霍山石斛多糖抗运动性疲劳的实验研究

（2）血乳酸的测定方法
a.检测意义：乳酸是糖无氧氧化（糖酵解）的代谢产物。乳 酸产生于骨胳，肌肉，脑和红细胞。经肝脏代谢后由肾分 泌排泌。血乳酸测定可反映组织氧供和代谢状态以及灌注 量不足。
b.检测原理：以NAD+为氢受体，LDH催化乳酸脱氢产生丙酮 酸，使NAD+转化成NADH。其中PMS递氢使NBT还原为紫色呈 色物，呈色物的吸光度在530mm时与乳酸含量成线性关系。
连续灌胃给药14d后开始进行力竭性游泳实验。小 鼠在长宽高为80*80*70厘米游泳池中游泳，水温保持30± 3℃。测定当天正常喂食、喂水，小鼠的负重量约为体质 量的1/10--1/20(约为3.0—4.0 g)，动物力竭判断标准按 thomas报道的文献标准为人工驱赶小鼠不停游泳至完全没 入水中8-10s不出水面即可定为力竭。
ODU——测定管吸光度值 ODB——空白管吸光度值 ODS——标准管吸光度值 CS——标准浓度（3mmol/L） N——样品测试前稀释倍数
（3）BUN的测定方法
a.检测原理:尿素被尿酶分解成二氧化碳和氨,在碱性条件 下,亚硝基铁氰化钠做催化剂,氨与苯酚和次氯酸钠反应生 成篮色的吲哚酚,在620或630nm波长测定吸光度值,计算其 含量。
霍山石斛多糖抗运动性疲劳的实验研究
前言
运动性疲劳是由于进行体育训练或锻炼而引起的 机体工作能力暂时降低的一种身体状态，是人体生理过程 的一种自然现象。随着现代竞技体育运动竞争的日益激烈 和运动强度的越来越大，导致大运动量训练或比赛后运动 员很容易出现各种运动性疲劳的现象，这就需要用科学的 手段予以消除：除了不断改进训练方法外，如何及时、有 效地补充能量物质，增强运动能力，尽快消除运动性疲劳， 正日益受到国内外学者的重视。近年来，应用运动补剂增 强运动能力和消除运动疲劳的研究十分活跃，许多学者指 出，运动补剂对提高运动能力和消除运动性疲劳有一定的
A(样)
A(标) ×C（标）
（4）MDA的测定方法
a.测定意义：机体通过酶系统与非酶系统产生自由基，后 者能攻击生物膜中的多不饱和脂肪酸，引发脂质过氧化作 用，并因此形成脂质过氧化物。如：醛基（丙二醛MDA）、 酮基、羟基、羰基、氢过氧基或内过氧基，以及新的氧自 由基等。脂质过氧化作用不仅把活性氧转化成活性化学剂， 即非自由基性的脂类分解产物，而且通过链式或链式支链 反应，放大活性氧的作用。因此，初始的一个活性氧能导 致很多脂类分解产物的形成，这些分解产物中，一些是无 害的，另一些则能引起细胞代谢及功能障碍，甚至死亡。 氧自由基不但通过生物膜中多不饱和脂肪酸的过氧化引起 细胞损伤，而且还能通过脂氢过氧化物的分解产物引起细 胞损伤。因而测试MDA的量常常可反映机体内脂质过氧化 的程度，间接地反映出细胞损伤的程度。
b.测试原理：过氧化脂质降解产物中的丙二醛（MDA）可 与硫代巴比妥酸（TBA）缩合，形成红色产物，在532nm处 有最大吸收峰。因底物为硫代巴比妥酸（TBA），所以此 法称TBA法。
c.实验操作步骤表
10nmol/ml标准品（ml） 无水乙醇（ml） 测试样品（ml） 试剂一（ml） 试剂二（ml） 试剂三（ml） 50%冰醋酸（ml）
c.实验操作步骤表
试 剂加样管 蒸馏水
空白管B（ml） 标准管S（ml） 测定管U（ml） 0.02
3mmol/L 标准液
0.02
样本
0.02
酶工作液
1
1
1
显色剂
0.2
0.2
0.2
混匀，37℃水浴准确反应10分钟
终止液
2
2
2
OD(U ) OD(B)
d.计算方法： 血清中乳酸（LD）含量= OD(S) OD(B) ×CS×N
1.石斛多糖的生物学功能
①降血糖作用 ②抗氧化、抗衰老作用 ③抗肿瘤作用 ④免疫调节作用
2.实验对象及方法
2.1实验对象
清洁级健康雄性昆明种小鼠（由同济医科大学动物 实验中心提供），6周龄，体质量(32.12±2.1)g，室温控 制在22-25℃。
2.2实验方法
随机分为4组，每组8只。阴性对照组:给予生理盐 水灌胃；阳性对照组:给予葡萄糖2g/(kg.d)灌胃；霍山石 斛多糖高剂量处理组:给予霍山石斛多糖450mg/(kg.d)灌 胃，霍山石斛多糖低剂量处理组：给予霍山石斛多糖150m g/(kg.d)灌胃。适应性饲养两周后进行实验。
作用。
21世纪以来，分子生物学的飞速发展以及对多糖生 物功能认识的不断深入，多糖的生物功能已被逐步揭示和 认识，多糖生物学研究成了国际争夺生物化学研究领域的 制高点，以多糖为重点的糖工程研究可能是继蛋白质工程、 基因工程后生物化学和分子生物学领域中的科学前沿，对 其提高运动能力和消除运动性疲劳的前瞻性研究也必将受 到广泛的关注。
b.实验操作步骤表：
试剂白管
标准管
样品管
工作试剂（ml）
0.3
0.3
0.3
标准液（ul）
—
10
—
样品（ul）
—
—
10
充分混合，37℃水浴10分钟
显色剂Ⅰ（ml）
0.2
0.2
0.2
显色剂Ⅱ（ml）
0.2
0.2
0.2
充分混合，37℃水浴5分钟，各管加3ml蒸馏水，混匀，上机测定。
c.计算方法：C（样）=
实验取材
将小鼠断头处死后，立即将血液收集到抗凝管中，取 肝组织密封放入冰箱中保存，待测。取材过程均由固定人 员操作完成。
实验中检测的指标 小鼠体重、游泳运动力竭时间、BUN、MDA、BLA、肝糖元
指标测定方法
（1）小鼠的力竭游泳时间 根据小鼠不停游泳至完全没入水中8-10s不出水面即
可定为力竭，然后记录每组小鼠力竭游泳时间。
标准管 *
标准空白管 *
*
*
混匀（摇动几下试管架）
3
3
1
1
测定管
* * 3 1
测定空白管
* * 3 1
d.计算方法：
血清中MDA含量= 测定管吸光度 — 测定空白管吸光度× 标准管吸光度 — 标准空白管吸光度
（5）肝糖元的测定方法
a.检测原理：肝糖原的正常含量约占肝重的5%肝和肌肉组 织中含量最高，因此适应于作糖原的提取和鉴定。糖原在 浓酸中可水解生成葡萄糖，浓硫酸能使葡萄糖进一步脱水 生成5-羟甲基呋喃甲醛，后者和蒽酮作用生成蓝色化合物， 与同样处理的标准葡萄糖溶液进行比色测定，可计算出糖 原含量。糖原在碱性溶液中非常稳定，显色前先将肝组织 放在浓碱中加热，可以使其它成分破坏，而保留肝糖原。