液相色谱质谱联用分离鉴定小肽混合物
生物体内代谢产物的分离纯化及鉴定
生物体内代谢产物的分离纯化及鉴定生物体内代谢物的分离纯化及鉴定是现代生物学研究的基础工作，涉及到多种技术手段和方法，根据实验目的的不同，可以选择不同的分离纯化和鉴定方法。
1.分离纯化常用的分离纯化方法包括色谱法、电泳法、过滤法等。
其中，液相色谱法是分离和纯化生物体内代谢物的主要手段之一，包括高效液相色谱、气相色谱、离子交换色谱、凝胶过滤色谱等多种方法，介质的选择和条件的调节可以使样品之间的差异得到充分体现，从而实现样品的高效分离。
比如，糖类代谢产物可以使用高效液相色谱法进行分离纯化，利用糖柱可以将不同类型的糖类分离开来，可以加入梯度洗脱条件和紫外检测器，来实现纯化和定量分析。
电泳法则主要应用于酶的分离纯化和代谢产物的分析，如凝胶电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳等，通过分子质量和电荷差异实现代谢物的不同程度分离。
而过滤法则通常用于低分子量代谢产物的分离，如葡萄糖、氨基酸和小肽等，通过滤纸或者膜过滤可以实现速度快、效果好的分离和纯化。
2.鉴定分析鉴定是指通过化学或者物理手段，确定代谢物的化学结构和分子质量。
常用的分析方法包括核磁共振、质谱、红外光谱、紫外光谱、荧光光谱等技术。
其中核磁共振是一种常用的结构鉴定技术，可以通过核磁共振光谱来确定代谢物的分子结构，操作简单、灵敏度高、获取的信息多，是现代生物科学中得到广泛应用的技术手段之一。
质谱分析则介于化学和物理之间，它通过对代谢产物的分子质量的测定和分析，来确定代谢物的分子结构信息。
同时，质谱分析还可以与其他分析技术进行联用，如气相色谱质谱联用、液相色谱质谱联用等，这些联用技术可以进一步提高分析结果的精度和准确性。
综上所述，生物体内代谢物的分离纯化和鉴定是现代生物学和生物技术研究不可或缺的基础工作，多种技术手段可以用于此项工作，选择合适的方法需要结合具体实验目的、代谢产物特点、设备条件等综合因素考虑，通过多种技术手段的联合使用，可以对代谢物进行更加系统和全面的研究。
快速高分离液相色谱-质谱联用法测定减肥药中3种违禁成分的含量
快速高分离液相色谱-质谱联用法测定减肥药中3种违禁成分的含量夏威标;水冰洁;丁兴红【摘要】Objective]To establish a rapid resolution liquid chromatography-mass spectrometry(RRLC-MS) method for sibutramine hydrochloride, ephedrine hydrochloride and furosemide, which is the illegally added substances in diet pills. [Method]The chromatographic conditions: Agilent SB-C18 column(2.1mm×50mm, 5μm). The mobile phase consists of acetonitrile(containing 0.1% formic acid) and 0.1% formic acid solution, gradient elution with flow rate of 0.2mL·min-1; The MS conditions: electrospray ionization(ESI) source, with positive and negative ions, multiple reaction monitoring(MRM) mode to detect contents of prohibited substances in diet pills. [Result]Under the above conditions, all seven diet pills were detected with the sibutramine hydrochloride and ephedrine hydrochloride. The concentration range of the two substances was from0.39 to 4.29μg·g-1 and from 1.63 to 8984.18μg·g-1 respectively. One drug contained furosemide, while the content was 8.71μg·g-1. [Conclusion]The method established was fast, convenient, had high sensitivity and high accuracy, which can detect prohibited substances quantitatively and qualitatively in diet pills.%[目的]建立盐酸西布曲明、呋塞米和盐酸麻黄碱的快速高分离液相色谱-质谱联用（rapid resolution liquid chromatography-mass spectrometry, RRLC-MS）方法，检测7种减肥药中是否含有非法添加成分。
液相色谱质谱联用分离鉴定小肽混合物
收稿日期：!""!#$!#$"作者简介：曹书霞，女，$%&’年生，硕士，讲师，从事有机分析及化学生物学研究，()*：（"+,$）,,&,"-"，.#/01*：234!5567)867297液相色谱／质谱联用分离鉴定小肽混合物曹书霞$，廖新成$，陈晓岚$，赵玉芬$，!（$7郑州大学化学系化学生物重点实验室，河南郑州:-""-!；!7清华大学化学系生命有机磷化学与化学生物学教育部重点实验室，北京$"""’:）关键词：液相色谱／质谱法；丝组二肽；组组二肽中图分类号：;&-’文献标识码：<文章编号：$"""#’,$+（!""+）"&#"&!&#"$!实验部分仪器与试剂：德国=>6?)>.3@61>)+"""高效液相色谱#电喷雾#离子阱多级质谱仪（A B C D #.E F #G E ／G E ）；甲醇、乙腈为色谱纯，三氟乙酸（(H <）、十二烷基磺酸钠（E I E ）为分析纯。
色谱条件：色谱柱为G 12>J 3J >K;I E 柱（:L &//1L 8L M !-"//，-"/）；检测波长，!$"9/；流动相为乙腈#水（含"L "-N (H <，$//J *／CE I E ）溶液（体积比为+-O &-）；流速"L :/C ／/19。
质谱条件：.E F 离子源，正离子检测模式，喷雾电压为:"""P ，毛细管温度为+&-Q ，喷雾气（R !）压力为$,!L !-?B 0（!-S 31）；干燥气（R !）流速为,C ／/19。
高效液相色谱%质谱法识别不同明胶酶解产物中特征多肽
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图２牛明胶酶解产物巾ｍ／ｚ９２３．９（Ａ）和和猪明胶酶 解产物中ｍ／ｚ ９２９．８（Ｂ）的提取离子流图 Ｆｉｇ．２ Ｅｘｔｒａｃｔｅｄ ｉｏｎ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｍｓ ｏｆ ｍ／ｚ ９２３．９（Ａ）ｉｎ ｄｉｇｅｓｔｅｄ ｂｏｖｉｎｅ ｇｅｌａｔｉｎ ａｎｄ ｍ／ｚ ９２９．８（Ｂ）ｉｎ ｄｉｇｅｓｔｅｄ ｐｏｒｃｉｎｅ ｇｅｌａｔｉｎ １０１）或Ｉ（残基质量数１１３）。利用串联质谱分析微 量或痕最样品过程中，常使用动态排除技术通过增 ］Ｊｎ－级质谱扫描次数以获得目标离子尽町能多的碎
原蛋白以链中存在多肽１７９５ＧＰＰＧＰＳＧＩＳＧＰＰＧＰＰＧＰＡＧＫ引５，与牛以链巾的序列相比，苏氨酸被异亮氨酸
取代。猪明胶酶解产物中检测出离子ｍ／ｚ ９２９．８（图２Ｂ），精确质量数扫描（ｚｏｏｍｓｃａｎ）结果表明，
该离子带两个电荷，其二级质谱与Ｉ丹５ ＧＰ＋Ｐ‘ＧＰＳＧＩＳＧＰＰ＋ＧＰ’ＰＧＰＡＧＫ引５的多肽序列标签对应
关键词明胶，酶解，特征多肽，高效液相色谱质谱联用，多肽识别
１引言
明胶是胶原蛋白部分降解得到的分子量不均一的多肽混合物，在食品、医药和化妆品等领域应用十 分广泛。明胶溶液的凝同点、凝胶强度和等电点等性质主要受其分了量范幽、胶原赁白来源和降解方式 等囚素影Ⅱ向…。目前巾．场上常见明胶多以牛骨、猪骨或猪皮为原料制备。宗教因素和近年来疯牛病或 几蹄疫偶然发生使人们必须区别使用这ｆ｜；Ｉｉ种小同动物来源的明胶。凶此，建立明胶动物来源鉴别方法 十分必要。
根际小肽分离-概述说明以及解释
根际小肽分离-概述说明以及解释1.引言1.1 概述根际小肽是一类具有特殊生物活性的蛋白质片段，通常由20个氨基酸左右的多肽组成。
这些小肽由根际微生物在植物根际环境中产生，并在植物生长发育过程中发挥重要作用。
根际小肽具有促进植物生长、提高植物抗逆性、增强养分吸收等多种生理功能，被广泛应用于植物生产和抗逆栽培领域。
本文将介绍根际小肽的定义、特点以及在植物生长中的作用，重点探讨根际小肽的分离方法和意义。
通过对根际小肽的深入研究，我们可以更好地了解其在植物生长中的生物学功能，为今后的农业生产和生物技术研究提供重要的理论支持和实践指导。
愿本文的内容能够对读者有所启发和帮助。
1.2文章结构1.2 文章结构本文将从引言部分开始介绍根际小肽分离的背景和意义，然后详细探讨根际小肽的定义、特点以及在植物生长中的作用。
接着，将对目前常用的根际小肽分离方法进行介绍，包括其优缺点和适用范围。
最后，结合已有研究成果，探讨根际小肽分离的意义以及未来研究展望，并对整个文章进行总结。
通过本文的阐述，读者将能够全面了解根际小肽分离的重要性以及未来研究的发展趋势。
1.3 目的根际小肽在植物生长和发育中起着重要的作用，但由于其种类繁多且含量微量，难以直接检测和分离，因此本文旨在总结目前常用的根际小肽分离方法，探讨其优缺点，为后续研究提供参考。
通过深入了解根际小肽的分离技术，可以更好地揭示其在植物生长过程中的作用机制，为进一步探索植物生长调控提供有力支持。
同时，本文的目的还在于强调根际小肽分离研究的重要性，促进相关领域的发展与进步。
2.正文2.1 根际小肽的定义和特点根际小肽是指在根际环境中由植物根系释放的一类小分子肽类物质。
它们通常由20个氨基酸组成，具有较小的分子量和复杂的结构。
根际小肽在土壤中起着重要的作用，可以调节植物生长、抗逆性和与微生物的互作。
根际小肽的特点包括：1. 多样性：根际小肽的种类繁多，每种小肽具有不同的结构和生物活性。
寡肽 液相检测方法(一)
寡肽液相检测方法(一)寡肽液相检测方法介绍1. 简介寡肽（oligopeptide）是由2-20个氨基酸残基组成的短肽，具有重要的生物活性。
液相检测方法是目前常用的一种寡肽分析技术，它能够高效地分离和定量寡肽样品。
本文将介绍几种常见的液相检测方法，包括HPLC、UPLC和LC-MS等。
2. HPLC（高效液相色谱）HPLC是一种基于分子大小、极性差异和化学性质的液相分离技术，广泛应用于寡肽的检测和纯化。
以下是HPLC方法的主要特点： - 高分离度：HPLC能够通过调节流动相的性质和分离柱的特性，实现对寡肽的高效分离。
- 高灵敏度：采用紫外检测器或荧光检测器，可以获得较高的检测灵敏度。
- 高重复性：HPLC方法具有良好的重复性和稳定性，能够准确地测定寡肽的含量和纯度。
3. UPLC（超高效液相色谱）UPLC是一种与传统HPLC相比，更高性能的液相色谱技术。
以下是UPLC方法的主要特点： - 高分辨率：UPLC使用更小粒径的填充剂，能够获得更高的分辨率和分离效率。
- 快速分析：由于UPLC所需的压力较低，可以以较高的流速进行分析，提高分析速度。
- 节约样品：相比HPLC，UPLC所需的样品量更少，可以节约宝贵的样品。
4. LC-MS（液相色谱-质谱联用）LC-MS是一种基于液相色谱与质谱联用的寡肽分析方法，结合了高效分离和高灵敏度检测的优势。
以下是LC-MS方法的主要特点： - 高灵敏度：质谱检测器能够提供非常高的灵敏度，可以检测低浓度的寡肽成分。
- 结构鉴定：通过质谱的碎裂模式和质谱库的比对，可以对寡肽的结构进行准确定性分析。
- 多样性应用：LC-MS不仅适用于寡肽的分析，还可以用于蛋白质组学、代谢组学等领域。
5. 总结液相检测方法是寡肽分析中常用的技术手段，其中HPLC、UPLC和LC-MS是几种常见的方法。
它们各自具有独特的特点和优势，可以根据实际需求选择合适的方法进行寡肽的分析和检测。
HPLC拆分鉴定复杂混合物
HPLC拆分鉴定复杂混合物随着科学技术的飞速发展和人们对药物、化妆品和食品等复杂混合物的要求越来越高，HPLC（高效液相色谱）技术在分析鉴定中的应用也越来越广泛。
HPLC是一种基于分子相互作用原理的分离方法，它被广泛用于复杂混合物的拆分和定量分析。
本文将重点介绍HPLC在复杂混合物拆分鉴定中的应用。
首先，HPLC拆分复杂混合物的原理是基于样品中各成分在不同程度上与固定相（色谱柱）发生相互作用，从而实现各组分的分离。
这些相互作用可包括物理性质，如极性、疏水性和分子大小等，以及化学性质，如氢键和离子作用等。
通过调节流动相的组成和流速，可以控制相互作用的强度，从而实现目标物质的分离和纯化。
为了成功拆分和鉴定复杂混合物，首先需要进行样品预处理。
样品预处理的目的是去除干扰物质和提高目标物质的检测灵敏度。
常用的样品预处理方法包括萃取、固相萃取和液液分配等。
通过这些预处理方法，我们可以将目标物质从复杂的矩阵中分离出来，以便在HPLC分析中进行更准确的测定。
在进行HPLC分析之前，还需要选择合适的色谱柱和流动相。
色谱柱的选择主要基于目标物质的化学性质和分离需求。
常见的色谱柱有反相柱、离子交换柱、大小排除柱和亲和柱等。
流动相的选择和优化也非常重要，它决定了样品分离的效果和分析的灵敏度。
在选择流动相时，我们需要考虑样品的性质、分离机理和仪器的兼容性等因素。
在HPLC分析中，柱温和流速是两个重要的参数。
柱温的调节可以影响物质在柱上的分离速度和分离度。
在某些情况下，调节柱温可以提高分离效果或减少分析时间。
流速的选择不仅影响分析时间，还会影响分离的分辨率和峰形。
根据目标物质的性质和分离要求，我们需要进行流速优化以达到最佳的分析效果。
在HPLC分析中，检测器的选择和优化也是至关重要的。
常见的检测器有紫外可见光检测器、荧光检测器、光电二极管阵列检测器和质谱检测器等。
根据目标物质的特点，我们需要选择合适的检测器以获得最准确的测定结果。
反相高效液相色谱双梯度洗脱分离肽混合物及质谱分析
有高正交性， 与常规 的 @A89:@A89 方 法 相 比， 可以 多鉴定到 #+ H 的 磷 酸 肽。 I.)’#J.0 等［ (+ ］研 究 发 现 @A:BA89 的 $B 梯 度 洗 脱 分 离 是 一 种 新 的 分 离 极 性化合物的有效方 法， 即 在 @A:BA89 系 统 上， 通过 $B 的线 性 增 加 或 减 少， 实 现 $B 梯 度 洗 脱 分 离， 增 加混合物的分离 程 度， 减 小 峰 宽。 并 在 理 论 和 实 验 上研 究 了 $B 梯 度 和 有 机 相 梯 度 @A89 的 分 离 方 法［ (( ］， 比较了 $B 梯度 和 有 机 溶 剂 梯 度 中 含 有 多 个 $B 梯 度 的 @A89 分 离 模 式 下 一 系 列 肽 段 的 保 留 参 数， 发现影响肽段洗 脱 的 因 素 涉 及 肽 段 的 疏 水 性 和 等电点［ (! ］。本文在上述 研 究 基 础 上， 建 立 了 $B 梯 度结合有机相梯 度 的 双 梯 度 洗 脱 @A:BA89 进 行 分 离， 收集馏分并将相 等 时 间 间 隔 的 前 段 梯 度 和 后 段 梯度的 两 个 馏 分 混 合， 进行纳升级 （ 0.03 ） @A89: ;< C ;< 分析的方法， 并将该方法应用于酵母蛋白酶 切产物的分离和质 谱 鉴 定， 结果表明该策略可显著 提高蛋白质组的鉴定覆盖率。
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微柱高效液相色谱质谱质谱快速鉴定混合蛋白质新方法
微柱高效液相色谱!质谱"质谱快速鉴定混合蛋白质新方法张素艳#$王静#$卞利萍#$许云敏%$王洪海%$&$杨原#$&’#(复旦大学化学系$%(遗传研究所$&(蛋白质组学研究中心$上海%))*&&+摘要发展了一种混合蛋白质快速鉴定的新方法(将几种蛋白质的混合物于热变性后直接在溶液中酶解$利用微柱高效液相色谱,离子阱串级质谱进行肽谱"氨基酸序列分析$并结合-./012数据库搜索处理功能$实现了混合蛋白质快速准确的鉴定(关键词混合蛋白质鉴定3蛋白质组学3微柱高效液相色谱3离子阱质谱"质谱3序列分析中图分类号4567(7文献标识码8文章编号)%6#,)79)’%))%+)7,#%*5,)6收稿日期:%))#,);,%)(基金项目:国家重点基础研究专项经费’批准号:%))#<=6#)%+和上海市科学技术委员会重点项目资助(联系人简介:杨原’#9*9年出生+$男$教授$博士生导师$从事生物质谱分析研究(>,?.@A :B C C .D E F G H I .D (J I H (0D在蛋白质组学研究中$将质谱与二维凝胶电泳结合是当前蛋白质组学研究中必不可少的技术平台K #L &M(在对胶上斑点进行质谱鉴定时$常采用胶上酶解技术获得肽段混合物$再利用质谱技术进行分析(但是$从二维凝胶电泳中分离蛋白质到单个点的酶解N 提取和质谱分析是一项繁琐费时的工作(由于肽段的回收率受到限制$无疑给后续的分析造成了一定的困难(如果蛋白质混合溶液不经凝胶电泳分离$而是直接变性后在溶液内酶解$再利用-8O P Q ,R 4S K *M 或>T Q -T "-T K 6M 进行蛋白质的鉴定$无疑可以突破这些限制(最近U .2J /等K 6M采用混合酶解方法$利用二维色谱的高分离效率及串级质谱的结构解析功能$成功地鉴定了酵母蛋白质组中#*;*种蛋白质$包括大量的膜蛋白质(本工作研究了这一混合蛋白质酶解技术$利用微柱高效液相色谱,离子阱串级质谱对几种蛋白质的混合物进行了鉴定$建立了适合于常规分析的新方法(同时本工作还提出和发展了低得分匹配蛋白质的再鉴定方法$改进了数据库搜索准确率$开拓了此技术在蛋白质组学中的应用(V 实验部分V (V 仪器与试剂W X ##))二元泵高效液相色谱仪’安捷伦科技+$>/Y H @Z J &)))电喷雾离子阱质谱仪’=Z H [J Z 公司$德国+(牛血清白蛋白’=T 8+购自华美生物工程公司$牛血红蛋白’W J ?1E A 1\@D]$^链+和伴刀豆球蛋白8’<1D 0.D ._.A @D8$刀豆+均购自百特’上海+科技有限公司$肌红蛋白’-C 1E A 1\@D$马心+和胰蛋白酶’R X <‘处理+购自T @E ?.公司(乙腈和甲酸’W X O <级+购自-J Z 0[公司’德国+3碳酸氢铵为国产分析纯’上海化学分析试剂有限公司+$-@A A @a 级水’-@A A @B 1Z J公司+(V (b 混合蛋白质酶解按每种蛋白质溶液%)c O ’浓度均为#)c E "c O+量取一定量的蛋白质标准样品水溶液(混合后’共;)c O +$用等体积的碳酸氢铵溶液’)(#?1A "O $B W d;(#+稀释$摇匀$于96e 水浴中保持#)?@D 后$自然冷却至室温(以底物"酶质量比为6)"#加入胰蛋白酶$恒温&7e 过夜(将反应物于f*e 终止反应$获得混合肽段(g 1A (%&高等学校化学学报h 1(7%))%年7月<W >-Q <8Oi 4j k h 8O4S<W Q h >T >j h Q g >k T Q R Q >T#%*ll l l l l l l l l l l l l l l l l l l l l l l l l l l l l l l l l l l l l l l l l l l l l l l l l l l l l l l l l l l l l l l 5L#%6)!"#高效液相色谱$串级质谱分析将获得的肽段利用反相高效液相色谱$电喷雾质谱联用%&’()$*+,-+.进行分析"这两者的联用/01"!23456789:;<=>2?@2%A .)B C D E C F G B C H I J B I K L CM G F NO B P F J B I K L CP O I G F Q %R .J B K O I E SM G F NL G J T B $J B I K L C U C BP O I G F"方式如图V 所示U 有A 和R 两种模式"模式%A .是常规柱&’()$*+,-+联用的装置示意图"由于其色谱流速在V L (W L G C 左右U 不适合直接进入质谱U 必须柱后分流以降低流速U 但这样会浪费样品"而改用微柱后U 不但可以降低样品消耗量U 还可以避免柱后分流X 如图V 中模式%R .所示Y "由于本实验中离子阱质谱仪的喷雾方向与采样毛细管成直角U 更加有利于避免体系的污染U 从而使得与微柱的联用更加方便高效"尽管微柱的流速与电喷雾质谱相适应U 但在本实验中U 考虑到分流后可在较低喷雾雾化气和干燥气流量下达到很好的喷雾U 仍采用了图V %A .所示的联用方式U 分流比约为Z [V U 最终进入质谱的流速为\](W L G C"分离部分利用V L L 微柱%’N E C B L E C E ^)V \UV "_L L ‘V Z _"_L L Ua _C L UZ ]L .UZ _](W L G C 流速U 梯度洗脱"流动相为A X 水W _"V b 甲酸%体积分数.Y 和R X 乙腈W _"V b 甲酸%体积分数.Y "利用V __bA 平衡后U 采用如下梯度程序c_dZ _L G C U R 相由_上升至e _bQZ _de Z L G C U R 上升至f Z bQe Z d g Z L G C U 保持f Z b R "自动进样器进样h "Z ]("质谱校正液为厂商提供的i K C G C j-G ^F K T E U 自动串级质谱分析%A K F B $-+W -+."设定母离子所满足的强度阀值和可选择的个数U 当扫描过程中某个质荷比的离子信号强度满足这一要求U 仪器自动选定此离子为母离子U 软件控制仪器转为串级模式U 进行母离子的分离k 断裂及断裂离子的分析"在本实验中U 母离子强度阀值设为V ‘V _e%)B K C F P .U 分离宽度%,P B I H F G B CM G S F N .为l %m W n .U 断裂的能量幅值%A L O I G F K S E.为_"g o "p 结果与讨论p "!肽谱分析图h 是按照上述实验条件获得的色$质联用质量肽谱图"由图h 可以看到U 每个谱峰都可能对应着/01"p :3640q 3r s t r r s t 6u v9:;<=>2?@2w O $G C P E F %A .H C S %R .c F H C S E L -+P O E J F T H B x O E O F G S E P G C S G J H F E Sy zH T T B M P "一个肽段的质量信息"同时由于利用了串级功能U 还可以获得每一肽段的断裂谱图U 从而提供肽段的部分序列信息U 图h %A .和%R.是分别对应于箭头所指的两个肽段的串级断裂谱图"大量肽段的串级质谱图的获得U 使得利用肽谱图进行混合蛋白质的鉴定更加准确可靠"这一点可以在数据库搜索结果中有所反映"将实验获得的所有肽段的信息%质量及断裂离子.同时送入数据库%{)R ,C T .U 使用-H P J B F %N F F O c W W M M M "L H F T G ^P J G E C J E "J B L "U -H F T G ^+J G E C J E (F S"U w |.中的串级质谱数据搜索功能%-+W -+,B C P +E H T J N U -,+.进行搜索"选择胰蛋白酶%i T z O P G C .为裂解酶U 允许未切位点%-G P P E SJ I E H D H j E P .的最大数为V U 肽段和断裂离子的质量容差%-H P P F B I E T H C J E.为V U 返回前a _个匹配结果"搜索结果及各自得分情况如表V 所示"由搜索结果可知U 混合物中的几种蛋白质都得到了准确鉴定"得分最高的两个%+E T K L H I y K L G CO T E J K T P B T 及&E L B j I B y G C}$J N H G C.分别有V _个和f 个肽段的串级质谱图得到了匹配U 在目标蛋白质的鉴定中起决定作用"gl h V {B"g 张素艳等c 微柱高效液相色谱$质谱W ~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~质谱快速鉴定混合蛋白质新方法!"#$%&’"()*+(%",)-,%(.$+#/’01’02*3((%",)-2345678696:;8<=6<>?@<;A >:@B CD;<:=C E F C F <6E C >G D51D5H 76I J K L J M N O 5C B P Q ;A R P Q 68F B C :P B >@B S S N J N 76I J S S L O N T C Q @7A @R 68U V :=;68J M J M 76I S L L W X W M DY @7A @R 68G =@B >C =C ;B <H Q P <;8<Z 6<=[C P J N W B C F A ;:C ER Y\>8G [J N W 8H J L ]]76I J M W S O L N DY @7A @R 68G =@B >C =C ;B <H Q P <;8<Z 6<=5C B M S B C F A ;:C ER Y\>F G 5M S EH J L X O 76I M M M ]O N DY @7A @R 68Q P <;8<Z 6<=T 6>M K B C F A ;:C ER Y?Y B G T M K Y H DY @7A @R 68^_;A 6E ;<C E ‘V T @B >C J L X O T C Q @7A @R 68;A F =;:=;68a^b @><;P B P >‘O O W 76I S K N ]S X c @8:;8;_;A 68\L WKd e d 酶解过程对于鉴定结果的影响酶解反应对于鉴定结果的影响不容忽视e 尽管利用肽序列标签和D51D5批量处理搜索进行蛋白质鉴定是一种强有力的方法f 但由于蛋白质经常存在诸如氨基酸取代g 甲基化及糖基化等翻译后修饰f 若要完全准确地鉴定出目标蛋白质f 必须获得尽可能完全的酶解f 这样才可获得较高的序列覆盖率G 5C h P C 8:C :@_C B ;7C H f 从而得出更为准确的结果e 为了获得理想的完全酶解的产物f 往往对蛋白质要进行变性f 使肽链完全伸展f 从而使酶的作用位点完全暴露在溶液中f 加速酶解e 常用的变性方法有化学变性G 借助于化学物质如脲素g 盐酸胍和i ??等H和热变性G 高温变性H e 相比较而言f 热变性中不会引入化学物质的污染f 同时简单快速f 并不影响利用串级数据进行蛋白质的鉴定^X ‘e 同时为了防止胰蛋白酶的非专一性裂解及降低自身降解f 胰蛋白酶采用j c k 处理并且最好采用测序级e 本实验结果表明f 酶解令人满意ed e l ’01’0谱图分析图K 是利用上述条件得出的b 5\中一个肽段的串级质谱图G 理论分子量为JJ X S e X S f 氨基酸序列为[m n o [?o p \k H e 根据搜索结果f 标出了肽段的各种断裂离子e 由图K 可推测出肽段的氨基酸序列的吻合程度e 在进行串级质谱分析时f 可选择多个母离子f 使得共流出的微量肽段也获得串级信息e尽管微柱色谱具有很好的分辨力f 但由于肽的数量很多f 不可避免地有共流出组分e 一方面可改进分离效率f 减少共流出组分f 如采用二维分离方法^L ‘q 另一方面f 质谱串级功能可以实现母离子的进一步分离e 只要设定每次全扫描时可选择的母离子数rJ f 同时满足一定的强度阀值f 共流出组分中强度较低的肽段仍然可以被选为母离子f 进行分离g 断裂及子离子的分析es 24e l ’01’0(t %)+,.u *v w 0xt %t +2y %d e z 混合蛋白的批量处理检索质谱解谱软件的发展f 可以从原始数据中同时获得大批量的肽段质量和序列信息e 结合强大的生]W S J 高等学校化学学报m @A{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{e S K物信息学信息!可以实现蛋白质的批处理检索"作牛血清白蛋白#$%&’的肽谱#原始数据未列出’!将实验获得的((个肽段的串级谱图数据送入)*$+,-数据库#.//0122333",456",78",6."9:;’!再利用<=>4:/的串级质谱数据搜索功能进行搜索!得到唯一的匹配为%?@A <&B $A <+)C @?*A @%D @E $D %F &A @A %#$D G +)?’#H I JKL(M N ’!总得分O L P !有O P 个肽段的串级谱图得到了匹配"具体匹配情况如表(所示"从表(中可以看出!批量处理搜索的优势得以体现"在输入的((个Q R S -T #代表单个肽的断裂数据’中!只有OO K U "V O !OU P V "W V 和OK M P "P O 的匹配可信度较高#得分分别为V P !U V 和U N ’!且排名最高X OP O M "V U 和O M U L "V P 虽然排名很高!但得分很低#分别为L 和V ’X 其余的V 个匹配上的肽段不仅得分低!排名也不是第O 位的"将这((个串级信息分别输入<=>4:/搜索来验证!只能凭O O K U "V O !O U P V "W V 和O K M P "P O 这U 个肽段得到比较可信的匹配$%&的结果"其余的肽段有O (个根本匹配不上$%&X 其余W 个可以匹配上$%&!但不论$%&排名第几位!得分都太低!根本不可信"但批量处理搜索结果考虑的是总得分!只要总得分高即是可信的!得到匹配的肽段都会对总得分做出贡献!并在结果中显示出来"Y Z [\]^Y Z _‘]a bcd ]e f \g e e ]Z d h i ]‘j _bZ e h k gQ R S -T D 5>S -;S l H -#S m 0/"’H -#4=74"’n S 7/=<6>>%4:-S @=,o C S 0/6l S O K N L "V M K N N "V U K N N "U W P "O K P O K L &I%G &@(W N L "W L W N N "W N W N N "M K P "U (P N V B G F n B F p M L (W "V M L (K "V U L (K "M L P "P V P O W (q B q ?+&@K L W M "V M L W U "V U L W U "M V P "P N P N (n B r ??s t p W OP P ("V U OP P O "V U OP P O "V N uP "P V P U (B G G %F Q F &B &L OP O M "V U OP O U "V (OP O U "K O uP "P L P L O Q F &B G ?B B p O P OO K U "V O OO K ("V O OO K ("K (uP "O (P V P O B G )?B F ?t &p O O OU P V "W V OU P M "W V OU P M "W O P "P M P U V O s B G n ?C Q )B +p O U OM U L "V P OM U N "V P OM U N "N P uP "U O O V O @s C ?q &G %G B B @O NOK M P "P OOK U L "P OOK U N "L OP "P WOU NOp G C Q G %F C F B G ?G %@^"v 低搜索得分蛋白质的再确认由搜索结果可知!伴刀豆蛋白质#*:,4=,=;=76,&’的概率得分仅为V M !故可信度在所有V 个被鉴定的蛋白质中最低"为了进一步提高低得分蛋白质的鉴定准确度!我们提出了一种w 再确认x 的鉴定技术"再确认技术的第一步是利用<=>4:/搜索的结果!得到一张相关肽段的部分序列标记的质谱2质谱图#图M ’"根据<=>4:/搜索的结果!可以对图M 中伴刀豆蛋白&的OM O K "O P肽段的质谱碎片峰进行序y j z "{bc 2bce |]h g d f a k }|]|g j ‘]}d k a ~k _h Z _Z !Z \j _"LM (O ):"W 张素艳等1微柱高效液相色谱E 质谱2################################################################质谱快速鉴定混合蛋白质新方法列标记!得到带质量标记的序列"#$%&$’($)*+,-"../01,2344"56107,0研究表明8/9!质量标记序列的准确性要远高于其它技术"如人工测序,0利用肽质量序列标签搜索":;;<=>>???0’*@@*A B @0$C D EF G $H A $E D $@+0A $,!将此质量标记在2I J K 数据库"C H @@B @L H ;$=M ;<=>>M ;<0$D H 0*(0&N ><&D >A *;*D *L $L>O $<;H A $#$*@(:!P *C D @H A +$!Q R ,中进行搜索!得到结果如表S 所示0T U V W X Y Z X [\W ][^_‘a [X b \X c d X ]U e[X U _d fgO $<;H A $#$%&$’($C *;(:$A 1h i Sj*L LJ *;*D *L $*(($L L H B ’O @B ;$H ’’*C $k l )m G 4432#k J R S 106n #?H L L ’$?-Oh n 7o o P p 2m q P m 2r 2P p 2P m 2m k m s 42m O I r P Q k l )m G 4432#k J R n 606/<A D -1P 211P 21F m P p 2P m 2m k m s 42m "J r jr )m s ,k l )m G 4432#k J R n 606/<A D -n P 2m n P 2m P p 2P m 2m k m s 42mk l )m G 4432#k J Rn 60o h<A D -1m O 21m O 2F m jp s q 4J =1t jp s r P Q s r =P p g #$*@(:<*@*C $;$@L =L $%&$’($;*+"../05,2344"56107,t O @B ;$H ’C *L L@*’+$1hh h h uo hh h h t (E $*v *+$*+$’;)@w <L H ’t <$<;H A $C *L L *((&@*(w h 07t <$<;H A $C *L L 1.1o 01h t C *;(:@$+H B ’L 1!n *’A S t L $*@(:D w3F ;w <$L $%&$’($H B ’L t *E E B ?$A’&C D $@B M $@@B @L ht ’B C H ’*E C *L L H L B E $&(H ’$$%&*E L E $&(H ’$t ’B C H ’*E C *L L +E &;*C H ’$$%&*E L E w L H ’$t 2;$@C H ’*E L <$(H M H (0由表S 可知!伴刀豆蛋白质m "P B ’(*’*v *E H ’m ,是唯一的匹配结果0研究表明!仅需要一个质量标记序列便可唯一地确认蛋白质的归属8/90由此!原低得分的蛋白质被x 再确认技术y 准确地鉴定0所以!以质量标记序列再确认的技术可以弥补肽谱匹配时得分较低的不足0将混合蛋白质不经过分离而直接酶解!利用G O s P F r #4j#>j#联用进行分析!是一种更为有效z 快速z 简捷的蛋白质鉴定方法0由于可以将蛋白质翻译后再进行修饰!如甲基化z 糖基化及磷酸化等进行准确分析!使蛋白质鉴定的可靠度更高0总之!这一技术在蛋白质组学的高通量研究中有着重要的应用前景0参考文献819G *’*L :#0j 00r E $(;@B <:B @$L H L 8{9!n h h h !|}=1n h n u1n h 58n 9O *’A $wm 0!j*’’j 002*;&@$8{9!n h h h !~!"=7S /u7.o 8S 9#*L :D &C j 0O 0!3*;$L {0I 00P &@@0p <H ’0jH (@B D H B E 08{9!n h h h !Y =n 5n un 5/8.9O *@N $$$F 3B ’+!I &L L $E E J 0G 00m ’*E 0P :$C 08{9!n h h 1!%Y "11,=n667un6o .869#*L :D &C j 0O 0!#B E ;$@L J 0m 0!3*;$L {0I 002*;&@$K H B ;$(:’B E B +w 8{9!n h h 1!}&=n .n un ./8o 9O *@N $$$F 3B ’+!I &L L $E E J 0G 00m ’*E 0P :$C 08{9!n h h h !%|"11,=no o /uno /h 8/9G &*’+O 0’0!#*E E J 0K 0!O *@&L #0()*+00{0m C 0#B (0j*L L 0#<$(08{9!n h h h !}}"n ,=1n /u1S 6,-X .T X d f c /b \X ]‘01X c ]/^20c 1/3/1\U W 4_‘]X /c /c 5‘a 6W X 7V 28/d _‘d ‘W \a c 9:4;59<=08=>8=$G m 2l #&F 3*’1!#m 2l {H ’+1!K 4m 2s H F O H ’+1!>Q 3&’F jH ’n!#m 2l G B ’+F G *H n !S!3m 2l O $’+F 3&*’1!Sg"10(@*A )B (C )D EF G (B H I )A J !n 0K C I )H )L )(D EM (C ()H N I !S 0F (C )(A D EO A D )(D B H N I!P L Q *CR C H S (A I H )J !T G *C U G *H n h h .S S !F G H C *,,V []_U d ]4’;:H L ?B @N;:$H A $’;H M H (*;H B ’C $;:B A M B @<@B ;$H ’C H V ;&@$H L @$<B @;$A !H ’?:H (:L $v $@*E <@B F;$H ’L?$@$v *@H M H $AD wG O s P F r #4j#>j#*M ;$@;:$?:B E $(B C <E $V <@B ;$H ’L?$@$A H @$(;E wA H +$L ;$AH ’L B E &;H B ’!H ’L ;$*A B M;:$@B &;H ’$n F A H C $’L H B ’*E+$E$E $(;@B <:B @$L H L 0):$B D ;*H ’$A A *;*?*L;:$’L $*@(:$A*+*H ’L ;2P K 4’@A *;*D *L $D w&L H ’+j#>j#4B ’L #$*@(:":;;<=>>???0C *;@H V L (H $’($0(B C ,!*’A*<B L H ;H v $@$L &E ;?*L ;:$@$M B @$B D ;*H ’$A 0#H ;:;:$L H C &E *;$AL $%&$’($L <$(;@*H ’A *;*D *L $L $*@(:FH ’+!*@$F H A $’;H M H (*;H B ’C $;:B A?*LA $v $E B <$AM B @E B ?F L (B @$C *;(:$A<@B ;$H ’D wL $%&$’($F ;*+;$(:F’H %&$0m L *;w <H (*E $V *C <E $!P B ’(*’*v *E H ’m !*E $L L F L B E &D E $<@B ;$H ’?H ;:*E B ?C *;(:H ’+L (B @$!?*L *E L BL &(($L L M &E E wH A $’;H M H $A !?:H (:H ’A H (*;$A;:$+@$*;<B ;$’;H *E B M(B C <E $V A H +$L ;H B ’H ’<@B ;$B C H (L ;&A w0W X 2.‘_1[4A $’;H M H (*;H B ’B M (B C <E $V <@B ;$H ’t O @B ;$B C H (L t jH (@B F G O s P t 4B ’F )@*<;*’A $C C *L L L <$(F;@B C $;@w t #$%&$’($*’*E w L H L"r A0=m !l ,h6n 1高等学校化学学报k B EXX X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X 0n S微柱高效液相色谱-质谱/质谱快速鉴定混合蛋白质新方法作者：张素艳， 王静， 卞利萍， 许云敏， 王洪海， 杨芃原作者单位：张素艳,王静,卞利萍(复旦大学化学系,上海,200433)， 许云敏(复旦大学遗传研究所,上海,2004333)， 王洪海(复旦大学遗传研究所,上海,2004333,复旦大学蛋白质组学研究中心,上海,200433)， 杨芃原(复旦大学化学系,上海,200433；复旦大学蛋白质组学研究中心,上海,200433)刊名：高等学校化学学报英文刊名：CHEMICAL JOURNAL OF CHINESE UNIVERSITIES年，卷(期)：2002，23(7)被引用次数：14次1.Hanash S M查看详情 20002.Pandey A.Mann M查看详情 20003.Washbum M P.Yates J R查看详情 20004.Park Zee-Yong.Russell D H查看详情 2001(11)5.Washbum M P.Wolters D A.Yates JR查看详情 20016.Park Zee-Yong.Russell D H查看详情 2000(11)7.Huang P Q.Wall D B.Parus S查看详情 2000(02)1.会议论文唐育虹.李通化.李伟光.陈开.姚微佳投影图旋转分析法用于蛋白质LC-MS谱图分析2005针对蛋白质色谱-质谱测定实验中，由于酶解反应得到的肽段数量太多，不可避免地有共流出组分，从而蛋白质或多肽混合物不能被有效地分离，同时测得的肽段的氨基酸序列的吻合程度不高、甚至有些含量低的肽片断无法搜寻鉴定出来等现象。
分离小肽的高效液相柱子
分离小肽的高效液相柱子
分离小肽的高效液相柱子通常使用反相高效液相色谱（RP-HPLC）或亲水作用色谱（HILIC）等方法。
反相高效液相色谱（RP-HPLC）是一种常用的分离小肽的方法。
在这种方法中，小肽被固定在非极性固定相上，并利用不同溶剂的洗脱能力将其分离。
通过调整洗脱液的组成和流动相的比例，可以改变小肽的保留时间和洗脱顺序，从而实现分离。
亲水作用色谱（HILIC）也是一种常用的分离小肽的方法。
在这种方法中，小肽被固定在极性固定相上，并利用溶剂和固定相之间的相互作用将其分离。
与RP-HPLC不同的是，HILIC主要利用亲水性相互作用来分离小肽，因此对于一些疏水性较弱的小肽分离效果可能更好。
对于不同的分离需求，可以选择不同的高效液相柱子。
例如，对于一些较大和较为疏水的小肽，可以选择使用较粗的粒径填料的柱子，以提高分离效果和降低柱压。
对于一些较小和较为亲水的小肽，可以选择使用较细粒径填料的柱子，以提高分辨率和分离效果。
以上内容仅供参考，可以查阅专门的研究资料或者文献，了解具体的色谱条件和最佳分离方案，也可咨询相关的色谱专家获取准确和专业的判断和建议。
超高效液相色谱-串联质谱在中西医药品检测与分析中的应用
2020年12月邓博等.超高效液相色谱-串联质谱在中西医药品检测与分析中的应用49超高效液相色谱-串联质谱在中西医药品检测与分析中的应用邓博，邓护军，杨飞，门靖西安万隆制药股份有限公司，西安710119摘要超高效液相色谱-串联质谱（UPLC-M S/MS)是一种高效、迅速、稳定性和精密度高的综合性分析技术,其应用前景十分广阔。
本文着重介绍了近年来UPLC- MS/MS在人体化学药品、动物体内化学药品、以及中医药分析与检测三方面的最新应用研究，并展望了其发展前景，以期为医药产品检测与分析、临床药物应用提供参考。
关键词液相色谱串联质谱中西医检测分析应用超高效液相色谱-串联质谱（UPL C - M S/ M S)检测分析技术具有高效分离度和超高灵敏度 的优势，可显著提高数据分析与检测的可靠性与 耐用性，增强目标化合物的分析效率与准确度，是 分析检测领域内的一种综合性的分析手段[3_4]。
近年来,UPLC - M S/M S分析技术在医药[5-6]、化 工[7]、生物工程[84、保健食品[1°]、特种材料"1]等众多领域应用广泛，尤其是化工与医药产品的 检测与残留分析凭借U P L C- M S/M S获得了大幅 度的提升与改进。
本文将重点综述U P L C- M S/M S在中西医药 品检测与分析中的应用研究现状，从人体化学药 品、动物体内化学药品、以及中医药分析与检测三 方面归纳U P L C -M S/M S最新应用研究进展。
1 UPLC-M S/M S应用于人体化学药品的检测1.1 UPLC- M S/M S检测抗菌药物泊沙康唑是一种三唑类广谱抗真菌药物，具 有高效、广谱、低毒等特点[U]。
检测该药物在人 体血浆中的浓度对监测药物吸收、指导临床用药 安全尤为重要[1243]。
金鸿宾等[14]建立了一种特 异性强、灵敏度高的U P L C - M S/M S法测定血浆 中泊沙康唑浓度方法。
(整理)小肽检测方法.
肽含量检测方法—三氯乙酸沉淀法（TCA-NSI）（可溶解小分子含氮物质定量测定）一．二．关于富力肽中小肽含量的确定：1．1 检测方法：三氯乙酸氮溶指数（TCA—NSI）1．2 原理：三氯乙酸是一种蛋白质沉淀剂，它可以沉定蛋白质和较长的肽段。
随着酶解反应的进行，蛋白质的肽链逐渐被切成大小不等的片段，三氯乙酸氮溶指数提高。
因此，三氯乙酸氮溶指数可以准确地反应蛋白质的酶解情况，溶解指数越高，表明小肽的含量越高。
1．3 方法：见标准。
1．4 富力肽中小肽含量的确定：采用上述方法进行检测，可以确定富力肽中的小肽含量。
在富力肽的全部蛋白类物质中小肽的含量为≥65%。
在富力肽的水溶性蛋白类物质中小肽的含量为≥98%。
三．关于富力肽中小肽分子量谱的确定：2．1 检测方法：基质辅助激光解吸附飞行时间质谱（MALDI—TOF—Mass Spectroscopy）2．2 原理：质谱是肽和蛋白质分析的重要工具，这主要归功于一些软电离技术的应用，其中最具代表性的即基质辅助激光解吸附电离（MALDI）。
该项技术由于方便、灵敏度高，已成为蛋白质酶解产物中肽段质量谱分析（Peptide Mass Fingerprinting）的最有效的工具。
MALDI—TOF—MS采用有紫外吸收的小分子晶体为基质，将待测物与基质结合。
然后用一定波长的激光照射，聚集的能量加热晶体，使基质晶体升华而将非挥发性的待测物释放到气相中。
MALDI主要生成待测物的单电荷离子，送入TOF（Time of Flight）分析仪，测得离子从起始谱到探测端的飞行时间，根据飞行时间的长短确定分子量的大小，从而得到一张完整的蛋白质酶解产物的肽段分子量图谱。
2．3 富力肽中小肽分子量的确定：MALDI—TOF—MS的检测结果表明，在富力肽的水溶性蛋白类物质中，富含2~6个氨基酸的小肽。
肽段的分子量区间为：分子量（Dalton）摩尔百分含量0~160 3%161~650 87% 651~1000 8% > 1000 2%。
超高效液相-高分辨质谱联用法检测人尿中48种小肽兴奋剂
超高效液相-高分辨质谱联用法检测人尿中48种小肽兴奋剂超高效液相-高分辨质谱联用法检测人尿中48种小肽兴奋剂随着体育竞技的发展，兴奋剂的滥用问题日益突出，给体育界带来了严重的影响。
其中，小肽兴奋剂是一类常见的兴奋剂，具有短效、快速、隐蔽等特点，很难被常规检测方法检测出来。
因此，研究人员不断探索新的方法来提高兴奋剂检测的灵敏度和准确性。
在这方面，超高效液相-高分辨质谱联用法（UPLC-HRMS）成为了一种有效的手段，可以对尿液中的小肽兴奋剂进行快速、灵敏的检测。
UPLC-HRMS是一种结合了超高效液相色谱和高分辨质谱技术的检测方法。
超高效液相色谱（UPLC）具有色谱分离效果好、分离速度快、峰形对称等优点，能够对复杂的尿液样品进行高效分离；高分辨质谱（HRMS）则能够提供高分辨率和高质量的质谱数据，准确确定目标化合物的分子结构和质谱特征。
在进行小肽兴奋剂的检测时，首先需要将尿液样品进行前处理。
常见的前处理方法包括固相萃取（SPE）、液液萃取（LLE）等，这些方法能够有效地从尿液中富集目标化合物，并去除干扰物质。
然后，采用UPLC-HRMS对前处理后的样品进行分析。
根据小肽兴奋剂的特征峰进行定性和定量分析。
同时，借助高分辨质谱的高分辨率和高质量的质谱数据，可以准确确定目标化合物的分子结构和质谱特征。
针对小肽兴奋剂的检测问题，研究人员已经开展了大量的研究工作，并取得了丰富的研究成果。
例如，先前的研究已经使用UPLC-HRMS成功地检测出多种小肽兴奋剂，如EPO、GHRP-2、GHRP-6等。
针对不同的小肽兴奋剂，研究人员将其分离条件进行了优化，并确定了相应的质谱特征峰，从而实现了对小肽兴奋剂的高效检测。
然而，由于小肽兴奋剂种类繁多，每种兴奋剂的分子结构和质谱特征都存在差异，因此仍然面临一定的困难和挑战。
为了更好地应对这些挑战，研究人员需要进一步完善和优化UPLC-HRMS分析方法。
例如，针对多种小肽兴奋剂的同时检测，需要对色谱分离条件、质谱参数等进行合理调整和优化，以提高检测的灵敏度和准确性。
lc-ms的原理
lc-ms的原理
LC-MS（液相色谱-质谱联用）是一种结合了液相色谱和质谱技术的分析方法。
它的原理是将样品溶解在液相中，经过色谱柱分离，并通过质谱仪进行检测和识别。
液相色谱（LC）是一种基于分子在液相中的分配和亲和性质的分离技术。
样品溶解在移动相中，并通过固定相（色谱柱）分离成不同的组分。
这些组分通过不同的相互作用（如极性、分配系数等）在色谱柱中以不同的速率通过。
质谱（MS）则是一种基于分析样品中化合物的质荷比（mass-to-charge ratio，m/z）的技术。
在质谱仪中，样品分子通过电离过程转化为离子，然后通过加速电场、磁场和其他分子分离方法，根据其质量分离并检测。
在LC-MS联用中，液相色谱系统将分离的样品进样到质谱系统中。
质谱仪将进样的分离组分一个接一个地离子化，并对其进行分析和检测。
根据质荷比分离出的离子特征谱帮助识别化合物的组成和结构。
LC-MS联用的原理利用了液相色谱和质谱的互补性，可以很好地分析复杂的样品混合物中的化合物，并提供结构和组成信息。
它广泛应用于食品、环境、制药和生物医学等领域的化学分析和生物分析。
166液相色谱-质谱联用系统用于小分子化合物分析时的几点心得体会
发布日期20061129栏目化药药物评价>>化药质量控制标题液相色谱-质谱联用系统用于小分子化合物分析时的几点体会作者李志万部门正文内容审评十室李志万液质联用仪因其对大部分化合物的高灵敏度得到越来越广泛的应用，适合于体内药物、体内有毒物质、药物的杂质等物质的定性和定量分析等领域。
与传统的色谱分离检测器（紫外、荧光、视差、蒸发光散射、电化学等）检测的分析手段比较，质谱属于液相色谱的广适性检测器，具有明显的优势，该方法适用范围更广，灵敏度和高通量的特点，能够满足多个领域的定性和定量要求。
液质联用仪用于小分子化合物定性已有多年历史，普通高效液相系统只能对已知化合物（有标准品的化合物）通过峰位来定性，对于未知化合物却无能为力。
而高效液相色谱—质谱联用仪可以对化合物作多级质谱，通过多级质谱的分析来推测化合物的结构，从而对已知和未知化合物均可以较准确的定性。
液质联用仪还可用于小分子化合物定量，且与用普通高效液相系统对化合物进行定量相比，其不需要定量的化合物必须与样品中的其它有类似性质的成分完全分离，而高效液相色谱—质谱联用仪对化合物间的分离度没有要求，不但对保留时间不一致的物质能区分开，即使保留时间完全一致也同样互不干扰，只要过滤出想测的物质即可；且该方法可在数分钟内对几十个化合物同时定量，简便、快捷、灵敏、可靠。
质谱仪的定量原理是在电压和气流的作用下把待测物加氢离子（正离子方式）或减氢离子（负离子方式）后带电荷，仪器检测到的是一定质核比（m/z）的物质，即选择离子监测（SIM），其他质量数的物质能被滤掉，其他原理及要求同一般色谱要求。
目前多使用的一般仪器是单位质量分辨，可将分子量相差1的物质完全可以区分，专属性高，用单四级杆质谱仪就可以定量；有时为了进一步保证检测的准确性，把待测物加能量打碎，产生碎片离子（子离子），对母离子和子离子同时进行检测，采用三重四级杆质谱仪，也就是用选择反应监测（SRM）定量，母离子和子离子均完全一样的物质非常少见，因此定量的准确性更好，检测限更低。
氨基酸、多肽及蛋白质类药物分析方法 (2)
氨基酸、多肽及蛋白质类药物分析方法
氨基酸、多肽和蛋白质类药物的分析方法通常涵盖以下几
个方面：
1. 色谱分析方法：氨基酸、多肽和蛋白质类药物的分析常
常使用色谱技术，如高效液相色谱（HPLC）和气相色谱（GC）。
对于氨基酸和小肽的分析，常采用反相或离子交
换柱进行分离，并使用紫外或荧光检测器进行检测。
对于
大肽和蛋白质的分析，常采用尺寸排阻色谱（SEC）或离子交换色谱（IEC）进行分离，同时结合质谱进行定性与定量分析。
2. 质谱分析方法：质谱是氨基酸、多肽和蛋白质类药物研
究中常用的分析技术之一。
常用的质谱技术包括质谱成像（MSI）、质谱测定（MS）、质谱显微镜（MSM）等。
3. 免疫分析方法：免疫分析方法常用于蛋白质的定量分析，如酶联免疫吸附试验（ELISA）、免疫层析等。
免疫分析方
法依赖于特异性抗体与目标蛋白结合形成复合物，通过测定复合物的信号强度或荧光强度来定量。
4. 生化分析方法：利用酶促反应对氨基酸、多肽和蛋白质进行定量分析的方法，如酶标记法、比色法、发光法等。
5. 其他分析方法：还有一些特殊的分析方法，如核磁共振（NMR）、电泳等，也可以用于氨基酸、多肽和蛋白质类药物的分析研究。
需要根据具体的药物、样品和分析目的选择合适的分析方法，并结合这些方法的优势和特点进行分析。
高效液相色谱-电喷雾质谱法分离和鉴别枯草芽孢杆菌产生的脂肽类化合物
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收稿日期：!""!#$!#$"
作者简介：曹书霞，女，$%&’年生，硕士，讲师，从事有机分析及化学生物学研究，()*：（"+,$）,,&,"-"，.#/01*：234!5567)867297
液相色谱／质谱联用分离鉴定小肽混合物
曹书霞$，廖新成$，陈晓岚$，赵玉芬$，
!（$7郑州大学化学系化学生物重点实验室，河南郑州:-""-!
；!7清华大学化学系生命有机磷化学与化学生物学教育部重点实验室，北京$"""’:
）关键词：液相色谱／质谱法；丝组二肽；组组二肽中图分类号：;&-’
文献标识码：<
文章编号：$"""#’,$+（!""+）"&#"&!&#"$
!实验部分
仪器与试剂：德国=>6?)>.3@61>)+"""高效液相色谱#电喷雾#离子阱多级质谱仪（A B C D #.E F #G E ／G E ）；甲醇、乙腈为色谱纯，三氟乙酸（(H <）、十二烷基磺酸钠（E I E ）为分析纯。
色谱条件：色谱柱为G 12>J 3J >K;I E 柱（:L &//1L 8L M !-"
//，-"/）；检测波长，!$"9/；流动相为乙腈#水（含"L "-N (H <，$//J *／CE I E ）溶液（体积比为+-O &-）；流速"L :
/C ／/19。
质谱条件：.E F 离子源，
正离子检测模式，喷雾电压为:"""P ，毛细管温度为+&-Q ，喷雾气（R !）
压力为$,!L !-?B 0（!-S 31）；干燥气（R !）
流速为,C ／/19。
"结果与讨论
"#!小肽的合成采用文献［$，!］的方法，首先合成得到丝氨酸的五配位磷化合物，然后滴加三甲基硅基保护的组氨酸，最后水解得到丝组二肽。
对反应混合物经过萃取、旋蒸等处理直接用于A B C D #.E F #G E ／G E 测定，
其全质谱扫描图见图$。
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色谱
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