ELISA标本收集处理方法
ELISA组织样本处理方法
ELISA组织样本的处理
1、采集组织：在冰冷的生理盐水中漂洗组织，除去血液，滤纸拭干，称重（100mg左右为
宜），剔除附属的结缔组织，称取组织块。
2、用移液管量取0.1M PBS或者用0.86％冷生理盐水，组织：匀浆介质=1:10（或所用生理
盐水的体积总量为组织块重量的9倍），尽量保证样本间所取组织重量和加入匀浆介质（PBS或生理盐水）的比例一样。
然后用眼科小剪尽快剪碎组织块（操作要在冰水浴中进行）。
3、组织匀浆：
a) 玻璃匀浆器：将剪碎的组织倒入玻璃匀浆管中，再将剩余的1/3匀浆介质或生理盐水
冲洗残留在烧杯中的碎组织块，一起倒入匀浆管中进行匀浆，左手持匀浆管将下端插入盛有冰水混合物的器皿中，右手上下抽动或转动研磨杆数十次（6～8分钟），充分研碎，使组织匀浆化。
b) 组织匀浆/破碎机：用组织破碎机10000～15000r/min上下研磨制成10％组织匀浆，
也可用内切式组织匀浆机制备（匀浆时间10秒/次，间隙30秒，连续3～5次，在
冰水中进行），皮肤、肌肉组织等可延长匀浆时间。
4、将制备好的10％匀浆用离心机4℃，5000g离心5～10min，收集各匀浆样本上清。
5、BCA法测定各组织匀浆样本总蛋白量，便于后续统计分析数据。
6、将收集的上清分装成适量小份，按需保存备用：
4℃下，可保存不超过72小时；
-20℃下，可保存不超过1个月；
-80℃下，可保存不超过2～6个月；
7、根据实验需要，取适量上清液进行各种ELISA测定。
注意事项：
1、离心后的样本应清澈透明，无沉淀；
2、冻存的匀浆样本应避免反复冻融；
2、对于冷冻保存的样本，使用前在冰上融化，避免加热融化。
ELISA操作规程
ELISA操作规程引言概述ELISA（酶联免疫吸附试验）是一种常用的实验技术，用于检测特定蛋白质或其他分子在生物样本中的存在和浓度。
本文将详细介绍ELISA的操作规程，包括实验前的准备工作、样本处理、试剂配制、板上实验步骤和结果分析等内容。
一、实验前的准备工作1.1 样本准备：收集样本时应注意避免污染和交叉污染，避免冻融次数过多。
样本应在规定时间内处理，避免长时间存放。
1.2 试剂准备：根据实验方案准备所需的试剂，如稀释缓冲液、洗涤缓冲液、底物液等，确保试剂的质量和稳定性。
1.3 仪器准备：准备好ELISA板阅读器和洗板机等设备，确保仪器的正常运行和校准。
二、样本处理2.1 样本稀释：根据实验需求将样本进行适当的稀释，以确保浓度在标准曲线的线性范围内。
2.2 样本处理：对于血清或血浆样本，应先离心去除悬浮物，避免干扰因子的影响。
2.3 样本保存：处理完样本后，应储存于-20℃或更低的温度下，避免多次冻融。
三、试剂配制3.1 稀释缓冲液：根据实验方案准确称取试剂，按照比例稀释，确保最终浓度符合实验要求。
3.2 洗涤缓冲液：配制洗板机所需的洗涤缓冲液，保证洗板的干净程度。
3.3 底物液：根据实验方案配制底物液，确保底物液的质量和稳定性。
四、板上实验步骤4.1 包被：将包被抗体加入到板上，孵育一定时间后洗涤，使包被抗体固定在板上。
4.2 加样本：加入样本和标准品，孵育一定时间后洗涤，去除未结合的物质。
4.3 加底物：加入底物液，孵育一定时间后停止反应，加入停止液终止反应。
五、结果分析5.1 读板：使用ELISA板阅读器测定吸光度值，绘制标准曲线并计算样本的浓度。
5.2 数据处理：根据实验方案进行数据处理，包括样本浓度的计算和结果的统计分析。
5.3 结果解释：根据实验结果进行数据解释，得出结论并撰写实验报告。
总结：ELISA操作规程是一项重要的实验技。
ELISA操作流程
ELISA操作流程前处理1. 匀浆样本:取一定量（约100-150g）旳样本进行匀浆, 匀浆样本以无颗粒状为为佳。
样本匀浆好后来再运用称样勺搅拌样本, 以充足混合不一样个体旳样本, 到达均质旳效果。
2. 称量样本:运用0.01g当量旳电子天平称量对应旳样本重量, 误差尽量控制在±0.02g,以提高成果旳精确度。
样本直接称取到50ml离心管中。
称量旳样本应尽量称取匀浆效果比很好旳样品。
3. 加入提取液:在对应旳样本中加入对应旳提取溶剂, 溶剂旳体积在条件容许范围内尽量精确。
4. 提取或萃取:加入对应旳提取溶剂后来, 拧紧离心管盖, 运用涡旋仪充足振荡样品, 以样本与提取液充足混合为准。
详细时间可参照阐明书所提供旳措施时间规定。
5. 离心:把处理好旳样品对称放置在离心机中, 盖上离心机盖门, 直到听到离心机盖门关闭声音, 按“离心”键进行离心, 离心时间一般设为5min, 离心速度一般设为4500rpm/min。
假如样品离心效果不佳则可以加大离心力或延长离心时间再次离心。
6. 移取液体:运用加样枪移取对应旳旳溶剂液体至另一种容器中；假如需要吹干浓缩旳样品, 则移取到洁净干燥旳玻璃管中；假如是取下层进行分析旳样品则移取所有上层液体, 运用下层进行分析。
移取液体旳时候请注意防止移取到不有关旳液体层, 以免导致污染。
7. 浓缩吹干:先运用甲醇把氮吹仪旳针头进行润洗, 详细措施是先打开空气压缩机旳开头, 先通以少许气流, 把装有甲醇旳容量浸泡针头前端, 浸泡时间约1-2s即可。
润洗针头后, 把装有样品旳玻璃管放在下面水浴锅旳相对应旳固定夹子上, 再打开气流阀门, 以能感觉到气流声音为准, 再缓慢把针头伸到液面上方, 以吹动液面为限, 在浓缩吹干过程中应不停调整针头旳高度, 以节省吹干时间。
吹干旳样品以没有液体流动旳鉴定根据, 亦可在吹干后再吹大概2-3min左右。
严禁在没有吹干旳状况下就取下样品进行下一步操作。
ELISA实验标本的采集、处理和保存
ELISA实验标本的采集、处理和保存发布时间:2009-10-19ELISA实验标本的采集、处理和保存能够应用ELISA 实验的样本种类很多，有血清，血浆，细胞上清，细胞裂解液，尿液，关节滑液，脑脊液，肺泡灌洗液，各种组织的组织匀浆；采集和处理的方式都不相同。
下面就列出了biotnt 收集的给类样本的采集、处理和保存方式。
方法大多出自文献和试剂盒说明书，部分方法经Biotnt 验证过，但有的方法并没有实际操作过，所以，以下方法仅供参考。
一、ELISA实验中血清的采集、处理和保存；1、真空采血针采集2ml新鲜血液，加入无菌试管中；2、采血后室温静置1小时；3、将采集血液用离心机4℃，2500rpm离心10min，，将离心好的匀浆留上清，弃下面沉淀。
4、取上清。
分装冻存备用，2-8℃下，可放置保存24-48小时；-20℃下，可放置保存1个月；-70℃下，可放置保存6个月；5、根据你的实验需要，取适量上清夜进行各种ELISA测定。
大部分ELISA检测均以血清为标本。
血清标本可按常规方法采集，应注意避免溶血，红细胞溶解时会释放出具有过氧化物酶活性的物质，以HRP为标记的 ELISA测定中，溶血标本可能会增加非特异性显色。
此外还应避免细菌污染，因为菌体中可能含有含有内源性HRP，也会产生假阳性反应。
血清标本宜在新鲜时检测。
如在冰箱中保存过久，其中的可发生聚合，在间接法ELISA中可使本底加深。
二、ELISA实验中血浆的采集、处理和保存；1、真空采血针采集2ml新鲜血液，加入无菌试管中；2、按1:9加入抗凝剂（EDTA、草酸钠、肝素、枸橼酸钠），30分钟内于冰上分离血浆以减少血小板的污染；（也可以直接用抗凝管采集）；3、将采集血液用离心机4℃，2500rpm离心5min，，将离心好的匀浆留上清，弃下面沉淀。
4、取上清。
分装冻存备用，2-8℃下，可放置保存24-48小时；-20℃下，可放置保存1个月；-70℃下，可放置保存6个月；5、根据你的实验需要，取适量上清夜进行各种ELISA测定。
ELISA操作规程
ELISA操作规程引言概述：ELISA（酶联免疫吸附试验）是一种常用的实验技术，用于检测和定量分析生物样本中的特定分子，如抗体、抗原、蛋白质等。
ELISA操作规程是进行ELISA 实验的关键，它确保实验的准确性和可重复性。
本文将详细介绍ELISA操作规程的内容。
正文内容：1. 准备实验材料1.1 准备试剂和标准品：根据实验需要，准备适当的试剂和标准品，如抗体、底物、酶标记物等。
确保试剂的保存条件符合要求，标准品的浓度准确。
1.2 准备样本：收集样本后，按照实验要求进行处理和储存。
确保样本的质量和数量满足实验需求。
2. 准备实验设备2.1 洗板机：清洗洗板机，确保洗板机的清洁度，避免交叉污染。
2.2 酶标仪：校准酶标仪，确保测量结果的准确性。
2.3 微量移液器：校准微量移液器，确保样品的准确加入。
2.4 96孔板：准备好96孔板，标记好每个孔的内容。
3. 进行实验步骤3.1 固定抗原：将待测抗原加入96孔板中，使其吸附在孔壁上。
3.2 阻断：加入阻断剂，阻断非特异性吸附位点。
3.3 添加抗体：加入特异性抗体，与抗原结合。
3.4 添加酶标记物：加入酶标记的二抗或底物，与抗体结合。
3.5 洗涤：用洗涤缓冲液洗涤孔壁，去除未结合的物质。
3.6 反应底物：加入底物，使酶催化反应发生。
3.7 终止反应：加入终止液，停止酶催化反应。
4. 测量和数据处理4.1 使用酶标仪测量吸光度值，记录每个孔的读数。
4.2 绘制标准曲线：根据标准品的吸光度值，绘制标准曲线。
4.3 计算样本浓度：根据样本的吸光度值，通过标准曲线计算样本的浓度。
5. 实验注意事项5.1 严格按照操作规程进行操作，避免实验误差。
5.2 保持实验环境的清洁和无菌，避免污染。
5.3 注意实验材料的保存和使用期限，确保实验结果的准确性。
总结：ELISA操作规程是进行ELISA实验的重要指南。
准备实验材料和设备、按照规定的步骤进行实验、正确测量和处理数据以及注意实验细节是保证实验结果准确性和可重复性的关键。
ELISA样本准备及实验步骤
ELISA的标本准备在收集标本前都必须有一个完整的计划，必须清楚要检测的成份是否足够稳定。
对收集后当天就进行检测的标本，及时储存在4℃备用。
对于隔天再检测的标本，及时分装后冻存在-20℃备用，有条件的，最好-70℃冻存备用。
标本应避免反复冻融。
液体类标本包括血清、血浆、尿液、胸腹水、脑脊液、细胞培养上清等。
血清：室温血液自然凝固10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清。
保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
血浆：应根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清。
保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
尿液：用无菌管收集。
离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清。
保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
胸腹水、脑脊液参照此实行。
细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。
离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清。
培养细胞检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。
通过反复冻融或加入组织蛋白萃取试剂，以使细胞破坏并放出细胞内成份。
离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清。
保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
组织标本切割标本后，称取重量。
加入一定量的PBS，PH7.4。
用液氮迅速冷冻保存备用。
标本融化后仍然保持2-8℃的温度。
加入一定量的PBS（PH7.4），或组织蛋白萃取试剂, 用手工或匀浆器将标本匀浆化。
离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清。
分装后一份待检测，其余冷冻备用。
ELISA实验步骤工作原理（以VEGF ELISA Kit为例）血管内皮细胞生长因子（VEGF）是最重要的血管生长因子之一。
二个亚单位由二硫键连接，组成分子量46-48KDa的糖蛋白质。
ELISA检测样品处理方法
ELISA检测样品的处理方法Author:Elabscienceviews:2387通常我们可用于ELISA检测的样本是有多种类型的，如血清、血浆、尿液、细胞培养上清或组织匀浆液等，不同类型的检测样本前期的处理方法是不一样的。
正确的处理样本是保证ELISA检测的正确性和准确性的第一步，下面简单介绍一下不同类型的样本的处理方法。
1、血清血清是最常用于ELISA检测的一类样本，处理也比较简单。
用无热原、无内毒素的试管或离心管采集血液标本，将试管或离心管室温放置2小时或4℃过夜，使血清析出。
（最好将试管或离心管倾斜放置，使液面横截面增大，能使血清更大程度的析出。
）4℃ 1000×g离心20分钟，仔细收集上清。
建议将血清分装多份，-20℃或-80℃保存，避免反复冻融。
采血过程中应避免溶血，因为红细胞裂解时会释放具有过氧化酶活性的物质，在以HRP为标记的ELISA检测中会有非特异性的显色，而导致检测的不准确性。
同时也应避免细菌污染，因为菌体内可能含有内源性的HRP从而导致检测的假阳性。
2、血浆用含抗凝剂的采血管或离心管采集血液标本，标本采集后30min内4℃ 1000×g离心15min，取上清即血浆。
将上清分装多份，-20℃或-80℃保存，避免反复冻融。
避免使用溶血或高血脂的标本。
常用的抗凝剂为EDTA、肝素钠和枸橼酸钠等，检测时还应仔细阅读试剂盒说明书，检查试剂盒是否对抗凝剂有特殊要求。
3、细胞培养上清取细胞培养上清到离心管，1000×g离心20min，除去细胞碎片及杂质，取上清，-20℃或-80℃保存，避免反复冻融。
4、细胞裂解液1）吸去培养板内的培养基，用胰酶消化细胞，加适量培养基将细胞从培养板上吹下来。
悬浮细胞可省略。
2）收集细胞悬液，1000×g离心10min，弃去培养基，用预冷的PBS润洗3次。
3）加入适量的预冷PBS或细胞裂解液（临用前加入蛋白酶抑制剂）重悬细胞。
ELISA试剂盒检测中样品处置
ELISA试剂盒检测中样品的处置/各类检测样本的处置1．细胞培育物上清：细胞培育物于室温1000g，离心10分钟后搜集上清，并将标本保留于-20℃，且应幸免反复冻融。
2．血清：标本请于室温放置2小时或4℃留宿后于1000g，4℃离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃保留，但应幸免反复冻融。
3．血浆：可用EDTA或肝素作为抗凝剂标本搜集后30分钟内于2-8℃,1000g离心15分钟，或将标本放于-20℃保留，但应幸免反复冻融。
4．尿液：无菌搜集取初尿，离心除去沉淀物，即可用于检测，要长期保留尿样，能够加入％的NaN3在4-8℃保留，或加入尿样冰冻爱惜液放入-20℃冰箱长期保留。
5．组织匀浆：将组织标本先用PBS洗涤，除去多余血液，匀浆化后放在PBS于-20℃放置留宿，再通过二次反复冻融破膜，5000g，4℃离心5分钟，取上清即可检测。
ELISA法定量检测人细胞液、体液和组织匀浆中8羟基脱氧鸟苷的含量。
试剂组成:包被平底微孔板,酶结合物,生物素,标准品,显色剂A,显色剂B,终止液,浓缩洗涤液（100倍稀释）,利用说明书自备物品1.酶标仪（尽可能提早预热）2.微量加液器、吸头3.蒸馏水或去离子水和滤纸样本的搜集及保留一样的生物标本包括有：血液、体液、内脏器官、粪便、胃液、活检组织、组织提取液、天然孔分泌物及各类表达系统的表达产物等一样为无菌操作，低温保留（-80℃、液氮）一．若是搜集的实质器官那么要求：一、器官实质不能过小二、以搜集实质性病灶区为佳：如淋巴结、心脏、非、肺、脾和肠管等病毒、病菌聚集的地址为佳3、同一病例装入同一容器，并做好标记4、应在0-8℃的低温贮存和运输五、实质性器官的处置：、取实质性器官约左右，充分剪碎或研磨、加入约500ul的PBS/生理盐水，充分混匀、离心5000rmp x10min，去上清、-20℃保留，作为待检标本（切勿反复冻融）二．体液（常见的包括血清、血浆、唾液和尿液等）的处置方式一、血液包括血浆和血清，它们的要紧区别确实是：血清凝血而血浆不凝血，因此它们的处置方式也就不一样、搜集血浆时一样不加抗凝剂（要紧为枸橼酸盐和柠檬酸盐），搜集后当即离心800-1000rmp x 5min分离，取上清，-20℃或4℃保留备用；、如要搜集血清，一样要加入整体积1%的抗凝剂，搜集后先室温或4℃静置半小时后，800-1000rmp x 5min分离，取上清，-20℃或4℃保留备用；二、胃液和唾液的搜集方式一样现采现用，可是一样饭后半小时内不易搜集，因为刚进食的唾液中富含丰硕的唾液淀粉酶，最好的搜集的时刻时空肚搜集；3、尿液的搜集方式大体和唾液一样的，即现采现用，可是一样隔夜尿不搜集；4、组织提取液如肺泡灌洗液等，搜集后离心分离，800-1000rmp x 5min，取上清，-20℃或4℃保留备用；三．粪便和天然孔排泄物：搜集后一样现用PBS/生理盐水溶解，充分混匀，800-1000rmp x 5min分离，取上清，-20℃或4℃保留备用；四．活检组织一样进行穿刺检测，最多见的确实是肝活检，像病毒性肝炎、脂肪肝、各类类型的肝硬化等进行活检简单方便、准确。
ELISA方法的及步骤
ELISA方法的及步骤ELISA（酶联免疫吸附法）是一种常用于检测目标分子的方法，被广泛应用于生物医学研究、临床诊断和生物工程等领域。
ELISA方法通过利用免疫试剂（如抗体）与待测物发生特异性结合，再通过酶的催化作用来检测和定量目标分子的存在。
1.血清或其他样品的制备：将待测样品（如血清、细胞上清液等）收集并处理，如离心去除固体颗粒物或红细胞。
将样品稀释至适当的浓度，以保证检测结果在测量范围内。
2.包被试剂的制备：将目标分子（如蛋白质、病毒等）或其相应的抗体溶解在缓冲液中，然后将溶液加入到固相（如酶标板）上，使目标分子或抗体固定在固相表面上。
接下来，将固相洗涤以去除未结合的试剂，防止非特异性结合的发生。
3.样品的添加：将制备好的样品加入到包被试剂的固相上。
样品中的目标分子或抗体（如抗原、抗体）与包被试剂表面的抗体或抗原发生特异性结合。
4.洗涤：将固相进行多次洗涤以去除未结合的样品成分。
洗涤步骤可以使用缓冲液，如PBS（磷酸盐缓冲液）或TBS（三氯乙酸盐缓冲液）。
5.二抗的添加：将与目标分子或抗体结合的复合物的稳定剂（例如辣根过氧化物酶（HRP）标记的二抗）加入到固相上。
二抗与前一步骤中的特异性结合复合物再次发生特异性结合，形成二级结合复合物。
6.洗涤：将固相多次洗涤以去除未结合的二级抗体。
7.发色反应：在固相上加入一种含氢过氧化物（如TMB）的底物。
该底物与HRP酶发生反应，生成可测量的色素产物。
发色反应的发生时间应根据实验需求进行控制，以确保准确的测量。
8.反应终止：通过向反应混合物中添加酸（如硫酸）或碱（如氢氧化钠）等溶液来终止发色反应。
终止反应后，反应混合物中的混浊液体会变为蓝色或黄色。
9.信号测量：通过光谱法（如吸光度法）测量混合物的光密度，来反映目标分子或抗体的含量。
使用酶标仪可以读取光密度值，并将其与标准曲线进行比较以确定目标物的浓度。
ELISA方法的优点包括高灵敏度、高特异性、易于操作和较少的试剂消耗。
各种组织匀浆样本用于ELISA检测的处理方法
各种组织匀浆样本用于ELISA检测的处理方法ELISA(酶联免疫吸附试验)是一种常用的生物学实验方法，用于检测样本中特定分子的存在，如抗体、抗原、蛋白质等。
对于ELISA检测，颗粒样本的处理是非常重要的步骤之一，因为它可以消除潜在的干扰物，提高检测的准确性和可靠性。
下面将介绍一些常见的组织匀浆样本处理方法。
1.组织匀浆样本制备通常情况下，组织样本需要首先经过匀浆处理，以得到细胞和组织的裂解液。
一般来说，采用以下基本步骤：1.1取出所需组织样本，并在冰上迅速切割成小块。
1.2 将组织块放入冷冻匀浆管中，并加入适量的缓冲液，如磷酸盐缓冲液、磷酸盐缓冲液+0.1% Triton X-100等。
1.3使用研磨器、匀浆器或超声波仪器对组织块进行处理，直至均匀混合。
1.4将均浆液离心，以去除固体碎片和细胞残渣。
2.组织匀浆样本的稀释制备好的组织匀浆样本通常需要稀释，以使其适合ELISA检测的要求。
通常采用以下步骤：2.1选取适当的稀释液，如PBS缓冲液、BSA溶液等，根据实验需求和标准方案进行选择。
2.2将制备好的组织匀浆样本与稀释液按照一定比例混合，比如1:2、1:5等，以得到适当浓度的样品溶液。
3.组织匀浆样本的前处理在ELISA检测前，对组织匀浆样本进行前处理可以去除一些潜在的干扰物，并提高检测的灵敏度。
以下是一些常见的前处理方法：3.1丙二醛固定化：将组织匀浆样本加入适量的丙二醛溶液中，固定其中的蛋白质，以避免在ELISA检测中失去目标分子。
3.2蛋白酶处理：一些样本可能含有特殊结构的蛋白质，如膜蛋白等。
在进行ELISA检测之前，可以用适当的蛋白酶进行处理，如蛋白酶K、胰酶等。
4.组织匀浆样本的加样与检测经过前期处理和稀释后，组织匀浆样本可以用于ELISA检测。
通常的操作步骤如下：4.1将稀释后的组织匀浆样本加入已涂有特定抗原或抗体的酶标板孔上。
4.2确保每个样品加入相同体积的孔，以保持每个孔的样本负载均衡。
ELISA操作规程
ELISA操作规程引言概述：ELISA（酶联免疫吸附试验）是一种常用的生物化学实验技术，广泛应用于医学、生物学和生物化学等领域。
本文将详细介绍ELISA操作规程，并按照一、二、三、四、五这样的顺序，分为五个部份进行阐述。
一、试剂准备1.1 根据实验需要，准备ELISA板、酶标板液、洗涤缓冲液、样本稀释液等试剂。
1.2 检查试剂的有效期和储存条件，确保试剂的质量。
1.3 根据实验方案，按照规定的比例和方法，将试剂进行稀释和配制。
二、样本处理2.1 采集样本，并根据实验要求进行标记和编号。
2.2 根据实验方案，对样本进行预处理，如离心、稀释等。
2.3 确保样本的质量和数量符合实验要求，并进行必要的记录和标记。
三、板涂覆3.1 将ELISA板放置在工作台上，并按照实验方案要求，在每一个孔中加入特定抗原或者抗体。
3.2 保持ELISA板在适当的温度下孵育一段时间，以确保抗原或者抗体的吸附。
3.3 将孔中的液体倒出，并用洗涤缓冲液洗涤孔，以去除未吸附的物质。
四、标记物检测4.1 准备酶标记的抗体或者抗原，并按照实验方案要求进行稀释和标记。
4.2 将标记物加入到ELISA板的每一个孔中，并在适当的温度下孵育一段时间，使标记物与抗原或者抗体结合。
4.3 将孔中的液体倒出，并用洗涤缓冲液洗涤孔，以去除未结合的标记物。
五、结果分析5.1 加入底物溶液，使酶标记物发生可见的颜色反应。
5.2 在适当的时间内住手反应，并用酶标仪或者其他仪器测量吸光度。
5.3 根据实验方案和标准曲线，计算样本中目标物质的浓度或者活性。
总结：ELISA操作规程是进行ELISA实验的基本指南。
通过试剂准备、样本处理、板涂覆、标记物检测和结果分析等五个部份的详细阐述，可以确保实验的准确性和可重复性。
在操作过程中，需要严格遵守实验室的安全操作规范，并根据实验方案进行操作。
惟独正确操作，才干获得准确可靠的实验结果。
ELISA样本处理及要求
ELISA样本处理及要求样本处理及要求：1. 血清：室温血液自然凝固 10-20 分钟，离心 20 分钟左右（ 2000-3000 转 / 分）。
仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
2. 血浆：应根据标本的要求选择 EDTA 或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合 10-20 分钟后，离心20 分钟左右（ 2000-3000 转 / 分）。
仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。
3. 尿液：用无菌管收集，离心 20 分钟左右（ 2000-3000 转 / 分）。
仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
胸腹水、脑脊液参照实行。
4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。
离心 20 分钟左右（ 2000-3000 转 /分）。
仔细收集上清。
检测细胞内的成份时，用 PBS （ PH7.2-7.4 ）稀释细胞悬液，细胞浓度达到 100 万 /ml 左右。
通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。
离心 20 分钟左右（ 2000-3000 转 / 分）。
仔细收集上清。
保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
5.组织标本：切割标本后，称取重量。
加入一定量的 PBS ， PH7.4 。
用液氮迅速冷冻保存备用。
标本融化后仍然保持 2-8 ℃ 的温度。
加入一定量的 PBS （ PH7.4 ），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。
离心 20 分钟左右（ 2000-3000 转 / 分）。
仔细收集上清。
分装后一份待检测，其余冷冻备用。
6.标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。
若不能马上进行试验，可将标本放于 -20 ℃ 保存，但应避免反复冻融 .7.不能检测含 NaN3 的样品，因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（ HRP ）活性。
ELISA实验常见样本类型处理
1. 细胞培养上清
①收取细胞上清；
②离心10min（4℃，3000g），取上清。
建议进行两次离心和取上清；
③建议分装后-80℃冻存，避免反复冻存
2.血清
①不含抗凝剂的采血管采血，室温静置2小时（避免震动，防止溶血）；
②离心20min（4℃，3000g），取上清。
建议进行两次离心和取上清；
③建议分装后-80℃冻存，避免反复冻存
3.血浆
①含抗凝剂（EDTA、肝素，具体采取哪种抗凝剂，参考说明书）的采血管采血；
②离心20min（4℃，3000g），取上清。
建议进行两次离心和取上清；
③建议分装后-80℃冻存，避免反复冻存
4.细胞裂解液
①收集细胞，PBS清洗后，离心10min（1000g，4℃），弃去上清；
②加入适量裂解液（107细胞对应200-300ul裂解液），放置于4℃冰箱（20min）；
③离心10min（13000rpm，4℃），取上清，建议进行两次离心和取上清；
④测定BCA总蛋白浓度；
⑤建议分装后-80℃冻存，避免反复冻存。
ELISA操作规程
ELISA操作规程一、引言ELISA（酶联免疫吸附试验）是一种常用的实验技术，用于检测特定抗原或抗体的存在和浓度。
本文将详细介绍ELISA操作规程，包括试剂准备、样品处理、板涂覆、孵育、洗涤、检测和数据分析等步骤。
二、试剂准备1. 缓冲液的配制：根据实验需求，配制适当的缓冲液，例如PBS（磷酸盐缓冲液）、TBST（三倍磷酸盐缓冲液-Tween 20缓冲液）等。
2. 酶标板涂层抗体的制备：将特定抗体稀释至适当浓度，加入涂层液中，进行孵育。
三、样品处理1. 样品收集：收集待测样品，如血清、尿液等。
2. 样品预处理：根据实验要求，对样品进行适当的处理，如稀释、离心等。
四、板涂覆1. 涂层液加入：将酶标板中的孔加入涂层液，注意避免气泡的产生。
2. 孵育：将酶标板在适当温度下孵育一段时间，使抗体与孔壁结合。
五、孵育1. 样品加入：将经过处理的样品加入酶标板的孔中。
2. 孵育：将酶标板在适当温度下孵育一段时间，使待测物与抗体结合。
六、洗涤1. 洗涤液准备：配制适当的洗涤液，如TBST。
2. 洗涤：将洗涤液加入酶标板孔中，轻轻摇晃或使用洗涤器进行洗涤，去除未结合的物质。
七、检测1. 二抗加入：将特定的二抗加入酶标板的孔中，与待测物结合。
2. 孵育：将酶标板在适当温度下孵育一段时间，使二抗与待测物结合。
3. 洗涤：使用洗涤液洗涤酶标板，去除未结合的二抗。
4. 底物加入：将底物加入酶标板孔中，使酶与底物反应产生可测量的信号。
5. 反应停止：加入适当的反应停止液，停止底物反应。
八、数据分析1. 读板：使用酶标仪读取各孔的吸光度值。
2. 数据处理：根据实验设计和标准曲线，计算出待测物的浓度或相对含量。
3. 统计分析：对实验数据进行统计学分析，如均值、标准差、相关性等。
九、结果解读根据数据分析的结果，结合实验目的和背景知识，解读实验结果，得出相应的结论。
十、结论根据ELISA操作规程的步骤和结果解读，得出实验的结论，并讨论实验的可靠性和局限性。
ELISA实验样本处理方法
ELISA实验样本处理方法可用于ELISA实验的样本一般有血清、血浆、尿液、细胞培养上清以及组织匀浆等。
不同样本类型的预处理方法也不同。
适当的样本预处理是确保ELISA实验正确性和准确性的第一步。
这里，我们将介绍几种不同样本类型的处理方法。
1. 血清血清是ELISA实验最常用的样本，其预处理也十分简单。
使用无热原无内毒素的试管或离心管采集血液样本，将试管或离心管在室温下放置2小时或4℃过夜，分离出血清（建议倾斜试管或离心管以扩大液面的横截面，使血清可以更大程度地分离出来）。
4℃下以1000×g离心20分钟，小心收集上清液（血清），立即进行测定。
建议在-20℃或-80℃下将收集的血清分装保存，避免反复冻融。
在收集血液样本的过程中应避免溶血，因为红细胞在溶解时会释放具有过氧化物酶活性的物质，这种情况下，ELISA实验中将会出现非特异性显色反应，导致检测结果不准确，出现假阳性结果。
另外，样本还应避免细菌污染，因为细菌可能含有内源性HRP，也会导致检测结果不准确。
2. 血浆使用含抗凝剂的采血管或离心管采集血液样本，采集后30分钟内，4℃下以1000×g离心15分钟，小心收集上清液（血浆）。
建议在-20℃或-80℃下将收集的血浆分装保存，避免反复冻融。
样本应避免溶血或高血脂。
常见的抗凝剂包括EDTA，肝素钠，枸橼酸钠等。
检测前请仔细阅读ELISA试剂盒说明书，查看该试剂盒针对抗凝剂是否有特殊要求。
3. 细胞培养上清将细胞培养上清液吸入离心管中并以1000×g离心20分钟，除去细胞碎片和杂质，收集上清液备用，样本保存在-20℃或-80℃，避免反复冻融。
4. 细胞反复冻融方法：(1) 吸出培养板中的培养基，用胰蛋白酶消化细胞，然后加入适量的培养基将培养板上的细胞冲洗干净。
悬浮细胞可以省略该步骤。
(2) 将细胞悬浮液收集到离心管中，以1000×g离心10分钟，然后吸去培养基，用预冷PBS洗涤细胞3次。
ELISA实验标本收集处理事项
ELISA试验标本收集处置事项做ELISA试验，在处置样本前应当先了解收集样本的注意事项。
一、标本收集注意事项：1.收集血液的试管应为一次性的无热原，无内毒素试管。
2.血清和血浆躲避使用溶血，高血脂标本。
3.标本应清亮透亮，悬浮物应离心去除。
4.标本收集后若不适时检测，需按一次使用量分装，冻存于—20℃，—80℃电冰箱内，躲避反复冻融。
5.可依据标本的实际情况，做适当倍数稀释（建议做预试验，以确定稀释倍数）。
6.收集标本，尽量做到双份的用量，躲避一次试验失败，重复试验时标本缺失，从而耽误试验进程。
7.收集标本时，应当做好防护措施（譬如戴手套，口罩，护目镜等），认为全部标本都具有肯定的潜在不安全性。
8.样本处置应当在生物安全柜里面，而且正确使用生物安全柜。
样本正确的处置方法应当是这样的：二、标本处置方法：1.血清：将手记的全血静置冰箱4℃过夜，然后1000—3000rpm离心10分钟，取上清立刻测试，短时间不测可以放入—20℃（1—3个月）或—80℃（3—6个月）保管。
2.血浆：用EDTA，枸橼酸钠，肝素等作为抗凝剂，加入血液混匀后，1000—3000rpm离心10分钟，取上清立刻测试，短时间不测可以放入—20℃（1—3个月）或—80℃（3—6个月）保管。
3.组织匀浆：切取组织块，0.01MPBS中过洗一次；依照1G组织加入5—10ml组织蛋白萃取试剂的比例，在冰水中匀浆。
匀浆完成后，5000—10000rpm离心10分钟，取上清立刻测试，短时间不测可以放入—20℃（1—3个月）或—80℃（3—6个月）保管。
4.细胞培育上清：1000—3000rpm离心10分钟，取上清立刻测试，短时间不测可以放入—20℃（1—3个月）或—80℃（3—6个月）保管。
5.尿液，腹水，脑脊液等：1000—3000rpm离心10分钟，取上清立刻测试，短时间不测可以放入—20℃（1—3个月）或—80℃3—6个月）保管。
注：样品稀释的一般原则ELISA试验加样时可能碰到的问题：1、过长（特别是室内温度较高时）。
elisa操作方法
elisa操作方法Elisa操作方法一、概述Elisa是一种常用的酶联免疫吸附实验技术，被广泛应用于生物医学研究和临床诊断中。
本文将介绍Elisa的操作方法，包括试剂准备、样品处理、板涂覆、孵育、洗涤、检测等步骤。
二、试剂准备1. 根据实验设计，准备所需的试剂，包括酶标板、抗原或抗体、底物、洗涤缓冲液、稀释缓冲液等。
2. 检查试剂是否过期，确保其质量可靠。
三、样品处理1. 收集样品，并根据实验需要进行适当的处理，如离心、稀释等。
2. 保持样品的稳定性，避免冻融和长时间暴露在室温下。
四、板涂覆1. 将酶标板中的孔加入适量的抗原或抗体，尽量均匀涂覆。
2. 使用封闭剂封闭孔，避免非特异性结合。
五、孵育1. 将板密封，置于恒温箱中进行孵育，确保温度和湿度的稳定。
2. 孵育时间根据实验需求进行设定，一般为1-2小时。
六、洗涤1. 将洗涤缓冲液加入酶标板孔中，轻轻摇晃或使用洗涤器进行洗涤，去除非特异性结合物质。
2. 反复洗涤3-5次，每次洗涤时间约1-2分钟。
七、检测1. 加入标记有酶的抗体或底物，与特异性结合物发生反应。
2. 反应结束后，加入停止液终止反应，阻止进一步的底物转化。
3. 使用酶标仪测量吸光度，获取实验结果。
八、数据分析1. 根据实验目的和样品特点，选择适当的统计方法和数据处理软件进行数据分析。
2. 统计分析实验结果，得出结论，并将结果进行图表展示。
九、结果解读1. 根据实验目的和已有知识，对实验结果进行解读和讨论。
2. 分析可能存在的误差和限制，并提出改进意见。
十、实验注意事项1. 严格遵守实验室操作规范，保证实验的准确性和可靠性。
2. 避免交叉污染，使用干净的实验器具和试剂。
3. 注意试剂的保存条件和有效期。
4. 控制实验条件的一致性，确保实验结果的可比性。
十一、结论Elisa操作方法是一种重要的生物分析技术，通过合理的实验设计和操作流程，可以获得准确可靠的实验结果。
熟练掌握Elisa的操作方法，对于生物医学研究和临床诊断具有重要意义。
ELISA标本收集处理方法
标本的收集与保存临床检验常见的标本一般包括血液（指血，静脉血），尿，粪便，脑脊液，胸腹水，前列腺液，精液，阴道分泌物等，这些标本收集的时间、方法和保存都有一定的要求。
一、血液标本ELISA试验时，抽取血样的试剂管是EDTA抗凝管有些生理因素，如吸烟、进食、运动、情绪波动、妊娠、体位等均可影响血液中某些成分的变化，有些甚至还有昼夜变化。
因此血液标本的采集应尽量避免生理因素干扰，以条件一致为宜，如无法避免，应在标本上注明该因素。
1．外周血一般选取左手无名指内侧采血，该部位应无冻疮，炎症，水肿，破损。
如该部位不符合要求，以其他手指部位代替。
对烧伤病人，可选择皮肤完整处采血。
由于部分血液常规检测（如白细胞计数、分类等）受生理因素影响波动过大，比较时宜使条件尽量一致。
涉及到体内出、凝血功能的检测项目（如血小板计数，出血时间或凝血时间等）的检测，一定要注意了解患者是否用过抗凝、促凝药物，以便在减少或避免干扰因素的影响。
2．静脉血除涉及各种止血和血栓检测等项目需采用抗凝静脉血血浆外，目前绝大多数检测项目的分析检测可直接采用静脉血的血清。
在血清检测项目中，有些（如血糖，血脂等）受饮食及昼夜因素影响较大，一般以清晨空腹血标本为宜；有些在血中衰变较快（血清酶活性测定如ACP活性等），0~4℃贮存活性减弱也不一，这些项目的检测必须及时而快速；有些（如肌酸激酶等）受运动等因素影响较大。
抽血时避免溶血的发生也十分重要，尤其涉及血钾，LDH等的测定。
二、尿液标本同血标本一样，尿液标本受饮食、运动、药物量等因素的影响也较大，特别是饮食的影响，故一般来说晨尿优于随机尿。
晨尿是指清晨起床后的第一次尿标本，较浓缩和酸化，有形成分（如血细胞，上皮细胞，管形）相对集中便于观察。
随机尿即随意一次尿，留取方便，但受饮食、运动、药物影响较甚，易于出现假阳性和假阴性结果，如饮食性蛋白尿，饮食性糖尿，维生素C干扰潜血结果等。
餐后尿（午餐后2小时收集的患者尿液）适用于尿糖，尿蛋白和尿胆原的检查，此时的尿标本可增加试验敏感性，检出较轻微的病变。
酶联免疫吸附测定ELISA操作中标本的收集
酶联免疫吸附测定ELISA操作中标本的收集
酶联免疫吸附测定ELISA操作中标本的收集
用于ELISA测定的临床标本最为常用的是血清(浆)，有时因为特定的检
测目的，也用到唾液、脑脊液、尿液、粪便等标本。
目前使用血清(浆)标本测定的标志物一般有传染性病原体的抗原和抗体、肿瘤标志物、
激素、特种蛋白、细胞因子和治疗药物等。
对用于激素和治疗药物测定的血清标本的收集，要注意收集时间甚或
体位有可能会对测定结果产生影响。
如可的松在早晨4：00—6：00之间，会有一峰值出现；生长激素、促黄体激素(LH)和促卵泡激素(FSH)
均以阵发性方式释放，因此，在测定此类激素时，有必要在密切相连
的时间间隔内采取数份血样本，以其中间值为测定值。
又如当从卧位变为站立位时，血清中肾素活性将出现明显增高。
再如
治疗药物的检测，应根据药代动力学选择服药后的最适时间抽血检测。
用于传染性病原体的抗原和抗体、肿瘤标志物和特种蛋白等的检测的
血清标本的收集则没有时间和体位方面的影响。
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标本的收集与保存
临床检验常见的标本一般包括血液（指血，静脉血），尿，粪便，脑脊液，胸腹水，前列腺液，精液，阴道分泌物等，这些标本收集的时间、方法和保存都有一定的要求。
一、血液标本ELISA试验时，抽取血样的试剂管是EDTA抗凝管
有些生理因素，如吸烟、进食、运动、情绪波动、妊娠、体位等均可影响血液中某些成分的变化，有些甚至还有昼夜变化。
因此血液标本的采集应尽量避免生理因素干扰，以条件一致为宜，如无法避免，应在标本上注明该因素。
1．外周血
一般选取左手无名指内侧采血，该部位应无冻疮，炎症，水肿，破损。
如该部位不符合要求，以其他手指部位代替。
对烧伤病人，可选择皮肤完整处采血。
由于部分血液常规检测（如白细胞计数、分类等）受生理因素影响波动过大，比较时宜使条件尽量一致。
涉及到体内出、凝血功能的检测项目（如血小板计数，出血时间或凝血时间等）的检测，一定要注意了解患者是否用过抗凝、促凝药物，以便在减少或避免干扰因素的影响。
2．静脉血
除涉及各种止血和血栓检测等项目需采用抗凝静脉血血浆外，目前绝大多数检测项目的分析检测可直接采用静脉血的血清。
在血清检测项目中，有些（如血糖，血脂等）受饮食及昼夜因素影响较大，一般以清晨空腹血标本为宜；有些在血中衰变较快（血清酶活性测定如ACP活性等），0~4℃贮存活性减弱也不一，这些项目的检测必须及时而快速；有些（如肌酸激酶等）受运动等因素影响较大。
抽血时避免溶血的发生也十分重要，尤其涉及血钾，LDH等的测定。
二、尿液标本
同血标本一样，尿液标本受饮食、运动、药物量等因素的影响也较大，特别是饮食的影响，故一般来说晨尿优于随机尿。
晨尿是指清晨起床后的第一次尿标本，较浓缩和酸化，有形成分（如血细胞，上皮细胞，管形）相对集中便于观察。
随机尿即随意一次尿，留取方便，但受饮食、运动、药物影响较甚，易于出现假阳性和假阴性结果，如饮食性蛋白尿，饮食性糖尿，维生素C干扰潜血结果等。
餐后尿（午餐后2小时收集的患者尿液）适用于尿糖，尿蛋白和尿胆原的检查，此时的尿标本可增加试验敏感性，检出较轻微的病变。
12小时尿细胞计数即Addis计数（前晚8时排空膀胱后留取至次日晨8时的所有尿液），因时间较长，细菌易繁殖，须加入防腐剂甲醛。
24小时尿（第一天晨8时排空膀胱后留取至次日晨8时的所有尿液）中化学物质的定量，包括蛋白，糖，尿17-酮、17-羟类固醇，儿茶酚胺，Ca2+等，检测不同的物质，选择不同的防腐剂防腐。
清洁中段尿多用于尿细菌培养，要求无菌，冲洗外阴后留取标本。
所有尿标本的收集都应足量，最少12ml，最好50ml，定时尿须全部收集，对女性患者应避免阴道分泌物、经血污染尿标本。
三、粪便标本
粪便标本的检测对判断消化系统疾病有重要参考价值。
采集时要求用干净的竹签选取含有粘液、脓血等异常病变成分的粪便，对外观无异常的粪便须从表面、深处及粪端多处取材。
找寄生虫虫体及作虫卵计数应收集24小时粪便。
查痢疾阿米巴滋养体应于排便后立即检查，从有脓血和稀软处取材，保温送检。
查日本血吸虫虫卵时应取粘液、脓血部分，孵化毛蚴时至少留取30g粪便，且需尽快处理。
检查蛲虫卵须用透明薄膜拭子于晚12时或清晨排便前自肛门周围皱襞处拭取并立即镜检。
隐血试验（化学法），试验前3日禁食肉类及含动物血食物并禁服铁剂，维生素C等。
所有粪便标本采集后1小时内应检查完毕，以防止有形成分受消化酶及pH的破坏。
四、脑脊液标本
脑脊液标本采集后立即送检，放置过久将影响检验结果：如细胞变性，破坏，导致计数和分类不准；有些化学物质如葡萄糖等将分解含量减少；细菌发生自溶影响细菌的检出率。
脑脊液抽取后一般分装三个无
菌管，第一管作细菌培养，第二管作化学分析和免疫学检查，第三管作一般性状及显微镜检查，三管的顺
序不宜颠倒。
因标本采集较难，全部送检和检测过程应注意安全。
五、胸腹水标本
与脑脊液标本一样，采集后的标本注意安全，及时送检。
一般也分装三管，一管作常规细胞学检查，一管生化检查，一管细菌培养，顺序以与脑脊液相同为宜。
六、前列腺液标本
前列腺液标本由前列腺按摩后采集，液量少时直接滴在载玻片上及时送检，须注意防止标本蒸干，量多时收集在洁净干燥的试管中。
若按摩不出前列腺液，可检查按摩后的尿液沉渣。
七、精液标本
精液标本采集前应禁欲3~7天，排净尿液后可用手淫法或其他方法将精液直接排入干净的容器中，保温并及时送检。
由于精子生成日间变动较大，一般应检查2~3次（每次间隔1~2周）方可做诊断。
八、阴道分泌物标本
阴道标本采集前24小时应禁止房事、盆浴、阴道检查、阴道灌洗及局部上药等，取材所用器械需清洁。
一般用盐水浸湿的棉拭子自阴道深部或阴道穹后部、宫颈管口等处取材，制成生理盐水涂片后观察阴道分
泌物标本，经期的女性患者不宜检查阴道分泌物标本。
注意事项：
收集标本前必须清楚要检测的成份是否足够稳定。
对收集后当天进行检测的标本，储存在4℃备用，如有特殊原因需要周期收集标本，将标本及时分装后放在-20℃或-70℃条件下保存。
避免反复冻融。
标本2-8℃可保存48小时，-20℃可保存1个月。
-70度可保存6个月。
部分激素类标本需添加抑肽酶。
液体类标本
标本必须为液体，不含沉淀。
包括血清、血浆、尿液、胸腹水、脑脊液、细胞培养上清、组织匀浆等。
1ml的全血可得到0.5ml的血清或血浆。
每个标本量收集体积＝100ul×检测种类。
取材前须向销售人员索要说明书。
血清：
室温血液自然凝固10-20分钟后，离心20分钟左右(2000-3000转/分)。
收集上清。
如有沉淀形成，应再次离心。
血浆：
应根据试剂盒的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，加入10％(v)抗凝剂(0.1M柠檬酸钠或1%heparin或2.0%EDTA.Na2)混合10-20分钟后，离心20分钟左右(2000-3000转/分)。
仔细收集上清。
如有沉淀形成，应再次离心。
◇尿液、胸腹水、脑脊液：
用无菌管收集。
离心20分钟左右(2000-3000转/分)。
仔细收集上清。
如有沉淀形成，应再次离心。
◇细胞培养上清：
检测分泌性的成份时，用无菌管收集。
离心20分钟左右(2000-3000转/分)。
仔细收集上清。
检测细胞内的成份时，用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。
通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。
离心20分钟左右(2000-3000转/分)。
仔细收集上清。
保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
◇组织标本：
切割标本后，称取重量。
加入一定量的PBS，缓冲液中可加入1μg/L蛋白酶抑制剂或50U/ml的Aprotinin(抑肽酶)。
用手工或匀浆器将标本匀浆充分。
离心20分钟左右(2000-3000转/分)。
仔细收集上清置于-20度或-70度保存，如有必要，可以将样品浓缩干燥。
分装后一份待检测，其余冷冻备用。
寄标本时需注明以下情况：
1、标本编号；
2、所测项目；
3、是否做复孔；3、联系方式；
4、实验后标本是否寄回。