裸鼠荷瘤方法及注意事项
裸鼠皮下移植瘤实验造模步骤
裸鼠皮下移植瘤实验造模步骤顾名思义，这种模型的建立是将肿瘤细胞或肿瘤组织直接种植在小鼠的皮下。
种植的点也有讲究，一般选择血运淋巴回流丰富的腹股沟和腋窝。
可根据实验设计选择移植点，统一移植点的位置，除了遵守实验统一的条件外，待肿瘤成熟后收集肿瘤时留下照片证据也显得美观。
裸鼠（Balb/c 鼠，无毛发， T 淋巴细胞缺陷）是比较常见和常用的实验用鼠，尤其是在皮下移植瘤肿瘤模型的建立中起到重要作用。
裸鼠移植瘤模型的建立具有建立周期短、成瘤率高、易于操作、成本低的优点。
当然，这种肿瘤模型也有缺陷，即不能很准确的模拟正常人体肿瘤发生发展的过程。
☞肿瘤细胞移植时的简要步骤首先准备好要移植的肿瘤细胞（细胞量根据不同肿瘤略有不同，我们所用的前列腺癌细胞系每个移植点一般选择1x106 左右；肿瘤细胞可与基质胶 1:1 混匀后用 1 ml 注射器吸取，基质胶能够给肿瘤细胞提供营养环境，有助于肿瘤细胞生长）。
戴无菌手套后，将小鼠用左手大拇指和食指捏住颈部皮肤，然后将鼠尾用左手无名指和小指固定于左手大鱼际。
将腋窝或腹股沟用75% 酒精消毒3 次。
右手持吸有肿瘤细胞和基质胶混合液的注射器，在腹股沟或腋窝的位置，45 度斜角进针，注意不要突破腹膜，将针头保持于皮下位置。
然后近水平位置将针头几乎完全插入皮下，将混有基质胶的肿瘤细胞注射入皮下（肿瘤细胞量约1x106），快速退针，左手食指轻压针孔约1 min 后将小鼠放回饲养笼中，注意将小鼠侧放于垫料上，放置其不适呕吐时呕吐物误入呼吸道引起窒息。
2～3 h 后观察小鼠是否苏醒。
如果是利用肿瘤组织（人体肿瘤标本或小鼠移植瘤传代）建立裸鼠皮下移植瘤模型，则需要首先将肿瘤组织用无菌PBS（或1640 培养基）洗涤3 次，然后在无菌平皿上切成或用无菌剪刀剪成<1 mm3体积的小块（种植前可裹基质胶）备用。
将小鼠用水合氯醛麻醉后平卧于解剖板上，四肢用胶带固定，将腋窝或腹股沟用 75% 酒精消毒 3 次，然后用眼科剪剪开约 0.5 cm 小口，小镊子将皮下筋膜与皮肤分开，然后将肿瘤组织放入贴近腹股沟或腋窝的深部，每个位置放置 2～3 块肿瘤组织，注意不同组间统一放置肿瘤组织块数以保持一致。
裸鼠成瘤实验注意事项
相关裸鼠皮下成瘤的建议
1、裸鼠的品系。 2、裸鼠成瘤用的材料：细胞的选择。 3、客户的具体要求：比如说肿瘤形成部位，是否需要详细
记录肿瘤的大小变化，是否需要取材后需要怎么拍摄裸鼠 的照片等等。
谢谢大家！
感谢观看
• 裸大鼠(基因符号rnu )：
一般特征似裸小鼠，但躯干部仍有稀少被毛并非象裸小鼠那样完全无 毛，头部及四肢毛更多。裸大鼠易患呼吸道疾病。
裸鼠的选择
虽然说以裸大鼠代替裸小鼠，具有移植肿瘤大，取血 量多，可行某些外科小手术等优点。因此比裸小鼠有一定 优越性，其缺点是维持经费比裸SPF小鼠更高，另外裸大 鼠目前不怎么流行。所以我们实验室常用的是BALB/c-nu 裸小鼠。
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A549 +
裸鼠成瘤
细胞培养：
细胞的状态以及数量是裸鼠皮下成瘤很关键的一步。细胞 状态良好，对数生长期，接种很容易形成肿瘤，反之则会 导致失败。即浪费了细胞，又错过了裸鼠成瘤的最佳时期
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裸鼠成瘤
细胞接种：
接种的细胞量：无血清培养基重悬成1*107个/ml的悬液，只/针。也 就是一只裸鼠最少要用200W个细胞，有的细胞需求可能会达到 1000W个/只。
裸鼠（纯合子nu/nu突变鼠）主要表现为无毛（但可看到一 种细毛组织学证明有被毛滤泡）以及缺乏正常胸腺。杂合子小 鼠（nn/+）各方面表现都正常。
小鼠中有若干突变基因，它可产生一种为无毛的表现型（ phenotype），例如无胸腺裸鼠（Nude）、裸鼠（Naked）、无 毛鼠（Hairless）、无鼻毛鼠（Rhinol），不要把这些突变鼠基 因相互混淆。裸鼠的唯一特性是胸腺缺陷表现型，因此，不能 将“裸鼠”与“无毛鼠”两词交换使用。
裸鼠肿瘤接种技术实验操作方法
裸鼠肿瘤接种技术实验操作方法裸鼠肿瘤接种一般有细胞接种和瘤块接种两种方式，接种取材有手术活检标本、癌性胸腹水标本和体外培养的细胞系三种。
l楼主看来是做体外培养的细胞的裸鼠接种，一般用带6号针头的注射器取适量细胞悬液注射于裸鼠的皮下，部位看试验要求而定，一般在腋下或背部皮下，每个接种部位注射0.1-0.2ml。
就是将培养的细胞收集起来调整到适宜浓度重悬于不含血清的培养液或PBS中，放于冰盒中携至动物房，直接注射即可。
是牵涉到细胞株的成瘤性问题，可以通过增大细胞悬液浓度的办法来解决。
一般细胞浓度可在1*10的6次方到5*10的7次方之间，浓度再大就可能打不进去了。
具体浓度需要查相关文献。
如果成瘤率太低，可以通过把瘤块在裸鼠身上传2—3代的方法提高成瘤率，即将已成瘤鼠的瘤块取出接种于新鼠身上，成瘤后再取出接种新鼠，如此传几代，肿瘤性质稳定后，再将肿瘤取出，剪碎、研磨、匀浆成为细胞悬液后再接种。
一、可移植性肿瘤的建立方法1．腹水瘤的建立将动物实体瘤细胞注入受体动物腹腔内，或将实体疤移植于受体动物的腹壁内，肿瘤生长后引起腹水，腹水内含高大量瘤细胞可移植传代．即为腹水瘤。
建议腹水瘤初期、腹水往往是血性，多次传代后逐渐变为乳白色的瘤性腹水。
腹水如培养基一样供给瘤细胞生长所需的营养。
若将腹水瘤细胞注入皮下，又可形成实体瘤。
由于瘤细胞游离在腹水内，因此总呈圆形，体积可有大、中、小之分c：r．在一些细胞边缘偶见大小不等的泡状突起，称之为“鼓泡”。
一般在接种后第5天时核分裂相达高峰。
偶见三吸或四极分裂。
二、肿癌移植方法1．常规保种传代方法(1)腹水瘤移植方法：瘤源一般用接种后第5～6天的腹水，抽出的腹水以乳白色为佳。
接种应从下腹部件入受体动物腹腔，一般接种o．1一o．2m1。
可在腹水内加适量的抗凝药物。
(2)实体型肿瘤接种法：1)小块接种法：将瘤取出后，切开，选出生长良好而无变性坏死、呈谈红色、鱼肉状的瘤组织，切成小块(约5*5*5mm)；在受体动物腹部外例剪开—个小口，用无钩眼科镊子夹取小块，送入切口内皮下。
小鼠皮下荷瘤标准操作规程
小鼠皮下荷瘤标准操作规程小鼠皮下荷瘤（或称移植瘤）实验是一种常用的动物实验方法，用于研究肿瘤生长、药物疗效等方面。
为了保证实验操作的准确性和动物福利的最大化，下面是一份小鼠皮下荷瘤标准操作规程。
一、实验动物1. 鼠种选择：建议使用常用的实验动物品系（如BALB/c、C57BL/6等）。
2. 年龄选择：选择6-8周龄的小鼠，确保其免疫系统和器官发育成熟。
3. 处理：在实验之前，将小鼠隔离一段时间，以适应新环境，并遵循动物实验伦理和相关法规进行处理。
二、荷瘤动物的准备1. 荷瘤细胞株的选择：根据实验目的选择合适的肿瘤细胞株。
细胞株应来源于可靠且经验证的来源，如细胞库、研究机构合作实验。
2. 细胞培养：在符合无菌条件下，将细胞培养在合适的培养基中，保持其活性和稳定性。
3. 细胞计数：使用细胞计数仪准确计算细胞数目，并调整细胞浓度。
4. 细胞检测：定期检测细胞的纯度、鉴定和验证细胞的肿瘤特性。
5. 注射剂量：根据实验需求和细胞特性，确定荷瘤细胞的注射剂量。
三、手术准备1. 操作间的准备：在符合无菌条件下进行手术，准备好所需的实验器具和仪器。
2. 麻醉与镇痛：使用适合的麻醉方法对小鼠进行麻醉，并在手术中给予镇痛以减轻小鼠的疼痛。
3. 无菌操作：实施手术之前，用适当的方法消毒手术台和手术器械。
四、手术操作1. 注射位置选择：选择合适的部位进行皮下注射（如腹部、背部），确保容易观察和测量肿瘤的生长。
2. 手术操作流程：(1) 麻醉小鼠并进行镇痛。
(2) 将小鼠定位到手术台上，以固定小鼠的身体。
(3) 使用酒精棉球消毒注射部位。
(4) 使用规格合适的针头将预定剂量的荷瘤细胞注入小鼠的皮下组织中。
(5) 注意注射的角度和深度，避免插入过深或过浅。
(6) 注射完毕后轻轻拍打注射部位以防止荷瘤细胞漏出。
(7) 小鼠苏醒后放回适宜的养护环境。
五、术后护理1. 观察：术后密切观察小鼠的行为和健康状况，特别是对于术后48小时内的小鼠，要加强监测，以及记录并报告任何异常情况。
裸鼠荷瘤实验
接种量要查文献来确定接种量，在找不到任何相关资料的情况下，最高就用到1*107/0.2ml/site,再高也没有意义了。
如果你的细胞很小，1*107/0.1ml也可以操作，不至于很粘稠，那么最好是1*107/0.1ml/site。
查文献看他们的构建条件是什么样的，比如培养条件，接种量，接种位置什么的，是不是一定要用雌性鼠等等。
有的瘤株也有可能很容易成瘤，而且生长速度很快。
建议用几只动物试试不同的接种浓度，万一能够长出来，而且还长得很快，那你就要根据情况选择一个合适的浓度了。
基本上一般认为比较合适的接种浓度有这么几个特征：1. 接种后10到15天左右可以开始试验。
2. 开始试验时可以用于试验的动物数不少于60~70%，而且SD 不大于平均值的1/3左右。
3. 开始试验三、四周后肿瘤重量大于1g，并且没有溃烂。
当然，这些条件都是锦上添花的东西，如果以1*107/site 都勉勉强强长出肿瘤，那么就不必过多的去考虑它了。
接种部位接种部位:腋窝中部外侧皮下为好。
皮下肿瘤模型中，想要成瘤率高就接种在腋下。
接种时由裸鼠体侧腰部稍靠上的部位进针，要保证与接种点的距离小于针头的长度，向头部方穿行，绝对不能刺破皮肤或者刺破肌肉层，当针头到达接种位点时注射，退出针头，这样操作的目的并不完全是避免漏液，其实熟练后，不需要皮下穿行也不会漏液，主要是避免污染，进针点还有少量污染的可能性的，针头在皮下穿行一段后，接种点离进针点较远，最大限度减少污染的可能。
如果是用于正式实验，那么一只老鼠就只能接种一个位点，不可以接种多个位点用于保证可用的模型数。
因为在有些情况下，一个老鼠身上有多于一个肿瘤的情况下，会有相互影响的可能，无论这几个肿瘤相距有多远。
要是想多打几个部位做做预试验，倒也不是不可以，但是我觉得，基本上没有什么必要。
皮肤不用绷得太紧，平展就可以了，另外接种的时候进针点很靠下，针头在皮下走一段再注射，速度不要太快。
注射前针头稍微动一动，能动就说明在皮下，否则可能在皮内或者肌肉内。
裸鼠成瘤实验安全操作及保养规程
裸鼠成瘤实验安全操作及保养规程引言近年来，裸鼠成瘤实验逐渐成为一种常见的实验手段，被广泛应用于生物医学领域的基础、药物研究。
然而，由于实验过程中需要使用大量的化学试剂和高度精密的操作，所以如果在实验操作过程中未能注意安全问题，会带来诸多安全隐患。
因此，为了确保实验的顺利进行，有效避免实验操作中出现意外情况，本文将针对裸鼠成瘤实验，列出相应的安全操作及保养规程。
裸鼠成瘤实验前的准备工作在进行裸鼠成瘤实验时，需要提前准备充足的实验器材和生化试剂，同时也需要对实验室的环境进行合理的调整。
下面列出相应的注意事项：1.实验室环境要求实验室环境需保持干净整洁，避免有任何因素干扰实验的进行。
库房要求干燥、通风，实验区不得放置一切与实验无关的器械、试剂或物品，以确保实验室内部的清洁程度，并保持实验设备的灭菌。
2.实验器材和试剂的准备裸鼠成瘤实验器材需保证正常功能，严格按照使用说明使用，并对每种器材进行标注。
在实验前，应对涉及到的试剂进行检查，确保其没有已失效或污染，充分消毒。
对于不同类型的裸鼠成瘤实验所需要的各种器材和试剂的使用方法进行预见性的了解，将可在实验操作之前大幅降低因操作不当而产生的误差和成本。
3.人员准备实行裸鼠成瘤实验的操作人员应具有科学背景，拥有必要的实验技能和实验安全意识。
在实验操作之前，必须全面了解实验流程及实验器材的使用，以及实验操作过程中所需要的基本操作技能并保证其全面掌握。
裸鼠成瘤实验中的关键操作技能为了确保裸鼠成瘤实验的成功，降低实验操作中产生的偏差，必须合理掌握实验中的关键操作技能。
下面分别介绍实验中的几个关键操作技能：1.裸鼠的饲养和保养保证裸鼠进食和饮水的质量和数量，确保空气清洁，为其提供足够的光源和温度环境，定期检查和清理它们的笼子和环境等都是保证裸鼠安全、健康和成瘤的关键操作技能。
2.药物的制备及添加药物的选择要合理，必须进行初步检测。
准确制备药物，严格按照说明书添加化学试剂，安全量。
小鼠荷瘤模型实验流程及注意事项
小鼠荷瘤模型实验流程及注意事项
小鼠荷瘤，是将相关的肿瘤细胞通过原位注射或者通过皮下注射入小鼠体内，使其致瘤。
它是肿瘤机制和治疗研究的非常常用的实验手段。
流程：
1、荷瘤小鼠模型建立
2、药物治疗
3、荷瘤鼠临床症状观察
4、卡尺测量不同时间点肿瘤体积变化
5、荷瘤鼠体重变化
6、血液标本采集
7、实验终点肿瘤重量
8、肿瘤标本采集
注意事项：
小鼠的选择：可选择裸鼠或NOD/SCID小鼠
细胞的选择：细胞由用户提供，理论上建株的肿瘤细胞都可以，但建议选择国际公认度较高的细胞系：
头颈部肿瘤-Hep2（喉癌）、CNE（鼻咽癌）
肺癌-NCI-H460（大细胞肺癌）、SPC-A-1（肺腺癌）
胃癌-MNK-45、BGC-823
食道癌-Eca-109
前列腺癌-PC-3、DU-145
结肠癌-HT-29、Lovo
乳腺癌-MCF-7
肝癌-Hep-G2、EL7402
黑色素瘤-A375/B16-F10
原发肿瘤：结肠癌、乳腺癌、肺癌、卵巢癌、黑色素瘤、淋巴瘤、白血病、肾癌、宫颈癌、软组织肉瘤和骨肉瘤等移植于裸鼠，有一定几率也能成瘤。
需要预实验测试
细胞量：接种的细胞量：无血清培养基重悬成1×107个/ml的悬液，0.2ml/只/针。
一只裸鼠至少2×106个细胞，有的细胞需求可能会达到1×107个/只。
荷瘤小鼠实验报告
一、实验目的本实验旨在研究荷瘤小鼠的肿瘤生长、转移及治疗效果，为肿瘤的防治提供理论依据和实验数据。
二、实验材料与方法1. 实验动物：C57BL/6小鼠，雌雄各半，体重18-22g。
2. 实验试剂：肿瘤细胞株、细胞培养试剂、免疫组化试剂、流式细胞术试剂等。
3. 实验方法：（1）肿瘤细胞培养：将肿瘤细胞株在细胞培养箱中培养，待细胞生长至对数生长期后，收集细胞进行实验。
（2）荷瘤小鼠模型建立：取对数生长期的肿瘤细胞，以1×10^6个细胞/只的浓度注射至小鼠皮下，建立荷瘤小鼠模型。
（3）分组与处理：将荷瘤小鼠随机分为以下五组：模型组、药物低剂量组、药物中剂量组、药物高剂量组和对照组。
药物低、中、高剂量组分别给予相应浓度的药物灌胃，对照组给予等体积的生理盐水灌胃。
（4）观察指标：①肿瘤生长情况：每周测量肿瘤体积，计算肿瘤生长抑制率。
②肿瘤转移情况：在实验结束时，解剖小鼠，观察肿瘤转移情况。
③免疫组化检测：采用免疫组化技术检测肿瘤组织中相关蛋白的表达。
④流式细胞术检测：采用流式细胞术检测小鼠外周血中T淋巴细胞亚群的变化。
三、实验结果1. 肿瘤生长情况：与模型组相比，药物低、中、高剂量组肿瘤生长抑制率显著提高，差异具有统计学意义（P<0.05）。
2. 肿瘤转移情况：与模型组相比，药物低、中、高剂量组肿瘤转移率显著降低，差异具有统计学意义（P<0.05）。
3. 免疫组化检测：药物低、中、高剂量组肿瘤组织中相关蛋白表达显著降低，差异具有统计学意义（P<0.05）。
4. 流式细胞术检测：药物低、中、高剂量组小鼠外周血中T淋巴细胞亚群CD3+、CD4+、CD8+细胞数显著增加，差异具有统计学意义（P<0.05）。
四、讨论本实验通过建立荷瘤小鼠模型，研究了药物对肿瘤生长、转移及免疫功能的抑制作用。
结果表明，药物低、中、高剂量组均能有效抑制肿瘤生长和转移，提高小鼠的免疫功能。
1. 药物对肿瘤生长的抑制作用：药物通过抑制肿瘤细胞增殖、诱导肿瘤细胞凋亡等途径，发挥抗肿瘤作用。
裸鼠移植瘤方法建立
裸鼠移植瘤方法建立1.细胞准备：1.1用PBS 清洗细胞两遍，加入胰酶消化，吹打离心，无血清培养基清洗两次，然后用无血清培养基将细胞重悬，进行细胞计数，使得200μL 悬浮液里面含有1×107个细胞。
总共需要细胞: 18（只）*200ul*1.2=4.32ml×107个，将混合好的细胞放于4°C冰盒运至动物房。
2.裸鼠准备：2.1 3周龄小鼠饲养一周后，每只于右侧腋腹壁皮下接种MDA-MB-231和MCF-7细胞1×107/200μ L。
每日观察肿瘤生长情况, 待出瘤后使用游标卡尺测量肿瘤体积, 肿瘤体积=(D×d 2)/2(D表示肿瘤的长径, d表示肿瘤的短径)。
（注射器型号BD一次性使用无菌胰岛素注射器规格：1ml 25G）2.2 当肿瘤体积约为80 mm 3 时(100至150左右)，将裸鼠进行随机分成3 组（肿瘤大小，体重尽量接近），每组3只。
对照组，TO901317组，DADS组。
每天（每天给药？会不会太频繁？可以查阅相关类似成药的半衰期或综合国外文献的数据）将实验组灌胃TO901317，剂量为25mg/kg/d，将粉末状的TO901317 溶解到蓖麻油（或芝麻油以及生理盐水）里，每只裸鼠注射含有TO901317 的蓖麻油200μL；对照组注射等体积的蓖麻油。
连续注射两周。
（12号灌胃针头，每次用后一定要煮沸消毒）（灌胃进针时针头偏右，一般就不会进肺了）腹腔注射DADS，剂量为50mg/kg (含10%小牛血清的D ME M 培养液（最好使用生理盐水）)每次注射200 μL , 隔日注射, 连续7次给药。
2.3每2～3d观察测量1次, 计算肿瘤相对体积(RTV)。
以每组动物移植瘤体积的平均值, 绘制移植瘤生长曲线。
实验结束时在超净工作台上对裸鼠进行拍照，完整剥离肿瘤，用游标卡尺对肿瘤的大小进行测量，用电子天平称量移植瘤重量，用手术剪取出肿瘤，拍照。
裸鼠成瘤的一些个人经验
动物实验杂七杂八的做了不少，分享一下目前做的裸鼠成瘤的一些经验，希望和大家相互交流一下，旨在提高一下自己关于这个方面的技能。
本人完全是自己根据一些文献，自己摸索，摸着石头过河做的，没得正规的导师知指导，苦~ 本人联系方：(之前本来留个小企鹅的，结果表示文库给我一直都是提交中，苦~望大家在评论中交流哈~) ，希望大家有好的意见和建议，多多交流一下啊！下面开始正题：1、实验环境：也就是裸鼠饲养环境，由于条件限制，所饲养的裸鼠均为普通级，当然购买的肯定是SPF级哈。
最开始饲养的时候，很担心，因为裸鼠免疫缺陷，会不会动不动就挂了呢！在丁香园不断活跃了一翻。
最后根据实际情况总结了一翻目前裸鼠饲养的条件：首先，裸鼠必须和大小鼠分开，哪怕只是单独的隔一个屏风，大小鼠很容易传染鼠肝炎给裸鼠，裸鼠一旦得了这个病，死是必然的了（当然前提是不会医治哈，若能医疗就另当别论了）。
这个病的症状就是：裸鼠皮肤很红，弓背，越来越瘦瘦的成了皮包骨头了。
当你发现这个情况出现后，请及时处理掉，不然的话所有的裸鼠都会慢慢得这个病（亲身经历，惨不忍睹啊~）其次，裸鼠饲养的垫料，当然是要无菌垫料啦，这个应该不难吧，至少一般的高校动物中心都可以购买的啦~如果确实没的这个，可以使用卫生纸作为垫料，前提需要很勤的更换，普通的无菌垫料（松木花什么的）一般来说可以3-5天换一次，用纸的话就得几乎1-2天换了，太麻烦啦~再者，饲料和水源的问题，饲料采用无菌饲料这个全国各地都有买的。
水源很重要，至少等级为纯净水（就是办公司喝的那种），我现在用的是纯水仪进化的水，嘻嘻~。
关于水里面是否加抗生素的问题，本人表示最开始加了一下什么青霉素链霉素等等，该死的还是死，后来不再加了，一样没有问题，主要是饲养环境好就行。
晒一晒我自己的山寨版本的饲养条件：普通储物箱（就是超市里面经常卖的），一个独立的房间，纯水，无菌垫料和饲料。
OK 啦~，到目前位置，饲养的裸鼠没有再死掉啦~ 另外关于饲养时间的问题：网上流传的大部分是饲养4个月就不行了~，嗯嗯，本人饲养的一般来说也就3-4个月，但是基本上没有出现问题现在。
小鼠组织荷瘤步骤
小鼠组织荷瘤步骤
组织荷瘤步骤
1.将新鲜肿瘤组织放到HTK液里，迅速拿到超净台内。
2.将肿瘤组织放入盛满生理盐水的6cm培养皿中，反复冲洗3-4次。
每次均需换新水。
3.将肿瘤组织放入盛满三抗空培的6cm培养皿中，反复冲洗3-4次。
每次均需换新培养基。
4.用镊子将肿瘤组织按在空培中，用剪刀将其剪碎，一般剪成1mm3左右的碎块即可。
5.碎块移入新培养基中清洗最后一次，用镊子夹起碎块塞入穿刺针中，不断抽吸，使其进
入多个碎块。
6.荷瘤鼠用酒精棉球擦拭全身。
将其抓起，暴露侧腹部，在侧腹中部剪毛，用剪刀在其剪
毛处将皮肤剪一1mm长小口。
7.将穿刺针由小口进入皮下，向前肢或后肢端试探前行，针尖进入上肢或下肢根部停止。
将组织块注入，旋转针头拔出。
8.用棉签紧贴皮肤顺注入方向推揉，使组织碎块尽量集中于注射处。
9.用消毒棉球擦干注射处，放下老鼠，让其自由活动。
裸鼠抑制肿瘤瘤实验具体步骤及方法
动物体内抑瘤实验具体步骤及方法活体生物发光成像技术的原理：在小型哺乳动物体内利用报告基因（荧光素酶基因）表达所产生的荧光素酶蛋白与其小分子底物荧光素在氧、Mg2+存在的条件下消耗ATP 发生氧化还原反应，将部分化学能转化为可见光能释放。
因此只有在活细胞内才会发生发光现象。
并且光的强度与标记细胞的数目线性相关。
一、材料准备1. 动物：裸鼠9 只，6～8周龄，雄性；C57小鼠24 只，6～8 周龄，雄性；动物均为自由饮水采食。
2. 细胞：MDA-MB-231人乳腺癌细胞系，使用荧光素酶基因标记。
方法：用荧光素酶报告基因标记的质粒转染人乳腺癌细胞，共转染的还有选择性标记基因，从而保证转染细胞的稳定性，形成表达荧光素酶的肿瘤细胞株；B16 黑色素瘤细胞。
二、实验步骤1. 紫杉醇混合胶束的制备（1）将适量紫杉醇溶解在少量无水乙醇和丙二醇的混合溶剂中.（2）加入适当比例的磷脂和表面活性剂A 进行充分混合，制得稳定的紫杉醇混合胶束前体制剂，载药浓度为6 g/L。
（3）临用时按剂量加入生理盐水中稀释、摇匀后即可使用。
制剂体系的粒径大小与分布特征采用动态激光光散射粒度仪检测。
2. MDA-MB-231人乳腺癌细胞荷瘤鼠模型的建立（1）培养荧光素酶基因标记的MDA-MB-231人乳腺癌细胞系，使用DMEM 培养基（添加10%胎牛血清），37 ℃、5% CO2 培养箱中培养，每3天传代1次。
（2）待细胞密度为80%～90%、细胞总量达到实验所需要求时，使用胰酶消化，收集于PBS溶液重悬。
（3）如有需要，在细胞培养一定时间后，应使用抗生素Zeocin进行抗性筛选，保证荧光素酶基因的表达量足够。
（4）收集细胞，使用PBS稀释至细胞数1.5×108/mL，接种于裸鼠腋下，每只裸鼠的接种量为0.1 mL 。
3. 动物活体成像检测（1）接种后将裸鼠随机分为3组，分别为生理盐水组、紫杉醇注射液组、紫杉醇混合胶束制剂组，每组3只。
皮下荷瘤实验的介绍及应用（二）
⽪下荷瘤实验的介绍及应⽤（⼆）第⼆部分：裸⿏⽪下荷瘤步骤⼀般更多的时候是选择⼈源肿瘤细胞系，然⽽由于存在免疫排斥，需选择裸⿏荷瘤。
下⾯以裸⿏为例，为⼤家详细介绍⽪下荷瘤的实验过程⑴肿瘤细胞的传代扩增取冻存于液氮的肿瘤细胞复苏并扩增，确保肿瘤细胞的活⼒和良好的⽣长状态⑵计算细胞接种量根据经验，⼀般⿏源肿瘤细胞接种2～100万/只，⽽⼈源肿瘤细胞则需要200-1000万/只以上。
当然最好结合⽂献来确定细胞接种量，在找不到相关资料的情况下，最⾼就⽤到1000万/0.1ml，不可再⾼（因为细胞悬液已达饱和状态）。
并且提前计算确定细胞数量，⼀般注射40只⼩⿏，⾄少需要准备50只⼩⿏的细胞量。
⑶准备裸⿏⼀般选择5-6W裸⿏，⼩于4W动物可能不耐受⽽过早死亡，⼤于6W免疫⼒会增强，不易成瘤；每批实验只⽤同⼀性别动物，通常雌雄均可，但是根据研究的肿瘤类型及肿瘤细胞系选择（乳腺癌等要选择雌性，前列腺癌等要选择雄性）⑷操作步骤（请观看视频）①接种时选择好部位进针，建议接种前酒精棉球擦拭消毒进针位置；②向前⽅穿⾏，注射前针头稍微动⼀动，能动说明在⽪下，否则可能在⽪内或者肌⾁内；③针头在⽪下⾛⼀段再注射，速度不可太快，⼀般体积为100-200µL（PBS或者⽆⾎清培养基稀释细胞，若不易成瘤可添加matrigel促进成瘤），可看见明显的⿎包；④接种点离进针点尽量较远，减少漏液和污染的可能；⑤注射完毕后，缓慢退出针头，尽量避免漏液；⑥细胞需⼀直置于冰上，使细胞处于⽐较低的代谢状态，⼀般2h之内不会有问题。
下⾯为⽪下荷瘤视频（包括各个部位的注射⼿法）：第三部分：后续实验安排⑴分组：⼀般来说⽪下荷瘤主要⽤于抗肿瘤药物的检测，因此我们⼀般分为对照组，阳性药物组，低剂量、中剂量及⾼剂量药物组等；⑵数量：荷瘤时每组不少于10只，考虑到⼩⿏成瘤率和死亡原因，最终实验应⾄少可以获取6个有效数据；⑶给药时间：⼀般接种7-10天后便可看到肿瘤长起，便可分组实验（⿏源细胞系会更快）；⑷⼈道终点：动物伦理学规定，⼩⿏肿瘤重量不可超过⼩⿏体重10%，平均肿瘤直径不超过20mm，并且如果出现溃烂，造成感染或坏死时，应该中⽌实验且对动物施⾏安乐死。
裸鼠成瘤标准
裸鼠成瘤标准
白色小鼠可以作为模型来研究肿瘤，常用实验动物有小鼠，大鼠和兔子。
小鼠肿瘤模型是肿瘤生物学非常重要的研究手段，所以在小鼠瘤模型的建立方面有很多研究。
一般情况下，小鼠瘤模型的制备包括移植法和致瘤剂法两种。
移植法最常使用是小鼠和兔子细胞培养成瘤。
将细胞培养成瘤，然后移植到裸鼠皮下或者腹腔。
致瘤剂法是用致瘤剂，如甲苯胺咪唑（MTT），甲硝唑（MNU），敌敌畏（DMBA）等制备瘤体或者瘤细胞，然后将致瘤物质直接注入裸鼠的体内或者皮下。
拥有肿瘤模型的裸鼠都需要特殊的照顾，特别是在进行实验前，需要确保裸鼠的精神和身体健康，可以接受治疗。
另外，给裸鼠提供正常的饲养环境也非常重要，建立金标准的超净舍，保证裸鼠不受外界紫外线，空气，土壤和食物等致病因素的影响，以维持健康状态。
裸鼠荷瘤方法及注意事项
裸鼠荷瘤方法及注意事项关于肿瘤细胞株的选择，确实是一个很麻烦的问题，各类文献中提到过的细胞株有很多，但是一般而言，我觉得，对于我们做裸鼠肿瘤模型，细胞株的选择应该考虑一下几个方面：1. 国际公认度，虽然SFDA的指导原则上表示只要是建株细胞株均可以，但是一般来说，还是应该尽量考虑国际上比较公认的细胞株。
2. 体内生长情况，很多细胞株，在文献中有很高的出镜率，但是实际上，基本都是从体外开始有名，所以很多人就硬生生的往体内套，结果就是吃力不讨好，比如楼主提到的A549，还有MCF-7，都是很有名气的细胞株，但是在体内却不是一个好的试验对象，成瘤率低，生长慢，均一度差。
现在国内的很多研发单位，特别是一些公司的领导们，缺乏这方面的认识，动不动就把这些著名的细胞株挂在嘴边，硬压着一线的研究人员去花功夫做这些细胞株，作的不好，就怀疑大家的水平如何如何的，奶奶的，对此非常生气！3. 药物的敏感性，这一点常常被大家忽视，大部分的裸鼠肿瘤模型都是为抗肿瘤药物的筛选以及研究服务的，但是常常大家只考虑了这个细胞株是不是好做，但是没有考虑到细胞株本身对于药物的敏感性，比如Lovo细胞，国际公认度也还可以，体内生长情况也很棒，但是对于药物的敏感性不佳，大部分的常规化疗药物到了它这里，抑瘤率都会下降，显而易见，对于抗肿瘤药物的筛选来说，它不是一个好的选择。
另外说一点，体内与体外的关系，现在做体内的人，常常被体外的人牵着鼻子走，体外做出来什么什么细胞株敏感，体内的人就得吭哧吭哧的去做这个，但是却死活做不好，其实，现在我和一些老前辈们的观点是，体内和体外应该协调好细胞株的选择问题，体外的人手上有大把的细胞株可以选择，如果，体内的人不去和他们协调，那么将永远被牵着鼻子走，受累还不讨好，应该大家坐下来，一起选择20~30种细胞株作为常规的筛选细胞株，这就足够了，细胞株选择的时候考虑好方向（胃癌、肝癌、肺癌什么的）、靶点（EGF、vEGF等等），不能漫无边际的抓着哪个体内就的做哪个，谁也没有这个本事啊。
裸鼠皮下成瘤实验操作注意事项
裸鼠皮下成瘤实验操作注意事项1、裸鼠成瘤细胞系的选择与状态并非所有的肿瘤细胞都可以成瘤。
在正式做实验之前，建议去查查ATCC上面的测试数据。
如果不得不用不能独立成瘤或者难以成瘤的细胞系，请看第3点选NOD SCID小鼠，以及第4点的Matrigel法。
细胞的状态是成瘤实验的关键，所以细胞生长状态一定要好，取处于对数生长期的细胞，细胞达80-90%左右密度为宜。
收集细胞前一天晚上更换新鲜培养基。
2、成瘤细胞的处理细胞消化后应尽快接种到裸鼠皮下，一般尽量在半小时内完成，途中将细胞悬液放在冰上降低细胞的代谢。
细胞接种量1*107/200ul/只，或者浓缩为1*107/100ul/只，根据肿瘤细胞成瘤效果调整细胞量，最高不要超过1*107。
接种肿瘤实验一般采用4--6周龄的裸鼠，裸鼠太老会加大成瘤难度，放大个体差异。
3、裸鼠成瘤接种部位选择的裸鼠一般在5-8周龄，体重18-20g左右，种植部位选择血供丰富区域，如腋窝中后部、腹股沟中上部，背部、腋下、颈部均可以，当然腋下和颈部效果最好。
4、裸鼠皮下接种操作接种前用枪将细胞悬液充分的吹散，防止细胞成团而降低细胞成活率；接种时，针头在皮下进针深一点，约1cm深，减少注射后细胞悬液从针眼溢出；左手拇指和食指捏紧裸鼠颈背部皮肤，小拇指夹住裸鼠尾巴；接种后一周左右可以见到皮下开始出现肿块。
5、皮下肿瘤大小根据肿瘤细胞的特性和接种细胞的量，一般皮下成瘤的周期为1-2个月。
肿瘤不宜生长过大，一般不要超过1000mm3。
肿瘤大小测量一般为1周两次，游标卡尺测量肿瘤最长和最短部位。
V=1/2ab2 (a 为长轴，b为短轴)。
6、皮下肿瘤保存皮下瘤取下后一部分冻液氮用作以后提蛋白和RNA，一部分福尔马林固定用做免疫组化、免疫荧光等。
裸鼠瘤子剥离技巧
裸鼠瘤子剥离技巧如下：
1. 准备工作：首先，确保您已经获得了裸鼠瘤子样本，并将其放置在无菌的培养皿中。
然后，准备一些无菌的手术器械，如剪刀、镊子和医用手套。
2. 消毒：在进行瘤子剥离之前，务必对手术区域进行彻底的消毒。
使用75%的酒精棉球擦拭裸鼠的皮肤，确保整个操作区域干净无菌。
3. 麻醉：使用适量的麻醉药物(如戊巴比妥钠)对裸鼠进行麻醉。
确保裸鼠完全失去知觉，以免在操作过程中受到伤害。
4. 切口：在裸鼠背部的瘤子周围，用剪刀和镊子小心地切开皮肤。
切口应尽量小，以减少对裸鼠的创伤。
5. 剥离：使用镊子轻轻地剥离瘤子与周围组织之间的连接。
在剥离过程中，要保持手法轻柔，避免对瘤子和周围组织造成损伤。
6. 缝合：如果切口较大，需要进行缝合。
使用医用缝合线将切口缝合起来。
在缝合过程中，要确保切口对齐，以利于愈合。
7. 观察：在完成瘤子剥离后，观察裸鼠的反应。
如果裸鼠出现异常症状(如呼吸急促、心跳加速等)，应立即停止操作并寻求专业兽医的帮助。
8. 术后护理：为裸鼠提供适当的术后护理，包括保持伤口清洁、观察伤口愈合情况以及提供充足的营养和水分。
请注意，以上步骤仅供参考，实际操作时应根据具体情况进行调整。
如有需要，请咨询专业兽医或相关领域的专家。
多种肿瘤裸鼠成瘤实验具体步骤及说明
多种肿瘤裸鼠成瘤实验具体步骤及说明诱发性肿瘤动物模型是指研究者用化学致癌剂、放射线、致癌病毒诱发动物的肿瘤等。
一、肝癌1．二乙基亚硝胺（DEN）诱发大白鼠肝癌（1）取体重250 g左右的封闭群大白鼠，雌雄不拘；（2）按性别分笼饲养。
除给普通食物外，饲以致癌物，即用0.25%DEN水溶液灌胃，剂量为10 mg/kg，每周一次，其余5天用0.025%DEN水溶液放入水瓶中，任其自由饮用；（3）共约4个月可诱发成肝癌；（4）也可以单用0.005%掺入饮水中口吸服8个月诱发肝癌。
2．4-2甲基氨基氮苯（DBA）诱发大鼠肝癌（1）用含0.06%DBA的饲料喂养大鼠，饲料中维生素B2 不应超过1.5～2 mg/kg；（2）4～6月就有大量的肝癌诱发成功。
3．2-乙酰氨基酸（2AAF）诱发小鼠、狗、猫、鸡、兔肝癌（1）给成年大鼠含0.03% 2AAF标准饲料；（2）每日每平均2～3 mg 2AAF（也可将2AAF混于油中灌喂），3～4月后有80～90%动物产生肝肿瘤。
4．二乙基亚硝胺诱发大鼠肝癌：（1）用剂量为每日0.3～14 mg/kg体重，混于饲料或饮水中给予；（2）6～9个月后255/300大鼠发生了肝癌。
5．亚胺基偶氮甲苯（OAAT）诱发小鼠肝癌（1）用1%OAAF苯溶液（约0.1 ml含1 mg）涂在动物的两肩胛间皮肤上，隔日一次，每次2～3滴，一般涂100次。
（2）实验后7～8周即而出现第一个肝肿瘤，7个月以上可诱发小鼠肝肿瘤约55%。
（3）或用2.5 mg OAAT溶于葵瓜子油中，给C3H小鼠皮下注射4次，每日间隔10天，也可诱发成肝癌。
6．黄曲霉素诱发大鼠肝癌（1）每日饲料中含0.001～0.015 ppm，混入饲料中喂6个月后，肝癌诱发率达80％。
二、胃癌1．甲基胆蒽诱发小鼠胃癌（1）取20 g左右的小鼠，无菌手术下，在腺胃粘膜面穿挂含甲基胆蒽（MC）线结。
（2）含MC的线结是用普通细线，在一端打结后，将线结置于盛有MC小玻璃试管内，在酒精灯上微微加温，使MC液化渗入线结。
小鼠组织荷瘤步骤
组织荷瘤步骤
1.将新鲜肿瘤组织放到HTK液里，迅速拿到超净台内。
2.将肿瘤组织放入盛满生理盐水的6cm培养皿中，反复冲洗3-4次。
每次均需换新水。
3.将肿瘤组织放入盛满三抗空培的6cm培养皿中，反复冲洗3-4次。
每次均需换新培养基。
4.用镊子将肿瘤组织按在空培中，用剪刀将其剪碎，一般剪成1mm3左右的碎块即可。
5.碎块移入新培养基中清洗最后一次，用镊子夹起碎块塞入穿刺针中，不断抽吸，使其进
入多个碎块。
6.荷瘤鼠用酒精棉球擦拭全身。
将其抓起，暴露侧腹部，在侧腹中部剪毛，用剪刀在其剪
毛处将皮肤剪一1mm长小口。
7.将穿刺针由小口进入皮下，向前肢或后肢端试探前行，针尖进入上肢或下肢根部停止。
将组织块注入，旋转针头拔出。
8.用棉签紧贴皮肤顺注入方向推揉，使组织碎块尽量集中于注射处。
9.用消毒棉球擦干注射处，放下老鼠，让其自由活动。
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关于肿瘤细胞株的选择，确实是一个很麻烦的问题，各类文献中提到过的细胞株有很多，但是一般而言，我觉得，对于我们做裸鼠肿瘤模型，细胞株的选择应该考虑一下几个方面：1. 国际公认度，虽然SFDA的指导原则上表示只要是建株细胞株均可以，但是一般来说，还是应该尽量考虑国际上比较公认的细胞株。
2. 体内生长情况，很多细胞株，在文献中有很高的出镜率，但是实际上，基本都是从体外开始有名，所以很多人就硬生生的往体内套，结果就是吃力不讨好，比如楼主提到的A549，还有MCF-7，都是很有名气的细胞株，但是在体内却不是一个好的试验对象，成瘤率低，生长慢，均一度差。
现在国内的很多研发单位，特别是一些公司的领导们，缺乏这方面的认识，动不动就把这些著名的细胞株挂在嘴边，硬压着一线的研究人员去花功夫做这些细胞株，作的不好，就怀疑大家的水平如何如何的，奶奶的，对此非常生气！3. 药物的敏感性，这一点常常被大家忽视，大部分的裸鼠肿瘤模型都是为抗肿瘤药物的筛选以及研究服务的，但是常常大家只考虑了这个细胞株是不是好做，但是没有考虑到细胞株本身对于药物的敏感性，比如Lovo细胞，国际公认度也还可以，体内生长情况也很棒，但是对于药物的敏感性不佳，大部分的常规化疗药物到了它这里，抑瘤率都会下降，显而易见，对于抗肿瘤药物的筛选来说，它不是一个好的选择。
另外说一点，体内与体外的关系，现在做体内的人，常常被体外的人牵着鼻子走，体外做出来什么什么细胞株敏感，体内的人就得吭哧吭哧的去做这个，但是却死活做不好，其实，现在我和一些老前辈们的观点是，体内和体外应该协调好细胞株的选择问题，体外的人手上有大把的细胞株可以选择，如果，体内的人不去和他们协调，那么将永远被牵着鼻子走，受累还不讨好，应该大家坐下来，一起选择20~30种细胞株作为常规的筛选细胞株，这就足够了，细胞株选择的时候考虑好方向（胃癌、肝癌、肺癌什么的）、靶点（EGF、vEGF等等），不能漫无边际的抓着哪个体内就的做哪个，谁也没有这个本事啊。
以下给出一些细胞株供大家参考：头颈部肿瘤没有特别好的细胞株，Hep2（喉癌）、CNE（鼻咽癌）凑活，比较慢，但是可以接受。
肺癌不要和我提什么A549，不好伺候，NCI-H460（大细胞肺癌）还不错，生长速度快，成瘤率好，但是技术不好的话，均一度会差一些，水平过关的话，开始试验的时候SD应该为平均值的1/3，对药物很敏感，特别是紫杉醇，非常敏感。
SPC-A-1（肺腺癌），马马虎虎过得去，速度不是很快，但是也还能接受。
胃癌MNK-45，日本细胞株，公认度也可以，比较好。
BGC-823，很好的公认度，生长有些慢。
食道癌Eca-109，我们找不到其他的东西，只能用它，一般般，有点不好伺候。
前列腺癌PC-3、DU-145，都是不错的细胞株，用它们没错的。
结肠癌HT-29吧，生长还可以，Lovo对药物的敏感性差了点。
肝癌这个是比较头痛的一个领域，Bel-7402，SMMC7721只能说凑活，还有国内自己建株的QGY生长特性不错，但是公认度差了点。
白血病我自己都没有做出来过，嘿嘿，K562和HL60都不好整。
表皮癌A431，这家伙，棒极了，在我手上，每次试验只需要淘汰一两只，剩下的SD小于平均值的1/4，我很喜欢它，主要是EGFR高表达，做这方面的药物，少不了它！乳腺癌不要用MCF-7,MDA-MB-435、MDA-MB-468、Bcap-37都不错，其中Bcap-37也是EGFR高表达。
卵巢癌SK-ov-3不错的。
宫颈癌比较麻烦，Hela细胞株自身的生长特性就不佳，另外安全性方面也很不好，女生勿近，我们以前做过一个C33A，还可以，对药物很敏感，生长比较慢，成瘤率也偏差，用的人也不多，但是没有办法阿。
想起来的就这些，剩下的大家补充吧。
二、1.裸鼠的状态裸鼠的年龄，比如5-7ｗ比9ｗ容易成瘤，因为这时免疫系统不够强；或者如果裸鼠由于试验系统染菌而长毛或感染，则成瘤率可能会受影响2.细胞接种量动物肿瘤一般接种2～600万/只就100%成瘤，而人癌则需要1000万以上才能较高的成瘤3.细胞状态肿瘤细胞的活力，生长状态，是否对数生长期，有无污染也对成瘤影响很大三、接种量要查文献来确定接种量，在找不到任何相关资料的情况下，最高就用到1*107/0.2ml/site,再高也没有意义了。
如果你的细胞很小，1*107/0.1ml也可以操作，不至于很粘稠，那么最好是1*107/0.1ml/site。
查文献看他们的构建条件是什么样的，比如培养条件，接种量，接种位置什么的，是不是一定要用雌性鼠等等。
有的瘤株也有可能很容易成瘤，而且生长速度很快。
建议用几只动物试试不同的接种浓度，万一能够长出来，而且还长得很快，那你就要根据情况选择一个合适的浓度了。
基本上一般认为比较合适的接种浓度有这么几个特征：1. 接种后10到15天左右可以开始试验。
2. 开始试验时可以用于试验的动物数不少于60~70%，而且SD不大于平均值的1/3左右。
3. 开始试验三、四周后肿瘤重量大于1g，并且没有溃烂。
当然，这些条件都是锦上添花的东西，如果以1*107/site 都勉勉强强长出肿瘤，那么就不必过多的去考虑它了。
接种部位接种部位:腋窝中部外侧皮下为好。
皮下肿瘤模型中，想要成瘤率高就接种在腋下。
接种时由裸鼠体侧腰部稍靠上的部位进针，要保证与接种点的距离小于针头的长度，向头部方穿行，绝对不能刺破皮肤或者刺破肌肉层，当针头到达接种位点时注射，退出针头，这样操作的目的并不完全是避免漏液，其实熟练后，不需要皮下穿行也不会漏液，主要是避免污染，进针点还有少量污染的可能性的，针头在皮下穿行一段后，接种点离进针点较远，最大限度减少污染的可能。
如果是用于正式实验，那么一只老鼠就只能接种一个位点，不可以接种多个位点用于保证可用的模型数。
因为在有些情况下，一个老鼠身上有多于一个肿瘤的情况下，会有相互影响的可能，无论这几个肿瘤相距有多远。
要是想多打几个部位做做预试验，倒也不是不可以，但是我觉得，基本上没有什么必要。
皮肤不用绷得太紧，平展就可以了，另外接种的时候进针点很靠下，针头在皮下走一段再注射，速度不要太快。
注射前针头稍微动一动，能动就说明在皮下，否则可能在皮内或者肌肉内。
一般来说都是有鼓包的但是要是你接种位置太深入腋窝，你是看不到鼓包的。
主要靠针头稍微动一动来判断。
是否应用免疫抑制剂裸鼠皮下种瘤后，可以通过应用免疫抑制剂，比如环磷酰胺（2mg每只，打两天）来加速瘤体的生长，当然我知道裸鼠是T免疫缺陷动物，但是人家说的CTX可以进一步抑制裸鼠的体液免疫和NK细胞杀伤的保护作用，可以加快瘤子的生长，这样造模的周期很短，也可以进行人为的控制，不知道这个观点是不是有道理，实践中是不是真有人这么做呢？楼上说的文献中也有报道，而且还有预先用放射照射抑制动物免疫功能再接种的方法，但是一般常规应用中大多数时候不推荐这么做。
另外还有一个问题应该被考虑到，大家现在都在琢磨着怎么让肿瘤出瘤的更快，造模周期更短，但是如果人为的把肿瘤生长加速，其实对实验并不好。
因为造模周期短，很可能生长速度也会被加快，肿瘤可能很快就溃烂了，这样就不得不被迫中止实验，而用药却没有用到足够的时间，药效还没有发挥出来就结束了，这样是很不利的。
所以一般情况下，应该尽量的复合这个瘤株本身的生长特性，不应该过多地去加以人为的干扰。
是否用手术标本荷瘤如果是药效试验，不建议用手术标本，因为SFDA的临床前研究指导原则上明确指出要用建株的肿瘤株进行试验，因为用手术标本的试验可重复性太差，你这个标本万一没有保存好，断掉了，你自己都很难重复出上次的试验结果。
国外的文献上看到的却很少有人用手术标本构建模型进行试验。
取材的部位：肿瘤生长活跃，状态良好，结缔组织比较少的地方。
运送途径：无菌、冰浴保温，无菌培养液浸泡，时间不能超过1个小时。
最好一个小时内就能够接种到动物体内。
接种部位：腋下。
另外，手术标本还有一个风险：你不能保证取得的标本一定能够顺利地成瘤并且用于试验。
注意事项A裸鼠的周龄,B肿瘤细胞:何种肿瘤,接种细胞的数量(用对数生长期的,活力高的)记数要准确,C接种方式:注意不要漏液,否则会损失细胞数量D饲养环境:要求是SPF条件具体操作1.能不能成瘤，首先要考虑你的肿瘤细胞系能否成瘤，其次关键是你的肿瘤细胞数，一般肿瘤细胞存活力还是蛮高的，所以你重点要考虑细胞数的问题，但最高不要超过1*107。
2.接种时间，最好在1小时之内完成。
但在我实际操作过程中，裸鼠的数量又多，1小时之内根本做不完的，所以你可以预先将细胞放在冰盒里暂为保存。
效果还是不错的。
3.成瘤时间，每个肿瘤细胞不太一样，细胞数合适，一般一周左右应该能出来了；另外，如果你是打皮下，你要考虑是否有打到深层组织，比如肌肉，那即使成瘤了，也不大好摸出来。
腹腔注射1、腹腔注射进针的位置在腹中线与小鼠两后肢上沿连交叉以下的位置。
2、腹腔注射很少会打到肠管，因为肠子在碰到硬物时会缩起来，当然前提是你的进针不是特别深，如果你的整个针头都扎入了腹腔，那么肠子是无处可躲了。
3、腹腔注射进针后，你可以将针头左右摆动一下，如果是正确的，这时会有一种很自由无障碍的感觉，进针角度撑握在小于45度，针头进入长度不超过3厘米左右。
用大、小白鼠做实验时，以左手抓住动物，使腹部向上，右手将注射针头于左（或右）下腹部刺入皮下，使针头向前推 0.5～1.0cm，再以45度角穿过腹肌，固定针头，缓缓注入药液（图2-5），为避免伤及内脏，可使动物处于头低位，使内脏移向上腹。
若实验动物为家兔，进针部位为下腹部的腹白线离开1cm处肿瘤倍增时间肿瘤动物实验模型肿瘤的倍增时间（doubling time），应该是在瘤体积100－800之间计算，但是一组动物有10只，每周测量2次瘤体积，如果我想计算从200倍增到400的时间的话，10只动物不会在我测量体积的时候正好到200或400，那么，在计算的时候，具体应该怎么做？Geddes 等[29]将结节倍增时间的计算公式表示为：DT =（ln 2△ t）/ln（V2/V1），V1、V2分别是前后两次测量的体积，△ t是两次测量的时间间隔你的问题有歧义，我觉得可以有几下几种理解：1.测量的时候，对于某个老鼠来说，第一次可能测出来的体积是189.26（不是正好200），第二次是415.31（不是正好400），对于其他的动物都有这样的问题，2.对于十只老鼠来说，测量的时候，可能1号老鼠是189.26，2号是312.57，3号是110.89......，这也是一种理解，我的意见是：测量一段比较长的时间，每只老鼠可以独立计算倍增时间，然后计算平均值，SD等，用统计学处理的手段。
个体差异同一批种几十只老鼠，有的就长不出来，有的长得很大，使评价药效很困难。