实验四 水中细菌总数的测定和土壤微生物的分离_PPT幻灯片
泥土中细菌总数的测定试验
实验四细菌总数的测定——纯种分离一、目的1.掌握从环境（土壤和活性污泥等）微生物群体中获得纯种微生物的分离和培养技术。
2.掌握无菌操作技术。
二、材料和器皿1. 扭力天平、取土样工具、涂布棒(接种棒)。
2. 无菌三角瓶、试管、培养皿、移液管、玻璃珠。
3. 无菌水。
4. 培养基：牛肉膏蛋白胨培养基。
三、实验操作步骤1、取土样选定取样点，按对角交叉（五点法）取样。
先除去表层约2cm的土壤，将铲子插入土中数次，然后取2～10cm处的土壤。
盛土的容器应是无菌的。
将5点样品约1kg充分混匀，除去碎石、植物残根等。
土样取回后应尽快投入实验，同时取10-15g，称重后经105oC烘干8h，置于干燥器中冷却后再次称重，计算含水量。
2、倒平板熔化已灭菌的上述4种培养基并冷却至45oC左右倒平板，凝固待用，每种培养基每个稀释度各三只平板。
3、编号取5支无菌空试管（15×150mm）依次编号为10-3、10-4、10-5、10-6、10-7。
4、分装无菌水按无菌操作用5mL移液管分别吸取4.5mL无菌水于编号的各无菌空试管中。
5. 制备土壤稀释液称土样1g于盛有99mL无菌水或无菌生理盐水并装有玻璃珠的三角瓶中，振荡10～20min，使土样中的菌体、芽孢或孢子均匀分散，此即为10-2浓度的菌悬液。
用无菌移液管吸取悬液0.5mL于4.5mL无菌水试管中，用移液管吹吸三次、摇匀，此即为10-3浓度。
同样方法，依次稀释到10-7。
稀释过程需在无菌室或无菌操作条件下进行。
环境要求：琼脂平板在工作台暴露15分钟，每个平板不得超过15个菌落。
代表性：取固体样品时需多采几个部位，且经过均质或研磨；液体样品须经过振摇，以获得均匀稀释液。
减少误差：每递增稀释一次即换用1支1ml灭菌吸管，将吸管内液体沿管壁流入，勿使吸管尖端伸入稀释液内，并且稀释液应充分振摇。
6、培养及计数培养条件：倒置于36±1℃温箱内培养48±2h计数时间：到达规定培养时间，应立即计数。
实验水中细菌总数的测定
实验水中细菌总数的测定前言水是我们生活的重要组成部分，无论是生命的起源，还是人类生活和生产都与水密不可分。
但是随着工业化进程的加快，水质越来越受到污染，水中细菌总数也成为常见的水质指标之一。
本文将介绍如何进行水中细菌总数的测定实验。
实验目的1.掌握测定水中细菌总数的方法；2.熟悉细菌结构及其生长条件；3.加深对水质检测的认识。
实验原理水中的细菌一般通过卫生污染途径进入自来水、地下水、河流等水体，污染水源后就会对人们的生活、工作和生产带来很大的危害。
痢疾、霍乱、伤寒、腹泻等疾病多是由于口腔、消化系统中的有害菌群外移至消化道。
测定方法主要是基于发酵方法，通过统计水中微生物的数量，其基本依据在于微生物在适宜的温度和环境下，利用某些碳水化合物发酵而产生可测定的气体。
常用的指标为断氧时间（DT），根据氧的量来判断细菌数量的多少，一定程度上可以反映出水的卫生状况。
实验步骤1.取水样：从自来水水源处取出应检样品，需注意的是要使用无菌容器，最好是预先消毒过的。
在取水样前，最好流动5分钟以上方可取样，避免得到不实际的结果；2.加入营养元素：滤上滤膜后，再将约5ml的最少粉末培养基、4-5滴的氯化甲烷胺（1%）和约200ml无菌水混合均匀，将混合溶液倒入水样中；3.发酵过程：将水样发酵瓶通过逆时针旋紧，摇晃均匀；4.测定结果：记录下发酵瓶开始发酵的时间，水样中的气体不断地逸出，瓶内逐渐产生负压下降，直到完全断氧的时间。
断氧时间愈短，水质愈差，水中微生物愈多，反之亦然。
实验要点1.无菌取样，避免二次污染，结果更加准确；2.取样量及试剂加入的量要准确，否则会影响实验结果；3.发酵瓶要紧闭，防止气体泄漏；4.营养元素中含有的碳源、氮源等应与微生物的生长有适当的关系。
通过测定水中细菌总数，可以更加准确地判断水的卫生状况。
通过本实验的学习和操作，可以更加深入地了解微生物结构、生长条件以及水质检测的方法，具有较高的理论和实际应用价值。
细菌总数的测定完美版PPT
2.包装 （1）移液管包装
将干燥的移液管的吸端用细铁丝塞入少许棉花构成1～ 1.5cm长的棉塞，以防细菌吸入口中，并避免将口中细菌吹 入管内。棉塞要塞得松紧适宜，吸时既能通气，又不致使棉 花滑入管内。将塞好棉花的移液管的尖端，放在4～5cm宽的 长纸条的一端，移液管与纸条约成30°夹角，折叠包装纸包 住移液管的尖端（实验图2-1），用左手将移液管压紧，在 桌面上向前搓转，纸条螺旋式地包在移液管外面，余下纸头 折叠打结。包好的多个移液管可再用一张大的报纸包好。
皿、试管、锥形瓶等可用洗衣粉加去污粉洗
花将、塞牛 好皮棉纸花（的培或移养报液纸管皿）的、尖由电端一烤，箱放底。在4一～5盖cm宽组的成一套，用牛皮纸或报纸将每套培养皿 如（果3）将（培培养皿养皿皿底的放包金朝装属里筒内，皿盖朝外，）包好。如果将培养皿放金属筒内 （3）进培养行皿干的包热装 灭菌，则不必用纸包。
（2）棉塞的制作
（2）试管和三角瓶等的包装
用棉塞或泡沫塑料塞将试管管口和锥形瓶瓶口部塞住
然后在棉塞与管口和瓶口的外面用两层报纸与细线（或用铝
箔）包扎好，放在铁丝或铜丝篓内待灭菌。
晾干或放入烘箱中烘干、备用。 培养皿、移液管、试管及其他玻璃器皿可用干热
（3）培养皿的包装 度调至160 oC后维持2小时，把恒温箱的调节旋扭调
实验四 细菌总数的测定 ————器皿的包扎
一、目的
1．熟悉玻璃器皿的包扎方法。 2．掌握干热灭菌法灭菌技术。
二、仪器和材料
试管、移液管、锥形瓶、烧杯、量简纱布、棉 花、牛皮纸（或报纸）、电烤箱。
三、方法与步骤
1.洗涤 玻璃器皿在使用前必须洗涤干净。培养
皿、试管、锥形瓶等可用洗衣粉加去污粉洗 刷并用自来水冲净。移液管先用洗液浸泡， 再用水冲洗干净。洗刷干净的玻璃器皿自然 晾干或放入烘箱中烘干、备用。
水中菌落总数测定.ppt
动物性食品微生物检验
水中菌落总数的测定
主讲人：王福红
水中菌落总数测定
能力目标：
• 掌握生活饮用水菌落总数的测定方法 • 掌握水源水菌落总数的测定方法 • 判定水被细菌污染的程度和水的卫生质量
《动物检疫检验技术专业教学资源库》
水中菌落总数测定
水中菌落总数的测定
• 检验依据：GB/T5750.12-2006 • 方法：平皿计数法
实验器材 • 设备、器材
– 无菌工作台、酒精灯、灭菌 吸管、灭菌试管、稀释液、 灭菌平皿、恒温培养箱、高 压蒸汽灭菌器、菌落计数器、 天平、电炉等
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水中菌落总数测定
• 生活饮用水
实验操作
– 用灭菌吸管吸取1mL充分混匀的水样，注入灭菌平皿中
• 水源水
– 吸取1ml充分混匀的水样，注入盛有9ml灭菌生理盐水的 试管中，混匀制成1 : 10稀释液
实 不同稀释液的平均菌落数 菌落总数 报告方式
例
10-1
10-2 10-3 （CFU/mL） （CFU/mL）
6
27
11
5
270
270
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水中菌落总数测定
不同稀释度的选择及报告方法
• 若所有稀释度的平均菌落数均不在30~300之间，则应以 最接近30或300的平均菌落数乘以稀释倍数报告之（见表 中实例7）
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水中菌落总数测定
• 每递增稀释一次，必须更换一支1mL灭菌吸管 • 每个稀释度制作2个平皿 • 同时做空白试验
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水中菌落总数测定
土壤中细菌总数的测定实验
1 / 6实验四细菌总数的测定——纯种分离一、目的1.掌握从环境（土壤和活性污泥等）微生物群体中获得纯种微生物的分离和培养技术。
2.掌握无菌操作技术。
二、材料和器皿1.扭力天平、取土样工具、涂布棒(接种棒)。
2.无菌三角瓶、试管、培养皿、移液管、玻璃珠。
3.无菌水。
4.培养基：牛肉膏蛋白胨培养基。
三、实验操作步骤1、取土样选定取样点，按对角交叉（五点法）取样。
先除去表层约2cm的土壤，将铲子插入土中数次，然后取2～10cm处的土壤。
盛土的容器应是无菌的。
将5点样品约1kg充分混匀，除去碎石、植物残根等。
土样取回后应尽快投入实验，同时取10- 15g，称重后经105oC烘干8h，置于干燥器中冷却后再次称重，计算含水量。
2、倒平板2 / 6熔化已灭菌的上述4种培养基并冷却至45oC左右倒平板，凝固待用，每种培养基每个稀释度各三只平板。
3、编号取5支无菌空试管（15×150mm）依次编号为10- 3、10- 4、10- 5、10- 6、10-7。
4、分装无菌水按无菌操作用5mL移液管分别吸取4.5mL无菌水于编号的各无菌空试管中。
5.制备土壤稀释液称土样1g于盛有99mL无菌水或无菌生理盐水并装有玻璃珠的三角瓶中，振荡10～20min，使土样中的菌体、芽孢或孢子均匀分散，此即为10-2浓度的菌悬液。
用无菌移液管吸取悬液0.5mL于4.5mL无菌水试管中，用移液管吹吸三次、摇匀，此即为10-3浓度。
同样方法，依次稀释到10-7。
稀释过程需在无菌室或无菌操作条件下进行。
环境要求：琼脂平板在工作台暴露15分钟，每个平板不得超过15个菌落。
3 / 6代表性：取固体样品时需多采几个部位，且经过均质或研磨；液体样品须经过振摇，以获得均匀稀释液。
减少误差：每递增稀释一次即换用1支1ml灭菌吸管，将吸管内液体沿管壁流入，勿使吸管尖端伸入稀释液内，并且稀释液应充分振摇。
6、培养及计数培养条件：倒置于36±1℃xx箱内培养48±2h 计数时间：到达规定培养时间，应立即计数。
水中细菌总数的测定(课堂PPT)
10-2 10-3 10-4 10-5 10-6 10-1
10
（2）接种
以无菌操作方法用无菌吸管吸取原水样l ml或取 2-3个适宜浓度稀释液l ml，注入灭菌平皿中。倾 注约15ml已溶化并冷却到45℃左右的牛肉膏蛋 白胨琼脂培养基，并立即旋转平皿，使水样与培 养基充分混匀，每个稀释度平行三皿。另设三皿 空白对照（？）。
5
三、实验操作步骤
1. 水样的采集 供细菌学检验用的水样，必须按一般无菌操作的基 本要求进行采样，并保证在运送、贮存过程中不受 污染。为了要正确反映水质在采样时的真实情况， 水样在采取后应立即送检；一般从取样到检验不应 超过4小时。条件不允许立即检验时，应存于冰箱， 但也不应超过24小时，并应在检验报告单上注明。
(见表4-3-1例次6)。
17
表 4-3-1 计算菌落总数的方法举例
例
不同稀释度的平均菌落数 两个稀释 菌落总数 报告方式 备注
次
10-1
10-2
10-3 度菌落之 （个/ml） （个/ml）
比20
-
16400 1.6×104 两位以
后的数
2
2 760
294
46
1.6 37700 3.8×104 字采取
2
一、实验目的 二、实验仪器与材料 三、实验操作步骤 四、实验结果 五、思考题
3
一、实验目的
掌握水样的取样方法； 掌握水体中细菌总数的测定方法； 了解国家的相关法规。
4
二、实验仪器与材料
1. 仪器： 高压蒸汽灭菌器、恒温箱、冰箱、体视镜(放大镜)、带刻 度试管（3）、培养皿（4）、微量移液器（配枪头）、 三角瓶（2 ） 、计数器。 2. 培养基 牛肉膏蛋白胨琼脂培养基
课题土壤中分解尿素的细菌的分离与计数ppt课件
如何确定缘由究竟是什么？
二.实验的详细操作
㈠土壤取样
从肥沃、潮湿的土壤中取样。先铲去表层土3cm左
右，再取样，将样品装入事先预备好的信封中。
◆取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在运用前
灭菌
都要 。
㈡制备培育基 制以备尿素为独一氮源 的选择培育基。
⑵常用方法：稀释涂布平板法。
每克样品中的菌落数＝(C÷V)×M 其中，C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落 数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(ml)，
M代表稀释倍数。
本卷须知 ①为了保证结果准确，普通选择菌落数在30—3的00平板
上进展计数。
②为使结果接近真实值可将同一稀释度加到三个或三 个以上的培育皿中，经涂布培育，计算出菌落平均数。
①从物理性质看此培育基属于哪类？ 固体培育基
㈡统计菌落数目：
1、显微镜直接计数：
利用血球计数板，在显微镜下计算一定容积里样品中 微生物的数量。
缺陷：
不能区分死菌与活菌； 不适于对运动细菌的计数； 需求相对高的细菌浓度； 个体小的细菌在显微镜下难以察看。
2.间接计数法〔活菌计数法〕 ⑴原理：在稀释度足够高时，微生物在固体培育基上 所构成的一个菌落是由一个单细胞繁衍而成的，即一 个菌落代表原先的一个单细胞。
课题2 土壤中分解尿素的细菌的分别与计数
一、课题背景
1、尿素的利用：
尿素是一种重要的农业氮肥。尿素不能直接 被之农 后作 才物 干吸被氨收植。物土利壤 用中 。的细菌将尿素分解成
2、细菌利用尿素的缘由：
脲酶
土3、壤反中响的式细：菌分解尿参素与是酚由红于指它示们剂能？合成 。
实验12土壤微生物的分离及纯化ppt课件
实验原理
土壤是微生物生活的大本营，为了获得 某种微生物的纯培养，一般是根据该微 生物对营养、酸碱度、氧等条件要求不 同，而供给它适宜的培养条件，或加入 某种抑制剂，淘汰其他一些不需要的微 生物，再用各种方法分离、纯化该微生 物，直至得到纯菌株。
稀释涂板法、稀释混合平板法、划线分离
实验材料
实验程序3（微生物的分离—平板划线法）
制成平板。 凝固后，用接种环取相应的菌液一环（10－1）在平板上划 线。 1.连续划线法：将挑取有样品的接种环在平板培养基表面 作连续划线。完毕后，倒置于28～300C温室培养。 2.分区划线法：用接种环以无菌操作挑取土壤稀释液1环， 先在培养基的一边作第一次平行划线3—4条，再转动培养 皿约600C角，并将接种环上剩余物烧掉，待冷却后通过第 一次划线部分作第二次划线会，同法依次作第三次和第四 次划线。划线完毕，盖上皿盖，倒置于温室培养。 挑取单个菌落接种于斜面培养基上，如果不纯，再移植纯 化，最后得到纯培养。
样品：新鲜土壤。 培养基：灭菌的牛肉膏蛋白胨琼脂培养基、高氏 一号培养基、马铃薯蔗糖培养基。 无菌水：装有10mL无菌水三角瓶、装有9mL无 菌水的试管。 其它：无菌培养皿、无菌吸管、无菌三角刮子、 电子天平、记号笔、接种环、酒精灯、火柴。
实验步骤
稀释涂板法 稀释混合平板法（混菌法） 划线分离 微生物的培养
实验12土壤微生物的分离 及纯化
目的要求
初步掌握微生物的分离纯化和培养菌种的 基本方法。 练习微生物接种、移植和培养的基本技术， 掌握无菌操作技术。 掌握微生物的鉴定技术。
实验原理
自然界中各种微生物混杂生活在一起，要研 究某种微生物的特性，首先须使该微生物处 于纯培养状态。从混杂的微生物群体中获得 只含有某一株微生物的过程称为微生物的分 离与纯化。
实验六-土壤中微生物的分离和PPT课件
完整版课件
15
固体斜面培养特征
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16
液体培养特征
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17
半固体穿刺培养特征
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18
3 微生物的无菌操作接种原理
• 1) 斜面接种
菌种管和待接试管在手中的拿法
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19
试管拔塞后的灭菌
完整版课件
20
试管拔塞后的取菌
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• 2) 穿刺接种
穿刺接种
（a）水平穿刺接完种整；版（课件b）垂直穿刺接种
• 10 体表不同部位的微生物
• 取一个平板, 用记号笔在平板背面化分为几部分,每部分标 记好要检测的部位,如手,头发,衣服等, 可将洗手前后分别 检测.然后用不同的人体部位按在标记好的平板部位上,将 平板倒转, 恒温37℃培养两天后观察.
22
三 实验器材
• 1 培养基：牛肉膏蛋白胨琼脂培养基,倒平 板, 斜面,液体,半固体培养基.
• 2 器材：花园土，99mL无菌水1瓶，9mL无 菌水4支，1mL枪头, 0.1mL, 直径9cm的无 菌平皿，天平，试管架，无菌称量纸，酒 精灯，火柴，接种环，涂布棒，记号笔等.
• 3 菌种: 金黄色葡萄球菌, 变形杆菌,枯草杆 菌.
了研究某种微生物的特性或者要大量培养和使用某种微生 物，必须从这些混杂的微生物群落中获得纯培养，这种获 得纯培养的方法称为微生物的分离与纯化。 • 在自然界中，上壤是微生物生活的良好环境，其中生活的 微生物数量和种类都是极其丰富的。土壤中的微生物数量 与种类非常多,在通气良好的花园土中，好气性微生物占 有绝对优势。本实验以花园土为材料分离土壤中的好气性 细菌. • 分离微生物常用的方法有稀释平板分离法和划线分离法， 根据不同的材料，可以采用不同方法，其最终目的是要在 培养基上出现欲分离微生物的单个菌落，必要时再对单菌 落进一步分离纯化。在用稀释平板法分离微生物时，还可 以同时测定待分离的微生物的数量。
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一 实验目的 1.学习水样的采取方法和水样细菌总数
测定的方法；
2.了解水源水的平板菌落计数的原则。
二.实验原理：
本实验应用平板菌落计数技术测定水中细菌总数。 由于水中细菌种类繁多，它们对营养和其他生长
条件的要求差别很大，不可能找到一种培养基在 一种条件下，使水中所有的细菌均能生长繁殖， 因此，以一定的培养基平板上生长出来的菌落， 计算出水中细菌总数仅是一种近似值。 目前一般是采用肉膏蛋白胨琼脂培养基。
6.菌落计数：
1）挑取无片状菌苔生长的平板作为计数平板，若片状菌 苔的大小不到平板的一半，而其余的一半菌落分布很均 匀时，可将此一半的菌落数乘2以代表全平板的菌落数。
2）选择平均菌落数在30～300之间的平板来计算该水样的 菌落总数。如果所有的平板的菌落总数都不在30—300 范围之内，则取最靠近30—300的平板进行计数
本实验以普通牛肉膏蛋白胨琼脂培养基，采用平 板菌落计数技术来分别测定自来水和河水中的细 菌总数。
4.涂布平板法：
用移液管吸取0.1mL水样，滴于平板中；将玻璃涂布棒于酒 精灯的外焰上加热，杀死表面微生物，然后耐心待其冷却， 然后用涂布棒将水滴均匀的涂满整个平板表面，尽量将水 涂干。
5. 倒置于37℃培养箱中培养24h。
注：营养琼脂培养基用10-4，10-5 ，10-6 土壤稀释液； 高氏1号琼脂培养基用10-1， 10-2，10-3土壤稀释液； 马丁氏琼脂培养基用100 ， 10-1，10-2 若平板数量不足， 取前两个稀释度
4、培养 将高氏1号培养基平板和马丁氏培养基平板
倒置于28 ℃恒温培养箱中培养3-5d，营养琼 脂培养基平板倒置于37 ℃恒温培养箱中培养 2-3d。
株微生物的过程称为微生物的分离与纯化。常用平板 分离法：包括两个方面：
1、选取适当的培养基 2、挑取单菌落
三、实验操作
1、倒平板（已准备） 将营养琼脂培养基、高氏1号琼脂培养基、
马丁氏琼脂培养基，加热溶化，待冷至5560℃时，马丁培养基中加链霉素（终浓度为 30µg/ml），混匀后倒平板。
2、 制备土壤稀释液
称取土壤稀释液10g，放入盛有90ml无菌水 中，剧烈震荡20min，充分混合。用无菌吸管 吸取1ml土壤悬液加入9ml无菌水中，混匀，以 此类推，制备成10-1，10-2，10-3，10-4，10-5， 10-6不同稀释度的土壤溶液。
Hale Waihona Puke 3、涂平板 将上述每种培养基的三个平板底面分别用记号笔写上相 应稀释度，再用无菌吸管分别吸取相应稀释度的土壤稀 释液0.1ml，用无菌涂布棒涂布均匀后，静置5-10min。
5、菌落形态观察 、（计数）
思考题： 为什么马丁培养基中要加入链霉素？如果用牛 肉膏蛋白胨培养基分离一种对青霉素具有抗性 的细菌，你认为应如何做？
3） 如果有两个稀释浓度的总菌落数落在了30—300范围 之内，则先计算两个浓度下每ml水体中细菌总数，如果 两个数值的比值大于2则取小的浓度，如若小于2则取两 值的平均值。
（二）土壤微生物的分离、培养
一、实验目的 掌握微生物分离纯化的基本操作技术
二、实验原理 从混杂的微生物群体中获得只含某一种或某一