (TC)、甘油三酯 (TG)、低密度脂蛋白胆固醇 (LDL C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL C) ,免疫比浊法测定载脂蛋白B (ApoB)、载脂蛋白AI (ApoAI)。
结果健康儿童ApoE等位基因频率的分布按Apoe2 ,Apoe3和Apoe4顺序依次为5 .55 % ,86 .66 % ,7.77%。
Apoe3等位基因频率最高 ,Apoe4及Apoe2等位基因频率低。
与ApoE3/ 3表型相比 ,ApoE4/ 3表型血TC和LDL C显著增高 (均 P <0 .0 5)。
ApoE2 / 3表型血TC和LDL C平均水平有降低趋势 ,但未见统计学意义。
血TG ,HDL C ,ApoB ,ApoAI在三组间无显著差异。
结论ApoE遗传多态性对健康儿童血脂水平有影响。
Apoe4等位基因可能是高胆固醇血症的遗传易患因子。
对健康儿童进行ApoE基因型检测 ,早期发现冠心病 (CHD)高危人群 ,及时进行干预治疗。
【总页数】2页(P667-668)【关键词】载脂蛋白E;多态性;血脂;儿童;早期诊断;冠心病;CHD【作者】柳方娥【作者单位】山东大学第二医院儿内科【正文语种】中文【中图分类】R541.4;R446.6【相关文献】1.健康儿童载脂蛋白E基因多态性对血脂水平的影响 [J], 曾华松;吴淑群2.肥胖儿童载脂蛋白E遗传表型测定与血脂水平的观察 [J], 柳方娥;董俊华;时庆;李丽珍;沈柏均3.肾病综合征患儿载脂蛋白E遗传表型及与血脂水平的关系 [J], 柳方娥;董俊华;关广聚4.成都地区362名汉族成人载脂蛋白E表型分布及其与血脂和载脂蛋白之间的关系 [J], 范萍;张祖辉;刘宇;顾华强;刘秉文5.肥胖儿童血清脂蛋白（a）水平及载脂蛋白（a）的遗传表型研究 [J], 刘德文;候泽;张悦红;陈红杰;吕华;谢瑞瑝;王美德;赵吉娥;武纯;李瑞畸;强梅因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
载脂蛋白E基因多态性与老年人血脂、血压的相关性研究
载脂蛋白E基因多态性与老年人血脂、血压的相关性研究时宝庆;吕全军;李文杰;孙锦峰【期刊名称】《中国老年学杂志》【年(卷),期】2006(26)1【摘要】目的探讨载脂蛋白E(ApoE)基因多态性与老年人血脂、血压的关系.方法采用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性分析方法(PCR-RFLP)测定252例老年人的ApoE基因型.结果在不同基因型组间,收缩压水平按E3/4+E4/4＞E3/3＞EW2/2+E2/3顺序递减(P＜0.05).而舒张压水平在不同基因型组间无差异(P＞0.05);总胆固醇(TC)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平均按E3/4+E4/4＞E3/3＞E2/2+E2/3顺序递减(P＜0.05),甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平在各组间比较无差异(P＞0.05).结论ApoE基因多态性影响老年人血脂血压水平,ε4等位基因携带者除具有较高的TC、LDL-C水平外,还有较高的收缩压水平.【总页数】3页(P19-21)【作者】时宝庆;吕全军;李文杰;孙锦峰【作者单位】郑州大学公共卫生学院营养与食品卫生学教研室,河南,郑州,450052;郑州大学公共卫生学院营养与食品卫生学教研室,河南,郑州,450052;郑州大学公共卫生学院营养与食品卫生学教研室,河南,郑州,450052;郑州大学公共卫生学院营养与食品卫生学教研室,河南,郑州,450052【正文语种】中文【中图分类】R544.1【相关文献】1.载脂蛋白A5启动子-1131T＞C及56C＞G基因多态性与脑梗死血脂水平的相关性研究 [J], 洪雁2.载脂蛋白E基因多态性与血脂水平的相关性研究 [J], 张强3.载脂蛋白E基因多态性与血脂及动脉粥样硬化相关性研究进展 [J], 石佳鹭4.载脂蛋白E基因多态性与脑梗患者年龄和血脂的相关性研究 [J], 刘淑静;常欣魁;陈柯霖;张丽敏;司学众;张国军5.北京健康人群载脂蛋白A－Ⅳ基因多态性与血脂脂蛋白和载脂蛋白A－Ⅰ、A－Ⅳ水平相关性研究 [J], 王中燕;许漫;余铭鹏因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
载脂蛋白E基因多态性对8～12岁肥胖儿童血脂的影响
载脂蛋白E基因多态性对8～12岁肥胖儿童血脂的影响张晓;夏光;麦根荣【期刊名称】《中华国际医学杂志》【年(卷),期】2001(001)004【摘要】目的研究载脂蛋白E(APOE)基因多态性对单纯肥胖儿童血脂的影响.方法检测来自本地两所小学年龄在8～12岁的108例肥胖儿童的血脂,并使用多聚酶链反应检测其APOE基因型.结果不同APOE基因型间血脂明显不同(P＜0.01).与E3/3基因型相比,E3/4和 E4/4基因型TC、LDL-C显著增高(P＜0.01),且E4/4基因型TG、APOB亦显著增高(P＜0.05);E2/3基因型则显示了较高的APOA1和TG;各基因型间高密度脂蛋白胆固醇无显著性差异(P＞0.05).多元回归分析表明ε3和ε4等位基因与TC正相关,且ε4等位基因与LDL-C正相关.结论 APOE基因多态性对肥胖儿童血脂的影响在本地肥胖儿童中存在.【总页数】3页(P312-314)【作者】张晓;夏光;麦根荣【作者单位】武汉大学人民医院儿科,中国武汉,430060;武汉大学人民医院儿科,中国武汉,430060;武汉大学人民医院儿科,中国武汉,430060【正文语种】中文【中图分类】R589.2【相关文献】1.汉族人载脂蛋白E基因多态性对血脂,载脂蛋白和脂慢白（a）水平的影响 [J], 鄢盛恺;周新2.瘦素抵抗与载脂蛋白E基因多态性对儿童血脂的影响 [J], 郎琼;刘长云;陈雪;李梅;丁文玲;吴春友3.湖北省松滋市7～12岁单纯性肥胖儿童血清25羟基维生素D水平与其血脂关系的研究 [J], 向敏; 佘晓卉; 高鹭云; 李静; 曹黎4.载脂蛋白E基因多态性对儿童血脂的影响 [J], 张晓;麦根荣;江钟炎5.济宁市7～12岁肥胖儿童血脂含量的调查 [J], 庞维秋;张天丽因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
北京自然人群载脂蛋白E基因多态性频率分布及与血脂关系研究
北京自然人群载脂蛋白E基因多态性频率分布及与血脂关系研究黎旭;赵冬;刘静;刘飒;刘军;秦兰萍;吴兆苏【期刊名称】《心肺血管病杂志》【年(卷),期】2002(021)004【摘要】目的:本文旨在探讨apoE基因多态性对中国人群血脂水平的影响,以期为进一步研究提供基础和线索.方法:我们进行了大样本北京自然人群横断面研究,应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性技术(PCR-RFLP)进行apoE基因分型,分析人群apoE基因频率分布特点并比较不同apoE基因型血脂水平及各种异常脂血症的患病率.结果:1. 我国北京自然人群中存在6种基因型,其中以ε3/3为主,占总基因频率的65.6%;人群中ε2、ε3、ε4频率分别为9.1%、81.2%和9.7%,男女基因频率无显著差异;2. apoE基因多态性对 LDL-C影响最强,LDL-C血浆水平ε2/2最低,ε4/4最高,ε3/3居中; 3. ε2/2者血脂水平最具特征性:与ε3/3相比,LDL-C明显减低,HDL-C、VLDL-C有增高趋势;4.ε2/3高LDL-C血症患病率减低;ε3/4低HDL-C血症合并高TG血症患病率增高.结论:我国人群apoE 基因多态性频率分布有其自身特点,并与血脂代谢密切相关.【总页数】5页(P193-197)【作者】黎旭;赵冬;刘静;刘飒;刘军;秦兰萍;吴兆苏【作者单位】100029,北京市心肺血管疾病研究所流行病研究室;100029,北京市心肺血管疾病研究所流行病研究室;100029,北京市心肺血管疾病研究所流行病研究室;100029,北京市心肺血管疾病研究所流行病研究室;100029,北京市心肺血管疾病研究所流行病研究室;100029,北京市心肺血管疾病研究所流行病研究室;100029,北京市心肺血管疾病研究所流行病研究室【正文语种】中文【中图分类】R54【相关文献】1.北京汉族人群载脂蛋白AI基因多态性与血脂水平关系的研究 [J], 王绿娅2.昆明地区汉族人群载脂蛋白B基因多态性频率分布与高脂血症关系研究 [J], 钱净;胡大春;赵晓丽;邵剑春3.北京地区55岁及以上人群载脂蛋白E基因多态性分布特点及其与血脂的关系[J], 关绍晨;杨静芳;汤哲;吴晓光;刁丽君;刘宏军;孙菲;陈彪4.北京自然人群载脂蛋白E基因多态性频率分布研究 [J], 黎旭;赵冬;刘静;刘飒;刘军;秦兰萍;吴兆苏5.北京健康人群载脂蛋白A－Ⅳ基因多态性与血脂脂蛋白和载脂蛋白A－Ⅰ、A－Ⅳ水平相关性研究 [J], 王中燕;许漫;余铭鹏因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
载脂蛋白E基因多态性对血脂水平及益气活血化痰法调脂疗效影响的研究
载脂蛋白E基因多态性对血脂水平及益气活血化痰法调脂疗效影响的研究袁玉娇;杨惠民;韩丽蓓;梁晋普【期刊名称】《北京中医药》【年(卷),期】2009(28)11【摘要】目的探讨载脂蛋白E(ApoE)基因多态性对高脂血症痰瘀证患者血脂水平及药物调脂疗效的影响。
方法将206例高脂血症痰瘀证患者随机分为试验组和对照组,运用聚合酶链式反应--限制性片段长度多态性技术(PCR-RFLP)检测和分析其ApoE基因分型,同时检测其基线血脂水平,试验组给予益气活血化痰之调脂通脉颗粒治疗,对照组给予血脂康胶囊治疗,4周后再次检测其血脂水平。
结果206例患者基线血脂低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平,按照ApoE3/4>E3/3>E2/3的规律逐渐降低,3种基因型比较差异有统计学意义(P<0.01)。
试验组ApoE3/4基因型患者与ApoE2/3、ApoE3/3基因型患者比较,LDL-C降低改善率最高(P<0.01),ApoE2/3基因型患者与ApoE3/3、ApoE3/4基因型患者比较,高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)升高改善率最大(P<0.05)。
对照组血脂改善率,3种基因型比较差异无统计学意义(P>0.05)。
结论ApoE基因多态性影响高脂血症痰瘀证患者基线血脂水平,并对高脂血症痰瘀证患者所采取的益气活血化痰法调脂治疗反应存在差异。
【总页数】3页(P835-837)【关键词】ApoE基因多态性;调脂疗效;益气活血化痰法;高脂血症;痰瘀证【作者】袁玉娇;杨惠民;韩丽蓓;梁晋普【作者单位】北京市崇文区第一人民医院中医科;北京中医药大学东直门医院老年病科【正文语种】中文【中图分类】R587.2;R259.414【相关文献】1.汉族人载脂蛋白E基因多态性对血脂,载脂蛋白和脂慢白（a）水平的影响 [J], 鄢盛恺;周新2.载脂蛋白B基因多态性对阿托伐他汀调脂疗效的影响 [J], 范蕾;宋洪涛;盖晓波;夏向南3.载脂蛋白E基因多态性对高脂血症患者血脂浓度及应证复方中药调脂疗效的影响[J], 赵丹丹;杨惠民;宋剑南;金红;牛晓红;陈冰4.载脂蛋白E基因多态性对血脂康胶囊调脂作用的影响 [J], 蒋卫民;赖仁胜;陈晓虎;唐蜀华5.载脂蛋白E基因多态性对高脂血症痰瘀互阻证患者血脂浓度及应证方药调脂疗效的影响 [J], 赵丹丹;杨惠民;宋剑南;金红;牛晓红;陈冰因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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肥胖儿童Apo E基因多态性与其血脂PCR RFLP分析刘长云1,孙 未2,刘红英1,李伟华1,季加芬1,张培森1(1潍坊医学院附属医院,山东潍坊 261031;2青岛市儿童医院)[摘 要] 目的 探讨单纯性肥胖儿童载脂蛋白(Apo)E基因多态性的分布及其对血脂、脂蛋白、载脂蛋白的影响。
方法 选择6~14岁单纯性肥胖儿童40例和健康儿童42例。
受试者禁食12h,抽取外周静脉血,测定血清中甘油三酯(TG),总胆固醇(TC),高密度脂蛋白胆固醇(HDL C),低密度脂蛋白胆固醇(LDL C),载脂蛋白A1 (Apo A1),载脂蛋白B100(Apo B100)浓度。
应用改良的聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PC R RFLP)分析及聚丙烯酰胺凝胶电泳方法对单纯性肥胖及健康儿童Apo E基因型进行分析。
结果 本实验检出4种Apo E基因型,健康及肥胖儿童Apo E等位基因频率分布不均,以 3为最常见。
与健康儿童比较,肥胖儿童 4等位基因频率增高,差异有显著性(P<0.05)。
Apo E基因多态性影响健康及肥胖儿童的血脂水平。
结论 单纯性肥胖儿童有Apo E基因多态性的变化,且明显影响小儿血浆脂类代谢。
[关键词] 胆固醇;载脂蛋白E;等位基因;肥胖症;儿童[中图分类号] R723.14 [文献标识码] A [文章编号] 1004 3101(2003)05 0329 04The PCR RFLP Analysis to the Apolipoprotein E Polymorphism in Children with Sim ple Obesity,and the Association of the Genotype with the Lipid MetabolismLIU Chang yun1,S UN Wei2,LIU Hong yin g1,LI Wei hua1,JI Jia fen1,Z HANG Pei sen1(1The Aff iliate d H ospital o f Wei f an g Medical Colle ge,Wei fang 261031,China;2QingDao Children H osp ital)[ABSTRAC T] Ob j ective To investigate the distri bu tion of apolipoprotein(apo)E polymorphism and the association of Apo E genotypes with plasma lipids lipoprotein and apolipoprotein i n children with si mple obesity,and to provide a theoretical basis for the prevention of C HD.Methods 40children with si mple obesi ty and42healthy children from6to14years old were chosen as obesity group and control group.Seru m tri glyceride(TG),total choles terol(TC),high density lipoprotein choles terol(HDL C),low density lipoprotein cholesterol(LDL C),apolipoprotein A1(Apo A1),apolipoprotein B100(Apo B100)were measured after they fasted for12hours.Polymerase chain reaction restricted fragments length polymorphis m(PCRRFLP),polyacrylamide gel electrophoresi s,and silver staining technique were used for the detection of apolipoprotein E genotype.Results Four gen otypes of Apo E were detected,and their distribution was imbalanced.Most of them were pared with the con trol group,the frequency of 4allele in obesi ty group was hi gher(P<0.05).Apo E polymorp hism may affect plasma lipid levels of healthy and obesity children.Conclusion Children with simple obesity have di fferent patterns of Apo E polymorphism compared with healthy children.Apo E polymorphism may affect plas ma lipids metabolism.[KEY WORDS] Cholesterol;Apolipoprotein E;Alleles;Obesity;Child载脂蛋白(apolipoprotein,Apo)E是一种由遗传决定的具有多态性的蛋白质,由人类第19号染色体一个基因位点上的三个等位基因 2, 3, 4编码(位于19号染色体p13~q13区)[1],它有3种主要异构体,即E2, E3,E4,从而在血浆中形成常见的6种表型;Apo E4是动脉粥样硬化的危险因素之一,并且认为 4等位基因可能是冠状动脉粥样硬化性心脏病的重要遗传标记[2]。
本研究旨在通过聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性方法分析肥胖及健康儿童Apo E基因型,及其对血脂、脂蛋白、载脂蛋白的影响,为冠心病的早期预测、疾病预防提供理论依据。
1 材料和方法1.1 对象及标本来源 肥胖儿童选自儿科门诊、住院患儿及小学生体检时发现的肥胖者,临床上已排除与329潍坊医学院学报 2003年 第25卷 第5期[基金项目] 山东省卫生厅科研基金资助课题(课题编号:2001CA1CCB8)[作者简介] 刘长云(1955年6月~),男(汉族),山东省寿光市人,教授。
主要研究方向:遗传与优生。
遗传、内分泌、代谢及中枢神经系统疾病有关的肥胖及肥胖综合征。
采用W HO推荐的儿童身高体重值为参照人群值[2],凡体重超过按身长计算的平均标准体重20%者定为单纯性肥胖儿童。
共收集40例,男27例,女13例,年龄6~14岁。
健康组儿童选自与肥胖组同期、同地区、学校体检的,排除了可引起血脂异常的全身性疾病的非肥胖及超重儿童。
受试者禁食12h,抽取外周静脉血7ml,其中5ml用0.5%EDTA Na2抗凝,用于抽提血细胞中的DNA,剩余2ml制备血清,置-86 冻存待测血脂。
1.2 PCR引物及主要试剂 参照文献[3]的PCR引物设计,并使用由上海生工生物公司合成引物。
上游引物序列为:5 AC AGAATTCGCCCCGGCC TGGTACAC 3下游引物:5 TAAGC TTGGCAC GGCTGTCCAAGGGA 3。
4种脱氧核苷酸(dNTP),Taq DNA聚合酶,Hha!核酸内切酶均购自上海生工生物工程技术服务有限公司(Sangon公司)。
1.3 实验方法1.3.1 基因组DNA抽提 抽静脉血5ml,用0.5%ED TA Na21ml抗凝,加入9倍体积STMT溶液充分混匀,置4 冰箱30min;按常规DNA提取方法进行;应用岛津UV 150可见紫外分光光度计检测基因组DNA的浓度和纯度。
1.3.2 目的DNA片段的PCR扩增 参照改良Hison 法进行PC R扩增[4]。
PCR反应体系为25 l,其中缓冲液2.5 l,MgCl21.2m mol,dNTPs各0.24mmol,引物各0.75 mol,Taq DNA聚合酶1u。
在PTC 100型扩增仪进行扩增。
扩增条件:先行95 预变性5min,行94 变性45s,62 退火45s,72 延伸60s,循环30次,最后, 72 延伸5min。
PCR产物检测:PCR产物用6%琼脂糖凝胶电泳分离后,硝酸银染色检测Apo E基因PCR 产物(244bp)。
Hha!限制性内切酶消化:酶切反应在25 l体系中进行,其中包括PCR产物19 l,限制性内切酶!1 l(10u l)10∀缓冲液2.5 l,混匀后置37 水浴,消化4h,然后置-20 终止酶切。
1.3.3 全套血脂检测 #总胆固醇(TC)的检测:采用胆固醇氧化酶-过氧化物酶终点法。
∃甘油三酯(TG)的检测:采用甘油磷酸氧化酶-过氧化物酶终点法。
%高密度脂蛋白胆固醇(HDL C)的检测:采用直接测定法。
&低密度脂蛋白胆固醇(LDL C),Apo A1, Apo B100的检测:采用免疫透射比浊法。
以上试剂盒均由北京利德曼生化技术有限公司提供,在同一台日本产AU600Olympus全自动生化分析仪上进行。
1.3.4 等位基因频数计算 采用平衡法[5]: 2=Apo E2 2+1 2(Apo E2 3+Apo E2 4), 3=Apo E3 3+1 2 (Apo E2 3+Apo E4 3), 4=Apo E4 4+1 2(Apo E4 3+ Apo E4 2)。
1.3.5 统计学处理 所有计量资料均采用均数∋标准差表示。
组间比较采用t检验或方差分析。
分类资料组间比较采用2检验。
2 结果2.1 聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR RFLP)分析 Apo E是一种具有多态性的蛋白质,有3种常见的异构体,即E2,E3和E4。
由于Hha!内切酶只能内切编码精氨酸的核苷酸顺序GCGC,导致酶切片段不同,各Apo E基因型酶切片段分别为:E4 4: 35bp,38bp,48bp,72bp;E3 3:35bp,38bp,48bp,91bp;E2 2:38bp,83bp,91bp;E4 3:35bp,38bp,48bp,72bp,91bp; E2 3:35bp,38bp,48bp,83bp,91bp;E4 2:35bp,38bp, 48bp,72bp,83bp,91bp。
本实验未检出Apo E4 4和Apo E2 2基因型。
2.2 健康及肥胖儿童Apo E基因型分布和等位基因频数的比较 见表1,2。