基于高通量培养的胶球藻C-169生物量和油脂积累能力的快速评价
微藻能源规模化制备的科学基础
项目名称：微藻能源规模化制备的科学基础首席科学家：李元广华东理工大学起止年限：2011.1至2015.8依托部门：上海市科委二、预期目标1. 总体目标实现微藻能源规模化制备中的关键科学问题的重大突破，挖掘能源微藻优良藻种（株）选育原理，建立能源微藻藻种综合评价体系及适合于我国国情的可规模化培养的能源微藻藻种资源库；揭示能源微藻光能转化、光合固碳及油脂高效合成的机制；阐明光生物反应器设计、优化与放大原理，以及能源微藻光自养培养工艺优化及放大原理；阐明能源微藻细胞特性对能源微藻加工过程的影响规律以及加工工艺优化原理；构建微藻能源规模化制备的集成系统，并对其进行系统优化，明晰微藻能源规模化过程中的关键环节和具体的技术瓶颈，同时为技术瓶颈的突破提供创新的源泉，推进我国微藻能源的规模化进程。
2. 五年预期目标（1）阐明优良种（株）的选育原理；建立可在户外进行规模化光自养培养的能源微藻藻种的综合评价体系；建立适合于我国不同地域、不同季节以及不同CO2气源与氮磷废水资源光自养培养且具有我国自主知识产权的能源微藻种（株）库和共享信息平台。
（2）以可规模化培养的典型能源微藻为对象，阐明光合作用、固碳、油脂合成与积累的主要机制及其调控原理，建立能源微藻全基因组代谢网络模型；实现能源微藻光合、固碳油脂合成与积累网络的改造，提高能源微藻光合、固碳和油脂积累效率；发掘3-5个关键调控因子，获得5-10个生长快、高产油脂的转基因株系。
（3）建立不同类型光生物反应器的混合特性及光分布特性参数的CFD模拟方法；确定能源微藻在光生物反应器中培养的混合特性及光分布特性方面的敏感性参数；建立不同类型光生物反应器的评价方法，确定适合于能源微藻规模培养的光生物反应器类型；建立基于光照方向混合及光衰减特性的光生物反应器优化方法以及光生物反应器的放大准则。
（4）揭示环境因子诱导微藻中油脂过量积累与环境响应机制；建立基于重构全基因组代谢网络模型与多尺度分析方法相结合的能源微藻光自养培养过程优化与放大方法。
补充CO2提高胶球藻C-169生物量和脂肪酸产率的研究
补充CO 2提高胶球藻C-169生物量和脂肪酸产率的研究魏东，李露（华南理工大学轻工与食品学院，广东广州 510640）摘要：本研究在Basal 和BBM 培养基中补充2% CO 2或空气（0.04% CO 2）光自养培养胶球藻（Coccomyxa subellipsoidea ）C-169，系统比较了细胞比生长速率、生物量干重、总脂肪酸含量和产率以及中性脂含量的差异。
研究表明，与空气培养相比，在Basal 和BBM 培养基中补充2% CO 2可分别显著提高细胞的比生长速率2.6倍和2.3倍。
培养13 d 后，Basal 培养基中补充2% CO 2可获得最高生物量干重达4.67 g/L ，显著高于所有其他组（p ＜0.05）；而BBM 培养基中补充2% CO 2可获得最高总脂肪酸含量达37.53%干重，是通入空气时的5倍，脂肪酸产率更是高达77.49 mg/(L·d)，同时中性脂含量（以荧光强度表示）显著高于所有其他组（p ＜0.05）。
这就说明在Basal 培养基中补充CO 2有利于细胞生物量的积累；而在BBM 培养基中补充CO 2更有利于驱动细胞高产脂肪酸和中性脂，其生物量是制备生物柴油的极好原料。
关键词：胶球藻C-169；CO 2；生物量；脂肪酸；中性脂 文章篇号：1673-9078(2014)4-34-39Enhanced Yield of Biomass and Fatty Acids from Coccomyxasubellipsoidea C-169 by CO 2 SupplementWEI Dong, LI Lu(South China University of Technology, School of Light Industry and Food Sciences, Guangzhou 510640, China)Abstract: The effects of 2% CO 2 supplement or air (contain 0.04% CO 2) on cell specific growth rate, biomass dry weight, content and yield of total fatty acids, neutral lipids content of Coccomyxa subellipsoidea C-169 grown autotrophically in Basal and BBM media were investigated in this study. Compared with the results from aeration with air, 2% CO 2 supplement significantly increased the cell specific growth rate of 2.6 times in Basal medium and 2.3 times in BBM medium, respectively. After cultured for 13 days, the maximal biomass concentration was obtained at 4.67 g/L by 2% CO 2 supplement in Basal medium, which was much higher than other groups (p < 0.05). The highest content of total fatty acids reached 37.53% (DW) by supplying 2% CO 2 in BBM medium, which was 5 times higher than that by inletting air. And the yield of total fatty acids was up to 77.49 mg/(L·d) while neutral lipids referred as fluorescence intensity was significantly higher than other groups (p ＜0.05). These results indicated that 2% CO 2 supplement in Basal medium could promote cells to produce more biomass. In BBM medium, it could increase the yield of fatty acids and neutral lipids in the microalga, which was excellent raw material for biodiesel production.Key words: Coccomyxa subellipsoidea C-169; carbon dioxide; biomass; fatty acids; neutral lipids随着能源短缺和环境污染问题的日益加剧，寻找可替代化石燃料的可再生能源和环境友好型能源已成为世界各国普遍关注的问题。
全球藻类产品生产、贸易格局及中国竞争力分析
农业展望,2023,19(12):115-125.Agricultural Outlook收稿日期:基金项目:联系方式:2023-08-25宁波市农业局“三农”课题研究项目(20230208)周井娟,E-mail :******************。
通信作者陈娓娓,E-mail :****************全球藻类产品生产、贸易格局及中国竞争力分析周井娟,陈娓娓(浙江工商职业技术学院数字商务学院浙江宁波315012)摘要:藻类产品营养价值丰富、活性成分多,除食用外,广泛应用于医疗、工业、农业、美容保健以及生物等领域,市场供需两旺。
借助于联合国粮食及农业组织渔业统计数据库和商品贸易统计数据库,通过横向比较和纵向分析,对全球藻类产品生产布局和供给特点、贸易特征以及中国藻类产品的国际竞争力进行剖析。
研究发现:全球藻类产品生产与供给呈现出产量、产地、养殖品种高度集中的趋势;藻类产品国际贸易活跃且市场相对成熟,贸易规模稳中有升,但不同产品类别差异显著;中国藻类产品在全球市场竞争中优势明显,且有待开发的空间和挖掘的潜力依然很大,但仍存在许多制约瓶颈,机遇与挑战并存。
基于此,结合中国藻类产品当前存在的问题,提出了加强基础研究和科技攻关力度、优化养殖产品结构、实施目标市场差异化战略的建议。
关键词:藻类产品;生产特征;贸易格局;竞争力开放科学(资源服务)标识码(OSID):Global Algae Product Production,Trade Patternand China 's CompetitivenessZhou Jingjuan,Chen Weiwei(College of Digital Business,Zhejiang Business Technology Institute,Ningbo 315012,Zhejiang)Algae products have rich nutritional value and abundant active ingredients.In addition toconsumption,they are widely used in medical,industrial,agricultural,beauty and health care,as well as biological fields,with a thriving market supply and demand.By utilizing the FishstatJ Database and UN Comtrade Database from Food and Agriculture Organization of the United Nations,this study analyzed the global production layout,supply characteristics,trade characteristics,and international competitiveness of Chinese algae products through horizontal comparison and vertical analysis.The results showed that the global production and supply of algae products show a highly concentrated trend of yield,origin,and breeding variety;the international trade of algae products is active and the market is relatively mature,with a steady increase in trade scale,but there are significant differences among different product categories;Chinese algae products have obvious advantages in global market competition,and there is still a lot of room for development and potential to be explored,however,there are still many constraints and bottlenecks,and opportunities and challenges coexist.Based on this,suggestions were put forwardto1150引言藻类是一种纤维素含量高、微量元素丰富、活性成分多的水生植物,营养价值丰富,除食用外,广泛应用于医疗、工业、农业、美容保健以及生物等领域,市场供需两旺[1-2]。
硅藻中国新记录种
硅藻中国新记录种作者：龙继艳刘冰周阳艳徐三妹陈锦华来源：《广西植物》2022年第10期DOI： 10.11931/guihaia.gxzw202112013龍继艳，刘冰，周阳艳，等. 硅藻中国新记录种——帕瓦拉桥弯藻［Ｊ］. 广西植物，2022， 42（10）： 1791-1796.LONG JY， LIU B， ZHOU YY， et al. Cymbella pavanaensis A. Vigneshwaran et al.， a diatom reported for the first time in China ［J］. Guihaia， 2022， 42（10）： 1791-1796.摘要：在对湖南省硅藻多样性研究过程中，发现其中一采自湘江的桥弯藻种类具有以下鉴定特征：（1）细胞小，长度小于29 μm；（2）壳面略微呈背腹之分；（3）远缝端末梢向壳面背侧弯曲；（4）顶孔区很小，由1～3横列形态不同的两种类型孔纹组成，一种孔纹与壳面上的孔纹相似，呈狭缝隙状，另一种为圆形小孔，其内部开口上方有袋盖状硅质突出物覆盖；（5）壳面背侧中部处线纹密度每10 μm为10～12条、腹侧中部处每10 μm为11～13条，孔纹密度每10 μm为30～40个；（6）在靠近壳面腹侧中央区具有1～2个孤点。
经与帕瓦拉桥弯藻（ Cymbella pavanaensis A. Vigneshwaran et al.）模式种群相比较，该文确定上述桥弯藻即为帕瓦拉桥弯藻。
该文提供了对帕瓦拉桥弯藻超微结构的更多清晰认识，扩大了其地理分布区域，且是该种在中国的首次报道。
关键词：桥弯藻属，顶孔区，孤点，超微结构，新记录中图分类号： Q949文献标识码： A文章编号： 1000-3142（2022）10-1791-06Cymbella pavanaensis A. Vigneshwaran et al.，a diatom reported for the first time in ChinaLONG Jiyan1， LIU Bing1* ， ZHOU Yangyan1， XU Sanmei1， 2， CHEN Jinhua1（ 1. College of Biology and Environmental Sciences ， Jishou University ， Jishou 416000，Hunan， China;2. School of Arts and Sciences， Huaihua Normal College ， Huaihua 418000， Hunan，China ）Abstract： During the process of studying the diatom diversity of Hunan Province， we find that a Cymbella species collected from Xiang River possesses the following diagnostic features：（1）Cells are small and their lengths are less than 29 μm; （2） Valves exhibit slight dorsiventrality; （3） Distal raphe fissures are dorsally deflected; （4） Apical pore fields are very small and composed of 1-3 transapical rows of porelli， which comprise two forms， one is slit-like， similar to the areolae on the valve face， and the other is rounded with internal openings covered by the flap-like silica projections; （5） Striae 10-12/10 μm at the dorsal middle part， 11-13/10 μm at the ventral middle part， and areolae 30-40/10 μm; （6） And 1-2 stigmata exist near the valve ventral central area. After comparing this species with the type population of Cymbella pavanaensis A. Vigneshwaran et al.， in this paper， it is identified as C. pavanaensis . This paper provides a clearer knowledge of the ultrastructure of C. pavanaensis ， enlarges its geographical distribution region，and reports it for the first time in China.Key words： Cymbella Agardh， apical pore field， stigma， ultrastructure， new record桥弯藻属（ Cymbella Agardh）于1830年创立（Agardh， 1830），是硅藻门中重要类群，也是较大的硅藻属之一（Kapustin et al.， 2018）。
一种培养高油脂含量裂殖壶藻的发酵工艺[发明专利]
![一种培养高油脂含量裂殖壶藻的发酵工艺[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/c7c3d1d47d1cfad6195f312b3169a4517723e51f.png)
专利名称：一种培养高油脂含量裂殖壶藻的发酵工艺专利类型：发明专利
发明人：伍树松,刘志辉,宫嘉泰,李柏珍,蒋亦轩
申请号：CN202111631294.4
申请日：20211228
公开号：CN114164125A
公开日：
20220311
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明属于微生物发酵领域，具体涉及以改变裂殖壶藻的培养基营养成分，以提高裂殖壶藻的油脂产量的生产工艺；包括以下步骤：1)种子液培养2)初始发酵：将种子培养液进行初始发酵培养；3)单因素分析：通过单因素分析对裂殖壶藻的不同浓度碳源、氮源、接种量进行培养分析，以确定优化的浓度确定量；4)正交实验：通过对优化的碳源、氮源、外源添加剂进行正交实验来确定最优的裂殖壶藻培养基成分；5)摇瓶发酵：根据步骤3)和4)获得的最优发酵参数进行摇瓶发酵：6)菌体收集：将步骤5)获得的菌液依次进行离心、干燥，即得裂殖壶藻菌粉。
本发明成本较低，并且裂殖壶藻发酵的生物量和油脂含量较高。
申请人：湖南农业大学,湖南德诺健康产业集团有限公司
地址：410000 湖南省长沙市芙蓉区农大路1号
国籍：CN
代理机构：长沙科永臻知识产权代理事务所(普通合伙)
代理人：陈洁
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山东省海洋科技创新奖拟推荐项目公示
项目名称
海藻全质高值化酶酵产品关键技术创新与产业化应用
项目简介
“海藻全质高值化酶酵产品关键技术创新与产业化应用”以海洋微生物工具酶基因组的分析、功能解析、重组表达为理论基础，确定了酶学性质、酶的在线调控应用，经工艺拟合、酶酵协同、生产测试，完成了以海藻为原料，制备高纯度（医用、化妆品）材料、多样性活性片段（PM、PG）和海藻的全质产品加工，体现了技术创新引领下的工艺创新和产品创新，项目关键技术已实现产业化应用，直接经济效益1.3亿元。
姓 名
王鹏
排 名
3
技术职称
副教授
行政职务
无
工作单位
中国海洋大学
完成单位
中国海洋大学
对本项目技术创造性贡献：
项目核心成员，主要从事低值化藻类高值利用相关研究。对该项目的第1、2主要创新点作出了创造性贡献。在项目中负责微生物选育和基因挖掘等，实现工具酶功能基因工程化开发利用；基于人工智能构建工具酶系发酵神经网络在线控制技术，对项目相关贡献见附件3、6、7、8、9。
该成果整体水平达到国内领先水平。
应用情况
序号
应用单位名称
应用技术
应用时间
经济效益（万元）
1
青岛明月海藻集团有限公司
海藻全质高值化酶酵产品关键技术创新与产业化应用
2018.01.10-2020.05.29
11520
2
青岛啤酒股份有限公司
海藻全质高值化酶酵产品关键技术创新与产业化应用
2019.07.01-2020.05.28
2、基于离子调控技术的特定组分的M/G制备技术：通过工艺条件控制，定向、高效制备不同分子量的M、G和MG镶嵌片段，填补海藻加工行业特定M和G产品的空白，转化为低粘度与超低粘度组分的转化率在96%以上。同时由于酶液的酶解作用适当地降低了消化液的粘度，减少了传统工艺中用于稀释过滤过程所用大量水资源。
一株富含油脂的纤维藻及其培养应用[发明专利]
![一株富含油脂的纤维藻及其培养应用[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/c036fbfb6c175f0e7dd137a0.png)
专利名称：一株富含油脂的纤维藻及其培养应用
专利类型：发明专利
发明人：师文静,廖莎,姚新武,樊亚超,孙启梅,王领民,高大成,李晓姝
申请号：CN201410730989.1
申请日：20141205
公开号：CN105713836A
公开日：
20160629
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明公开了一株富含油脂的纤维藻及其培养应用，该藻株为SS-B7，其分类命名为纤维藻（Ankistrodesmus sp.），已于2013年4月15日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No. 7478。
本发明的纤维藻SS-B7能够耐受高浓度的CO和NOx，固碳效率高，获得的生物质中细胞总脂含量占细胞干重的40%以上，能够进行生物柴油的生产。
申请人：中国石油化工股份有限公司,中国石油化工股份有限公司抚顺石油化工研究院
地址：100728 北京市朝阳区朝阳门北大街22号
国籍：CN
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中棉所41获2009年国家科技进步二等奖
计增 收节 支６ ． ８ 元 。 ５４亿
本 实验 利用 自然 盐溃 土 建 立盐 池 ， 本 区 ４个 对 主栽棉 花品 种的抗 盐性 进行 初 步鉴 定 。结 果表 明，
新 陆早 １ ３与 石 Ｋ９的 耐 盐 性 明 显 优 于 其 它 ２个 品
该品种 先后 获 得 陕 西省 科 技 进 步 一 等 奖 和 农
时， 出苗 率仅 为２ ． ～ ３ ． 。经 方 差 分 析 （ ２９ ６７ 表
３ ， 种 间 、 度 Ｆ值 均 达 到 极 显 著 水 平 。 通 过 新 ）品 盐
复极 差测 验（ ４ ， 同盐分 含 量 间各 品种 出苗 率 表 ）不
表 ２ 盐 池试 验 不 同盐 度 各 参试 棉 花 品种 出苗 率 调 查 表
表 ４ 各处理 期棉花 出苗率 平均值差异 显著性 （ 复极 差测验 ） 新
中 所 １ ２９ 国 科 进 二 奖 棉 ４获 ０ 年 家 技 步 等 ０
中棉 所
我 所育种 室 主 任 郭 香 墨研 究 员 等 人 主 持 完 成 的“ 高效 广适 双价转基 因抗虫 棉 中棉 所 ４ ” 近 日获 １， 得 ２０ ０ ９年 国家 科 技 进 步 二 等 奖 。 中棉 所 ４ １是 我 所育成 的第一 个 国审双 价 转基 因抗 虫 棉 品种 ， 将我 国 自主知识 产权 的 Ｂ ＋ Ｃ Ｔ ｔ ｐ Ｉ双价 基 因， 用 花粉 采 管通道 法转 人 常 规 棉 品 种 中育 成 ， 高产 广 适 ， 一般
仍 可达 ３ ． ２ ， 盐 含 量 超 过 １ ５ 时 ， ０ ４ 总 ． 出苗 率 骤 降 ，
种 出苗 率也 不 相 同 ， 体 来 看 ， 陆 早 １ 总 新 ３和 石 Ｋ ９在 各 级 盐 分含 量 条件 下 出苗 率均 略 高 于其 它 ２个品 种 。
中性脂含量高的微拟球藻藻株的快速筛选
085,其中基因过表达藻株 12 株 9 ,分别为 Δ6 去饱和
酶基因(
NoD6)
3 株、
Δ12 去饱和酶基因(
NoD12)
3 株,
以及2条来自三角褐指藻 1 条来自拟南芥的二酰甘油
酰基转移酶 DGAT 基因,命名为 P
tDGAT1(
2 株)、
P
t
-
DGAT2(
3株)和 AtDGAT(
1 株)。28 株物理诱变藻
.02%,亚硝基胍(
NTG)诱变藻株 231 号相
对产率为323
.84%。本研究获得了3株中性脂产率高的微拟球藻藻株,这3株藻株有望应用于生物柴油的生产,研究结果
可为高油脂含量微藻的快速筛选提供参考。
关键词: 微拟球藻;中性脂;尼罗红;藻种选育
中图法分类号: S
968.
42;O657.
3
DOI: 10.
-1
为活化保存藻株用于实验,对藻种进行预培养,培
/2 海水培养基,盐度 30±2,光照强度为 50~
养基为f
60μmo
l·m-2·s-1,温度为(
25±3)℃,每天定时摇
瓶3次,培养至指数生长期用于后续实验。
1.
2 藻株中性脂含量的检测
尼罗红是一种脂溶性荧光染料,其在特定波长下
荧光强度与油脂含量呈显著的线性关系[16],可用于表
16441/
.
nk
i.
hdxb.
20220372
jc
文献标志码: A
文章编号: 1672
5174(
2023)
12
032
08
引用格式: 陈小凡,王路路,肖腾飞,等.中性脂含量高的微拟球藻藻株的快速筛选[
流加-连续培养的筒柱藻营养成分分析
流加-连续培养的筒柱藻营养成分分析兰岚;王巧晗;赫勇;刘岩;宫庆礼【期刊名称】《中国海洋大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2012(042)006【摘要】In this study, the main nutritional components, the compositions of amino acids and fatty acids were analyzed in CyLindrotheca fusiformis under Fed-Batch-Continuous culture. The results showed that C. fusiformis contains 3L 96% crude protein, 15. 10% ash, 12. 25% fat and 0. 85% fiber, respectively. The content of 18 kinds of amino acids was 26. 60 g/100g of dry weight (83. 23% of crude protein). Essential amino acids (EAA) and flavor amino acids reached 30. 79% and 42. 12%, respectively. In addition, C. fusiformis contains a variety of highly unsatured fatty acids, especially EPA. EPA was 19. 43 mg/g dry weight (15. 85% of total fatty acids).%对筒柱藻(Cylindrotheca fusiformis)的主要营养成分进行了分析,其中筒柱藻中含有的粗蛋白、粗灰分、粗脂肪和粗纤维含量分别占干重的31.96％、15.10％、12.25％和0.85％.结果表明:所测定的18种氨基酸总量为26.60 g/100g干品,占粗蛋白的83.23％;必需氨基酸(EAA)占粗蛋白的30.79％;呈味氨基酸占粗蛋白的42.12％.筒柱藻还含有多种高不饱和脂肪酸,尤其是EPA,其含量为19.43mg/g干品,达到总脂肪酸含量的15.85％.因此底栖硅藻筒柱藻是一种优良的水产动物苗种饵料.【总页数】4页(P68-71)【作者】兰岚;王巧晗;赫勇;刘岩;宫庆礼【作者单位】中国海洋大学水产学院藻类学与藻类养殖研究室,山东青岛266003;中国海洋大学水产学院藻类学与藻类养殖研究室,山东青岛266003;中国海洋大学水产学院藻类学与藻类养殖研究室,山东青岛266003;中国海洋大学水产学院藻类学与藻类养殖研究室,山东青岛266003;中国海洋大学水产学院藻类学与藻类养殖研究室,山东青岛266003【正文语种】中文【中图分类】Q501【相关文献】1.拟柱胞藻的营养成分与培养 [J], 查广才;杨东娟;邹海鹰2.两株硅藻筒柱藻和纤细角毛藻的油脂生产 [J], 彭小伟;张维;刘天中3.氮磷饥饿时间对筒柱藻生长及总脂含量的影响 [J], 梁英;孟祥荣;孙明辉;田传远;黄徐林4.氮磷源对筒柱藻叶绿素荧光特性和生长的影响 [J], 梁英;孙明辉;田传远;曹春晖5.氮磷浓度对筒柱藻生长及理化成分的影响 [J], 陈书秀;王伟伟;孙娟;李霞;宋少锋;王青岩因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
国际(地区)合作与交流项目
重点国际（地区）合作研究项目重点国际（地区）合作研究项目（以下简称重点合作研究项目）资助科学技术人员围绕科学基金优先资助领域、我国迫切需要发展的研究领域、我国科学家组织或参与的国际大型科学研究项目或计划以及利用国际大型科学设施与境外合作者开展的国际（地区）合作研究。
申请人应根据各科学部在《指南》中发布的鼓励研究领域，围绕重要科学问题提出创新性国际（地区）合作研究项目。
合作研究项目应当充分体现合作的必要性和互补性。
合作双方应具有长期而稳定的合作基础（如已合作发表研究论文、较长期的人员互访交流等），对方应对合作研究给予相应的投入。
合作研究过程中要注重成果共享和知识产权的保护。
2014年度重点合作研究项目共收到申请689项，资助105项，资助经费3亿元，平均资助强度为286万元/项，资助率为15.2%。
2015年度重点合作研究项目计划资助100项，资助强度约300万元/项，资助期限为5年。
申请人应当具备以下条件：（1）具有高级专业技术职务（职称）；（2）作为项目负责人正在承担或承担过三年期以上科学基金项目的依托单位科学技术人员。
合作者应当具备以下条件：（1）在境外从事科学研究，并独立主持实验室或重要的研究项目；（2）具有所在国（或所在地）相当于副教授以上的专业技术职务（职称）。
申报附件材料及要求：除提交中文申请书外，申请人还需提供以下材料：（1）英文申请书：可在ISIS申报系统中下载填写并作为在线填报申请书的附件一并提交。
（2）合作协议书：申请人应提供有合作者双方共同签字的《合作协议书》复印件，不可用只有单方签字的信函替代。
协议书必须涵盖：①合作研究内容和所要达到的研究目标；②合作双方负责人和主要参与者；③合作研究的期限、方式和计划；④知识产权的归属、使用和转移；⑤相关经费预算等事项。
具体要求参照《合作协议书》范本。
网址如下：/nsfc/cen/gjhz/cjwt/cjwt2011-10-26-06.html（3）合作者在所在国（或所在地）主持与申请项目内容有关的研究项目证明材料或近3年发表的与申请项目内容有关的论文。
一种提高盐生杜氏藻产油能力的驯化方法[发明专利]
![一种提高盐生杜氏藻产油能力的驯化方法[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/c1f4266fd0d233d4b04e694d.png)
专利名称：一种提高盐生杜氏藻产油能力的驯化方法专利类型：发明专利
发明人：凌雪萍,段然,卢英华,周芯羽,郭晓昀,陈翠雪申请号：CN201811305001.1
申请日：20181102
公开号：CN109355192A
公开日：
20190219
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明公开了一种提高盐生杜氏藻产油能力的驯化方法。
本发明首先通过在开始时添加乙酰辅酶A羧化酶抑制剂，确定进行驯化的浓度范围，之后选择适宜的抑制剂浓度对藻种进行多次驯化和传代，对藻种的生物量和产油能力进行测定，对藻种的遗传稳定性进行评估，选育出了产油能力高的盐生杜氏藻种。
申请人：厦门大学
地址：361000 福建省厦门市思明南路422号
国籍：CN
代理机构：厦门市首创君合专利事务所有限公司
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113基于高通量培养的胶球藻C-169生物量和油脂积累能力的快速评价魏东，李露（华南理工大学食品科学与工程学院，广东广州 510640）摘要：本研究利用CO 2培养箱内48孔板振荡光照培养专利设计的微藻高通量培养体系，结合细胞组学技术，系统评价了氮源和盐度梯度下胶球藻C-169细胞的生长速率、生物量浓度和油脂积累能力。
结果表明，该培养体系的均一性和稳定性良好，可实现微藻的高通量及多处理培养。
富氮培养基可显著提高胶球藻C-169的细胞生长速率和生物量浓度，缺氮培养基显著驱动了细胞积累中性脂。
在含1/4氮的培养基中藻细胞的生物量浓度是4倍氮培养基中的25%，而中性脂含量（平均荧光强度表示）则高达后者的16倍以上。
在0~15‰盐度范围内胶球藻C-169的生长状况良好且无显著差异（p >0.05），15‰以上盐度藻细胞生长受到明显抑制。
10‰盐度下中性脂含量（以平均荧光强度表示）显著高于所有其他组（p <0.05），说明该盐度有利于驱动细胞积累中性脂。
关键词：胶球藻C-169；高通量；氮源；盐度；细胞生长文章篇号：1673-9078(2016)12-113-119 DOI: 10.13982/j.mfst.1673-9078.2016.12.018Rapid Evaluation of Biomass and Lipid Accumulation Capacity in Coccomyxa subellipsoidea C-169 Cultured in a High-throughput SystemWEI Dong, LI Lu(School of Food Sciences and Engineering, South China University of Technology, Guangzhou 510640, China)Abstract: Coccomyxa subellipsoidea C-169 cells were cultured using a high-throughput microalgal culture system with a patented design, 48-well microplate with shaking and illumination in a CO 2 incubator. Combined with cytomics technology, the growth rate, biomass concentration, and lipid accumulation capacity in C. subellipsoidea C-169 cells under nitrogen and salinity gradients were systematically evaluated. The results showed that the culture system had excellent uniformity and stability, and could achieve high-throughput and multi-treatment microalgae culture. Cell growth and biomass concentration were significantly enhanced in nitrogen-rich medium; whereas neutral lipid accumulation was significantly enhanced in nitrogen-deficient medium. Biomass concentration in the medium containing 1/4 nitrogen concentration was 25% of that in medium containing four times as much nitrogen; however, neutral lipid content (shown as average fluorescence intensity) was more than 16 times higher. At salinity levels of 0~15%, C. subellipsoidea C-169 cells grew well, but rates were not significantly different (p >0.05). However, cell growth was significantly inhibited when salinity was higher than 15%. The neutral lipid content (shown as average fluorescence intensity) at a salinity of 10% was significantly higher than that of all other groups (p <0.05), indicating that this salinity level could facilitate accumulation of neutral lipids.Key words: Coccomyxa subellipsoid ea C-169; high-throughput; nitrogen; salinity; cell growth能源为人类生活提供动力，化石燃料具有不可再生性，且燃烧后会产生大量有害物质污染环境。
微藻来源广泛，光合效率高，生长周期短，可同化CO 2合成积累油脂，并能有效减少CO 、CO 2、SO x 及烃类物收稿日期：2015-12-11基金项目：国家自然科学基金项目（31370383）；国家863计划项目（2013AA065802）；广东省海洋渔业科技与产业发展专项（A201401C01）；广东省公益研究与能力建设项目（2015A020216003）作者简介：魏东（1966-），男，博士，教授，博士生导师，研究方向：工业生物技术质等的排放，是制备生物柴油的极好原料[1,2]。
高生物量和高油脂含量是能源微藻的理想特质，一般可通过优化培养基组成及改变环境条件来提高微藻的生物量和油脂含量。
实验室中通常使用锥形瓶，辅以通气或摇床摇动培养微藻，常面临光照不均一等问题，耗费大量人力物力，耗时低效。
而专利设计的高通量培养装置以CO 2培养箱和微孔板为载体在微量水平上对微藻实现多参数多平行培养，大大节省培养空间，提高培养效率。
同时结合基于荧光分子探针技术的流式细胞术、激光共聚焦显微镜术和图像分析术等细胞组学114分析技术平台，可实现细胞多参数多元化的综合分析，定性定量测定细胞的基础生物学信息，快速评价营养及环境因子对其细胞生长和产油能力的影响。
氮元素是微藻生长繁殖必需的基本营养元素，是构成藻细胞蛋白质、核酸及色素等的基本成分，硝态氮是微藻培养过程中常用的无机氮源，不同氮源浓度对藻细胞的生长速率和油脂积累有着较为显著的影响[3]。
盐度也是微藻生长环境的重要理化因子，通过影响各种膜结构的完整性和流动性，引起细胞渗透压和光合效率的改变，调节代谢活动最终影响细胞生长和油脂合成[4,5]。
胶球藻（Coccomyxa subellipsoidea ）C-169、绿藻门和胶球藻属，是首个完成基因组测序的极地真核藻种，并且细胞壁较薄易于油脂提取。
本文以胶球藻C-169为研究对象，通过构建均一稳定的高通量培养体系和Nile Red 荧光探针技术与多功能酶标仪、流式细胞术和激光共聚焦显微镜术等细胞组学分析技术联用的高通量评价体系，快速评估氮源浓度与盐度等因子对胶球藻C-169细胞生长和油脂积累产生的影响，有助于全面掌握能源微藻C-169的基础生物学信息，为其规模化培养和生长产油机理研究提供基础数据。
1 材料与方法 1.1 材料与仪器胶球藻（Coccomyxa subellipsoidea ）C-169购自日本NIES 藻种库，编号2166；尼罗红（Nile Red ）染料购自Sigma 公司；硝酸钠、氯化钠和二甲基亚砜（DMSO ）等试剂均为国产分析纯。
水套式CO 2培养箱购自美国Thermo 公司；Modulyod 型冷冻干燥机购自美国Thermo electron 公司；FLUOstar OPTIMA 多功能酶标仪购自德国BMG 公司；C6 Accuri 流式细胞仪购自美国BD 公司；TCS SP5X 激光共聚焦扫描显微镜购于德国Leica 公司；MX100-4A 微孔板振荡器购自杭州奥盛仪器有限公司；48微孔板购自美国Costar 公司。
1.2 培养基及培养条件胶球藻C-169使用Bold’s basal medium （BBM ）培养基[6]。
培养装置参照实用新型发明专利ZL 2014 2 0378727.9；CO 2培养箱内温度维持在25.5±1 ℃，光照强度2150±150 lx ，CO 2浓度设置2%，振荡速率600 r/min ，连续光照培养。
将配置好的藻液加入Costar 48孔板中，每孔装液量1 mL ，每浓度设定4个平行样，取平均值，计算标准偏差。
1.3 实验设计1.3.1 不同氮浓度对胶球藻C-169生长季油脂积累的影响培养基（除硝酸钠外）按BBM 培养基配方配置，硝酸钠浓度分别设置为0倍N 、0.25倍N 、0.5倍N 、1倍N 、2倍N 和4倍N 共六个梯度，每个梯度四个平行，其中1倍N 质量浓度为0.25 g/L 。
1.3.2 不同盐浓度对胶球藻C-169生长季油脂积累的影响培养基（除氯化钠外）按BBM 培养基配方配置，氯化钠质量分数分别设置为0.025‰、5‰、10‰、15‰、20‰和25‰共六个梯度，每个梯度四个平行，其中培养基中原始氯化钠质量分数为0.025‰。
1.4 分析测试与计算 1.4.1 细胞浓度及比生长速率使用FLUOstar OPTIMA 多功能酶标仪在690 nm 波长处测定48孔板中胶球藻C-169的吸光值，制作生长曲线。
比生长速率μ=（lnOD 2-lnOD 1）/t ，其中OD 2和OD 1分别是培养开始和结束后测得的OD 690值，t 为培养时间间隔，单位为/d 。
1.4.2 生物量干重培养结束后，将48孔板中的藻液吸出，在10000 r/min 下离心10 min ，弃上清液，用去离子水洗涤离心3次，然后用冷冻干燥机真空冷冻干燥36 h 制备干粉称重。