转基因玉米的多重PCR-毛细管电泳-激光诱导荧光检测方法研究
PCR扩增检测转基因大豆、玉米
【实验步骤】 基因组DNA浓度和纯度的鉴定
取5μL样品溶于95μL三重蒸馏水中，用 Biophotometer分 析DNA的浓度，通过它对提取大豆DNA测OD值。并记 录数据。由OD260nm/OD280nm判定基因组DNA的浓度， 其比值在1.7~2.0之间较好，符合PCR检测要求。
聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction, PCR)是 一种选择性体外扩增DNA的方法，其基本原理类 似 于 DNA 的 天 然 复 制 过 程 。 它 包 括 : 变 性 (Denature) 、 退火(Anneal)和延伸(Extension)三个基
外源基因( EPSPS)特异性扩增 12 3 4567M 12
外源终止子(NOS) 特异性扩增
外源启动子(CaMV35S)特 异性扩增
1 未加模板对照 2 转基因大豆、玉米 3~7 非转基因大豆、玉米
PCR假阳性结果 1． 引物设计不当，应调换引物 2． 循环参数不合适，导致非特异性扩增 3． 靶序列的交叉污染
大豆凝集素(Lectin)基因、玉米特异性内源基
因IVR为内参 ？
西医学是最近三四百年来建立在解 剖学、 生物学 及现代 科学技 术基础 上、发 展起来 的一门 以“解 剖人、 肉体人 ”为概 念的、 新兴的 现代医 学科学 理论体 系。主 要采用 科学实 验方法 ，从宏 观到微 观，直 至目前 的分子 基因层 次水平 ，发展 极为迅 速，超 过其它 任何一 门医学 科学， 成为世 界医学 史上的 主流。 医学、比较医学、后现代医学、行为 医学等 所谓“ 医学” ，都称 不上一 门独立 的医学 科学， 关于这 一点在 灵魂医 学有关 章节中 将有相 关点评 。
【实验步骤】
大豆、玉米DNA 提取--改良的CTAB法
玉米转基因检测工作总结
玉米转基因检测工作总结
近年来，随着生物技术的发展，转基因作物的种植越来越普遍。
而玉米作为世
界上种植面积最大的转基因作物之一，其转基因检测工作也变得愈发重要。
本文将对玉米转基因检测工作进行总结，以期为相关领域的研究和实践提供参考。
首先，玉米转基因检测工作的目的是为了确保市场上销售的玉米产品符合相关
的法律法规和标准。
通过检测玉米中是否含有转基因成分，可以保障消费者的权益，同时也有助于监管部门对市场上的玉米产品进行有效管理。
其次，玉米转基因检测工作通常包括样品收集、DNA提取、PCR扩增、基因
分型和数据分析等环节。
样品收集是整个检测工作的第一步，必须确保样品的来源真实可靠。
DNA提取是提取玉米样品中的基因组DNA，为后续的PCR扩增提供
原料。
PCR扩增是通过特定引物扩增目标基因片段，从而检测玉米中是否含有转
基因成分。
基因分型和数据分析则是对PCR扩增产物进行分析和鉴定，最终确定
样品中是否含有转基因成分。
最后，玉米转基因检测工作还需要关注一些问题。
例如，样品收集的时机和方法、DNA提取的纯度和质量、PCR扩增的引物设计和反应条件、基因分型的准确
性和灵敏度等都需要认真考虑和解决。
同时，检测结果的解读和报告也需要准确和详尽，避免因为技术误差或其他原因导致的错误判断。
总的来说，玉米转基因检测工作是一项复杂而重要的工作，涉及到多个环节和
技术。
只有严格按照标准操作流程，确保每个环节的准确性和可靠性，才能够得到真实有效的检测结果。
希望本文的总结能够为相关领域的研究和实践提供一定的参考和借鉴。
多重荧光PCR-毛细管电泳进行微卫星不稳定性分析中的常见问题
PCR
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临 床 与 实验 病 理 学 杂 志
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3 收稿 1 期
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基于激光诱导荧光光谱技术检测花生中黄曲霉毒素B_(1)
基于激光诱导荧光光谱技术检测花生中黄曲霉毒素B_(1)王成宏;何学明;都立辉;沈飞【期刊名称】《食品安全质量检测学报》【年(卷),期】2024(15)8【摘要】目的探究激光诱导荧光(laser induced fluorescence,LIF)技术检测花生中黄曲霉毒素B_(1)(aflatoxin B_(1),AFB_(1))的可行性,定性和定量分析花生中的AFB_(1)。
方法制备不同浓度梯度的污染花生,经LIF系统采集荧光光谱,平滑后分析光谱数据结构。
基于全波长光谱使用5种不同建模方法对污染花生定性判别,采用偏最小二乘法回归(partial least squares regression,PLSR)和BP神经网络(BP neural networks,BPNN)进行定量预测。
通过竞争性自适应重加权采样(competitive adaptive reweighted sampling,CARS)提取特征波长,研究其对定性和定量预测的影响。
结果对于全波长光谱数据,线性核函数的支持向量机[support vector machine with linear kernel function,SVM(Linear)]建立的判别模型效果最优,预测正确率100.00%。
PLSR和BPNN均获得较好的定量预测效果,剩余预测偏差(residual predictive deviation,RPD)>3.0,检出限(limit of detection,LOD)<20μg/kg;对于特征光谱数据,SVM(Linear)定性判别预测正确率93.94%,F1值为0.94,受试者工作特征(receiver operating characteristic curve,ROC)曲线下面积(area under the curve,AUC)为0.989。
建立的PLSR模型性能优于未提取特征波长的两种定量模型,RPD为3.36,LOD为14.76μg/kg。
多重荧光定量PCR法同时定量检测4
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分析检测
①在液化氮中将组织块研磨粉碎，取 50 mg 放入 2 mL 微量 离心管中。②加入 600 µL 的 FL Buffer 和 10 µL PK solution （加入 2 µL 的 100 mg/mL RNaseA）, 混合均匀，于 56 ℃温 浴 15 min， 然 后 14 000 r/min 离 心 3 min。 ③ 取 500 µL 上 清液，至新的 2 mL 离心管中，加入 700 µL Binding Buffer 和 300 µL 无水乙醇，颠倒混匀。④将混合液体转移至核 酸 纯 化 柱。 于 10 000 r/min 离 心 1 min， 并 弃 去 接 液 管 中 的液体。⑤向核酸纯化柱中加入 500 µL 的 PW Buffer，于 10 000 r/min 离心 30 s，并弃去接液管中液体。⑥向核酸纯 化柱中加入 600 µL 的 Wash Buffer，于 10 000 r/min 离心 30 s， 并弃去接液管中液体。⑦再次将核酸纯化柱于 10 000 r/min 离心 1 min，并将核酸纯化柱转移至一个新的 1.5 mL 离心管。 ⑧向核酸纯化柱中加入 100 µL 的 Elution Buffer，并于室温 放置 1 min。⑨ 10 000 r/min 离心 1 min, 并弃去核酸纯化柱， 1.5 mL 离心管中液体含有 DNA。用微量紫外分光光度计测 量 260 nm 和 280 nm 处的吸光度 A260 和 A280，以 A260/A280 的 比值确定 DNA 的纯度并计算其浓度。 1.2.2 多重实时荧光 PCR 反应体系与条件
转基因检测报告
转基因检测报告1. 背景介绍转基因是指通过人工手段将外源基因导入到目标生物体内，并使其在细胞内稳定表达的过程。
转基因技术被广泛应用于农业、医药、能源等领域。
然而，转基因食品引起了广泛的争议和关注，因为人们担心其中可能存在的风险和危害。
为了保障食品的安全性和可信度，转基因检测成为了必要的手段。
2. 检测目的转基因检测的主要目的是确认食品样品是否含有转基因成分。
通过检测食品中是否存在外源基因，可以评估其合法性和安全性。
此外，转基因检测还可以用于追溯产品的来源和生产过程。
3. 检测方法3.1 PCR法PCR（聚合酶链反应）是一种常用的转基因检测方法。
它利用特定引物与待检测样品中的目标基因序列进行扩增，通过检测扩增产物的存在与否来判断目标基因是否存在。
PCR法具有灵敏度高、特异性好的特点，适用于转基因检测中的早期筛查。
3.2 荧光定量PCR法荧光定量PCR法是PCR法的一种改进技术，可实现对扩增产物的实时监测和定量分析。
通过添加荧光标记到PCR反应体系中，使扩增产物在经过每一轮PCR 循环后产生特定的荧光信号。
荧光定量PCR法具有灵敏度高、准确性好、所需样本量少等优点，被广泛应用于转基因检测中。
3.3 基因测序技术基因测序技术是目前转基因检测中最准确、最可靠的方法之一。
通过对待检测样品中的基因进行全面的测序分析，可以发现并确认其中是否存在外源基因。
基因测序技术包括Sanger测序、高通量测序等多种方法，具有高度灵敏性和特异性。
4. 实验流程转基因检测的实验流程分为样品处理、DNA提取、PCR扩增、分析与解读等多个步骤。
4.1 样品处理：将待检测样品按照一定规则进行分组和标记，确保实验的准确性和可靠性。
4.2 DNA提取：从样品中提取出目标DNA，常用的DNA提取方法包括酚-氯仿法、磁珠法等。
4.3 PCR扩增：根据检测需要，设计合适的引物和扩增条件，进行PCR反应，扩增待检测目标基因。
4.4 PCR产物分析：通过凝胶电泳、荧光定量PCR等方法对PCR产物进行分析和检测。
基于三引物荧光PCR-毛细管电泳法的FMR1基因突变检测技术建立及其在自闭症辅助诊断中的应用
基于三引物荧光PCR-毛细管电泳法的FMR1基因突变检测技术建立及其在自闭症辅助诊断中的应用孙莉;杨琳艳;叶倩平;杨旭;杨学习【摘要】目的对自闭症患者FMR1基因5'非编码区CGG重复序列及重复数进行检测,探索检测脆性X综合征的新方法. 方法应用三引物荧光PCR-毛细管电泳法(Qseq100TM全自动核酸分析系统检测)对111例自闭症患者进行筛查,检测其FMR1基因5'非编码区CGG序列,计算CGG重复数,并与ABI 3500Dx基因分析仪毛细管电泳测序法进行结果比较验证. 结果 111例临床检测为自闭症的样本中,有2例为FMR1前突变携带者,一例为中间型.与3500Dx毛细管电泳测序结果一致. 结论三引物荧光PCR-毛细管电泳法能够用来检测FMR1基因5'非编码区CGG重复序列,在脆性X综合征发病机制及大规模携带者筛查方面都具有一定的应用价值.【期刊名称】《分子诊断与治疗杂志》【年(卷),期】2017(009)005【总页数】6页(P319-324)【关键词】自闭症;FMR1基因;脆性X综合征;三引物荧光PCR-毛细管电泳【作者】孙莉;杨琳艳;叶倩平;杨旭;杨学习【作者单位】华北石油管理局总医院检验科,河北,任丘062552;广州市达瑞生物技术股份有限公司,广东,广州510665;广州市达瑞生物技术股份有限公司,广东,广州510665;南方医科大学基础医学院,广东,深圳518110;南方医科大学检验与生物技术学院,广东,广州510515【正文语种】中文脆性X综合征是X连锁不完全显性遗传病［1⁃2］，是最常见的遗传性智力障碍类型之一。
其致病基因为FMR1（fragile X mental retardation 1），位于X染色体上的Xq27.3［3］，该病主要是由于FMR1基因5′非编码区的CGG重复序列动态突变导致。
根据CGG重复数不同可以分为4种类型：全突变（＞200个CGG重复），前突变（55～200个CGG重复），中间型突变（45～54个CGG重复）和正常型（＜45个CGG重复）［4］。
gexp多重rt-pcr技术在儿童呼吸道病毒感染病原体检测中...
GeXP多重RT-PCR技术在儿童呼吸系统病毒感染病原体检测中的应用于天晓石仲仁李贵霞郭巍巍杨硕王乐【摘要】目的利用GeXP多重基因表达遗传分析系统联合多重逆转录-聚合酶链反应(mRT-PCR)方法同时检测20种呼吸道病毒并探讨其在儿童呼吸系统病毒感染病原体检测中的价值。
方法收集2013年3月-2014年11月在河北省儿童医院呼吸科住院的1305例，年龄0-6岁呼吸系统病毒感染的患儿咽拭子和痰液样本，提取病毒DNA/RNA，利用mRT-PCR扩增技术，通过GeXP分析平台进行毛细管电泳，同时检测20种呼吸道病毒并评价其检测效能。
结果1305例呼吸系统病毒感染患儿病毒检出阳性率为58.77%。
（1）病毒种类：呼吸道合胞病毒阳性率最高（17.32%）；其次，副流感病毒3型，阳性率为16.02%；鼻病毒、腺病毒、博卡病毒和副流感病毒1型的阳性率分别为11.95%、5.06%、3.14%和2.07%。
此外，同时感染两种、以及两种以上病毒的混合感染患儿为92例，阳性率7.05%。
（2）患儿年龄：1-2岁患儿病毒检出率最高（83.61%）；5-6岁患儿病毒检出率最低（39.13%）。
结论利用GeXP分析平台联合多重RT-PCR技术同时检测20种呼吸道病毒，具有高通量、高灵敏度、特异性强且检验速度快等优点，其高效性能够充分满足临床对呼吸道病毒检测的要求，并为儿童急性呼吸道感染的防治提供数据资料，从而指导临床诊断和治疗，避免抗生素的滥用。
【关键词】GeXP分析平台；多重RT-PCR；儿童呼吸系统感染The application of GeXP based multiplex RT-PCR assay for the detection of pathogens in children with viral infection of the respiratory system Yu Tianxiao*,Shizhongren, Li Guixia, Guo Weiwei, Yang Shuo, Wang Le. *Pediatric Research Institute, Children’s Hospital of Hebei Province，Shijiazhuang 050031，chinaCorresponding author：Li Guixia，Email：138****************【Abstract】Objective Combined with the mR T-PCR (multiplex Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction), we used the GeXP (genomelab genetic analysis system) assay to simultaneously detect twenty kinds of virus from respiratory tract; the value of conducting this method in the children respiratory system was also discussed. Methods From 2013-3 to 2013-11, 1305 inpatient children (0-6 years olds) of Children’s Hospital of Hebei Province were recruited. The throat swab and sputum sample s were collected to extract the viral DNA or RNA, mRT-PCR amplification and GeXP capillary electrophoresis were used to test 20 viruses and evaluate the testing efficiency. Results Among 1305 children, infected by respiratory tract virus, the positive relevance rate was 58.77%. (1) Kinds of virus: the highest positive relevance rate was observed on the respiratory syncytial virus (RSV, 17.32%); the parainfluenza virus 3 (PIV-3, 16.02%), human rhinovirus (HRV, 11.95%), adenovirus (ADV, 5.06%), human bocavirus (HBOV, 3.14%) and the parainfluenza virus 1 (PIV-1, 2.07%) were figured out separately; additionally, the positive mixed infection rate was 7.05% (92 children). (2) Ages of children: the highest positive relevance rate was observed in 1-2 years old children (83.61%); the lowest rate was detected in 5-6 years old children (39.13%). Conclusion the combination assay (GeXP with mRT-PCR) we used to examine twenty respiratory tract viruses has the advantages including high throughput, sensitivity, specificity and speed, etc. Its high efficiency could satisfy the clinical examining demand, provide the prevention and curing data on acute respiratory tract infection, there by, conduct the clinical diagnosis and treatment and avoid the antibiotic abusing.【Key words】GeXP; mRT-PCR; Respiratory system infection in children作者单位：050000 石家庄，河北省儿童医院儿研所（于天晓石仲仁李贵霞郭巍巍杨硕王乐）通讯作者：李贵霞，电子邮箱：138****************.急性呼吸道感染（ARTI）是世界范围内婴幼儿发病和死亡的重要病因，ARTI的病原学十分复杂，病毒在儿童急性呼吸道感染中占绝大多数(高于90％)，其中约有30％的病例虽然被认为是由病毒感染引起，但是并未阐明其确切病原[1]。
多重PCR在质粒拷贝数检测中的应用
在分子 生 物 技 术 方 面，大 肠 杆 菌 系 统 作 为 重 要 的 宿主以其易于培养、遗传背景清楚、操纵简便等优点已 被广泛应用 于 大 量 重 要 基 因 的 克 隆 与 表 达，但 由 于 不 同质粒载体 在 宿 主 菌 中 存 在 松 弛 型 和 严 紧 型 调 控，使 得不同宿主 细 胞 中 质 粒 拷 贝 数 存 在 明 显 的 差 异，其 中 多拷贝质粒在每个细胞可以达几十乃至几百份质粒拷 贝，少的则只有一到几份拷贝［1-2］。由于不同质粒拷贝 数将严重制约目的基因的表达调控进而影响基因产物 的产率，因而发展一种经济合理、操作简便的质粒拷贝 数鉴定方法不仅可以加速基于原核表达体系进行基因 表达调控的 研 究，而 且 可 以 显 著 节 约 实 验 研 究 的 成 本 和时间。虽然利用传统 Southern blot 或 Dot blot 方法以 及借助于大型设备如高效液相色谱或毛细管电泳以及 Real-time PCR 等可以实现质粒拷贝数的测定，但由于 存在操作复杂、耗时长、成本高以及对于仪器的要求高
表 1 多重 PCR 反应的引物序列对 Table 1 Primer sequences for amplifying target
genes by multiplex PCR
靶序列
引物序列 （ 5'→3'）
预期扩增长度 （ bp）
GapA
上游： AGTTGGTGGTGCAGGAAGCGTT
138
下游： AACACATCACCGCTGGTGCGAA
收稿日期： 2011-01-05 修回日期： 2011-03-29 * 国家“973 ”计 划 （ 2006CB504100 ） 、国 家 科 技 重 大 专 项 课 题
转基因玉米的鉴别方法
转基因玉米的鉴别方法转基因玉米的鉴别可以采用许多复杂的技术，如分子标记分析，流式细胞术，实时定量PCR（qPCR）分析，蛋白分析，原位杂交等。
不过，可能也需要结合抗性检测或外部鉴别等方法。
其中常用的鉴定方法包括：（1）PCR 技术：它是利用脱氧核糖核酸（DNA）特异序列引物以及Taq 酶在反转录-聚合酶链反应（PCR）对转基因玉米的标志基因位点进行检测的一种技术，可以在体外快速、准确的鉴定不同的转基因玉米类型。
（2）分子权重（w）分析：它是利用核酸序列的分子量（mw）或分子量值来鉴定转基因玉米的一种技术，通过比较转基因玉米基因组DNA的分子量值与对照群体完全不同的DNA分子量值之间的差异，从而可以发现转基因玉米特有的特征。
（3）DNA 指纹：它是一种利用一系列剪接酶来生成特定基因组DNA片段的技术，可以用来鉴别转基因玉米的品种和基因组结构的变化。
（4）十二碳溴代酰胺（DCC）方法：它是一种利用基因片段中的三磷酸核苷（ATP）酶活性来鉴定转基因玉米特征的技术，可以利用电泳和有机溶剂中和镜翻转作为反应条件来鉴定基因片段的ATP 活性构成和构成比例，从而进行结果判断。
二、临床应用检测转基因玉米被广泛应用于药用植物、食物营养研究中，以及转基因产品的供应链及食品中的安全性研究中。
1. 检测转基因玉米的安全性研究：主要用于分析转基因玉米中毒性和敏感性的机制、治疗疾病进程及临床应用前的安全性评价等。
2. 转基因产品的供应链管理及检测：通过检测转基因玉米以及它在从种子到品牌食品所处的每个环节可以发掘出转基因物质在食品中是否合法。
3. 营养食品研发：通过系统地建立序列和功能数据库以及筛选和鉴别转基因玉米中的营养物质和抗耐性基因，找到一种能健康滋养身体的有效营养物质，用于营养食品的研发。
转基因玉米的鉴别方法
转基因玉米的鉴别方法近些年来，转基因技术已被广泛应用于生物学研究领域。
其优势在于能够大大提高种子性状和抗病能力，以及更加持久地改变植物结构。
转基因玉米是它的一个典型例子。
为了更好地获得转基因玉米的品质，必须鉴别其真实身份。
本文讨论了转基因玉米的鉴别方法。
转基因玉米鉴别方法一般分为实验室和田间两种。
实验室鉴别方法包括PCR法、测序法以及染色体分析法。
PCR法是通过分析转基因玉米的特定DNA序列来鉴别其真实身份的方法。
测序法是通过翻译和序列比对来确定转基因玉米的真实身份的方法。
染色体分析法是通过检测植物染色体的数目和形状来判断转基因玉米的真实身份。
除了实验室鉴别方法外，转基因玉米还有一种田间鉴别方法。
这种方法需要在田间观察植株的形态特征，以及收获的玉米穗的外观特征。
一般来说，转基因玉米植株的外观特征有：籽粒大小明显较大，形状均匀，而非转基因玉米植株则有较多的尖尖玉；收获的玉米穗有非常明显的穗颈，籽粒大小更大，形状均匀，表皮较硬。
转基因玉米的鉴别方法在获取优良品种和植物生物学研究方面具有重要意义。
把实验室鉴别方法和田间观察方法多结合起来，可以更精确地鉴别转基因玉米的真实身份，从而获得较为优良的品种。
但是，无论实验室还是田间鉴别方法，都需要具备一定的专业技能才能得到准确结果，因此应该在有专业背景的人员的指导下进行。
综上所述，转基因玉米的鉴别方法一般分为实验室鉴别方法和田间鉴别方法。
实验室鉴别方法包括PCR法、测序法以及染色体分析法；田间鉴别方法主要是通过观察植株的形态特征以及收获的玉米穗的外观特征来鉴别。
为了获得更优良的品种，应该将实验室鉴别方法和田间观察方法结合，并在有专业背景的人员的指导下进行。
转基因玉米最简单的辨别方法
转基因玉米最简单的辨别方法什么是转基因玉米？转基因玉米是经过基因工程技术改变了其基因组的玉米品种。
通过引入外源基因，转基因玉米可以表现出与传统玉米不同的特点。
转基因技术的引入旨在改善玉米的耐虫性、耐草药性、抗病性等，以增加产量和改善农作物的质量。
转基因玉米的辨别方法由于转基因玉米与传统玉米的性状非常相似，传统的肉眼观察往往无法直接区分。
然而，科学家们通过不断的研究和发展，已经开发出一些有效的方法来鉴定转基因玉米。
以下是一些可以用于辨别转基因玉米的简单方法。
DNA检测方法通过检测玉米中的DNA序列，可以准确地判断玉米是否为转基因品种。
以下是一些常用的DNA检测方法：1.PCR（聚合酶链反应）：PCR是一种扩增DNA序列的技术，可以通过特定引物扩增转基因DNA的片段。
通过检测扩增产物的大小和特征，可以判断玉米是否为转基因品种。
2.实时荧光PCR：实时荧光PCR结合了PCR技术和荧光检测技术，可以在扩增过程中实时监测DNA的数量和特征。
通过比较样本和参考样品的荧光信号，可以判断玉米是否为转基因品种。
3.基因芯片技术：基因芯片技术利用微阵列芯片上固定的DNA探针，可以同时检测多个基因。
通过比较样本和参考样品的信号强度和特征，可以判断玉米是否为转基因品种。
蛋白质检测方法转基因玉米通常会在其基因组中表达外源基因，并产生相应的蛋白质。
通过检测玉米中的特定蛋白质，可以判断玉米是否为转基因品种。
以下是一些常用的蛋白质检测方法：1.ELISA（酶联免疫吸附试验）：ELISA是一种常用的免疫检测方法，可以通过特定的抗体检测目标蛋白质。
通过比较样本和参考样品的吸光度值，可以判断玉米是否含有转基因蛋白质。
2.质谱法：质谱法是一种分析样品中蛋白质的方法，通过测量蛋白质的质量和带电量，可以确定蛋白质的特征。
通过比较样品和参考样品的质谱图谱，可以判断玉米是否含有转基因蛋白质。
生理学和形态学特征除了分子方法外，还可以通过观察玉米的生理学和形态学特征来推测其是否为转基因品种。
毛细管电泳在玉米品种真实性鉴定中的应用
摘要：为了打击套牌侵权行为，利用毛细管电泳荧光标记检测技术，选用20对SSR 核心引物对从辖区门店抽检的6个玉米样品进行真实性鉴定，结果表明：1、2、3、4号样品20个位点均不存在差异，5、6号样品存在1个差异位点，为相似品种，这与所抽检样品不符，进一步确认可提交有资质的机构做进一步检测。
说明在没有标准品的情况下，利用毛细管电泳荧光标记检测技术可以初步对抽检样品进行真实性鉴定，初步判断门店销售的种子是否存在套牌侵权的行为。
关键词：玉米；SSR 标记；毛细管电泳；真实性毛细管电泳在玉米品种真实性鉴定中的应用高素伟 张连海 赵新宇（北京市通州区种子管理站，北京101117）目前，北京市各区县种子管理站通过田间小区种植来鉴定品种的真实性和纯度，时效性较差，也无法提前避免农民遭受损失。
SSR 分子标记技术能够对抽检的样品进行快速而准确的检测，保证品种的真实性[1]。
毛细管电泳主要应用于肽类、蛋白、核酸、离子和药物等的分离和测定，是以高压电场为动力，以毛细管为通道，依据样品中分子量或碱基逐一分开[2]，可以同时对多个样品、多个标记进行检测，大大提高了检测效率。
因此，在现有条件下，利用SSR 标记并结合毛细管电泳检测技术对抽检样品进行品种真实性鉴定是提高各区县种子站业务工作能力，确保种子市场安全的有效 方法。
本文利用毛细管电泳荧光标记法对本辖区不同门店内抽取的6个玉米样品进行检测，初步判断品种的真实性，对有疑问的样品提交有资质的检验机构做进一步检测。
1 材料与方法1.1 试验材料 供试材料为2017年3月份从辖区门店抽取的6份玉米样品，1：金博士郑单958；2：金 娃娃郑单958；3：中字牌郑单958；4：德农郑单958； 5：纪元1号；6：纪元1号。
1.2 基因组DNA 的提取 将抽检的6个玉米样品进行田间种植，在3叶期进行取样，每个样品取10个单株叶片，利用TIANGEN 的新型植物基因组DNA 提取试剂盒，按照操作规程提取DNA ，并用1.5%的琼脂糖凝胶电泳检测。
SSR标记荧光毛细管电泳在种子检测中常见问题分析
SSR标记荧光毛细管电泳在种子检测中常见问题分析
李巧英
【期刊名称】《中国种业》
【年(卷),期】2022()7
【摘要】SSR分子标记荧光毛细管电泳在农作物种子质量检测中常用于种子真实性检测、种子纯度鉴定和指纹数据库的构建。
试验过程中模板DNA浓度、特异峰型的统计分析以及仪器设备运行和维护、试验结果与指纹数据库的比对等关键环节都直接影响待测样品的结果判定。
就检测中遇到的问题进行分析,并提出相应的解决方法,以期为农作物种子质量检测荧光毛细管电泳技术平台提供参考。
【总页数】3页(P57-59)
【作者】李巧英
【作者单位】山西省种业发展中心
【正文语种】中文
【中图分类】TP3
【相关文献】
1.玉米品种SSR标记毛细管电泳荧光检测法与变性PAGE银染检测法的比较研究
2.利用SSR荧光标记毛细管电泳法检测蝴蝶兰组培突变体
3.烟草SSR荧光标记与毛细管电泳检测技术研究
4.基于EST-SSR荧光标记和毛细管电泳检测技术分析邵武碎铜茶群体遗传多样性与亲缘关系研究
5.基于EST-SSR荧光标记和毛细管电泳检测技术分析邵武碎铜茶群体遗传多样性与亲缘关系研究
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微流控芯片-激光诱导荧光快速检测4种食源性致病菌
微流控芯片-激光诱导荧光快速检测4种食源性致病菌李永新;黎源倩;渠凌丽;何成艳【期刊名称】《分析化学》【年(卷),期】2008(36)12【摘要】建立了食品中4种常见食源性致病菌的微流控芯片快速检测方法.根据副溶血弧菌的Vpara(16S-23s rDNA IGs)基因、沙门菌的 invA 基因、大肠杆菌0157:H7 的 rfb0157 基因和志贺菌的 ipaH 基因序列设计了4对特异性引物,对上述致病菌进行四重 PCR 扩增,采用微流控芯片-激光诱导荧光检测食品中4种常见致病菌的多重 PCR 扩增产物.优化了多重 PCR 扩增和微流控芯片电泳分离的实验条件.当芯片电泳的筛分介质 HPMC-50 浓度为2.2%、溴乙锭(EB)含量为3.75μmoL/L、电场强度为120 V/cm 时,pUC Mix DNA Marker-8和待测致病菌的多重PCR扩增产物可以实现基线分离,600 s内即可完成上述4种致病菌的同时检测,迁移时间的日内相对标准偏差为0.74%～2.09%.本方法能够检出1×102 cfu/mL的副溶血弧菌、沙门菌、大肠杆菌0157:H7和志贺菌.方法特异性高,所设计的引物在10种非目的菌株体系中均未见扩增的片段.将本法应用于食品中上述致病菌的测定,获得了满意的结果,为常见食源性致病菌的快速检测提供了一种新的可靠分析手段,对保障食品安全具有重要的现实意义.【总页数】5页(P1667-1671)【作者】李永新;黎源倩;渠凌丽;何成艳【作者单位】四川大学华西公共卫生学院卫生检验教研室,成都,610041;四川大学华西公共卫生学院卫生检验教研室,成都,610041;四川大学华西公共卫生学院卫生检验教研室,成都,610041;四川大学华西公共卫生学院卫生检验教研室,成都,610041【正文语种】中文【中图分类】O65【相关文献】1.多响应曲面优化-毛细管电泳-激光诱导荧光快速检测食源性致病菌 [J], 渠凌丽;黎源倩;郑波;何成艳;何玲;李永新2.应用液相芯片技术快速检测常见食源性致病菌的研究 [J], 于金辉3.激光诱导荧光光谱快速检测食源性致病菌 [J], 刘宇;李增威;邓志鹏;张庆贤;邹立扣MP微流控芯片快速检测三种食源性致病菌 [J], 鞠鹤鹏;戴菁;谢逸欣;郑婕;陈丽璇;陈洁;梁卫根5.用于3种食源性致病菌核酸提取的微流控芯片制备 [J], 曹宁;申炳阳;喻梓瑄;占太杰;周新丽因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
应用GeXP遗传分析系统检测病毒性脑炎患儿脑脊液中的人类鼻病毒
应用GeXP遗传分析系统检测病毒性脑炎患儿脑脊液中的人类鼻病毒王琼;林广裕;高珺;蔡晓莹;张银辉;陈洁玲;陆学东【摘要】Objective To investigate the relationship between the viral encephalitis in children with human rhi‐novirus(HRV) and the application value of the GenomeLab Gene Expression Profiler (GeXP) analyzer for the detec‐tion of HRV in the cerebrospinal fluid (CSF) of children patients with viral encephalitis .Methods 140 CSF speci‐mens from children patients with convulsions and fever admitted to the pediatric intensive care unit (PICU ) of the Second Affiliated Hospital of Medical College of Shantou University from January 2012 to December 2012 were col‐lected and tested for common respiratory viruses including HRV by using GeXP genetic analysis system .The HRV positive specimens were amplified by n ested RT‐PCR ,and the positive PCR products were sequenced .The resultant DNA sequences were aligned with the reference HRV sequence in GenBank .Results Totally 6 HRV positive speci‐mens were detected by GeXP genetic analysis system .Among them 4 specimens were HRV‐C genotypes showing 95 .8% ~ 98 .3% identity with reference sequences .The others were 1 specimen of HRV‐A and 1 specimen of HRV‐B genotype which show 96 .0% and 99 .0% identity with reference sequences respectively .Conclusion HRV is one of the pathogens causing viral encephalitis in children ;the GeXP genetic analysis system could be used as a rapid and high throughput detection tool for viral encephalitis etiology research .%目的：探讨儿童脑炎与鼻病毒的关系以及 GeXP 多重基因表达遗传分析系统在病毒性脑炎患儿脑脊液人类鼻病毒检测方面的应用价值。
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之 间．
１２ ２ 多 重 Ｐ Ｒ 反 应 体 系及 反 应 条 件 反 应 体 系 ：１×ｂｆｒ ． ｍ ｌＬ Ｍ Ｃ， ．０ｍ ｌＬ ．． Ｃ ｕ ｅ，３０ ｍ ｏ ｇ １，０３ ｍｏ ／ ／
乙锭 ） ，电泳缓 冲溶液 为 Ｔ Ｅ溶 液 （５ｍ ｌＬＴ ｓ ４ ｏ ＬＢ ｒ Ｂ ４ ｍｏ ｒ ， ５ｍｍ ｌ ｏ ｃ酸 ，１ｍ ｌＬＥ Ｔ ｐ ／ ｉ ／ ｉ ｍｏ Ｄ Ａ， Ｈ＝８５ ． ／ ．） 取 １ Ｌ多重 Ｐ Ｒ扩增产 物 ， ５０ｋ Ｏ Ｃ 在 ． Ｖ下 电动进样 １ ，并在 ５０ｋ ５Ｓ ． Ｖ下恒 压 电泳 ，用 ５３５ｎ ４． ｍ波 长 的激光 激发 ，在 ５０ｎ ９ ｍ波 长处检 测 Ｄ Ａ 片段 的相 对荧 光强度 ．电泳温度 为 ２ Ｎ Ｏ℃ ， 次 电泳后用 ０Ｏ 每 ．１
收稿 日期 ： ０ ６ｌ —３ ２ ０ 一ｌｌ ． 基金项 目：国家 自然科学基金（ 批准号 ： ０ ７ ６８ 和国家博士学科点基金 （ ３０ ０７ ） 批准 号： ０ ３ ６０ ２ ） ２０ ０ １０ ９ 资助 联 系人简介 ：黎源倩 （９ ６年 出生 ） 女 ，教授 ， １４ ， 博士生导师 ， 主要从事卫生检验学和仪器分析研 究．
的优 势．
本文 以转基 因玉 米 ＭＯ ８０为 研究 对 象 ，采用 多 重 Ｐ Ｒ技术 ，一次 Ｐ Ｒ反 应 同 时扩增 玉 米 的 内 Ｎ１ Ｃ Ｃ 源基 因 Ｉｖｒ ｓ、Ｃ ＭＶ３ Ｓ 动子 及外 源基 因玉米 热激 蛋 白 ７ ｎｅｔ ｅ ａ ５ 启 ａ ０内显 子 （ ｓ７ ｔ ｎ ） ＣｙＡ（ ） ｈｐ０ｉｒ １ 和 ｒｌ ｂ 抗 ｎｏ
诱导荧光快速检测转基因玉米的新方法．对影响多重 Ｐ Ｒ扩 增和毛细管 电泳的因素进行 了优化．在优化 的 Ｃ 条件下 ， 本方法可 以同时检测转基 因玉米样品 中 ３种外源基 因．经序列 测试证实 ，三 重 Ｐ Ｒ扩增 产物 的序 Ｃ 列与原基 因完全一致 ， 明扩增结果可靠．该 方法能检 出 ０ ０ ％ ＭＯ ８０转基 因玉米成分 ， 表 ．５ Ｎ１ 远低 于欧盟 对 转基 因食 品规定标识 的质量分数 阈值 （ ％） １ ．该方法对玉米及 其制 品的检测结果 与实时荧 光 Ｐ Ｒ方法 的检 Ｃ 测结果一致 ，与传统 的琼脂糖凝胶 电泳法相 比， 具有特异性高 、 快速及灵敏等优点 ， 用于玉米 中转基 因成 适 分以及转基因玉米 ＭＯ ８０品系 的快速筛选 、 Ｎ１ 鉴定 和检测 ， 能满足我 国实施转基 因食品标签法规的要求．
关键词 多重 Ｐ Ｒ 无 胶筛 分毛细管 电泳 ； Ｃ ； 激光诱导荧光检测 ； 转基因玉米
０ ５ ６７ 文献标识码 Ａ 文 章编 号 ０５ － ９ （０ ７ ０ —４ ８０ ２ １０ ０ ２０ ） ８１５ －６ ７ 中 图分 类 号
目前 ， 检测 转基 因食 品的检测 方 法主要 有两类 ：一类是 检测 外 源基 因表 达 的蛋 白质 的酶联 免疫 法 （ ＬＳ ， Ｅ ＩＡ） 该法 快速 且成本 低 ， 但难 于检 测 出加工 食 品 中 的转 基 因成分 … ．另 一 类是 目前应 用 得较 多 的聚合酶链 反应 （ ｏｙ ｒｓ ｈｉ ａｔｎ Ｐ Ｒ） Ｐｌ ａｅｃａ ｒ ｃｉ ， Ｃ 技术 ， 法 比 Ｅ ＩＡ法灵 敏 ， ｍｅ ｎｅ ｏ 该 ＬＳ 主要 用 于检测 转基 因食 品 中的外源 基 因序列 ．与单 重 Ｐ Ｒ相 比 ， Ｃ 多重 Ｐ Ｒ一次反应 就 能实现 多个基 因 的 同时扩增 ， 以提高 Ｃ 可 检测 效率 ， 缩短 分析 时 间和减少 受污染 的机会 ， 实现 转基 因食 品的快速 检测 ． 为 了标 识转基 因食 品 ， 常不仅要 筛选 和检 测 出转 基 因作 物 的 ３Ｓ启 动子及 Ｎ Ｓ终 止子 ， 通 ５ Ｏ 还要 鉴 定转 基 因农 作物 的品 系和定 量转基 因成 分 ．目前 所用 的定量 竞 争性 Ｐ Ｒ及 巢 式 Ｐ Ｒ等 方 法均 采用 传 Ｃ Ｃ 统 的凝胶 电泳法 ， 方法耗 时且 操作 繁琐 ．毛 细管 电泳 法是 近年 来发 展 迅 速 的分 离 分析 技术 之 一 ，比 该 凝胶 电泳 的分离 效能高 、 析速 度快 、样 品用 量少且 成本低 ， Ｄ Ａ限制性 片段 的分 析方 面具有 显著 分 在 Ｎ
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Ｖｏ ． １２８ ２ ０ ０ ７ 年 ８月
高 等 学 校 化 学 学 报
ＣＨＥ ＣＡＬ ＯＵＲＮＡＬ ＯＦ ＣＨＩ ＭＩ Ｊ ＮＥＳ ＵＮＩ ＲＳＴＩ Ｓ Ｅ ＶＥ Ｉ Ｅ
Ｎｏ ８ ．
１５ ４ ８～ｌ ６ ４ ３
转基 因玉米 的 多重 Ｐ Ｒ 毛细 管 电泳・ 光 Ｃ ・ 激 诱 导 荧 光检 测 方 法研 究
周 颖 ， 源倩 ， 晓方 黎 裴
（ 四川大学华西公共卫生学院 ， பைடு நூலகம்都 ６０ ４ ） １０ １
摘 要 采用三重 Ｐ Ｒ反应 ，同时 扩增 Ｃ ＭＶ ３ Ｓ启 动 子 、ｈｐ０ ｉｔ ｎ Ｃ ａ ５ ｓ７ ｎｒ ｌ和 ＣｙＡ（ ） 因之 间序 列 以及 ｏ ｒＩ ｂ 基
Ｉｖｒ ｓ ｎｅｔ ｅ基因 ， ａ 扩增产物用无胶筛分毛细管 电泳一 光诱 导荧光检测 ， 而建 立了多重 Ｐ Ｒ 毛细管电泳一 光 激 从 Ｃ一 激
抗虫转 基 因玉 米 ＭＯ ８ ０标 准参 考 物 （Ｒ Ｎ１ ＩＭＭ－１． ｔ ＭＯ含 量 依 次 为 ０， ．％ ， ．％ ，１ ， ４３ｓ ，Ｇ ｅ ０ １ ０５ ％ ２ 和 ５ ） 购 自瑞 士 Ｆｕａ公 司 ．羟丙 基 甲基 纤 维 素 （ Ｐ － ０ Ｓｇ ％ ％ 均 ｌｋ Ｈ ＭＣ４ ０， ｉ ０ ｍａ公 司 ） 溴 乙锭 （ ｉ ａ公 ， Ｓｇ ｍ
反应参 数 ： ５ｏ ９ Ｃ预变 性 ５ｍｎ ９ Ｃ变 性 ３ ， ８ｏ 火 ３ ， ２ｏ 延 伸 ５ ，共 ４ ｉ， ５ｏ ０Ｓ ５ Ｃ退 ０Ｓ ７ Ｃ ０Ｓ Ｏ个 循 环 ， ７ ２℃延 伸 ５ｒｎ 于 ４℃保存 ． ｉ， ａ
１２３ 多重 Ｐ Ｒ产物的毛细管 电泳分析 在电泳分析前 ， ．． Ｃ 先在毛细管柱 中注入质量分数为 ０ １ 的 ．％ 羟丙基 甲基 纤维 素 ，再充 以筛分介 质 ，即质 量分 数 为 ０８ 的羟 丙基 甲基纤 维 素 （ 有 ３５￣ ｏ Ｌ溴 ．％ 含 ． ｍｌ ／
Ｅ ｍａ ｌ ｉｕ ｎ ｉ ｎ ６＠ １ ３ ｃ ｒ — ｉ：ｌ ａ ｑ ａ ４ ｙ ６． ｏ ｎ
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Ｎ ． ｏ８
周
颖等：转基 因玉米的多重 Ｐ Ｒ 毛细管电泳． 光诱 导荧光检测 方法研 究 Ｃ一 激
１５ ４９
司） ；三羟 甲基 氨 基 甲烷 、乙 二 胺 四 乙 酸 及 硼 酸 （ 析 纯 ，上 海 化 学 试 剂 总 厂 ） ａ Ｎ 聚 合 酶 分 ；ＴｑＤ Ａ （ ／ Ｌ ｅｍ ｎａ） ｄ Ｔ ｓ Ｒ ｃｅ ； ｚｒ ５Ｕ Ｉ ，Ｆｒｅｔ ， Ｎ Ｐ（ ｏｈ ） Ｗｉ ｄ基 因组 核 酸 提 取 试 剂 盒 （ ｒｍｅａ公 司 ） ｒｔｎｓ ｘ ｓ ａ Ｐｏ ｇ ，Ｐｏ ｉａｅＫ ｅ
析．
２ 结 果 与讨 论
２１ 样 品 Ｄ ． ＮＡ提取
选用 Ｗｉ ｒ 因组 核酸提 取试剂 盒 ，用于 玉米 及 其加 工 制 品 中 Ｄ Ａ 的提 取 ， 提取 玉米 样 品 的 ｚ ｄ基 ａ Ｎ 所 Ｄ Ａ的 Ｏ Ｅ／ Ｄ８ Ｎ Ｄ６ Ｏ 值在 １６ ２０ ｏ ０ ．５— ． 之间， 能够满足 Ｐ Ｒ扩增 的要求． Ｃ
ｍ ｌＬＨ Ｐ ｏ 。Ｏ 溶液冲洗毛细管 ５ｍｎ 再进行下一次检测．用计算机采集毛细管电泳谱图并处理数据． ／ ｉ，
采用不 同 Ｇ ＭＯ含量 的转基 因玉米 的标 准参 考物质 和待 检样 品 ， 相 同条件 下进 行 多重 Ｐ Ｒ扩 增 在 Ｃ 和 毛细管 电泳检测 ， 据 毛细管 电泳 的迁 移 时间进 行定性 分析 ， 据相对 荧光 强度 （ 高 ） 行定 量分 根 根 峰 进
（ ／Ｌ Ｍｅｋｒ 司 ） Ｒ ａｅＡ（ ｇ Ｉ ，Ｓ ｍ ２ｍｇ Ｉ Ｌ， ｒｅ 公 ， Ｎ ｓ ２ｍ ／ Ｌ ｉ ａ公 司），ｐ Ｃ ９ Ｎ ／ ｐ Ｉ（ｔａ ｌ）Ｍａｋ ｒ Ｆ ｒ ｘ ｇ Ｕ １ Ｄ Ａ Ｍｓ １ Ｉ ｐ ｒｅ（ ｅ．
ｍ ｎａ，晶美 生 物工程 有 限公 司 ） ｅｔｓ ，使 用 时 用 无 菌 水 稀 释 １０倍 ；琼 脂 糖 （ ａａａ ；Ｔｑ ｎＵ ｉｅ ａ ０ Ｔ ｋｒ） ａＭａ ｎｖｒ ｌ ｓ Ｐ Ｒ Ｍａｔ ｘ（ ｐｌ ｄＢｏｙｔ ｓ ，Ａ ｐｉａＴＧ ｌ Ｎ 聚 合 酶 （ ／ｘ ，Ａ ｐｉ ｉ ｙｔ ） Ｃ ｓ ｒＭｉ Ａ ｐｉ ｉｓｓ ｍ ） ｍ ｌ ｑ ｏ Ｄ Ａ ｅ ｅ ｅ Ｔ Ｍ ｄ ５Ｕ ｉ Ｌ ｐｌｄＢｏ ｓｍｓ ， ｅ ｓ ｅ Ａ ｐ ｒｓ Ｕ Ｇ酶 （ ／ｘ ， ｐｌｄＢｏｙｔ ） 无 水 乙醇 ，三氯 甲烷 、异 戊 醇及 异 丙 醇 （ 析纯 ， ｍ Ｅａｅ Ｎ ５Ｕ ｉ Ａ ｐｉ ｉｓｓ ｍｓ ； Ｌ ｅ ｅ 分 北 京化学 试剂 总厂 ） ．玉米 粉 、玉米 面 、玉米罐 头及爆 米花 等样 品均从 超市 购买 ． 激 光诱 导 荧 光 检 测 一 效 毛 细 管 电 泳 装 置 （自行 组 装 ） ， 括 氦 氖 激 光 器 （４ ． ｍ，ＪＳ 高 Ｊ 包 ５ ３５ ｎ Ｄ Ｕ ｉｈｓ） 熔 融石英 毛细管 （ ｎｐａｅ ； 河北 永年光 导纤 维厂 ） 长 ５ ｍ（ 效 长度 为 ４ ｍ） ： ０ｃ 有 ３ｃ ，内径 为 １０ ０ ， 外 径为 ３５Ｉ 毛细 管柱 内表面 的聚丙烯 酰胺 化学 键 合涂 层 由本 实 验室 完 成 ．Ｍａｔｒｙｌ ３３基 因 ７ ｍ， ｘ ｓ ｃｃ ｒ ３ ｅ ｅ５ 扩增 仪 （ 国 Ｅ ｐｎｏ 公 司） ７０ 德 ｐｅｄｆ ， ７０实时 荧光定 量 Ｐ Ｒ仪 （ 国 Ａ ｐｉ ｉ ｙｔｍ 公 司 ） 核酸 蛋 白分 Ｃ 美 ｐｌｄＢｏ ｓ ｓ ｅ ｓ ｅ ， 析仪 （ 国 Ｂｃｍ ｎ公 司 ） 超 纯水处 理 系统 （ 国 Ｍｉｐｒ公 司 ） 美 ｅｋ ａ ， 美 ｌ ｏｅ ｉ ． 所用 引物 由上海 博亚生 物技术 有 限公 司合 成 ，Ｐ Ｇ Ａ Ｅ纯 化 ．Ｐ Ｒ产 物 全序 列 由上海 博 亚 生物 技术 Ｃ 有 限公 司测定 ， Ｂ１０测序仪 ． Ａ Ｉ０