水中细菌总数测定ppt课件
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实验四 水中细菌总数的测定和土壤微生物的分离_PPT幻灯片
（一）水中细菌总数的测定
一 实验目的 1.学习水样的采取方法和水样细菌总数
测定的方法；
2.了解水源水的平板菌落计数的原则。
二.实验原理：
本实验应用平板菌落计数技术测定水中细菌总数。 由于水中细菌种类繁多，它们对营养和其他生长
条件的要求差别很大，不可能找到一种培养基在 一种条件下，使水中所有的细菌均能生长繁殖， 因此，以一定的培养基平板上生长出来的菌落， 计算出水中细菌总数仅是一种近似值。 目前一般是采用肉膏蛋白胨琼脂培养基。
6.菌落计数：
1）挑取无片状菌苔生长的平板作为计数平板，若片状菌 苔的大小不到平板的一半，而其余的一半菌落分布很均 匀时，可将此一半的菌落数乘2以代表全平板的菌落数。
2）选择平均菌落数在30～300之间的平板来计算该水样的 菌落总数。如果所有的平板的菌落总数都不在30—300 范围之内，则取最靠近30—300的平板进行计数
本实验以普通牛肉膏蛋白胨琼脂培养基，采用平 板菌落计数技术来分别测定自来水和河水中的细 菌总数。
4.涂布平板法：
用移液管吸取0.1mL水样，滴于平板中；将玻璃涂布棒于酒 精灯的外焰上加热，杀死表面微生物，然后耐心待其冷却， 然后用涂布棒将水滴均匀的涂满整个平板表面，尽量将水 涂干。
5. 倒置于37℃培养箱中培养24h。
注：营养琼脂培养基用10-4，10-5 ，10-6 土壤稀释液； 高氏1号琼脂培养基用10-1， 10-2，10-3土壤稀释液； 马丁氏琼脂培养基用100 ， 10-1，10-2 若平板数量不足， 取前两个稀释度
4、培养 将高氏1号培养基平板和马丁氏培养基平板
倒置于28 ℃恒温培养箱中培养3-5d，营养琼 脂培养基平板倒置于37 ℃恒温培养箱中培养 2-3d。
一 实验目的 1.学习水样的采取方法和水样细菌总数
测定的方法；
2.了解水源水的平板菌落计数的原则。
二.实验原理：
本实验应用平板菌落计数技术测定水中细菌总数。 由于水中细菌种类繁多，它们对营养和其他生长
条件的要求差别很大，不可能找到一种培养基在 一种条件下，使水中所有的细菌均能生长繁殖， 因此，以一定的培养基平板上生长出来的菌落， 计算出水中细菌总数仅是一种近似值。 目前一般是采用肉膏蛋白胨琼脂培养基。
6.菌落计数：
1）挑取无片状菌苔生长的平板作为计数平板，若片状菌 苔的大小不到平板的一半，而其余的一半菌落分布很均 匀时，可将此一半的菌落数乘2以代表全平板的菌落数。
2）选择平均菌落数在30～300之间的平板来计算该水样的 菌落总数。如果所有的平板的菌落总数都不在30—300 范围之内，则取最靠近30—300的平板进行计数
本实验以普通牛肉膏蛋白胨琼脂培养基，采用平 板菌落计数技术来分别测定自来水和河水中的细 菌总数。
4.涂布平板法：
用移液管吸取0.1mL水样，滴于平板中；将玻璃涂布棒于酒 精灯的外焰上加热，杀死表面微生物，然后耐心待其冷却， 然后用涂布棒将水滴均匀的涂满整个平板表面，尽量将水 涂干。
5. 倒置于37℃培养箱中培养24h。
注：营养琼脂培养基用10-4，10-5 ，10-6 土壤稀释液； 高氏1号琼脂培养基用10-1， 10-2，10-3土壤稀释液； 马丁氏琼脂培养基用100 ， 10-1，10-2 若平板数量不足， 取前两个稀释度
4、培养 将高氏1号培养基平板和马丁氏培养基平板
倒置于28 ℃恒温培养箱中培养3-5d，营养琼 脂培养基平板倒置于37 ℃恒温培养箱中培养 2-3d。
实验水中细菌总数的测定
实验水中细菌总数的测定前言水是我们生活的重要组成部分，无论是生命的起源，还是人类生活和生产都与水密不可分。
但是随着工业化进程的加快，水质越来越受到污染，水中细菌总数也成为常见的水质指标之一。
本文将介绍如何进行水中细菌总数的测定实验。
实验目的1.掌握测定水中细菌总数的方法；2.熟悉细菌结构及其生长条件；3.加深对水质检测的认识。
实验原理水中的细菌一般通过卫生污染途径进入自来水、地下水、河流等水体，污染水源后就会对人们的生活、工作和生产带来很大的危害。
痢疾、霍乱、伤寒、腹泻等疾病多是由于口腔、消化系统中的有害菌群外移至消化道。
测定方法主要是基于发酵方法，通过统计水中微生物的数量，其基本依据在于微生物在适宜的温度和环境下，利用某些碳水化合物发酵而产生可测定的气体。
常用的指标为断氧时间（DT），根据氧的量来判断细菌数量的多少，一定程度上可以反映出水的卫生状况。
实验步骤1.取水样：从自来水水源处取出应检样品，需注意的是要使用无菌容器，最好是预先消毒过的。
在取水样前，最好流动5分钟以上方可取样，避免得到不实际的结果；2.加入营养元素：滤上滤膜后，再将约5ml的最少粉末培养基、4-5滴的氯化甲烷胺（1%）和约200ml无菌水混合均匀，将混合溶液倒入水样中；3.发酵过程：将水样发酵瓶通过逆时针旋紧，摇晃均匀；4.测定结果：记录下发酵瓶开始发酵的时间，水样中的气体不断地逸出，瓶内逐渐产生负压下降，直到完全断氧的时间。
断氧时间愈短，水质愈差，水中微生物愈多，反之亦然。
实验要点1.无菌取样，避免二次污染，结果更加准确；2.取样量及试剂加入的量要准确，否则会影响实验结果；3.发酵瓶要紧闭，防止气体泄漏；4.营养元素中含有的碳源、氮源等应与微生物的生长有适当的关系。
通过测定水中细菌总数，可以更加准确地判断水的卫生状况。
通过本实验的学习和操作，可以更加深入地了解微生物结构、生长条件以及水质检测的方法，具有较高的理论和实际应用价值。
实验十二-水中细菌总数和大肠杆菌检测
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≥24000
大肠菌群测定
产酸判断：紫色培养液变成黄色
产气判断：发酵导管内有小气泡，如轻轻打动试 管有气泡沿管壁上浮，应考虑可能有气体产生， 需进一步试验。
稀释度选择及细菌总数报告方法
平均 菌落
水中细菌总数的测定(课堂PPT)
9
10-2 10-3 10-4 10-5 10-6 10-1
10
（2）接种
以无菌操作方法用无菌吸管吸取原水样l ml或取 2-3个适宜浓度稀释液l ml，注入灭菌平皿中。倾 注约15ml已溶化并冷却到45℃左右的牛肉膏蛋 白胨琼脂培养基，并立即旋转平皿，使水样与培 养基充分混匀，每个稀释度平行三皿。另设三皿 空白对照（？）。
5
三、实验操作步骤
1. 水样的采集 供细菌学检验用的水样，必须按一般无菌操作的基 本要求进行采样，并保证在运送、贮存过程中不受 污染。为了要正确反映水质在采样时的真实情况， 水样在采取后应立即送检；一般从取样到检验不应 超过4小时。条件不允许立即检验时，应存于冰箱， 但也不应超过24小时，并应在检验报告单上注明。
(见表4-3-1例次6)。
17
表 4-3-1 计算菌落总数的方法举例
例
不同稀释度的平均菌落数 两个稀释 菌落总数 报告方式 备注
次
10-1
10-2
10-3 度菌落之 （个/ml） （个/ml）
比20
-
16400 1.6×104 两位以
后的数
2
2 760
294
46
1.6 37700 3.8×104 字采取
2
一、实验目的 二、实验仪器与材料 三、实验操作步骤 四、实验结果 五、思考题
3
一、实验目的
掌握水样的取样方法； 掌握水体中细菌总数的测定方法； 了解国家的相关法规。
4
二、实验仪器与材料
1. 仪器： 高压蒸汽灭菌器、恒温箱、冰箱、体视镜(放大镜)、带刻 度试管（3）、培养皿（4）、微量移液器（配枪头）、 三角瓶（2 ） 、计数器。 2. 培养基 牛肉膏蛋白胨琼脂培养基
10-2 10-3 10-4 10-5 10-6 10-1
10
（2）接种
以无菌操作方法用无菌吸管吸取原水样l ml或取 2-3个适宜浓度稀释液l ml，注入灭菌平皿中。倾 注约15ml已溶化并冷却到45℃左右的牛肉膏蛋 白胨琼脂培养基，并立即旋转平皿，使水样与培 养基充分混匀，每个稀释度平行三皿。另设三皿 空白对照（？）。
5
三、实验操作步骤
1. 水样的采集 供细菌学检验用的水样，必须按一般无菌操作的基 本要求进行采样，并保证在运送、贮存过程中不受 污染。为了要正确反映水质在采样时的真实情况， 水样在采取后应立即送检；一般从取样到检验不应 超过4小时。条件不允许立即检验时，应存于冰箱， 但也不应超过24小时，并应在检验报告单上注明。
(见表4-3-1例次6)。
17
表 4-3-1 计算菌落总数的方法举例
例
不同稀释度的平均菌落数 两个稀释 菌落总数 报告方式 备注
次
10-1
10-2
10-3 度菌落之 （个/ml） （个/ml）
比20
-
16400 1.6×104 两位以
后的数
2
2 760
294
46
1.6 37700 3.8×104 字采取
2
一、实验目的 二、实验仪器与材料 三、实验操作步骤 四、实验结果 五、思考题
3
一、实验目的
掌握水样的取样方法； 掌握水体中细菌总数的测定方法； 了解国家的相关法规。
4
二、实验仪器与材料
1. 仪器： 高压蒸汽灭菌器、恒温箱、冰箱、体视镜(放大镜)、带刻 度试管（3）、培养皿（4）、微量移液器（配枪头）、 三角瓶（2 ） 、计数器。 2. 培养基 牛肉膏蛋白胨琼脂培养基
水的细菌学检查 ppt课件
• 在人粪中粪大肠菌群细菌占总大肠菌群 数的96.4%；在外环境中粪大肠菌群不易 繁殖，因此，粪大肠菌群较总大肠菌群 作为粪便污染指示菌意义更大。
一、实验目的
1．学习水样细菌总数的测定方法。 2．掌握水中大肠菌群的测定方法。 3．了解大肠菌群的数量与生活饮用水的
重要性。
二、实验原理
（一）细菌总数的测定 水中的细菌总数可反映出水体被有机
• 多管发酵法使用历史较久，又称水的标 准分析方法，为我国大多数卫生单位与 水厂所采用；
• 滤膜法是一种快速的替代方法，而且结 果重复性好，又能测定大体积的水样， 目前国内已有很多大城市的水厂采用此 法。
• 粪大肠菌群
• 粪大肠菌群（fecal coliform）是能在 44.5℃（44～45 ℃）发酵乳糖的大肠菌 群（thermotolerant coliform），以埃希氏 菌属为主。
（1）个别其他类型的细菌在上述条件下也 可能产气，需进行下述试验（即平板分 离和复发酵试验）才能进一步确证。
（2）培养24h后产酸，但未见产气者，不 能立即判断为阴性结果，由于菌量少， 也可能延迟至48h后才产气，应视为可疑 结果，也需进行下述试验（即平板分离 和复发酵试验）进一步确证，48h后仍不 产气，可判断为阴性结果。
• 我国饮用水的卫生学指标规定：在lmL自 来水中细菌总数不得超过100个。
二、实验原理
（二）水中大肠菌群的测定（多管发酵法） 多管发酵法包括：初发酵试验、平板分
离和复发酵试验三部分。
1．初发酵试验
初发酵试验的液体培养基含有乳糖、蛋 白胨和溴甲酚紫。
乳糖起选择性碳源的作用，大肠菌群 可发酵乳糖产酸（有机酸），产气 （CO2+H2）。
四、实验操作
一、实验目的
1．学习水样细菌总数的测定方法。 2．掌握水中大肠菌群的测定方法。 3．了解大肠菌群的数量与生活饮用水的
重要性。
二、实验原理
（一）细菌总数的测定 水中的细菌总数可反映出水体被有机
• 多管发酵法使用历史较久，又称水的标 准分析方法，为我国大多数卫生单位与 水厂所采用；
• 滤膜法是一种快速的替代方法，而且结 果重复性好，又能测定大体积的水样， 目前国内已有很多大城市的水厂采用此 法。
• 粪大肠菌群
• 粪大肠菌群（fecal coliform）是能在 44.5℃（44～45 ℃）发酵乳糖的大肠菌 群（thermotolerant coliform），以埃希氏 菌属为主。
（1）个别其他类型的细菌在上述条件下也 可能产气，需进行下述试验（即平板分 离和复发酵试验）才能进一步确证。
（2）培养24h后产酸，但未见产气者，不 能立即判断为阴性结果，由于菌量少， 也可能延迟至48h后才产气，应视为可疑 结果，也需进行下述试验（即平板分离 和复发酵试验）进一步确证，48h后仍不 产气，可判断为阴性结果。
• 我国饮用水的卫生学指标规定：在lmL自 来水中细菌总数不得超过100个。
二、实验原理
（二）水中大肠菌群的测定（多管发酵法） 多管发酵法包括：初发酵试验、平板分
离和复发酵试验三部分。
1．初发酵试验
初发酵试验的液体培养基含有乳糖、蛋 白胨和溴甲酚紫。
乳糖起选择性碳源的作用，大肠菌群 可发酵乳糖产酸（有机酸），产气 （CO2+H2）。
四、实验操作
水中大肠菌群的含量测定PPT课件
水中大肠菌群的测定
1
一、目的要求
1、掌握测定水中大肠菌群数量的多管发酵法的原理、 操作步骤及方法；
2、掌握划线分离法； 3、了解水质评价的微生物学卫生标准，明白其应用的
重要性。
2
二、基本原理
总大肠菌群（coliform group，total coliforms） 总大肠菌群指数高，表示水源被粪便污染，则有可
2）池水、河水或湖水 应取距水面10~15cm的深层水 样，先将灭菌的带玻璃塞瓶，瓶口向下浸入水中，然后翻 转过来，除去玻璃塞，水即流入瓶中，盛满后，将瓶塞盖 好，再从水中取出。最好立即检查，否则需放入冰箱充分 冷却。
9
1、初发酵试验：（自来水检查为例）
在2个含有50mL 3倍浓缩的乳糖蛋白胨发酵烧瓶中， 各加入100mL水样。在10支含有5mL3倍浓缩的乳糖蛋白 胨发酵管中，各加入10mL水样。混匀后，37℃培养24h， 24h未产气的继续培养至48h；
基，3倍浓缩乳糖蛋白胨发酵管（内有倒置小套管）培养 基，伊红美蓝琼脂平板。 3、溶液和试剂：革兰氏染液、无菌水等。 4、仪器和其他用品：显微镜、载玻片、无菌培养皿、灭 菌吸管、灭菌试管、镊子、烧杯、温箱等。
8
四、操作步骤
水样的采取
1）自来水 先将自来水龙头用火焰烧灼3min灭菌，再开 放水龙头使水流5min后，以灭菌三角烧瓶接取水样，以 待分析。
2、平板分离：
将24h培养后产酸产气和48h培养后产酸产气的发酵管， 分别划线接种于伊红美蓝琼脂平板上，再于37℃下培养18～ 24h，将符合下列特征菌落：深紫黑色，有金属光泽；紫黑 色，不带或略带金属光泽；淡紫红色，中心颜色较深，挑取 其中的一小部分，进行涂片，革兰氏染色，镜检；
1
一、目的要求
1、掌握测定水中大肠菌群数量的多管发酵法的原理、 操作步骤及方法；
2、掌握划线分离法； 3、了解水质评价的微生物学卫生标准，明白其应用的
重要性。
2
二、基本原理
总大肠菌群（coliform group，total coliforms） 总大肠菌群指数高，表示水源被粪便污染，则有可
2）池水、河水或湖水 应取距水面10~15cm的深层水 样，先将灭菌的带玻璃塞瓶，瓶口向下浸入水中，然后翻 转过来，除去玻璃塞，水即流入瓶中，盛满后，将瓶塞盖 好，再从水中取出。最好立即检查，否则需放入冰箱充分 冷却。
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1、初发酵试验：（自来水检查为例）
在2个含有50mL 3倍浓缩的乳糖蛋白胨发酵烧瓶中， 各加入100mL水样。在10支含有5mL3倍浓缩的乳糖蛋白 胨发酵管中，各加入10mL水样。混匀后，37℃培养24h， 24h未产气的继续培养至48h；
基，3倍浓缩乳糖蛋白胨发酵管（内有倒置小套管）培养 基，伊红美蓝琼脂平板。 3、溶液和试剂：革兰氏染液、无菌水等。 4、仪器和其他用品：显微镜、载玻片、无菌培养皿、灭 菌吸管、灭菌试管、镊子、烧杯、温箱等。
8
四、操作步骤
水样的采取
1）自来水 先将自来水龙头用火焰烧灼3min灭菌，再开 放水龙头使水流5min后，以灭菌三角烧瓶接取水样，以 待分析。
2、平板分离：
将24h培养后产酸产气和48h培养后产酸产气的发酵管， 分别划线接种于伊红美蓝琼脂平板上，再于37℃下培养18～ 24h，将符合下列特征菌落：深紫黑色，有金属光泽；紫黑 色，不带或略带金属光泽；淡紫红色，中心颜色较深，挑取 其中的一小部分，进行涂片，革兰氏染色，镜检；
实验十二 水中细菌总数和大肠杆菌检测 ppt课件
实验十二 水中细菌总数和大肠杆菌检测 ppt课件
一 实验目的
1、掌握细菌总数的测定方法 2、掌握大肠杆菌的鉴定和计数
方法 3、巩固无菌操作技术
二 实验原理
1.细菌总数测定原理
用营养琼脂倾注平板，测定被检物在单 位重量或体积（g或ml）内所含有的活细 菌数量，以判明被检物被细菌污染的程度。
三、实验器材
板 牛肉膏蛋白胨培养基:150ml，6个平板
4400
3
2
2
2100
350
4700
3
2
3
2900
3
3
0
2400
360
13000
3
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1
4600
710
24000
3
3
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11000
1500
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≥24000
大肠菌群测定
产酸判断：紫色培养液变成黄色
产气判断：发酵导管内有小气泡，如轻轻打动试 管有气泡沿管壁上浮，应考虑可能有气体产生， 需进一步试验。
将产气的发酵管分别转种在伊红美蓝琼脂平板上，置 36℃±1℃温箱内，培养18h—24h，然后取出，观察菌 落形态并做革兰氏染色和证实试验。
4.证实试验
在上述平板上，挑取可疑大肠菌群菌落1—2个进行革兰 氏染色，同时接种乳糖发酵管，置36℃±1℃的温箱内培 养24h±2h，观察产气情况。
凡乳糖管产气、革兰氏染色为阴性无芽胞杆菌，即报告 为大肠菌群阳性。
10-3无法计数
菌落计数的报告:
菌落数
报告结果
1、 30~300 之间
平均菌落数 X 稀释倍数
2、 (若有两个稀释度) 在30~300之间
一 实验目的
1、掌握细菌总数的测定方法 2、掌握大肠杆菌的鉴定和计数
方法 3、巩固无菌操作技术
二 实验原理
1.细菌总数测定原理
用营养琼脂倾注平板，测定被检物在单 位重量或体积（g或ml）内所含有的活细 菌数量，以判明被检物被细菌污染的程度。
三、实验器材
板 牛肉膏蛋白胨培养基:150ml，6个平板
4400
3
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350
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≥24000
大肠菌群测定
产酸判断：紫色培养液变成黄色
产气判断：发酵导管内有小气泡，如轻轻打动试 管有气泡沿管壁上浮，应考虑可能有气体产生， 需进一步试验。
将产气的发酵管分别转种在伊红美蓝琼脂平板上，置 36℃±1℃温箱内，培养18h—24h，然后取出，观察菌 落形态并做革兰氏染色和证实试验。
4.证实试验
在上述平板上，挑取可疑大肠菌群菌落1—2个进行革兰 氏染色，同时接种乳糖发酵管，置36℃±1℃的温箱内培 养24h±2h，观察产气情况。
凡乳糖管产气、革兰氏染色为阴性无芽胞杆菌，即报告 为大肠菌群阳性。
10-3无法计数
菌落计数的报告:
菌落数
报告结果
1、 30~300 之间
平均菌落数 X 稀释倍数
2、 (若有两个稀释度) 在30~300之间
实验三水中细菌总数的测定PPT课件
03
CATALOGUE
实验步骤
实验步骤
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实验步骤
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实验步骤
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02
培养数据分析能力
通过对实验数据的分析，可以培养数据分析能力，提高数据处理水平。
03
学习并掌握实验报告撰写的基本方法
通过撰写实验报告，可以培养报告撰写能力，提高文字表达能力。
02
CATALOGUE
实验原理
细菌总数的概念及测定意义
细菌总数
指在一定条件下，每毫升水样中 可以生长的细菌菌落的总数。
测定意义
中细菌总数。
学习并掌握无菌操作技术
02
在实验过程中结果的准确性。
实验十一水中细菌总数的测定
数据处理
根据菌落计数结果，计算每毫升水样中的细菌总数。计算公式 为：细菌总数（cfu/mL）=（平均菌落数×稀释倍数）/接种体 积。同时，计算标准差和变异系数，评估结果的可靠性。
04 实验结果与数据分析
菌落形态描述及数量统计
菌落形态
在培养皿中观察到不同形态的菌落， 包括圆形、不规则形状等。菌落表面 光滑或粗糙，颜色也有所不同，从白 色到黄色不等。
结果分析与讨论
结果分析
根据实验结果，可以对水样中的细菌总数进行评估。如果细菌总数超过了相应的卫生标准，则说明水 样受到了污染，需要采取相应的措施进行处理。
结果讨论
在实验过程中，可能会受到一些因素的影响，如温度、pH值、营养物质等。这些因素可能会导致实验 结果的偏差。因此，在讨论实验结果时，需要考虑这些因素的影响，并对实验结果进行合理的解释和 讨论。同时，也可以提出改进实验方法的建议，以提高实验的准确性和可靠性。
时一般采用平板计数法，选择菌落数在30-300之间的平板进行计数，
以确保结果的准确性。
03 实验步骤与操作
样品稀释与接种
样品稀释
取1mL水样，加入9mL无菌水中，充分混匀，得到10^-1稀释液。以此类推， 制备10^-2、10^-3等稀释液。
接种
分别取不同稀释度的水样1mL，倾注于无菌平皿中，每个稀释度做两个平行样。 同时，以无菌水作空白对照。
计数误差
在细菌计数过程中，可能因计数不准确或视野选择不当导 致误差。为减小误差，应采用合适的计数方法，如平板计 数法，并选择具有代表性的视野进行计数。
提高实验准确性的建议
严格控制实验条件
在实验过程中，应严格控制温度、湿 度、光照等实验条件，确保实验结果 的准确性和可重复性。
根据菌落计数结果，计算每毫升水样中的细菌总数。计算公式 为：细菌总数（cfu/mL）=（平均菌落数×稀释倍数）/接种体 积。同时，计算标准差和变异系数，评估结果的可靠性。
04 实验结果与数据分析
菌落形态描述及数量统计
菌落形态
在培养皿中观察到不同形态的菌落， 包括圆形、不规则形状等。菌落表面 光滑或粗糙，颜色也有所不同，从白 色到黄色不等。
结果分析与讨论
结果分析
根据实验结果，可以对水样中的细菌总数进行评估。如果细菌总数超过了相应的卫生标准，则说明水 样受到了污染，需要采取相应的措施进行处理。
结果讨论
在实验过程中，可能会受到一些因素的影响，如温度、pH值、营养物质等。这些因素可能会导致实验 结果的偏差。因此，在讨论实验结果时，需要考虑这些因素的影响，并对实验结果进行合理的解释和 讨论。同时，也可以提出改进实验方法的建议，以提高实验的准确性和可靠性。
时一般采用平板计数法，选择菌落数在30-300之间的平板进行计数，
以确保结果的准确性。
03 实验步骤与操作
样品稀释与接种
样品稀释
取1mL水样，加入9mL无菌水中，充分混匀，得到10^-1稀释液。以此类推， 制备10^-2、10^-3等稀释液。
接种
分别取不同稀释度的水样1mL，倾注于无菌平皿中，每个稀释度做两个平行样。 同时，以无菌水作空白对照。
计数误差
在细菌计数过程中，可能因计数不准确或视野选择不当导 致误差。为减小误差，应采用合适的计数方法，如平板计 数法，并选择具有代表性的视野进行计数。
提高实验准确性的建议
严格控制实验条件
在实验过程中，应严格控制温度、湿 度、光照等实验条件，确保实验结果 的准确性和可重复性。
细菌总数与大肠菌群数测定 PPT课件
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初发酵
器材与试 剂
水样、无菌水、三倍乳糖蛋白胨，吸管、酒精灯、 吸球
30
大肠菌群数测定
实验步骤： 1.初发酵 （1）2个大试管（内有倒管），100ml水样+已灭 菌的3倍浓缩乳糖蛋白胨培养液（50ml） （2）10支试管（内有倒管），10ml水样+已灭菌 的3倍浓缩乳糖蛋白胨培养液（5ml） （3）培养：37 ℃，24h （4）观察指标： 产酸（黄色），产气（倒管内有气泡）
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24
第二部分 总大肠菌群数测定
总大肠菌群是指那些能在37ºC，48h之内 发酵乳糖产酸产气的、需氧及兼性厌氧的 革兰氏阴性的无芽胞杆菌。主要包括埃希 氏菌属、柠檬酸杆菌属、肠杆菌属、克雷 伯氏菌属等菌属的细菌。
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总大肠菌群的检验方法中，多管发酵法适 用于各种水样（包括底泥），但操作复杂 ，需要时间长；滤膜法主要适用于杂质较 少的水样，操作简单快捷
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16
八、计算
1、菌落计数及报告方法
作平皿菌落计数时，可用眼睛直接观察， 必要时用放大镜检查，以防遗漏。在记下 各平皿的菌落数后，应求出同稀释度的平 均菌落数，供下一步计算时应用。
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在求同稀释度的平均数时，若其中一个平 皿有较大片状菌落生长时，则不宜采用， 而应以无片状菌落生长的平皿作为该稀释 度的平均菌落数。若片状菌落不到平皿的 一半，而其余一半中菌落数分布又很均匀， 则可将此半皿计数后乘2以代表全皿菌落 数。然后再求该稀释度的平均菌落数。
11
2、操作方法
（1）以无菌操作方法用灭菌吸管吸取 1mL充分混匀的水样，注入灭菌平皿中， 倾注约15mL已融化并冷却到45℃左右的 营养琼脂培养基，并立即旋摇平皿，使水 样与培养基充分混匀。每次检验时应做一 平行接种，同时另用一个平皿只倾注营养 琼脂培养基作为空白对照
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初发酵
器材与试 剂
水样、无菌水、三倍乳糖蛋白胨，吸管、酒精灯、 吸球
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大肠菌群数测定
实验步骤： 1.初发酵 （1）2个大试管（内有倒管），100ml水样+已灭 菌的3倍浓缩乳糖蛋白胨培养液（50ml） （2）10支试管（内有倒管），10ml水样+已灭菌 的3倍浓缩乳糖蛋白胨培养液（5ml） （3）培养：37 ℃，24h （4）观察指标： 产酸（黄色），产气（倒管内有气泡）
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第二部分 总大肠菌群数测定
总大肠菌群是指那些能在37ºC，48h之内 发酵乳糖产酸产气的、需氧及兼性厌氧的 革兰氏阴性的无芽胞杆菌。主要包括埃希 氏菌属、柠檬酸杆菌属、肠杆菌属、克雷 伯氏菌属等菌属的细菌。
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总大肠菌群的检验方法中，多管发酵法适 用于各种水样（包括底泥），但操作复杂 ，需要时间长；滤膜法主要适用于杂质较 少的水样，操作简单快捷
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八、计算
1、菌落计数及报告方法
作平皿菌落计数时，可用眼睛直接观察， 必要时用放大镜检查，以防遗漏。在记下 各平皿的菌落数后，应求出同稀释度的平 均菌落数，供下一步计算时应用。
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在求同稀释度的平均数时，若其中一个平 皿有较大片状菌落生长时，则不宜采用， 而应以无片状菌落生长的平皿作为该稀释 度的平均菌落数。若片状菌落不到平皿的 一半，而其余一半中菌落数分布又很均匀， 则可将此半皿计数后乘2以代表全皿菌落 数。然后再求该稀释度的平均菌落数。
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2、操作方法
（1）以无菌操作方法用灭菌吸管吸取 1mL充分混匀的水样，注入灭菌平皿中， 倾注约15mL已融化并冷却到45℃左右的 营养琼脂培养基，并立即旋摇平皿，使水 样与培养基充分混匀。每次检验时应做一 平行接种，同时另用一个平皿只倾注营养 琼脂培养基作为空白对照
水中细菌总数测定.共29页
水中细菌总数测定.
56、死去何所道，托体同山阿。 57、春秋多佳日，登高赋新诗。 58、种豆南山下，草盛豆苗稀。晨兴 理荒秽 ，带月 荷锄归 。道狭 草木长 ，夕露 沾我衣 。衣沾 不足惜 ，但使 愿无违 。 59、相见无杂言，但道桑麻长。 60、迢迢新秋夕，亭亭月将圆。
41、学问是异常珍贵的东西，从任何源泉吸 收都不可耻。——阿卜·日·法拉兹
42、只有在人群中间，才能认识自 己。——德国
43、重复别人所说的话，只需要教育； 而要挑战别人所说的话，则需要头脑。—— 玛丽·佩蒂博恩·普尔
44、卓越的人一大优点是：在不利与艰 难的遭遇里百折不饶。——贝多芬Βιβλιοθήκη 45、自己的饭量自己知道。——苏联
56、死去何所道，托体同山阿。 57、春秋多佳日，登高赋新诗。 58、种豆南山下，草盛豆苗稀。晨兴 理荒秽 ，带月 荷锄归 。道狭 草木长 ，夕露 沾我衣 。衣沾 不足惜 ，但使 愿无违 。 59、相见无杂言，但道桑麻长。 60、迢迢新秋夕，亭亭月将圆。
41、学问是异常珍贵的东西，从任何源泉吸 收都不可耻。——阿卜·日·法拉兹
42、只有在人群中间，才能认识自 己。——德国
43、重复别人所说的话，只需要教育； 而要挑战别人所说的话，则需要头脑。—— 玛丽·佩蒂博恩·普尔
44、卓越的人一大优点是：在不利与艰 难的遭遇里百折不饶。——贝多芬Βιβλιοθήκη 45、自己的饭量自己知道。——苏联
水中细菌总数的检测
三、实验仪器和材料1、高压蒸汽灭菌锅、恒温箱、冰箱、无菌接种间。
消毒酒精、消毒水。
3、试管、三角瓶、平皿、刻度吸管、涂布器等（实验前包扎灭菌处理好备用）4、培养基蛋白陈lOg 牛肉膏3g 氯化钠5g 琼脂10~20g 蒸镭水1000ml制备方法:按照实际的需要量，按上述配方称取各成分混合后，加热溶解，调整 为7.4-7.6,,分装于玻璃容器中，用咼压蒸汽火菌锅四、实验内容:（一）、培养基的制备:（-）、取水样:打开龙头放水1-2分钟，用无菌空三角瓶接取水样200毫升。
2、纯净水取样：用消毒酒精棉擦拭纯水机出口后，先放走部分水，再用 无菌空三角瓶接取水样200毫升。
细菌总数测定 定量接 种水样 宕予•一制作培养基平板 37 C F 培养 24h 、自来水的取样：先将自来水龙头用酒精棉擦拭,再用酒精灯火焰灭菌,pH121 r 灭菌 20mi n,倒5、水样:制成平板后储存于冷处备用。
自来水、 实验前事先准备好培养基平板（方法见上），每小组2-4个平板。
3、池水、河水或湖水应取距水面10- 155的深层水样，先将灭菌的带玻璃塞瓶，瓶口向下浸入水中，然后翻转过来，除去玻璃塞，水即流入瓶中，盛满后，将 瓶塞盖好，再从水中取出，最好立即检查，否则需放入冰箱中保存。
（三）、接种培养：（要求无菌操作）用无菌吸管吸取1毫升水样，加入平板中（每个水样平行做两个平板），用24h-48小时培养后'统计细困困洛的总数。
（四）、菌落记数:菌落计数及报告方法作平皿菌落计数时，可用眼睛直接观察，必要时用放大镜检查以防遗漏。
在 记下各平皿的 菌落数后，应求出同稀释度的平均菌落数，供下一步计算时应用。
在求同稀释度的平均数时，若其中一个平皿有较大片状菌落产生时，则不宜采用,而应以无片状菌落产生的平皿作为该稀释度的平均菌落数。
的一半，而其余一半中菌落数分布又很均匀，则可将此半皿计数后乘 皿菌落数。
然后再求该稀释度的平均菌落数。
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37℃培养24h后，所生长细菌菌落的总数。
◈生活饮用水的细菌总数lmL不得超过100个
一、细菌总数测定的意义
◈可以反映水体有机污染的程度
精品课件
24
Ⅰ 细菌总数的测定
二、培养基的制作 三、测定方法及步骤
1.稀释水样 2.接种水样 3.培养：37℃下倒置培养24h
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6
（四）实验方法
培养基的制备过程 称量---溶解----调节pH值----过滤---分装及包扎----灭菌----灭菌后试管 摆放斜面
1.称量 按照培养基配方，准确称量各成份放于瓷缸中。 配方：牛肉膏5.0g,蛋白胨10.0g，NaCl5.0g,琼脂 20.0g,蒸馏水1000ml,pH7.0。
适用于无菌室，接种箱，手术室内的空 气及物体表面的灭菌。
精品课件
18
2、步骤 1）单用紫外灯 在无菌室内或在接种箱内打开紫外线
灯开关，照射30min，将开关关闭。 2）化学消毒剂与紫外线照射结合使用 在无菌室内，先喷洒化学消毒剂溶液，
再用紫外线灯照射15imn
精品课件
19
水中细菌总数测定
精品课件
精品课件
3
（二）实验原理
培养基是按照微生物生长繁殖或积累代谢产物 所需的各种营养物质，用人工方法配制而成的一 种基质。它包括碳源、氮源、能源、生长因子、 无机盐和水六类营养要素。由于不同微生物细胞 组成不同，因而所需营养基质不同，为了分离、 培养和鉴定不同的微生物，必须根据其需要，配 制合适的培养基.
不同层次的搅扰；同一采样点与理化监测项目同时采样时，应 先采集细菌学检验样品
（6）采样完毕，做好记录
精品课件
22
二、样品保存
采好的水样，应迅速运往实验室，进行细菌学 检验。一般从取样到检验不宜超过2h，否则应 使用10℃以下的冷藏设备保存样品，但不得超 过6h
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23
Ⅰ 细菌总数的测定
细菌总数：指lmL水样在营养琼脂培养基中，于
用火焰烧灼或电热干燥箱内高温热空气灭菌 2、湿热灭菌
⑴高压蒸汽灭菌法 ⑵间歇灭菌法 ⑶煮沸消毒法
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5
（三）实验器材
1.药品和试剂：牛肉膏、蛋白胨、NaCl、10％ NaOH溶液、10％盐酸溶液。
2.器材：天平、药匙、瓷缸、玻璃棒、电炉、 PH试纸、试管、三角瓶、分装漏斗、牛皮纸、 棉花、线绳、干燥箱、高压锅。
20
一、水样的采集
1. 采水容器
① 采样瓶：具磨口玻塞的500mL广口瓶 ② 采样瓶的洗涤
③ 采样瓶的灭菌: 160～170℃干热灭菌2h，或用高压蒸 汽灭菌器，121℃灭菌15min
精品课件
21
一、水样的采集
2. 采样步骤及注意事项
(1)去氯和高浓度重金属：灭菌前按500mL采样瓶加入 0.3mL10%Na2S2O3溶液
(2) 采集江、河、湖、库等地表水样时，可握住瓶子下部直 接将已灭菌的带塞采样瓶插入水中，约距水面10～15cm处采 （集3）采集一定深度的水样时，可使用单层采水器或深层采水器
（4）从自来水龙头采集样品时，采水前可先将水龙头打开至最 大，放水3～5min，用酒精灯火焰灼烧约3min灭菌
（5）在同一采样点进行分层采样时，应自上而下进行，以免
培养基的种类繁多，根据培养基的成分、物 理性状不同，可分为天然培养基、合成培养基、 半合成培养基、固体培养基、半固体培养基和液 体培养基。
精品课件
4
灭菌是指应用物理或化学的方法，杀 灭物体表面和内部一切微生物营养体、芽孢 和孢子。灭菌方法很多，可分为加热、过滤、 照射和化学药品法等。
常用加热灭菌法： 1、干热灭菌：
5、分装过程中注意不要将培养基沾在管（瓶）口上，以免沾污棉塞 而引起污染。
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14
（五）实验作业
为什么湿热灭菌比干热灭菌法更有效？
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15
消毒与灭菌
1．干热灭菌法 2．高压蒸汽灭菌 3．紫外线灭菌法
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16
（二）高压蒸汽灭菌
1、原理
利用加热一个密闭的加压灭菌锅，使灭 菌锅隔套间的水沸腾而产生蒸气。由于蒸气不 能溢出，而增加了灭菌锅内的压力，从而使沸 点增高，得到高于100℃的温度。导致菌体蛋 白质凝固变性而达到灭菌的目的。
一般培养基用0.1Mpa，121.5℃,15～ 30min
加2水、步骤装待灭
菌物品
加盖
加热
精品课件
灭菌时间到后 断电源
压力降为零 开箱取物
17
（三）紫外线灭菌法 1、原理
紫外线杀菌机理主要是因为它诱导了胸 腺嘧啶二聚体的形成和DNA 链的交联，从而 抑制了DNA 的复制。另一方面，由于辐射能 使空气中的氧电离成[O]，再使O2 氧化生成 臭氧或使水氧化生成H2O2。O3 和H2O2 均有 杀菌作用。
2、蛋白胨极易吸湿，称取时动作要迅速；
2、配制固体培养基时，先将其他药品加热溶解到快沸时，再将称好 的琼脂加入，继续加热至琼脂完全熔化，此过程要不断搅拌，以免 琼脂糊底，并控制火力，防止沸腾外溢；
4、分装量根据试管大小和实际需要而定，固体培养基装量约为管高 的1/5，液体培养基的装量约为管高的1/4，三角瓶的装量不超过瓶 体的1/2 ；
水中的细菌总数测定
1. 培养基的配制 2. 消毒与灭菌 3. 水中细菌总数的测定 4. 菌落计数法
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1
培养基的制备与灭 菌
（一）实验目的
（二）实验原理
（三）实验器材
（四）实验方法 （五）实验作业
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2
（一）实验目的
1、明确培养基的配制原则； 2、掌握配制培养基的一般方法和步骤； 3、了解高压蒸汽灭菌的基本原理及应用范围； 4、掌握高压蒸汽灭菌技术，了解几种常用灭菌 方法。
精品课件
7
2.溶解
向上述瓷缸中加入所需要的水量，搅拌，加热使 其溶解。如是配制固体培养基，在琼脂的熔化过 程中，需不断搅拌，并控制火力不要使培养基溢 出或烧焦。待完全熔化后，补足所失水分。
3.调节pH值
用玻璃棒沾少许液体，测量PH值。用氢氧化钠和 盐酸调节PH。
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8
4.过滤 用滤纸或多层纱布过滤，一般无特殊要求可省 去。
5.分装及包扎
根据不同的需要，可将制好的培养基分装入试 管内（用分装漏斗）或三角瓶内，管（瓶）口 塞上棉塞。最后用牛皮纸将棉塞部分包好。
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9
6.灭菌：高压蒸汽灭菌，1210C灭菌20分钟。
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10
7. 灭菌后试管摆放斜面
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பைடு நூலகம்
11
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12
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13
注意事项
1、称取药品时严防药品混杂，一把牛角匙称一种药品；
◈生活饮用水的细菌总数lmL不得超过100个
一、细菌总数测定的意义
◈可以反映水体有机污染的程度
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Ⅰ 细菌总数的测定
二、培养基的制作 三、测定方法及步骤
1.稀释水样 2.接种水样 3.培养：37℃下倒置培养24h
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6
（四）实验方法
培养基的制备过程 称量---溶解----调节pH值----过滤---分装及包扎----灭菌----灭菌后试管 摆放斜面
1.称量 按照培养基配方，准确称量各成份放于瓷缸中。 配方：牛肉膏5.0g,蛋白胨10.0g，NaCl5.0g,琼脂 20.0g,蒸馏水1000ml,pH7.0。
适用于无菌室，接种箱，手术室内的空 气及物体表面的灭菌。
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2、步骤 1）单用紫外灯 在无菌室内或在接种箱内打开紫外线
灯开关，照射30min，将开关关闭。 2）化学消毒剂与紫外线照射结合使用 在无菌室内，先喷洒化学消毒剂溶液，
再用紫外线灯照射15imn
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水中细菌总数测定
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3
（二）实验原理
培养基是按照微生物生长繁殖或积累代谢产物 所需的各种营养物质，用人工方法配制而成的一 种基质。它包括碳源、氮源、能源、生长因子、 无机盐和水六类营养要素。由于不同微生物细胞 组成不同，因而所需营养基质不同，为了分离、 培养和鉴定不同的微生物，必须根据其需要，配 制合适的培养基.
不同层次的搅扰；同一采样点与理化监测项目同时采样时，应 先采集细菌学检验样品
（6）采样完毕，做好记录
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22
二、样品保存
采好的水样，应迅速运往实验室，进行细菌学 检验。一般从取样到检验不宜超过2h，否则应 使用10℃以下的冷藏设备保存样品，但不得超 过6h
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Ⅰ 细菌总数的测定
细菌总数：指lmL水样在营养琼脂培养基中，于
用火焰烧灼或电热干燥箱内高温热空气灭菌 2、湿热灭菌
⑴高压蒸汽灭菌法 ⑵间歇灭菌法 ⑶煮沸消毒法
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（三）实验器材
1.药品和试剂：牛肉膏、蛋白胨、NaCl、10％ NaOH溶液、10％盐酸溶液。
2.器材：天平、药匙、瓷缸、玻璃棒、电炉、 PH试纸、试管、三角瓶、分装漏斗、牛皮纸、 棉花、线绳、干燥箱、高压锅。
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一、水样的采集
1. 采水容器
① 采样瓶：具磨口玻塞的500mL广口瓶 ② 采样瓶的洗涤
③ 采样瓶的灭菌: 160～170℃干热灭菌2h，或用高压蒸 汽灭菌器，121℃灭菌15min
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一、水样的采集
2. 采样步骤及注意事项
(1)去氯和高浓度重金属：灭菌前按500mL采样瓶加入 0.3mL10%Na2S2O3溶液
(2) 采集江、河、湖、库等地表水样时，可握住瓶子下部直 接将已灭菌的带塞采样瓶插入水中，约距水面10～15cm处采 （集3）采集一定深度的水样时，可使用单层采水器或深层采水器
（4）从自来水龙头采集样品时，采水前可先将水龙头打开至最 大，放水3～5min，用酒精灯火焰灼烧约3min灭菌
（5）在同一采样点进行分层采样时，应自上而下进行，以免
培养基的种类繁多，根据培养基的成分、物 理性状不同，可分为天然培养基、合成培养基、 半合成培养基、固体培养基、半固体培养基和液 体培养基。
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灭菌是指应用物理或化学的方法，杀 灭物体表面和内部一切微生物营养体、芽孢 和孢子。灭菌方法很多，可分为加热、过滤、 照射和化学药品法等。
常用加热灭菌法： 1、干热灭菌：
5、分装过程中注意不要将培养基沾在管（瓶）口上，以免沾污棉塞 而引起污染。
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（五）实验作业
为什么湿热灭菌比干热灭菌法更有效？
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消毒与灭菌
1．干热灭菌法 2．高压蒸汽灭菌 3．紫外线灭菌法
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（二）高压蒸汽灭菌
1、原理
利用加热一个密闭的加压灭菌锅，使灭 菌锅隔套间的水沸腾而产生蒸气。由于蒸气不 能溢出，而增加了灭菌锅内的压力，从而使沸 点增高，得到高于100℃的温度。导致菌体蛋 白质凝固变性而达到灭菌的目的。
一般培养基用0.1Mpa，121.5℃,15～ 30min
加2水、步骤装待灭
菌物品
加盖
加热
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灭菌时间到后 断电源
压力降为零 开箱取物
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（三）紫外线灭菌法 1、原理
紫外线杀菌机理主要是因为它诱导了胸 腺嘧啶二聚体的形成和DNA 链的交联，从而 抑制了DNA 的复制。另一方面，由于辐射能 使空气中的氧电离成[O]，再使O2 氧化生成 臭氧或使水氧化生成H2O2。O3 和H2O2 均有 杀菌作用。
2、蛋白胨极易吸湿，称取时动作要迅速；
2、配制固体培养基时，先将其他药品加热溶解到快沸时，再将称好 的琼脂加入，继续加热至琼脂完全熔化，此过程要不断搅拌，以免 琼脂糊底，并控制火力，防止沸腾外溢；
4、分装量根据试管大小和实际需要而定，固体培养基装量约为管高 的1/5，液体培养基的装量约为管高的1/4，三角瓶的装量不超过瓶 体的1/2 ；
水中的细菌总数测定
1. 培养基的配制 2. 消毒与灭菌 3. 水中细菌总数的测定 4. 菌落计数法
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1
培养基的制备与灭 菌
（一）实验目的
（二）实验原理
（三）实验器材
（四）实验方法 （五）实验作业
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2
（一）实验目的
1、明确培养基的配制原则； 2、掌握配制培养基的一般方法和步骤； 3、了解高压蒸汽灭菌的基本原理及应用范围； 4、掌握高压蒸汽灭菌技术，了解几种常用灭菌 方法。
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2.溶解
向上述瓷缸中加入所需要的水量，搅拌，加热使 其溶解。如是配制固体培养基，在琼脂的熔化过 程中，需不断搅拌，并控制火力不要使培养基溢 出或烧焦。待完全熔化后，补足所失水分。
3.调节pH值
用玻璃棒沾少许液体，测量PH值。用氢氧化钠和 盐酸调节PH。
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4.过滤 用滤纸或多层纱布过滤，一般无特殊要求可省 去。
5.分装及包扎
根据不同的需要，可将制好的培养基分装入试 管内（用分装漏斗）或三角瓶内，管（瓶）口 塞上棉塞。最后用牛皮纸将棉塞部分包好。
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6.灭菌：高压蒸汽灭菌，1210C灭菌20分钟。
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7. 灭菌后试管摆放斜面
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注意事项
1、称取药品时严防药品混杂，一把牛角匙称一种药品；