高效液相色谱法测定生乳中双乙酸钠_张养东
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收 稿 日 期 ：２０１３－０８－２０ 作者简介：张养东（１９８２－），男，山东人，博 士，研 究 方 向：奶 牛 营
养与牛奶质量安全。 通信作者：郑楠（１９８０－），女，内 蒙 人，博 士，从 事 牛 奶 质 量 安 全
与 风 险 评 估 研 究 。Ｅ－ｍａｉｌ：ｎａｎｚｈｅｎｇ．ｃｎ＠ｇｍａｉｌ．ｃｏｍ 基金项目：现代农业产业技术体系 专 项 资 金 （ｎｙｃｙｔｘ－０４－０１）和 生
鲜乳质量安全风险评估专项资助。
５００ｍＬ超 纯 水 中 加 入 ５３．５ ｍＬ 磷 酸，定 容 至 １０００ｍＬ；磷 酸 氢 二 铵 溶 液：准 确 称 取 磷 酸 氢 二 铵 １．２ｇ，加 水 溶 解，加 入 １．０ ｍＬ 磷 酸，定 容 至 １０００ｍＬ，０．４５μｍ 水 相 微 孔 滤 膜 过 滤，滤 液 待 用 （临用前配制）。准确称 取 １ｇ （精 确 至 ０．００１ｇ）双 乙酸钠标准品，用 水 定 容 至 １００ ｍＬ，配 制 成 含 量 为 １０ｍｇ／ｍＬ 的标准储备液，于４ ℃保存。 １．３ 试 验 方 法 １．３．１ 色 谱 条 件 流 动 相 ：磷 酸 氢 二 铵 溶 液 ；流 速 ： １．０ ｍＬ／ｍｉｎ；进 样 量：２０μＬ；柱 温：３５ ℃；检 测 波 长 ：２１４ｎｍ。 １．３．２ 样 品 前 处 理 准 确 称 取５ｇ（精 确 至０．０１ｇ） 均匀生乳试验样品置于 １０ｍＬ 容量瓶中，加入磷酸 溶液０．５００ｍＬ，混匀，４ ℃放置２０ｍｉｎ，取出放置至 室 温，加 水 稀 释 至 刻 度，混 匀。１００００ ｇ 离 心 １０ｍｉｎ，收 集 上 清 液，经 ０．４５μｍ 微 孔 滤 膜 过 滤， 待测。
中国畜牧兽医 ２０１３年第４０卷 增刊
安全检测
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高效液相色谱法测定生乳中双乙酸钠
张 养 东１，２，３，郑 楠１，２，３，李 松 励１，２，３，郑 姗 姗１，２，３，许 晓 敏１，２，王 加 启１，２，３
（１．中国农业科学院北京畜牧兽医研究所，农业部奶产品质量安全风险评估实验室（北京），北京 １００１９３； ２．农 业 部 奶 及 奶 制 品 质 量 监 督 检 验 测 试 中 心 （北 京 ），北 京 １００１９３；３．动 物 营 养 学 国 家 重 点 实 验 室 ，北 京 １００１９３）
Ｃｅｎｔｅｒ，Ｂｅｉｊｉｎｇ １００１９３，Ｃｈｉｎａ；３．Ｓｔａｔｅ Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ａｎｉｍａｌ Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ，Ｂｅｉｊｉｎｇ １００１９３，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ａ ｈｉｇｈ ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ ｌｉｑｕｉｄ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ （ＨＰＬＣ）ｍｅｔｈｏｄ ｗａｓ ｄｅｖｅｌｏｐｅｄ ｆｏｒ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｓｏｄｉｕｍ ｈｙｄｒｏ－ ｇｅｎ ｄｉａｃｅｔａｔｅ ｉｎ ｒａｗ ｍｉｌｋ．Ｐｒｏｔｅｉｎ ｗａｓ ｄｅｎａｔｕｒｅｄ ｗｉｔｈ ｐｈｏｓｐｈｏｒｉｃ ａｃｉｄ ｔｈｅｎ ｐｒｅｃｉｐｉｔａｔｅｄ，ａｎｄ ｔｒａｎｓｆｅｒ ｓｏｄｉｕｍ ｈｙｄｒｏｇｅｎ ｄｉａｃｅ－ ｔａｔｅ ｉｎｔｏ ａｃｅｔｉｃ ａｃｉｄ ｉｎ ｒａｗ ｍｉｌｋ，ｃｏｎｓｔａｎｔ ｖｏｌｕｍｅ，ｃｅｎｔｒｉｆｕｇｅｄ ａｎｄ ｔｈｅ ｓｕｐｅｒｎａｔａｎｔ ｓａｍｐｌｅ ｏｖｅｒ ｔｈｅ ｍｅｍｂｒａｎｅ．Ｔｈｅ ｔａｒｇｅｔ ｃｏｍ－ ｐｏｕｎｄ ｗａｓ ａｎａｌｙｚｅｄ ｂｙ ＨＰＬＣ ｗｉｔｈ ａｍｍｏｎｉｕｍ ｄｉｈｙｄｒｏｇｅｎ ｐｈｏｓｐｈａｔｅ ａｓ ｍｏｂｉｌｅ ｐｈａｓｅ，ｔｈｅ ｔａｒｇｅｔ ｗａｓ ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ ａｎｄ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ ｂｙ ｅｘｔｅｒｎａｌ ｓｔａｎｄａｒｄ ｍｅｔｈｏｄ．Ｉｎ ｔｈｅ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｒａｎｇｅ ｏｆ ０．０５ｔｏ ０．５０ ｍｇ／ｍＬ，Ｒ２ ｏｆ ｃａｌｉｂｒａｔｉｏｎ ｃｕｒｖｅ ｆｏｒ ｔｈｅ ｏｂｊｅｃｔ ｗａｓ ａｂｏｖｅ ０．９９．Ｔｈｅ ｒｅｃｏｖｅｒｙ ｏｆ ｔａｒｇｅｔ ｃｏｍｐｏｕｎｄ ｒａｎｇｅｄ ｆｒｏｍ ９０％ ｔｏ １１０％ ｗｉｔｈ ｒｅｌａｔｉｖｅ ｓｔａｎｄａｒｄ ｄｅｖｉａｔｉｏｎｓ ｏｆ １．０％ ｔｏ ４．１％． Ｔｈｅ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｌｉｍｉｔ ｗａｓ ０．０５ｇ／ｋｇ，
双乙酸钠
添 加 量 （ｇ／ｋｇ）
０．１０ ０．２０
表 １ 双 乙 酸 钠 的 加 标 回 收 率 和 精 密 度
检 测 值 （ｇ／ｋｇ）
样品１ ０．１１９６ ０．２０９０
样品２ ０．１２２０ ０．２０５３
样品３ ０．１２０７ ０．２０４９
样品４ ０．１１８８ ０．２０６２
样品５ ０．１１７４ ０．２０５１
关 键 词 ：高 效 液 相 色 谱 色 谱 （ＨＰＬＣ）；生 乳 ；双 乙 酸 钠 中 图 分 类 号 ：Ｓ８５９．８４ 文 献 标 识 码 ：Ａ 文 章 编 号 ：１６７１－７２３６（２０１３）增 刊－００３７－０２
双乙酸钠是中 国 批 准 使 用 的 一 种 防 腐 剂，只 允 许使用在 “基 本 不 含 水 的 脂 肪 和 油 ”的 食 品 中 （ＧＢ ２７６０－２０１１）；生乳含水约８８％、含脂肪平均 为 ４．０％ （王 加 启 ，２００６），按 照 国 家 标 准 ，生 乳 中 不 允 许 使 用 双乙酸钠。因此，有 必 要 开 发 生 乳 中 的 双 乙 酸 钠 的 检 测 方 法 ，监 控 生 乳 中 的 双 乙 酸 钠 。 目 前 ，国 家 标 准 《食品中双乙 酸 钠 的 测 定 高 效 液 相 色 谱 法》（ＧＢ／Ｔ ２３３８３－２００９）中 检 测 双 乙 酸 钠 的 方 法，适 用 于 豆 干 类、豆干 再 制 品、糕 点、预 制 肉 制 品、熟 肉 制 品、调 味 品、复合调 味 料、油 炸 小 食 品 （仅 限 油 炸 薯 片 ）等 食 品，不包含生乳。 吴 新 等 （２０１２）开 发 了 针 对 乳 制 品 中双乙酸钠的方法，生 乳 中 双 乙 酸 钠 的 检 测 方 法 至 今未见报道。作者旨在建立一种生乳样品双乙酸钠 的 简 便 、快 捷 和 准 确 的 高 效 液 相 色 谱 检 测 方 法 。 １ 材 料 与 方 法 １．１ 仪 器 与 试 剂 Ｗａｔｅｒｓ ２６９５ ＨＰＬＣ 色 谱 仪 配 置二 极 管 阵 列 检 测 器；Ａｔｌａｎｔｉｓ Ｔ３ Ｃ１８ ４．６ｍｍ× ２５０ｍｍ（５μｍ）色 谱 柱；分 析 天 平 （感 量 ０．１ ｍｇ 和 ０．０１ｇ）；离 心 机 （ＨＩＴＡＣＨＩ）；０．４５μｍ 微 孔 滤 膜、 水相；Ｍｉｌｌｉ－Ｑ 超 纯 水 器 （美 国 Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ公 司 ）。 双 乙酸钠（纯度 ≥９９．０％，美 国 Ｓｉｇｍａ公 司）；磷 酸 （分 析纯），磷酸氢二铵 （分 析 纯）。 生 乳 样 品：采 集 ５ 份 不同的生乳样品，４ ℃保存。 １．２ 试 验 溶 液 及 标 准 溶 液 配 制 磷 酸 溶 液：
回 收 率 （％ ）
９３．４～９７．９ ９０．４～９２．９
ＲＳＤ（％）
１．８ １．１
２．３ 准 确 度 由 不 同 的 操 作 者 ，采 用 本 方 法 对 添 加 双乙 酸 钠 的 １ 份 生 乳 样 品 进 行 检 测，添 加 量 为 ０．１０ｇ／ｋｇ（２倍检出 限）和 ０．２０ｇ／ｋｇ（４ 倍 检 出 限）， 共 进 行 ５ 批 次 试 验，每 批 次 同 一 添 加 浓 度 做 ５ 个 平 行，做实验室内准确度试验。结果表明双乙酸钠的平 均加标 回 收 率 为 ９３．４％ ～１０２．７％，相 对 标 准 偏 差 （ＲＳＤ）为１．０％～４．１％（表２），说 明 本 方 法 具 有 较 好
２ 结 果 与 讨 论 ２．１ 线性关系和检 出 限 准 确 吸 取 双 乙 酸 钠 标 准 储备液 ０．００、１．００、２．００、３．００、４．００、５．００ ｍＬ 于 １０ｍＬ容量瓶中，加入 ０．５ ｍＬ 磷 酸 溶 液，用 水 定 容 至刻度，摇匀，过０．４５μｍ 微 孔 滤 膜，获 得 浓 度 分 别 为０．００、０．１０、０．２０、０．３０、０．４０、０．５０ ｍｇ／ｍＬ 的 标 准工作溶液。按照 浓 度 由 低 到 高 顺 序 进 样，标 准 谱 图见图 １；以 浓 度 为 横 坐 标 （Ｘ），峰 面 积 为 纵 坐 标 （Ｙ），以峰面积对溶液质量浓度进行 线 性 回 归，得 到 回 归 方 程 Ｙ ＝ ４４０３１０Ｘ ＋ ５４３．６７，在 ０．０５ ～ ０．５０ｍｇ／ｍＬ范 围 内 线 性 关 系 良 好，相 关 系 数 Ｒ２＝ ０．９９９７，信 噪 比 （Ｓ／Ｎ）为 ３ 时 ，检 出 限 为 ０．０５ｇ／ｋｇ。 ２．２ 回收率和精密度 采 用 本 方 法 对 ５ 份 生 乳 样
表 ２ 双 乙 酸 钠 的 实 验 室 准 确 度 试 验
双乙酸钠
添加量（ｇ／ｋｇ） 批间回收率（％）
０．１０ ０．２０
９３．５～９５．７ ９３．４～１０２．７
ＲＳＤ（％） １．０ ４．１
的再现性。 ３ 结 论
本研究建 立 了 基 于 ＨＰＬＣ 检 测 生 乳 中 双 乙 酸 钠 的 检 测 方 法 ，具 有 较 好 的 精 密 度 和 准 确 度 。
中 国 标 准 出 版 社 ，２０１１． ４ ＧＢ／Ｔ ２３３８３－２００９．食品中双乙酸钠 的 测 定．高 效 液 相 色 谱 法．北
京 ：中 国 标 准 出 版 社 ，２００９．
Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ Ｓｏｄｉｕｍ Ｈｙｄｒｏｇｅｎ Ｄｉａｃｅｔａｔｅ ｉｎ Ｒａｗ Ｍｉｌｋ ｕｓｉｎｇ Ｈｉｇｈ Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ Ｌｉｑｕｉｄ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ
摘要：试验旨在建立高效液相色谱（ＨＰＬＣ）测定生乳中双乙 酸 钠 的 方 法。 生 乳 样 品 经 磷 酸 变 性 沉 淀 蛋 白，并 将 样 品 中 双 乙酸钠酸化转化为乙 酸，定 容，离 心 取 上 清 液，过 微 孔 滤 膜 后，以 磷 酸 二 氢 铵 为 流 动 相 进 行 ＨＰＬＣ 检 测，外 标 法 定 量。 在 ０．０５～０．５０ｍｇ／ｍＬ 浓度范围内，标准曲线 Ｒ２＝０．９９７，样 品 加 标 回 收 率 在 ９０％ ～１１０％ 之 间，相 对 标 准 偏 差 １．０％ ～４．１％。 此 方 法 检 出 限 为 ０．０５ｇ／ｋｇ。
参考文献
１ 王加启．现代奶牛养殖科学 ［Ｍ］．北京：中国农业出版社，２００６． ２ 吴新，包梦醒，余雯静，等．高 效 液 相 色 谱 法 测 定 牛 奶 中 的 双 乙
酸钠 ［Ｊ］．农产品加工·学刊，２０１２，１０：１４３～１４５． ３ ＧＢ ２７６０－２０１１．食品安全国家 标 准．食 品 添 加 剂 使 用 标 准．北 京：
ＺＨＡＮＧ Ｙａｎｇ－ｄｏｎｇ１，２，３，ＺＨＥＮＧ Ｎａｎ１，２，３，ＬＩ Ｓｏｎｇ－ｌｉ １，２，３，ＺＨＥＮＧ Ｓｈａｎ－ｓｈａｎ１，２，３， ＸＵ Ｘｉａｏ－ｍｉｎ１，２，ＷＡＮＧ Ｊｉａ－ｑｉ １，２，３
（１．Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ａｎｉｍａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｃｈｉｎｅｓｅ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｍｉｎｉｓｔｒｙ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ－Ｍｉｌｋ Ｒｉｓｋ Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｂｅｉｊｉｎｇ １００１９３，Ｃｈｉｎａ；２．Ｍｉｎｉｓｔｒｙ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ－Ｍｉｌｋ ａｎｄ Ｄａｉｒｙ Ｐｒｏｄｕｃｔ Ｉｎｓｐｅｃｔｉｏｎ
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物 质 的 液 相 色 谱 图
中国畜牧兽医 ２０１３年第４０卷 增刊
品 进 行 双 乙 酸 钠 本 底 值 检 测 ，检 测 结 果 表 明 ，采 集 的 ５份生乳样品不含有双乙酸钠。采用本方法对添加 双乙 酸 钠 的 ５ 份 生 乳 样 品 进 行 检 测。添 加 量 为 ０．１０ｇ／ｋｇ（２ 倍 检 出 限 ）和 ０．２０ｇ／ｋｇ（４ 倍 检 出 限 ）， 做方法回收率试验。结果表明双乙酸钠在２个添加 水平的平均加标回收率 ９０．４％ ～９７．９％ 之 间，相 对 标 准 偏 差 （ＲＳＤ）在 １．１％ ～１．８％ 之 间 （表 １）。 加 标 回收率和精密度符合《实验室质量控制规范 食品理 化 检 测 》（ＧＢ／Ｔ ２７４０４－２００８）要 求 。
养与牛奶质量安全。 通信作者：郑楠（１９８０－），女，内 蒙 人，博 士，从 事 牛 奶 质 量 安 全
与 风 险 评 估 研 究 。Ｅ－ｍａｉｌ：ｎａｎｚｈｅｎｇ．ｃｎ＠ｇｍａｉｌ．ｃｏｍ 基金项目：现代农业产业技术体系 专 项 资 金 （ｎｙｃｙｔｘ－０４－０１）和 生
鲜乳质量安全风险评估专项资助。
５００ｍＬ超 纯 水 中 加 入 ５３．５ ｍＬ 磷 酸，定 容 至 １０００ｍＬ；磷 酸 氢 二 铵 溶 液：准 确 称 取 磷 酸 氢 二 铵 １．２ｇ，加 水 溶 解，加 入 １．０ ｍＬ 磷 酸，定 容 至 １０００ｍＬ，０．４５μｍ 水 相 微 孔 滤 膜 过 滤，滤 液 待 用 （临用前配制）。准确称 取 １ｇ （精 确 至 ０．００１ｇ）双 乙酸钠标准品，用 水 定 容 至 １００ ｍＬ，配 制 成 含 量 为 １０ｍｇ／ｍＬ 的标准储备液，于４ ℃保存。 １．３ 试 验 方 法 １．３．１ 色 谱 条 件 流 动 相 ：磷 酸 氢 二 铵 溶 液 ；流 速 ： １．０ ｍＬ／ｍｉｎ；进 样 量：２０μＬ；柱 温：３５ ℃；检 测 波 长 ：２１４ｎｍ。 １．３．２ 样 品 前 处 理 准 确 称 取５ｇ（精 确 至０．０１ｇ） 均匀生乳试验样品置于 １０ｍＬ 容量瓶中，加入磷酸 溶液０．５００ｍＬ，混匀，４ ℃放置２０ｍｉｎ，取出放置至 室 温，加 水 稀 释 至 刻 度，混 匀。１００００ ｇ 离 心 １０ｍｉｎ，收 集 上 清 液，经 ０．４５μｍ 微 孔 滤 膜 过 滤， 待测。
中国畜牧兽医 ２０１３年第４０卷 增刊
安全检测
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高效液相色谱法测定生乳中双乙酸钠
张 养 东１，２，３，郑 楠１，２，３，李 松 励１，２，３，郑 姗 姗１，２，３，许 晓 敏１，２，王 加 启１，２，３
（１．中国农业科学院北京畜牧兽医研究所，农业部奶产品质量安全风险评估实验室（北京），北京 １００１９３； ２．农 业 部 奶 及 奶 制 品 质 量 监 督 检 验 测 试 中 心 （北 京 ），北 京 １００１９３；３．动 物 营 养 学 国 家 重 点 实 验 室 ，北 京 １００１９３）
Ｃｅｎｔｅｒ，Ｂｅｉｊｉｎｇ １００１９３，Ｃｈｉｎａ；３．Ｓｔａｔｅ Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ａｎｉｍａｌ Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ，Ｂｅｉｊｉｎｇ １００１９３，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ａ ｈｉｇｈ ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ ｌｉｑｕｉｄ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ （ＨＰＬＣ）ｍｅｔｈｏｄ ｗａｓ ｄｅｖｅｌｏｐｅｄ ｆｏｒ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｓｏｄｉｕｍ ｈｙｄｒｏ－ ｇｅｎ ｄｉａｃｅｔａｔｅ ｉｎ ｒａｗ ｍｉｌｋ．Ｐｒｏｔｅｉｎ ｗａｓ ｄｅｎａｔｕｒｅｄ ｗｉｔｈ ｐｈｏｓｐｈｏｒｉｃ ａｃｉｄ ｔｈｅｎ ｐｒｅｃｉｐｉｔａｔｅｄ，ａｎｄ ｔｒａｎｓｆｅｒ ｓｏｄｉｕｍ ｈｙｄｒｏｇｅｎ ｄｉａｃｅ－ ｔａｔｅ ｉｎｔｏ ａｃｅｔｉｃ ａｃｉｄ ｉｎ ｒａｗ ｍｉｌｋ，ｃｏｎｓｔａｎｔ ｖｏｌｕｍｅ，ｃｅｎｔｒｉｆｕｇｅｄ ａｎｄ ｔｈｅ ｓｕｐｅｒｎａｔａｎｔ ｓａｍｐｌｅ ｏｖｅｒ ｔｈｅ ｍｅｍｂｒａｎｅ．Ｔｈｅ ｔａｒｇｅｔ ｃｏｍ－ ｐｏｕｎｄ ｗａｓ ａｎａｌｙｚｅｄ ｂｙ ＨＰＬＣ ｗｉｔｈ ａｍｍｏｎｉｕｍ ｄｉｈｙｄｒｏｇｅｎ ｐｈｏｓｐｈａｔｅ ａｓ ｍｏｂｉｌｅ ｐｈａｓｅ，ｔｈｅ ｔａｒｇｅｔ ｗａｓ ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ ａｎｄ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ ｂｙ ｅｘｔｅｒｎａｌ ｓｔａｎｄａｒｄ ｍｅｔｈｏｄ．Ｉｎ ｔｈｅ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｒａｎｇｅ ｏｆ ０．０５ｔｏ ０．５０ ｍｇ／ｍＬ，Ｒ２ ｏｆ ｃａｌｉｂｒａｔｉｏｎ ｃｕｒｖｅ ｆｏｒ ｔｈｅ ｏｂｊｅｃｔ ｗａｓ ａｂｏｖｅ ０．９９．Ｔｈｅ ｒｅｃｏｖｅｒｙ ｏｆ ｔａｒｇｅｔ ｃｏｍｐｏｕｎｄ ｒａｎｇｅｄ ｆｒｏｍ ９０％ ｔｏ １１０％ ｗｉｔｈ ｒｅｌａｔｉｖｅ ｓｔａｎｄａｒｄ ｄｅｖｉａｔｉｏｎｓ ｏｆ １．０％ ｔｏ ４．１％． Ｔｈｅ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｌｉｍｉｔ ｗａｓ ０．０５ｇ／ｋｇ，
双乙酸钠
添 加 量 （ｇ／ｋｇ）
０．１０ ０．２０
表 １ 双 乙 酸 钠 的 加 标 回 收 率 和 精 密 度
检 测 值 （ｇ／ｋｇ）
样品１ ０．１１９６ ０．２０９０
样品２ ０．１２２０ ０．２０５３
样品３ ０．１２０７ ０．２０４９
样品４ ０．１１８８ ０．２０６２
样品５ ０．１１７４ ０．２０５１
关 键 词 ：高 效 液 相 色 谱 色 谱 （ＨＰＬＣ）；生 乳 ；双 乙 酸 钠 中 图 分 类 号 ：Ｓ８５９．８４ 文 献 标 识 码 ：Ａ 文 章 编 号 ：１６７１－７２３６（２０１３）增 刊－００３７－０２
双乙酸钠是中 国 批 准 使 用 的 一 种 防 腐 剂，只 允 许使用在 “基 本 不 含 水 的 脂 肪 和 油 ”的 食 品 中 （ＧＢ ２７６０－２０１１）；生乳含水约８８％、含脂肪平均 为 ４．０％ （王 加 启 ，２００６），按 照 国 家 标 准 ，生 乳 中 不 允 许 使 用 双乙酸钠。因此，有 必 要 开 发 生 乳 中 的 双 乙 酸 钠 的 检 测 方 法 ，监 控 生 乳 中 的 双 乙 酸 钠 。 目 前 ，国 家 标 准 《食品中双乙 酸 钠 的 测 定 高 效 液 相 色 谱 法》（ＧＢ／Ｔ ２３３８３－２００９）中 检 测 双 乙 酸 钠 的 方 法，适 用 于 豆 干 类、豆干 再 制 品、糕 点、预 制 肉 制 品、熟 肉 制 品、调 味 品、复合调 味 料、油 炸 小 食 品 （仅 限 油 炸 薯 片 ）等 食 品，不包含生乳。 吴 新 等 （２０１２）开 发 了 针 对 乳 制 品 中双乙酸钠的方法，生 乳 中 双 乙 酸 钠 的 检 测 方 法 至 今未见报道。作者旨在建立一种生乳样品双乙酸钠 的 简 便 、快 捷 和 准 确 的 高 效 液 相 色 谱 检 测 方 法 。 １ 材 料 与 方 法 １．１ 仪 器 与 试 剂 Ｗａｔｅｒｓ ２６９５ ＨＰＬＣ 色 谱 仪 配 置二 极 管 阵 列 检 测 器；Ａｔｌａｎｔｉｓ Ｔ３ Ｃ１８ ４．６ｍｍ× ２５０ｍｍ（５μｍ）色 谱 柱；分 析 天 平 （感 量 ０．１ ｍｇ 和 ０．０１ｇ）；离 心 机 （ＨＩＴＡＣＨＩ）；０．４５μｍ 微 孔 滤 膜、 水相；Ｍｉｌｌｉ－Ｑ 超 纯 水 器 （美 国 Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ公 司 ）。 双 乙酸钠（纯度 ≥９９．０％，美 国 Ｓｉｇｍａ公 司）；磷 酸 （分 析纯），磷酸氢二铵 （分 析 纯）。 生 乳 样 品：采 集 ５ 份 不同的生乳样品，４ ℃保存。 １．２ 试 验 溶 液 及 标 准 溶 液 配 制 磷 酸 溶 液：
回 收 率 （％ ）
９３．４～９７．９ ９０．４～９２．９
ＲＳＤ（％）
１．８ １．１
２．３ 准 确 度 由 不 同 的 操 作 者 ，采 用 本 方 法 对 添 加 双乙 酸 钠 的 １ 份 生 乳 样 品 进 行 检 测，添 加 量 为 ０．１０ｇ／ｋｇ（２倍检出 限）和 ０．２０ｇ／ｋｇ（４ 倍 检 出 限）， 共 进 行 ５ 批 次 试 验，每 批 次 同 一 添 加 浓 度 做 ５ 个 平 行，做实验室内准确度试验。结果表明双乙酸钠的平 均加标 回 收 率 为 ９３．４％ ～１０２．７％，相 对 标 准 偏 差 （ＲＳＤ）为１．０％～４．１％（表２），说 明 本 方 法 具 有 较 好
２ 结 果 与 讨 论 ２．１ 线性关系和检 出 限 准 确 吸 取 双 乙 酸 钠 标 准 储备液 ０．００、１．００、２．００、３．００、４．００、５．００ ｍＬ 于 １０ｍＬ容量瓶中，加入 ０．５ ｍＬ 磷 酸 溶 液，用 水 定 容 至刻度，摇匀，过０．４５μｍ 微 孔 滤 膜，获 得 浓 度 分 别 为０．００、０．１０、０．２０、０．３０、０．４０、０．５０ ｍｇ／ｍＬ 的 标 准工作溶液。按照 浓 度 由 低 到 高 顺 序 进 样，标 准 谱 图见图 １；以 浓 度 为 横 坐 标 （Ｘ），峰 面 积 为 纵 坐 标 （Ｙ），以峰面积对溶液质量浓度进行 线 性 回 归，得 到 回 归 方 程 Ｙ ＝ ４４０３１０Ｘ ＋ ５４３．６７，在 ０．０５ ～ ０．５０ｍｇ／ｍＬ范 围 内 线 性 关 系 良 好，相 关 系 数 Ｒ２＝ ０．９９９７，信 噪 比 （Ｓ／Ｎ）为 ３ 时 ，检 出 限 为 ０．０５ｇ／ｋｇ。 ２．２ 回收率和精密度 采 用 本 方 法 对 ５ 份 生 乳 样
表 ２ 双 乙 酸 钠 的 实 验 室 准 确 度 试 验
双乙酸钠
添加量（ｇ／ｋｇ） 批间回收率（％）
０．１０ ０．２０
９３．５～９５．７ ９３．４～１０２．７
ＲＳＤ（％） １．０ ４．１
的再现性。 ３ 结 论
本研究建 立 了 基 于 ＨＰＬＣ 检 测 生 乳 中 双 乙 酸 钠 的 检 测 方 法 ，具 有 较 好 的 精 密 度 和 准 确 度 。
中 国 标 准 出 版 社 ，２０１１． ４ ＧＢ／Ｔ ２３３８３－２００９．食品中双乙酸钠 的 测 定．高 效 液 相 色 谱 法．北
京 ：中 国 标 准 出 版 社 ，２００９．
Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ Ｓｏｄｉｕｍ Ｈｙｄｒｏｇｅｎ Ｄｉａｃｅｔａｔｅ ｉｎ Ｒａｗ Ｍｉｌｋ ｕｓｉｎｇ Ｈｉｇｈ Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ Ｌｉｑｕｉｄ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ
摘要：试验旨在建立高效液相色谱（ＨＰＬＣ）测定生乳中双乙 酸 钠 的 方 法。 生 乳 样 品 经 磷 酸 变 性 沉 淀 蛋 白，并 将 样 品 中 双 乙酸钠酸化转化为乙 酸，定 容，离 心 取 上 清 液，过 微 孔 滤 膜 后，以 磷 酸 二 氢 铵 为 流 动 相 进 行 ＨＰＬＣ 检 测，外 标 法 定 量。 在 ０．０５～０．５０ｍｇ／ｍＬ 浓度范围内，标准曲线 Ｒ２＝０．９９７，样 品 加 标 回 收 率 在 ９０％ ～１１０％ 之 间，相 对 标 准 偏 差 １．０％ ～４．１％。 此 方 法 检 出 限 为 ０．０５ｇ／ｋｇ。
参考文献
１ 王加启．现代奶牛养殖科学 ［Ｍ］．北京：中国农业出版社，２００６． ２ 吴新，包梦醒，余雯静，等．高 效 液 相 色 谱 法 测 定 牛 奶 中 的 双 乙
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ＺＨＡＮＧ Ｙａｎｇ－ｄｏｎｇ１，２，３，ＺＨＥＮＧ Ｎａｎ１，２，３，ＬＩ Ｓｏｎｇ－ｌｉ １，２，３，ＺＨＥＮＧ Ｓｈａｎ－ｓｈａｎ１，２，３， ＸＵ Ｘｉａｏ－ｍｉｎ１，２，ＷＡＮＧ Ｊｉａ－ｑｉ １，２，３
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物 质 的 液 相 色 谱 图
中国畜牧兽医 ２０１３年第４０卷 增刊
品 进 行 双 乙 酸 钠 本 底 值 检 测 ，检 测 结 果 表 明 ，采 集 的 ５份生乳样品不含有双乙酸钠。采用本方法对添加 双乙 酸 钠 的 ５ 份 生 乳 样 品 进 行 检 测。添 加 量 为 ０．１０ｇ／ｋｇ（２ 倍 检 出 限 ）和 ０．２０ｇ／ｋｇ（４ 倍 检 出 限 ）， 做方法回收率试验。结果表明双乙酸钠在２个添加 水平的平均加标回收率 ９０．４％ ～９７．９％ 之 间，相 对 标 准 偏 差 （ＲＳＤ）在 １．１％ ～１．８％ 之 间 （表 １）。 加 标 回收率和精密度符合《实验室质量控制规范 食品理 化 检 测 》（ＧＢ／Ｔ ２７４０４－２００８）要 求 。