裸鼠荷瘤资料.doc

接种量要查文献来确定接种量，在找不到任何相关资料的情况下，最高就用到1*107/0.2ml/site，再高也没有意义了。

如果你的细胞很小，1*107/0.1ml 也可以操作，不至于很粘稠，那么最好是1*107/0.1ml/site。

查文献看他们的构建条件是什么样的，比如培养条件，接种量，接种位置什么的，是不是一定要用雌性鼠等等。

有的瘤株也有可能很容易成瘤，而且生长速度很快。

建议用几只动物试试不同的接种浓度，万一能够长出来，而且还长得很快，那你就要根据情况选择一个合适的浓度了。

基本上一般认为比较合适的接种浓度有这么几个特征：1.接种后10到15天左右可以开始试验。

2.开始试验时可以用于试验的动物数不少于60~70%，而且SD不大于平均值的1/3左右。

3.开始试验三、四周后肿瘤重量大于1g, 并且没有溃烂。

当然，这些条件都是锦上添花的东西，如果以1*107/site 都勉勉强强长出肿瘤，那么就不必过多的去考虑它了。

接种部位接种部位：腋窝中部外侧皮下为好。

皮下肿瘤模型中，想要成瘤率高就接种在腋下。

接种时由裸鼠体侧腰部稍靠上的部位进针，要保证与接种点的距离小于针头的长度，向头部方穿行，绝对不能刺破皮肤或者刺破肌肉层，当针头到达接种位点时注射，退出针头，这样操作的目的并不完全是避免漏液，其实熟练后，不需要皮下穿行也不会漏液，主要是避免污染，进针点还有少量污染的可能性的，针头在皮下穿行一段后，接种点离进针点较远，最大限度减少污染的可能。

如果是用于正式实验，那么一只老鼠就只能接种一个位点，不可以接种多个位点用于保证可用的模型数。

因为在有些情况下，一个老鼠身上有多于一个肿瘤的情况下，会有相互影响的可能，无论这几个肿瘤相距有多远。

要是想多打几个部位做做预试验，倒也不是不可以，但是我觉得，基本上没有什么必要。

皮肤不用绷得太紧，平展就可以了，另外接种的时候进针点很靠下，针头在皮下走一段再注射，速度不要太快。

注射前针头稍微动一动，能动就说明在皮下，否则可能在皮内或者肌肉内。

一般来说都是有鼓包的但是要是你接种位置太深入腋窝，你是看不到鼓包的。

主要靠针头稍微动一动来判断。

是否应用免疫抑制剂裸鼠皮下种瘤后，可以通过应用免疫抑制剂，比如环磷酰胺（2mg 每只，打两天）来加速瘤体的生长，当然我知道裸鼠是T免疫缺陷动物，但是人家说的CTX可以进一步抑制裸鼠的体液免疫和NK细胞杀伤的保护作用，可以加快瘤子的生长，这样造模的周期很短，也可以进行人为的控制，不知道这个观点是不是有道理，实践中是不是真有人这么做呢？楼上说的文献中也有报道，而且还有预先用放射照射抑制动物免疫功能再接种的方法，但是一般常规应用中大多数时候不推荐这么做。

另外还有一个问题应该被考虑到，大家现在都在琢磨着怎么让肿瘤出瘤的更快，造模周期更短，但是如果人为的把肿瘤生长加速，其实对实验并不好。

因为造模周期短，很可能生长速度也会被加快，肿瘤可能很快就溃烂了，这样就不得不被迫中止实验，而用药却没有用到足够的时间，药效还没有发挥出来就结束了，这样是很不利的。

所以一般情况下，应该尽量的复合这个瘤株本身的生长特性，不应该过多地去加以人为的干扰。

是否用手术标本荷瘤如果是药效试验，不建议用手术标本，因为SFDA的临床前研究指导原则上明确指出要用建株的肿瘤株进行试验，因为用手术标本的试验可重复性太差，你这个标本万一没有保存好，断掉了，你自己都很难重复出上次的试验结果。

国外的文献上看到的却很少有人用手术标本构建模型进行试验。

取材的部位：肿瘤生长活跃，状态良好，结缔组织比较少的地方。

运送途径：无菌、冰浴保温，无菌培养液浸泡，时间不能超过1个小时。

最好一个小时内就能够接种到动物体内。

接种部位：腋下。

另外，手术标本还有一个风险：你不能保证取得的标本一定能够顺利地成瘤并且用于试验。

注意事项A裸鼠的周龄,B肿瘤细胞:何种肿瘤，接种细胞的数量（用对数生长期的，活力高的）记数要准确,C接种方式:注意不要漏液，否则会损失细胞数量D饲养环境:要求是SPF条件具体操作1•能不能成瘤，首先要考虑你的肿瘤细胞系能否成瘤，其次关键是你的肿瘤细胞数，一般肿瘤细胞存活力还是蛮高的，所以你重点要考虑细胞数的问题，但最高不要超过1*107。

2•接种时间，最好在1小时之内完成。

但在我实际操作过程中，裸鼠的数量又多，1小时之内根本做不完的，所以你可以预先将细胞放在冰盒里暂为保存。

效果还是不错的。

3•成瘤时间，每个肿瘤细胞不太一样，细胞数合适，一般一周左右应该能出来了；另外，如果你是打皮下，你要考虑是否有打到深层组织，比如肌肉，那即使成瘤了，也不大好摸出来。

腹腔注射1、腹腔注射进针的位置在腹中线与小鼠两后肢上沿连交叉以下的位置。

2、腹腔注射很少会打到肠管，因为肠子在碰到硬物时会缩起来，当然前提是你的进针不是特别深，如果你的整个针头都扎入了腹腔，那么肠子是无处可躲了。

3、腹腔注射进针后，你可以将针头左右摆动一下，如果是正确的，这时会有一种很自由无障碍的感觉，进针角度撑握在小于45度, 针头进入长度不超过3厘米左右。

用大、小白鼠做实验时，以左手抓住动物，使腹部向上，右手将注射针头于左（或右）下腹部刺入皮下，使针头向前推0.5〜1.0cm, 再以45度角穿过腹肌，固定针头，缓缓注入药液（图2-5）,为避免伤及内脏，可使动物处于头低位，使内脏移向上腹。

若实验动物为家兔，进针部位为下腹部的腹白线离开1cm处。

肿瘤倍增时间肿瘤动物实验模型肿瘤的倍增时间(doubling time ),应该是在瘤体积100 —800之间计算，但是一组动物有10只，每周测量2次瘤体积，如果我想计算从200倍增到400的时间的话，10只动物不会在我测量体积的时候正好到200或400 ,那么，在计算的时候，具体应该怎么做？Geddes等［29］将结节倍增时间的计算公式表示为：DT = (In2A t) /In (V2/V1 ), VI、V2分别是前后两次测量的体积，△t是两次测量的时间间隔你的问题有歧义，我觉得可以有几下几种理解：1. 测量的时候，对于某个老鼠来说，第一次可能测出来的体积是189.26 (不是正好200),第二次是415.31 (不是正好400), 对于其他的动物都有这样的问题，2. 对于十只老鼠来说，测量的时候，可能1号老鼠是189.26 , 2号是312.57 ,3号是110.89……，这也是一种理解，我的意见是：测量一段比较长的时间，每只老鼠可以独立计算倍增时间，然后计算平均值，SD等，用统计学处理的手段。

个体差异同一批种几十只老鼠，有的就长不出来，有的长得很大，使评价药效很困难。

排除接种悬液未摇匀的可能后，还有什么原因可能造成这一点？可能是是个体差异了。

其中，老鼠年龄是一个很大的因素。

本人就遇到过2个月的老鼠接种肿瘤以后，有的长有的不长的情况。

如果控制好试验条件，动物也比较均一的话，一般肿瘤生长都会很好的控制在一定范围的肿瘤模型新药申报zym145286做的肿瘤模型实验是用于新药申报用，现在有一些问题还不能校准，我做的是人癌模型，实验动物为裸鼠.1. 新药报批中，有明确的要求说肿瘤来源必须是体内传代3次以上吗？2. 实验结束后，对于取出肿瘤块的质量有没有明确的规定呢？还是跟其他种鼠一样，要求平均瘤重不小于1g或者不大于20% 的瘤快质量不小于400mg,3. 实验评价指标相对肿瘤增殖率T/C(%),指的是瘤体积比还是瘤质量比？4. 实验申报材料是否需要附属实验动物裸鼠的照片？若需要附属的话，照片没有没有什么要求怎么照的，是鼠活的时候的照片还是实验结束后处死鼠后在摆好位置照？5. 申报材料中附图要求是肿瘤的生长曲线还是不同时间测量的T/C值对时间所做的曲线？还是两个都要有呢？6. 实验分组分5组,空白溶剂对照组,药物高中低三个剂量组，阳性药物有效浓度对照组.这样可以吗？要是不可以,还需要怎么分呢？7. 实验材料中是否需要包含该实验动物血液相关指标的数值呢？比如：白细胞数量，骨髓的影响等等8. 一次实验有效后，是不是也需要重复实验三次？那三次的数据都需要包含在数据中吗？？swordzjsh具体问题回答如下：1. 没有问题，新老原则均明确要求体内三代以上，并且不能超过15~20代（人肿瘤）。

2. 新原则已经没有瘤重的指标，只考察瘤体积，也没有对试验结束后的肿瘤大小有明确要求，但是老的指导原则有这方面的要求。

3. 新的原则是指瘤体积，老的指瘤重，实际上在数据处理的时候一般瘤体积和瘤重的数据都会加入，分别计算相应的T/C。

4. 需要，常见的有两种：一种是处死后摆放并拍摄整鼠照片，还有一种是剥取肿瘤后拍摄肿瘤的照片，还是那句话，最好都有，至少资料中放一个，另外一份备好，答辩的时候可以随时展示。

另外，以前不允许数码拍摄，要求光学照相机，以防电脑编辑，不知道现在还有没有类似的要求。

5. 有的人要看肿瘤生长曲线，有的人要看T/C的曲线，不过一般放生长曲线的多一些，记住，生长曲线现在要求RTV，相对肿瘤体积。

以前报批的时候就可以放RTV曲线了，现在更是RTV的天下。

6. —般来说，正式试验基本上就是这么设计了，但是你最好有这些剂量、疗程、给药途径等的设计依据，比如权威文献、你们的预试验等材料备问。

当然，如果你的药物有些特别的地方，那么要根据他的具体特点设计试验。

7. 这个是锦上添花的指标，对于药效试验来说，没有明确要求，但是一定要有体重和死亡的数据。

8. 老原则要求重复两次，一共三次试验，新原则前几稿要求重复一次，一共三次试验，但是最新一稿我没有看到对于重复试验的要求，但是作为药理研究的基本常识，重复试验是一定需要的，作为正式试验的重复试验应该把数据和结果分析都列入报告中，重复试验之间是同等重要的。

zym145286:针对您的回答，我仍有几点不解1. 实验结束后瘤的质量标准问题，您说新原则没有指标，那么老原则（就是现在还遵循的原则）具体是多少呢，能不能说明一下啊？2. T/C标准按照体积计算的时候，按照的是哪个时间点的体积呢,还是说整个测量过程的体积都要算？3. 还有一个比较基本的问题，不要笑话我了，呵呵，那个RTV是怎样算出来的？是用药组数据减去空白组数据吗？还是其他算法？4. 正式实验中，每组的动物数量是多少？6只,还是10-12只？5. 对给药时间有没有什么具体要求呢，就是说有没有上限，比如不可以超过一个月啊什么的？swordzjsh1. 老原则的标准就是你写出来的那个。

2. 整个测量过程的体积都要算，可以用T/C对时间点作图的那种。

实际上，不知道你有没有老的指导原则，上面有一个表，那个表里面汇总了一些试验的基本信息，那个表里面要填增殖率，一般是选效果最好的那一天的数据填上去。

3. RTV = Vt / V0。