实验三 微生物检定法测定硫酸庆大霉素的效价
关于药品效价的知识
医务工作者要合理使用各种抗菌素，在用抗菌素治疗各种感染时要注意以下几点：
一、要严格掌握适应症，每一个抗菌素并不是对所有的细菌都是有抗菌作用的，只有用在对该抗菌素敏感细菌所致的感染性疾病时才有效。
青霉素的主要适应症为链球菌感染（包括猩红热、丹毒、扁桃体炎、心内膜炎等）、敏感金黄色葡萄球菌感染、肺炎双球菌感染（大叶性肺炎）、气性坏疽、炭疽、梅毒、流行性脑脊髓膜炎等。
链霉素的主要适应症为结核病、鼠疫、兔热病等。
四环素的主要适应症为布氏杆菌病、立克次体病、非典型肺炎（肺炎支原体所引起的各种感染如肺炎、尿路感染、败血症等。
抗菌药物有哪些？2008-06-11 17:05
抗菌药物包括抗菌素，磺胺药和抗菌中草药。目前临床常用的抗菌素品种很多，大约可分为下列五类：
一、主要作用于革兰氏阳性细菌的抗菌素，如青霉素G及其各种制剂（普鲁卡因青霉素G、长效青霉素等）、红霉素、新生霉素、杆菌肽、万古霉素、洁霉素、氯洁霉素等。
二、主要作用于耐药性金黄色葡萄球菌的抗菌素，如苯唑青霉素、乙氧萘青霉素、邻氯青霉素、双氯青霉素、头孢菌素族抗菌素、利福平等。
三、主要作用于革兰氏阴性菌的抗菌素，如多粘菌素E（抗敌素）、创新霉素、羧苄青霉素、链霉素等。
四、广谱抗菌素，如四环素族抗菌素、氯霉素、合霉素、卡那霉素、庆大霉素等。
22、什么叫做抗菌谱？2008-06-02 15:08
细菌根据染色的不同可以分二类：革兰氏染色阳性菌和阴性菌。革兰氏染色阳性细菌（细菌染色后，菌体在显微镜下呈紫色）常见：金黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌、链球菌、肺炎双球菌、白喉杆菌、破伤风杆菌等。革兰氏染色阴性细菌（细菌染色后，菌体在显微镜下呈粉红色）常见：大肠杆菌、痢疾杆菌、变形杆菌、绿脓杆菌、伤寒杆菌等等。
微生物比浊法测定硫酸庆大霉素颗粒效价
２ ５ ９
微 生物 比浊 法测 定硫酸庆大 霉素颗 粒效价
张胜波 屈 胜 环 （ 济 宁 市 药 品 检 验所 ， 山东 济 宁 ２ ７ ２ ０ ２ ５ ； 济宁市妇幼保健院 ， 济宁 ２ ７ ２ ０ ０ ０ ）
摘 要 目的 建 立 微 生 物 比浊 法 测 定 硫 酸庆 大 霉 素颗 粒 效 价 的 方 法 。 方 法 以金 黄 色 葡 萄 球 菌 为 试 验 菌， 菌 液 浓度 为 １ ． ０ ， 培 养 测 定 时 间为 ３ ～４ ｈ 。结 果 硫 酸 庆 大 霉 素 浓 度 在 ０ ． ２ ～１ ． ０ Ｕ／ ｍｌ 的范 围内， 浓度 的
ｔ ｈ ｅ ｒ ａ ｎ ｇ ｅ ｏ ｆ ０． ２ ～１． ０ Ｕ／ ｍＬ ， ｗｈ ｉ ｌ ｅ ｔ ｈ ｅ ｃ ａ ｌ ｉ ｂ ｒ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｃ ｕ ｒ ｖ ｅ ｌ ｉ ｎ ｅ ａ ｒ ｅ ｑ ｕ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｉ ｓ Ａ：０． ６ ２ １ ４ — ０． ７ １ ８ ７ １ ｇ Ｃ（ ｒ一 ０ ． ９ ９ ８ ９ ） 。 ａ ｎ ｄ ｔ ｈ ｅ ａ ｖ ｅ ｒ ａ ｇ ｅ ｒ ｅ ｃ ｏ ｖ ｅ ｒ ｙ ｉ ｓ ９ ９ ． ２ ％ ｗｉ ｔ ｈ ＲＳ Ｄ ｏ ｆ ０ ． ２ ５ ％． Ｇｅ ｎ ｔ ａ ｍｉ ｃ ｉ ｎ ｓ ｕ ｌ ｆ ａ ｔ ｅ ｉ ｎ ｃ ｏ ｎ ｃ ｅ ｎ ｔ ｒ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｉ ｎ ０ ． ２ ～１ ． ０ Ｕ／ ｍＬ．
硫酸庆大霉素内控质量标准
制药GMP管理文件
一．目的：制定硫酸庆大霉素内控质量标准，规范公司硫酸庆大霉素的采购与生产。
二．适用范围：适用于硫酸庆大霉素的采购与验收。
三．责任者：生产部经理、质管部经理、检验员
四．正文：
硫酸庆大霉素
本品按无水物计算，每1mg的效价不得少于590庆大霉素单位。
【性状】本品为白色或类白色的粉末；无臭；有引湿性。
本品在水中易溶，在乙醇、丙酮、三氯甲烷或乙醚中不溶。
比旋度取本品，精密称定，加水溶解并定量稀释制成每1ml 中约含50mg的溶液，依法测定，比旋度为+107°至+121°。
【鉴别】（1）取本品约5mg，加水1ml溶解后，加0.1%茚三酮的水饱和正丁醇溶液1ml与吡啶0.5ml，在水浴中加热5分钟，即显紫蓝色。
（2）取本品与庆大霉素标准品，分别加水制成每1ml中含20mg 的溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各2ul，分别点于同
一硅胶G薄层板（临用前于105℃活化2小时）上；另取三氯甲烷-甲醇-浓氨溶液(1：1：1)混合振摇，放置1小时，分取下层混合液为展开剂，展开，取出于20~25℃晾干，置碘蒸气中显色，供试品溶液所显主斑点数、位置和颜色应与标准品溶液斑点数、位置和颜色相同。
（3）本品的红外吸收图谱应与对照的图谱一致。
（4）本品的水溶液显硫酸盐的鉴别反应。
【检查】酸度取本品，加水制成每1ml中含40mg的溶液，依法测定，PH值应为4.0～6.0。
溶液的澄清度与颜色取本品5份，各0.4g，分别加水5ml使溶解，溶液应澄清无色；如显浑浊，与1号浊度标准液比较，均不得更浓；如显色，与黄色
最新 抗生素微生物检定及比浊法在效价测定中关键控制点-精品
抗生素微生物检定及比浊法在效价测定
中关键控制点
自1929年英国细菌学家弗来明发现了第1个抗生素一青霉素至今已有半个多世纪，随着抗生素种类不断增加，在治疗感染性疾病和保障健康方面作出了令人瞩目的贡献。在当今世界临床上，抗生素类药物已是一类不可缺少的重要化学药物，在很多国家的T业中产值均居于首位。抗生素在农牧业上也被广泛应用，随着抗生素应用范围的扩大，对抗生素药品的分析工作更加繁重，现代化学分析技术不断发展，特别是各种仪器分析和自动分析技术的日新月异，有可能对各种抗生素进行有效的快速测定，但传统的生物检测法及经典的化学分析方法还是目前各国药典中采用最多、最主要的检测方法。为保证抗生素药品的安全有效性，对抗生素药品的检测及质量控制显得尤为重要。
抗生素微生物检定法是国际上通用的经典测定法，由于微生物检定法的特点是直观和特异地反应抗生素药品抗菌活性的差异，化学测定结果难于准确表征组分组成、含量和活性的关系，许多抗生素品种由于各种原因，目前没有适当的化学分析方法表征其活性，同时，微生物检定法所需的仪器设备简单，成本低廉，故抗生素微生物检定法目前在各国药典中仍占有重要地位。
1 分类
单组分抗生素由于结构明确，含量和生物活性相一致，采用化学分析方法测定含量是其发展趋势，但对于庆大霉素、乙酰螺旋霉素和吉他霉素等多组分抗生素来说，各国药典均采用微生物效价测定法。
由于抗生素对微生物具有杀菌和抑菌作用，这是其他物或化学方法不能达到的，因此，用抗生素对细菌的抑制程度来检定和表示效价是有实际意义的。抗生素微生物检定法可分为稀释法、比浊法和管碟法。
硫酸庆大霉素可溶性粉质量标准
硫酸庆大霉素可溶性粉质量标准（地标升国标第一册）
硫酸庆大霉素可溶性粉
Liusuan Qingdameisu Kerongxingfen
Gentamycin Sulfate Soluble Powder
本品为硫酸庆大霉素与适宜辅料配制而成。含庆大霉素应为标示量的90.0%-110.0%。
【性状】本品为白色或类白色粉末。
【鉴别】（1）取本品适量（约相当于庆大霉素5mg），加水1ml使溶解，加0.1%茚三铜的水饱和正丁醇溶液1ml与吡啶0.5ml，在水浴中加热5分钟，即显紫蓝色。
（2）取本品与硫酸庆大霉素标准品，分别加水制成每1ml中含20mg的溶液，照薄层色谱法（附录80页）试验，吸取上述两种溶液各2μl，分别点与同一硅胶G 薄层板（临用前于105℃活化2小时）上；另取三氯甲烷-甲醇-浓氨溶液（1:1:1）混合振摇，放置1h，分取下层混合液为展开剂，展开，取出于20-25℃晾干，置碘蒸气中显色，供试品溶液所显主斑点数、颜色与位置应与标准品溶液斑点数、颜色与位置相同。
（3）本品的水溶液显硫酸盐的鉴别反应（附录21页）
【检查】干燥失重取本品，105℃干燥至恒重，减失重量不得过5.0%（附录69页）
其他应符合可溶性粉剂项下有关的各项规定（附录16页）。
【含量测定】取本品适量，精密称定，用灭菌水溶解并定量稀释制成每1ml中含1000单位的溶液，照抗生素微生物检定法（附录103页）测定，即得。
【作用与用途】抗生素类药。用于治疗鸡敏感的革兰氏阴性菌和阳性菌感染。
【用法与用量】以本品计。混饮：每1L水，鸡2g，连用3-5日。
抗生素微生物效价测量实验的研究
抗生素微生物效价测量实验的研究
抗生素微生物效价测量实验的研究
一、实验简介：
抗生素微生物效价检定法是以抗菌活性为指标来衡量抗生素中有效成分效力的一种方法。此方法恰好与临床应用的要求相符合，能够确定抗生素的医疗价值，虽然随着仪器分析的发展，部分抗生素含量测定被物理、化学方法所代替，但微生物效价检定法仍然作为抗生素含量测定的经典方法之一被各国药典所采用。
抗生素微生物效价测定法可分为稀释法、比浊法和渗透法三类[1]，通常稀释法用于测定药物的MIC，各国药典均未收载该方法。除中国药典外，《USP》23 版第六增补版，《BP》1998，《EP》1997第三版，《日抗基》1998均收载了比浊法，其优点是采用液体培养基，无扩散因素的影响。试验过程短于渗透法。轩书堂[2]也曾用比浊法测定过泰乐星效价，但该法要求仪器设备较高，且菌种容易污染，故一直未被中国药典所采用。《日本药局方》虽然收载了该方法，但几乎没有机构使用。渗透法也称扩散法，其中管碟扩散法即管碟法是国内外最常用的方法。中、美、英、日和欧洲药典均收载了该方法。
管碟法是利用抗生素在培养基内的扩散渗透作用，将抗生素稀释液加入已放置含有高度敏感性的试验菌培养基的小管内，经培养后，在抗生素扩散到达的适当范围内，形成一定浓度的球型区，产生透明的抑菌圈。通过测量抑菌圈的大小可进行效价计算。管碟法分为一剂量法，二剂量法，三剂量法三种。一剂量法是用已知效价的标准品溶液制备出标准曲线，并在同样条件下测出供试品溶液所致抑菌圈直径的平均值后，再求出其与标准品溶液所致抑菌圈直径平均值之差，以换算出效价。该方法较为繁琐，目前除《日抗基》1998及《USP》23 版收载外，其他药典均未收载，而《中国药典》自1997年版后已经淘汰了该方法。
含量和标示含量
含量是样品的纯度的体现，标示量是含量除以产品规格后的得到的．如一个样品阿莫西林胶囊（规格０．２５g），其中阿莫西林的含量为８５％，那它的标示含量就等于（胶囊的装量＊８５％）／０．２５．
药物标示量，指该剂型单位剂量的制剂中规定的主药含量，通常在该剂型的标签上表示出来。例如：一片剂中应含有主药0.1g，但是总有误差的，一般规定在90%—110%，所以你测出主药是0.09g至1.10g/片，都是符合要求
1、抗生素的效价
抗生素的剂量常用重量和效价来表示。化学合成和半合成的抗菌药物都以重量表示, 生物合成的抗生素以效价表示, 并同时注明与效价相对应的重量。
效价是以抗菌效能（活性部分）作为衡量的标准, 因此, 效价的高低是衡量抗生素质量的相对标准。效价以“单位”来表示。
世界上第一个抗生素青霉素, 最初是以“稀释U”（牛津U）来衡量其质量的。在标准情况下, 能在50ml肉汤内完全抑制金黄色葡萄球菌（牛津标准菌）生长的青霉素最低含量称1个牛津U。随着提取纯化
技术的提高, 获得青霉素纯品, 1944年, 国际联盟卫生组织规定, 以苄青霉素钠重量作为抗菌活力的标准, 按重量标准, 1μg相当U。由于以前用牛津U,改成重量U后, 引起临床使用不便, 决定将1个牛津U相当于0.6μg苄青霉素钠所具有的活力, 作为1个国际单位（IU）, 即1mg相当于1670IU。链霉素效价也是
从未获纯品时的Waksman稀释U过渡到重量U, 1μg纯链霉素（碱）的抗菌活力为1个链霉素U。
稀释U测定时需无菌操作，样品处理繁复, 误差大；所得结果是两种浓度的范围值, 不能获得绝对值，在应用上受到很大限制, 而逐渐被重量U所取代。
抗生素效价
用管碟法（2.2）法，测定链霉素活菌剂的效价，估计效价为1 000 000 u/g，供试品最终浓度为1.4u/ml 及0.7u/ml。
链霉素的效价测定
抗生素微生物检定法
本法系在适宜条件下，根据量反应平行线原理设计，通过检测抗生素对微生物的抑制作用，计算抗生素活性（效性）的方法。
抗生素微生物检定包括两种方法，即管碟法和浊度法。
测定结果经计算所得的效价，如低于估计效价的90%或高于估计效价的110%时，应调整其估计效价，重新试验。
除另有规定外，本法的可信限率不得大于5%。
第一法管碟法
本法系利用抗生素在琼脂培养基内的扩散作用，比较标准品与供试品两者对接种的试验菌产生抑菌圈的大小，以测定供试品效价的一种方法。
菌悬液的制备
枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）悬液
取枯草芽孢杆菌［CMCC（B）63501］的营养琼脂斜面培养物，接种于盛有营养琼脂培养基的培养瓶中，在35～37℃培养7日，用革兰氏染色法涂片镜检，应有芽孢85％以上。用灭菌水将芽孢洗下，在65℃加热30分钟，备用。
短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)悬液
取短小芽孢杆菌［CMCC(B)63202］的营养琼脂斜面培养物，照上述方法制备。
金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）悬液
取金黄色葡萄球菌［CMCC（B）26003］的营养琼脂斜面培养物,接种于营养琼脂斜面上，在35～37℃培养20～22小时。临用时，用灭菌水或0.9％灭菌氯化钠溶液将菌苔洗下，备用。
藤黄微球菌（Micrococcus luteus）悬液
9.11硫酸庆大霉素
硫酸庆大霉素及其制剂的分析
结构特点
硫酸庆大霉素属氨基糖苷类抗生素，为氨基环己多元醇和氨基糖形成的苷。其结构如下：
结构特点
庆大霉素分子中有五个碱性中心，为碱性化合物，药物为庆大霉素的硫酸盐。庆大霉素是C组分的复合物，主要成分为C1、C2、C1a及C2a等，其结构如下：
硫酸庆大霉素的鉴别
薄层色谱法
HPLC法
硫酸盐的鉴别反应
硫酸庆大霉素的鉴别
1．薄层色谱法
浓度：本品与标准品加水制成每1ml中含2.5mg的溶液
点样量：各2μl
硅胶板：硅胶G薄层板上
展开剂：三氯甲烷-甲醇-氨溶液（1:1:1)混合振摇，放置1 小时，分取下层混合液为展开剂，
检视：碘蒸气中显色
要求：供试品溶液所显主斑点数、位置和颜色应与标准品溶液主斑点数、位置和颜色相同。
硫酸庆大霉素的鉴别
2.HPLC法
在庆大霉素C 组分测定项下记录的色谱图中，供试品溶液各主峰保留时间应与标准品溶液各主峰保留时间一致。
标准溶液HPLC图谱
硫酸庆大霉素的鉴别
对照的IR图谱3．红外分光光度法
《中国药典》采用红外分光光度法鉴
别本品，用溴化钾压片后测定，要求
供试品的红外吸收光谱与对照的图谱
一致。
硫酸庆大霉素的检查
1. 水分的检查
2. 硫酸盐
3. 细菌内毒素
4. C组分
5. 酸度
6. 溶液澄清度与颜色
7. 有关物质
8. 炽灼残渣
硫酸庆大霉素的检查
4. C组分
庆大霉素C1、C2、C1a对微生物的活性无明显差异，但其毒副作用和耐药性有差异，导致各组分的多少影响产品的效价和临床疗效。
庆大霉素无紫外吸收，当采用紫外检测器检测时，需进行衍生化处理。由于其具有强极性和水溶性，为获得理想的色谱结果，可采用蒸发光散射检测器或利用庆大霉素C组分结构中的氨基与邻苯二醛(o-phthaldehyde，OPA)、巯基醋酸在pH10.4的硼酸盐缓冲液中反应，生成1-烷基-2-烷基硫代异吲哚衍生物，在330nm 波长处有强吸收。
实验三 微生物检定法测定硫酸庆大霉素的效价
实验三微生物检定法测定硫酸庆大霉素的效价
一、概述
由于抗生素多为结构复杂的多组分物质，异构体多，且不稳定，容易产生降解杂质，故各国药典均以微生物检定法为主要含量测定法，因为抗生素药品的医疗作用主要是它的抗菌活力，而微生物检定法正是以抗生素的抗菌活力为指标来衡量抗生素效价的一种方法，其测定原理与临床要求相一致，能直接反映抗生素医疗价值，因此一直为各国药典所采用的主要测定方法。
微生物检定法测定抗生素效价，一般可分为稀释法、比浊法和琼脂扩散法三类。以琼脂扩散法应用最广泛，为目前国际上测定抗生素效价的通用方法。
琼脂扩散法，亦称管碟法。系采用抗生素在琼脂培养基内的扩散作用，采用量反应平行线原理的设计，比较标准品与供试品两者对接种的试验菌产生抑菌圈的大小，以测定供试品效价的一种方法。
二、基本设备、用具和试验材料
1. 基本设备
(1) 抗生素效价测定实验室：室内应为半无菌，装有紫外线灯，有固定的效价测定台，台面要求水平、防震。该室应与稀释抗生素溶液的工作室隔离，以防止空气、地面污染抗生素。
(2) 超净工作台：超净工作台应放置在洁净工作室或半无菌室内。
(3) 抑菌圈面积测量分析仪：该仪器装有微处理机，可自动测量抑菌圈面积，并打印出统计分析的各种数据。
2.用具
（1）玻璃双碟：为硬质玻璃制品，碟底内径约90mm，碟高16-17mm，碟底面应平，厚薄均匀无凹凸现象。新购的双碟应按上述要求进行检查。检查时可将双碟底平放在水平台上，每碟内加入2ml染料液，仔细观察碟底反映的颜色深浅是否一
致，挑选底部平的双碟，洗净晾干，置高温烘箱内140-160℃干热灭菌2小时后备用。
标准曲线法测定硫酸庆大霉素片的抗生素效价
酸 庆 大 霉 素 片 （ 格 ４ ０ 规 ０ ０ ０Ｕ，批 号 为 ２０ ０ ０ ， ０ ６ ５ ４ ０ ５ ７ ７ ２ ０ ００ ， ２ ００ ０ ，０ ６ ４ ５ 开封制药＜ ０ ６ ４ １ ２ ００ ０ ， 集团＞ 有限公司） 抗生素检定培养 ；
６￣ ５Ｃ加热 ３ ｎ 即得 短小芽孢杆 菌菌悬 液。 ０ｍｉ， 取直径约 ９ 高 ０ｍｍ， １ ６～１ ｍ的平底 双碟 ， ７ｍ 分别注入加热融化的抗生素检定培养基 Ｉ ２ Ｌ 使 在碟底 内均 匀摊 布 ， 置水 平 台上使 凝 固 ， 为底 层 ； ０ｍ ， 放 作 另取抗 生素检定 培养基 Ｉ 量加 热融化 后 ， 适 放冷 至 ６ ￣ 加入短 ０Ｃ， 小芽孢 杆菌菌 悬液适 量 （ 能得 清晰 的抑 菌 圈为度 ， 标准 品溶液 使
剂 量 的 浓 度 ， 种 浓 度 Ｃ（ － 各 ｋ 一‰） 别 为 ４ ２ ４ ８ ５ ５ ６ ４ ７ ２ 分 ． ，． ，． ，． ，． ，
８ ２， ３， ０． ／ｍＬ。 ． ９． １ ６ Ｕ
曲线法（ 又称一剂量法 ） １ ［测定其效价 ， ２ 取得 了良好效果 。
１ 仪 器 、 药 与菌 种 试
硫 酸庆大霉素标准溶液制备 ： 密称取硫酸庆大霉素标准 品， 精 用灭 菌 水 制 成 １ ０ ／ ０Ｕ ｍＬ的 溶 液 ， 密 吸取 １ Ｌ 置 １０ｍ ０ 精 ０ｍ ， ０ Ｌ量
关于药品效价的知识
医务工作者要合理使用各种抗菌素，在用抗菌素治疗各种感染时要注意以下几点：
一、要严格掌握适应症，每一个抗菌素并不是对所有的细菌都是有抗菌作用的，只有用在对该抗菌素敏感细菌所致的感染性疾病时才有效。
青霉素的主要适应症为链球菌感染（包括猩红热、丹毒、扁桃体炎、心内膜炎等）、敏感金黄色葡萄球菌感染、肺炎双球菌感染（大叶性肺炎）、气性坏疽、炭疽、梅毒、流行性脑脊髓膜炎等。
链霉素的主要适应症为结核病、鼠疫、兔热病等。
四环素的主要适应症为布氏杆菌病、立克次体病、非典型肺炎（肺炎支原体所引起的各种感染如肺炎、尿路感染、败血症等。
抗菌药物有哪些？2008-06-11 17:05
抗菌药物包括抗菌素，磺胺药和抗菌中草药。目前临床常用的抗菌素品种很多，大约可分为下列五类：
一、主要作用于革兰氏阳性细菌的抗菌素，如青霉素G及其各种制剂（普鲁卡因青霉素G、长效青霉素等）、红霉素、新生霉素、杆菌肽、万古霉素、洁霉素、氯洁霉素等。
二、主要作用于耐药性金黄色葡萄球菌的抗菌素，如苯唑青霉素、乙氧萘青霉素、邻氯青霉素、双氯青霉素、头孢菌素族抗菌素、利福平等。
三、主要作用于革兰氏阴性菌的抗菌素，如多粘菌素E（抗敌素）、创新霉素、羧苄青霉素、链霉素等。
四、广谱抗菌素，如四环素族抗菌素、氯霉素、合霉素、卡那霉素、庆大霉素等。
22、什么叫做抗菌谱？2008-06-02 15:08
细菌根据染色的不同可以分二类：革兰氏染色阳性菌和阴性菌。革兰氏染色阳性细菌（细菌染色后，菌体在显微镜下呈紫色）常见：金黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌、链球菌、肺炎双球菌、白喉杆菌、破伤风杆菌等。革兰氏染色阴性细菌（细菌染色后，菌体在显微镜下呈粉红色）常见：大肠杆菌、痢疾杆菌、变形杆菌、绿脓杆菌、伤寒杆菌等等。
《药物分析》毕业考试题库
毕业生考试习题库（适用于药学专业)
药
物
分
析
一、最佳选择题(共150题）
以下各题均有A、B、C、D四个备选答案,请从中选出一个最符合题意的答案（最佳答案).
1。关于药典的叙述最准确的是D
A。国家临床常用药品集
B。药工人员必备书
C。药学教学的主药参考书
D.国家关于药品质量标准的法典
2.《中国药典》（2010年版）分为C
A.1部
B。2部
C.3部
D。4部
3.某药厂新进3袋淀粉,取样应A
A。每件取样
B。在一袋里取样
C。按+1随机取样
D.按+1随机取样
4。《中国药典》现行版规定“精密称重“是指称取重量应准确至所取重量的B
A。百分之一
B。千分之一
C.十分之一
D。万分之一
5.《中国药典》现行版规定“恒重"是指连续两次称重之差不超过C
A。0.03mg
B。0。3g
C.0。3mg
D。0.1mg
6。药物鉴别的主要目的是B
A。判断药物的优劣
B。判断药物的真伪
C。确定有效成分的含量
D.判断未知物的组成和结构
7。下列叙述与药物鉴别特点不符的是C
A。为已知药物的确证试验
B。是个别分析而不是系统试验
C.是鉴定未知药物的组成和结构
D.制剂鉴别主要考虑附加成分和各有效成分之间的相互干扰
8。对专属鉴别试验的叙述不正确的是B
A.是证实某一种药物的试验
B.是证实某一类药物的试验
C。是在一般鉴别试验的基础上，利用各种药物化学结构的差异来鉴别药物
D.是根据某一种药物化学结构的差异及其所引起的物理化学特性的不同，选用某些特有的灵敏定性反应来鉴别药物真伪
9。下列不属于物理常数的是B
A。折光率
B。旋光度
C.比光度
D。相对密度
10。《中国药典》现行版对药物进行折光率测定时，采用的光线是B
实验三微生物检定法测定硫酸庆大霉素的效价
实验三微生物检定法测定硫酸庆大霉素的效价
一、概述
由于抗生素多为结构复杂的多组分物质，异构体多，且不稳定，容易产生降解杂质，故各国药典均以微生物检定法为主要含量测定法，因为抗生素药品的医疗作用主要是它的抗菌活力，而微生物检定法正是以抗生素的抗菌活力为指标来衡量抗生素效价的一种方法，其测定原理与临床要求相一致，能直接反映抗生素医疗价值，因此一直为各国药典所采用的主要测定方法。
微生物检定法测定抗生素效价，一般可分为稀释法、比浊法和琼脂扩散法三类。以琼脂扩散法应用最广泛，为目前国际上测定抗生素效价的通用方法。
琼脂扩散法，亦称管碟法。系采用抗生素在琼脂培养基内的扩散作用，采用量反应平行线原理的设计，比较标准品与供试品两者对接种的试验菌产生抑菌圈的大小，以测定供试品效价的一种方法。
二、基本设备、用具和试验材料
1. 基本设备
(1) 抗生素效价测定实验室：室内应为半无菌，装有紫外线灯，有固定的效价测定台，台面要求水平、防震。该室应与稀释抗生素溶液的工作室隔离，以防止空气、地面污染抗生素。
(2) 超净工作台：超净工作台应放置在洁净工作室或半无菌室内。
(3) 抑菌圈面积测量分析仪：该仪器装有微处理机，可自动测量抑菌圈面积，并打印出统计分析的各种数据。
2.用具
（1）玻璃双碟：为硬质玻璃制品，碟底内径约90mm，碟高16-17mm，碟底面应平，厚薄均匀无凹凸现象。新购的双碟应按上述要求进行检查。检查时可将双碟底平放在水平台上，每碟内加入2ml染料液，仔细观察碟底反映的颜色深浅是否一
致，挑选底部平的双碟，洗净晾干，置高温烘箱内140-160℃干热灭菌2小时后备用。
两种方法测定硫酸庆大霉素颗粒剂生物效价的比较
两种方法测定硫酸庆大霉素颗粒剂生物效价的比较
高燕霞;姜建国;李玉兰
【期刊名称】《中国药业》
【年(卷),期】2007(16)7
【摘要】目的用两种方法测定硫酸庆大霉素颗粒剂的生物效价,并对结果进行分析.方法采用管碟法,用两种培养基测定效价;采用浊度法,以一剂量法测定线性、二剂量法测定效价.结果管碟法测得的效价分别为127.2%和104.0%;浊度法测得的抗生素线性范围为0.16～0.39 μg/mL,二剂量法测得的效价为97.2%.结论采用浊度法测定效价,影响因素较少,结果较准确.
【总页数】2页(P10-11)
【作者】高燕霞;姜建国;李玉兰
【作者单位】河北省药品检验所,河北,石家庄,050011;河北省药品检验所,河北,石家庄,050011;张家口长城药业有限责任公司,河北,张家口,075000
【正文语种】中文
【中图分类】R927.11;R978.1+2
【相关文献】
1.微生物比浊法与管碟法测定硫酸庆大霉素效价的评价 [J], 霍启录;侯连兵;邵红霞
2.微生物比浊法测定硫酸庆大霉素注射液的效价 [J], 李哲媛;康勇;范兵
3.微生物浊度法测定硫酸庆大霉素颗粒的效价 [J], 汪洋;闵盛
4.微生物比浊法测定硫酸庆大霉素颗粒效价 [J], 张胜波;屈胜环
5.pH值对硫酸庆大霉素生物效价测定的影响 [J], 张芳
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9.11庆大霉素讲稿
硫酸庆大霉素及其制剂的分析
硫酸庆大霉素属氨基糖苷类抗生素，为氨基环己多元醇和氨基糖形成的苷。其结构如下：O C R 3
1RHN R 2
O
NH 2O O OH OH OH CH 3NHCH 3H 2N NH 2
绛红糖胺2-脱氧链霉胺加洛糖胺
庆大霉素
庆大霉素分子中有五个碱性中心，为碱性化合物，药物为庆大霉素的硫酸盐。庆大霉素是C 组分的复合物，主要成分为C 1、C 2、C 1a 及C 2a 等，其结构如下：
组分
R 1R 2R 3分子式C l
CH 3CH 3H C 21H 43N 5O 7C 2
CH 3H H C 20H 41N 5O 7C 1a
H H H C 19H 39N 5O 7C 2a
H H CH 3C 20H 41N 5O 7一、硫酸庆大霉素的分析
(一)鉴别
1．薄层色谱法《中国药典》采用薄层色谱法鉴别本品。取本品与庆大霉素标准品，分别加水制成每1ml 中含2.5mg 的溶液，取上述两种溶液各2μl ，分别点于同一硅胶G 薄层板上，用取三氯甲烷-甲醇-氨溶液（1:1:1)混合振摇，放置1小时，分取下层混合液为展开剂，展开，取出于20 25°C 晾干，置碘蒸气中显色，供试品溶液所显主斑点数、位置和颜色应与标准品溶液主斑点数、位置和颜色相同。
2．HPLC 法在庆大霉素C 组分测定项下记录的色谱图中，供试品溶液各主峰保留时间应与标准品溶液各主峰保留时间一致。
3．红外分光光度法《中国药典》采用红外分光光度法鉴别本品，用溴化钾压片后测定，要求供试品的红外吸收光谱与对照的图谱一致。
4．硫酸盐的鉴别反应本品的水溶液显硫酸盐的鉴别反应。
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实验三微生物检定法测定硫酸庆大霉素的效价
一、概述
由于抗生素多为结构复杂的多组分物质，异构体多，且不稳定，容易产生降解杂质，故各国药典均以微生物检定法为主要含量测定法，因为抗生素药品的医疗作用主要是它的抗菌活力，而微生物检定法正是以抗生素的抗菌活力为指标来衡量抗生素效价的一种方法，其测定原理与临床要求相一致，能直接反映抗生素医疗价值，因此一直为各国药典所采用的主要测定方法。
微生物检定法测定抗生素效价，一般可分为稀释法、比浊法和琼脂扩散法三类。以琼脂扩散法应用最广泛，为目前国际上测定抗生素效价的通用方法。
琼脂扩散法，亦称管碟法。系采用抗生素在琼脂培养基内的扩散作用，采用量反应平行线原理的设计，比较标准品与供试品两者对接种的试验菌产生抑菌圈的大小，以测定供试品效价的一种方法。
二、基本设备、用具和试验材料
1. 基本设备
(1) 抗生素效价测定实验室：室内应为半无菌，装有紫外线灯，有固定的效价测定台，台面要求水平、防震。该室应与稀释抗生素溶液的工作室隔离，以防止空气、地面污染抗生素。
(2) 超净工作台：超净工作台应放置在洁净工作室或半无菌室内。
(3) 抑菌圈面积测量分析仪：该仪器装有微处理机，可自动测量抑菌圈面积，并打印出统计分析的各种数据。
2.用具
（1）玻璃双碟：为硬质玻璃制品，碟底内径约90mm，碟高16-17mm，碟底面应平，厚薄均匀无凹凸现象。新购的双碟应按上述要求进行检查。检查时可将双碟底平放在水平台上，每碟内加入2ml染料液，仔细观察碟底反映的颜色深浅是否一
致，挑选底部平的双碟，洗净晾干，置高温烘箱内140-160℃干热灭菌2小时后备用。
(2) 陶瓦圆盖：应平，无凹凸现象。
(3) 不锈钢小管：外径7.8±0.1mm，内径6.0±0.1mm，高10.0±0.1mm，重量差异不超过±25mg，钢管内外壁要求光洁，管壁厚薄要一致，两端面要平坦光洁。
(4) 小钢管放置器：四孔，一台。
(5) 游标卡尺：精密度0.02mm。
(6) 滴管：管口应细长平滑，不得有缺口。
3. 试验材料
(1) 培养基I：取胨5g、牛肉浸出粉3g、磷酸氢二钾3g和蒸馏水1000ml，加热融化，混合，调节pH使其值比最终的pH值略高0.2-0.4，加入琼脂20g，加热溶化过后，调节pH值使灭菌后为7.8-8.0，在115℃灭菌30分钟。
(2) 营养琼脂培养基：取胨10g、氯化钠5g和肉浸液1000ml，混合，调节pH 使比最终的pH值略高0.2-0.4，加入琼脂15-20g，加热溶化过后，调节pH值使灭菌后为7.2-7.4，分装，在115℃灭菌30分钟，趁热斜放使凝固成斜面。
(3) 磷酸盐缓冲液（pH7.8）：取磷酸氢二钾5.59g与磷酸二氢钾0.41g，加蒸馏水使成1000ml，在115℃灭菌30分钟。
(4) 试验用菌种：短小芽孢杆菌(CMCC(B)63 202).
短小芽孢杆菌菌悬液的制备和保存：取短小芽孢杆菌试验用菌种斜面1支，按无菌操作要求加入灭菌水2ml，将菌苔洗下，摇匀，取出1ml接种于盛有30ml营养琼脂培养基的100ml 三角瓶中，在35-37℃培养7日，用革兰氏染色法涂片镜检，应有芽孢85%以上，用灭菌水20ml将芽孢洗下，制成悬液，在65℃水浴中加热30分钟，即得，置5℃冰箱中保存，可使用6个月。
4. 双碟的制备：取直径约90mm、高16-17mm的平底双碟，分别注入加热融化的培养基I 20ml,使在碟底内均匀摊布，放置水平台上使凝固，作为底层。另取培
养基适量加热融化后，放冷至50-60℃，加入菌悬液适量（能得清晰的抑菌圈为度）,摇匀，在每1双碟中分别加入5ml，使在底层上均匀摊布，作为菌层。放置水平台上冷却后，在每1双碟中以等距离均匀安置不锈钢小管（内径6.0±0.1mm，高
10.0±0.1mm，外径7.8±0.1mm）4个，用陶瓦圆盖覆盖备用。
三、二剂量检定法
取照上述方法制备的双碟不得少于4个，在每1双碟中对角的2个不锈钢小管中分别滴装高浓度及低浓度的标准品溶液，其余2个小管中分别滴装相应的高低两种浓度的供试品溶液；高、低浓度的剂距为2：1或4：1。在35-37℃条件下培养14-16小时后，测量各个抑菌圈的直径（或面积），照生物检定统计法中的(2.2)法进行可靠性测验及效价计算。
四、硫酸庆大霉素的效价测定：
1. 标准品溶液的配制：精密称取硫酸庆大霉素标准品适量，加乙醇溶解后，用灭菌水制成每1ml中含1000单位的溶液，作为贮备液，置5℃以下的冰箱中保存，可使用7日。将贮备液加pH7.8磷酸盐缓冲液稀释，使标准品高剂量溶液和低剂量溶液每ml中分别含硫酸庆大霉素10U和5U。
2. 供试品溶液的配制：取硫酸庆大霉素肠溶片4片，研细，用乙醇适量（硫酸庆大霉素约0.25g，用乙醇25ml），分次研磨使硫酸庆大霉素溶解，并用水稀释成每1ml中约含1000单位的溶液，摇匀，静置，精密量取上清液适量，按（1）法同法配制，使供试品高剂量溶液和低剂量溶液按标示量计算每ml中含硫酸庆大霉素分别为10U和5U。
3. 测定法：按二剂量检定法测定效价，计算出供试品中含硫酸庆大霉素相当于标示量的百分数。
附录：生物检定统计法中的（2.2）法
抗生素微生物检定法是以微生物为工具，不可避免地存在着较大的生物差异性，
因此，必须借助于生物统计方法来减少生物差异对检定结果的影响，使结果达到一定的精确度。英、美、日等国家药典附录中都详细地制定了生物检定方法的实验设计和统计分析，并根据生物统计的要求规定了各个品种的误差范围。中国药典从1985年版起增加了生物检定法的实验设计和可靠性测验及误差估计等内容，这对判断检验质量及促使检验方法的改进等方面都具有重要意义。
1.可靠性测验
抗生素微生物检定法按照观察的方法和生物反应的类型属量反应，即观察每一反应本身所表现的程度，可以用量来表示。实验设计采用供试品（T ）和已知效价的标准品（S ）对比试验的平行线原理。由于平行线测定的计算原理是在一定剂量范围内T 和S 的对数剂量与反应或反应的特定函数呈直线关系以及在T 和S 两条直线互相平行（当T 和S 的活性组分基本相同时）的基础上，因此，可靠性测验就是运用统计方法来验证实验结果是否符合量反应的平行线设计原理，是否显著偏离了直线性和平行性，以便评价实验结果的可靠性。对不是显著偏离平行偏离直线（在一定的概率水平下）的实验结果，认为可靠性成立，方可按有关公式计算供试品的效价和可信限。
(1)可靠性测验的统计方法
抗生素微生物检定法的可靠性测验采用F 测验，即实验结果的方差分析。方差分析为测验多组均数之间的差别是否显著。通过统计运算求得试品间、回归、偏离平行、剂间及碟间项的方差，并以统计得的以上各项方差和误差项方差（S 2
）的比值称F 值（各项F 值=)
S 误差项方差（各该项方差
）作为指标来观察其差别的显著性
程度。
将实验结果求得的F 值，按相应各项的自由度及误差项的自由度查F 值表来判断实验结果求得的F 值是大于还是小于F 值表上()05.021f f F ⋅和()01.021f f F ⋅的F 值。