SDS电泳
电泳中sds的作用
电泳中sds的作用电泳是生物化学和分子生物学领域中常用的实验技术，用于分离和分析DNA、RNA和蛋白质等生物大分子。
其中，SDS（十二烷基硫酸钠）作为一种表面活性剂，在电泳中发挥着重要的作用。
本文将详细介绍SDS在电泳中的作用。
SDS在电泳中的作用之一是使样品蛋白质变性。
SDS具有疏水性，可以与蛋白质相互作用并破坏其原有的空间构象，使其变性为线性链状。
通过SDS的作用，蛋白质分子在电泳中呈现相同的负电荷密度，从而使蛋白质样品在电场中能够按照其分子量大小进行分离。
这种变性作用使得SDS电泳成为一种常用的蛋白质分子量测定方法。
SDS在电泳中的作用还包括给予蛋白质样品负电荷。
SDS在电泳缓冲液中的存在使得其能够与蛋白质发生静电相互作用，将蛋白质表面带上负电荷。
这种负电荷的引入使得蛋白质在电场中向阳极移动，从而实现了蛋白质的分离和测定。
SDS还起到了增加样品可视化效果的作用。
由于SDS与蛋白质发生相互作用，使得蛋白质变性并带负电荷，这样蛋白质样品在电泳过程中会变得更易染色。
在电泳分离后，我们可以使用染色剂如Coomassie Brilliant Blue来染色，使蛋白质呈现出明显的彩色带状条带，方便观察和分析。
SDS还能帮助样品在电泳过程中进行均匀地加热。
由于SDS具有良好的热稳定性，可以抵抗样品在电泳过程中的热变性。
在电泳的过程中，样品会因为电流通过而发热，SDS的存在可以帮助样品均匀地分散热量，防止样品局部过热而引起不均匀的电泳结果。
SDS还可以在电泳过程中起到稳定蛋白质的作用。
由于SDS与蛋白质的相互作用，可以使蛋白质在电泳过程中保持线性形态，防止蛋白质的聚集和凝固。
这种稳定作用可以使得蛋白质在电泳过程中更加均匀地分散，从而保证分离结果的准确性和重复性。
SDS在电泳中具有使样品蛋白质变性、给予负电荷、增加可视化效果、帮助样品均匀加热和稳定蛋白质的作用。
这些作用使得SDS成为电泳分离和分析中不可或缺的重要试剂。
SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质分子量
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5.“SDS — 聚丙稀酰胺凝胶电 泳法测定蛋白质分子量”一实验的开 设达到了与国内同类院校相当的较高 水平。
对本科生的实验教学、本科生的 论文设计、研究生的高级生化实验等 方面都充实了内容。
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（二）特点：
SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，是在 聚丙烯酰胺凝胶系统中引进SDS（十二 烷基磺酸钠）。
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蛋白质在一定浓度的含有强还原剂 的SDS溶液中，与SDS分子按比例结合， 形成带负电荷的SDS-蛋白质复合物。
蛋白质丧失了原有的电荷状态形成 仅保持原有分子大小为特征的负离子团 块，降低或消除了各种蛋白质分子之间 天然的电荷差异，因此在进行电泳时，
电泳分类：移动界面电泳、区带电泳等。
区带电泳 是在半固相或胶状介质上加一个点或一薄 层样品溶液，然后加电场，分子在支持介质上或支 持介质中迁移。
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区带电泳使用不同的支持介质，有
滤纸、纤维素粉、聚氯乙烯树脂、淀 粉凝胶、琼脂凝胶、醋酸纤维素膜， 现在则多用聚丙烯酰胺（PAGE）和 琼脂糖凝胶。
球蛋白（去年完成的基金项目）
（三）纯化免疫球蛋白G DEAE-离子交换纤维素法纯化免疫球蛋白G子量（ 连续四个单项实验）。
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（1）制胶（简单叙述）（双层胶，摸索胶浓度）
A.将玻璃板用蒸馏水洗净晾干, 准备2个干 净的锥形瓶。把玻璃板在灌胶支架上固定好。
开封后溶于200µl蒸馏水，置-20℃保存，使用前室温融化，沸水浴中加热3-5分钟后上样。
。 样品1：称3mg样品1，加2 ml蒸馏水溶解
SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳PAGE测定蛋白质分子量
02 实验材料
所需的试剂和溶液
丙烯酰胺（AA）：用于制备凝胶，是聚合反应 的单体。
甲叉双丙烯酰胺（MBA）：交联剂，增加凝胶 的交联度。
N,N,N',N'-四甲基乙二胺（TEMED）：催化剂， 加速交联聚合反应。
所需的试剂和溶液
过硫酸铵（APS）
引发剂，产生自由基，引发聚合反应。
SDS
十二烷基硫酸钠，用于变性蛋白质并促使其 带负电荷。
发展新型分离技术
随着生物技术的不断发展，可以发展新型的蛋白质分离技术， 如二维电泳、毛细管电泳等，以提高蛋白质分离的分辨率和准
确性。
应用多维度分析
在后续实验中，可以将SDS-PAGE与其他蛋白质分析技术相结 合，如质谱技术、免疫学检测等，进行多维度分析，更全面地
了解蛋白质的性质和功能。
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白质带负电荷，从而在电场中向正极移动。
聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质，能够根据蛋白质分子量的不同
03
对其进行分离。
蛋白质的分子量测定
通过比较标准蛋白的迁移率和已知分 子量的标准蛋白，可以大致测定出待 测蛋白质的分子量。
蛋白质的迁移率与其分子量的对数成 反比，因此可以通过计算待测蛋白与 标准蛋白的相对迁移率来推算其分子 量。
甘氨酸
作为分子量标准品。
Tris-HCl缓冲液
维持电泳过程中的pH值稳定。
所需的仪器和设备
电源
为电泳提供电力。
凝胶板
放置凝胶的框架。
垂直电泳槽
提供电泳所需的基 本结构。
移液器
精确添加试剂和溶 液。
紫外透射仪
检测蛋白质条带。
实验前的准备事项
清洗电泳槽和相关器具，确保无残留物。 准备好所需的试剂和溶液，并确保其在有效期内。
sds聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质相对分子量的原理;
sds聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质相对分子量的原理;
SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳是一种蛋白质分析方法，常用于测定蛋白质的相对分子量。
其原理是利用SDS（十二烷基硫酸钠）使蛋白质带负电，使蛋白质在凝胶中按照相对分子量大小进行分离。
具体原理如下：
1. SDS：SDS是一种表面活性剂，它可以与蛋白质发生结合，使得所有蛋白质带有相同的电荷密度。
2. 蛋白质解不性：在SDS存在条件下，蛋白质发生解性，其中SDS会形成不溶解的复合物，使蛋白质具有均一负电荷。
3. 凝胶电泳：将SDS处理后的蛋白质样品加于聚丙烯酰胺凝胶电泳胶板上，施加电场使蛋白质迁移。
4. 分离：由于凝胶电泳胶阻力不同，蛋白质经过一段时间后在凝胶上分离成锥形区带。
5. 相对分子量测定：在同一凝胶中，已知相对分子量已知的标准蛋白质样品与待测蛋白质样品进行分析，通过对比标准蛋白质样品的迁移距离和待测蛋白质样品的迁移距离，可以推算出待测蛋白质样品的相对分子量。
需要注意的是，由于SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳是以相对分子量进行分析的，所以对于蛋白质的准确分子量测定，还需结合其他方法如质谱等进行综合分析。
《中国药典》2020版—SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法
0541电泳法第五法 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法是一种变性的聚丙烯酰胺凝胶电泳方法。
SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法分离蛋白质的原理是根据大多数蛋白质都能与阴离子表面活性剂十二烷基硫酸钠(SDS)按重量比结合成复合物，使蛋白质分子所带的负电荷远远超过天然蛋白质分子的净电荷，消除了不同蛋白质分子的电荷效应，使蛋白质按分子大小分离。
本法适用于蛋白质的定性鉴别、纯度和杂质控制以及定量测定。
1.仪器装置恒压或恒流电源、垂直板电泳槽和制胶模具。
2.试剂(1)水 (去离子水，电阻率不低于18.2MΩ•cm)。
(2)分离胶缓冲液（4×，A液）：1.5mol/L三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲液称取三羟甲基氨基甲烷18.15g，加适量水溶解，用盐酸调pH值至8.8, 加水稀释至100ml。
(3)30%丙烯酰胺溶液（B液）：称取丙烯酰胺58.0g、N,N’-亚甲基双丙烯酰胺2.0g，加温水溶解并稀释至200ml，滤纸过滤(避光保存)。
(4)10%SDS溶液（C液）：称取十二烷基硫酸钠10g，加水溶解并稀释至100ml。
(5)四甲基乙二胺溶液（TEMED，D液）：商品化试剂，通常浓度为10%的N,N,N’,N’-四甲基乙二胺。
(6)10%过硫酸铵溶液（E液）：称取过硫酸铵10g，加水溶解并稀释至100ml。
建议临用前配制，或分装于-20℃可贮存2周。
(7)浓缩胶缓冲液（4×，F液）：0.5mol/L三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲液称取三羟甲基氨基甲烷6.05g，加适量水使溶解，用盐酸调pH值至6.8，加水稀释至100ml。
(8)电极缓冲液（10×）：称取三羟甲基氨基甲烷30g、甘氨酸144g、十二烷基硫酸钠10g ，加水溶解并稀释至约800ml，用盐酸调pH值至8.1-8.8之间，加水稀释至1000ml。
(9)非还原型供试品缓冲液（4×）：称取三羟甲基氨基甲烷3.03g、溴酚蓝20mg、十二烷基硫酸钠8.0g，量取甘油40ml，加水溶解并稀释至约80ml，用盐酸调节至pH6.8，加水稀释至100ml。
《中国药典》(2020版)SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳
第五法SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法（SDS-PAGE法）SDS-PAGE法是一种变性的聚丙烯酰胺凝胶电泳方法。
本法分离蛋白质的原理是根据大多数蛋白质都能与阴离子表面活性剂十二烷基硫酸钠（SDS）按重量比结合成复合物，使蛋白质分子所带的负电荷远远超过天然蛋白质分子的净电荷，消除了不同蛋白质分子的电荷效应，使蛋白质按分子大小分离。
本法用于蛋白质的定性鉴别、纯度和杂质控制以及定量测定。
1.仪器装置恒压或恒流电源、垂直板电泳槽和制胶模具。
2.试剂（1）水。
（2）分离胶缓冲液（4×，A液） 1.5moL/L三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲液称取三羟甲基氨基甲烷18.15g，加适量水溶解，用盐酸调节pH值至8.8，加水稀释至100mL。
（3）30%丙烯酰胺溶液（B液）称取丙烯酰胺58.0g、N,N-亚甲基双丙烯酰胺2.0g，加温水溶解并稀释至200mL，滤纸过滤（避光保存）。
（4）10%SDS溶液（C液）称取十二烷基硫酸钠10g,加水溶解并稀释至100mL。
（5）四甲基乙二胺溶液（TEMED，D液）商品化试剂。
（6）10%过硫酸铵溶液（E液）称取过硫酸铵10g，加水溶解并稀释至100mL。
建议临用前配制，或分装于-20℃可贮存2周。
（7）浓缩胶缓冲液（4×，F液）0.5moL/L三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲液称取三羟甲基氨基甲烷6.05g，加适量水使溶解，用盐酸调pH值至6.8，加水稀释至100mL。
（8）电极缓冲液（10×）称取三羟甲基氨基甲烷30g、甘氨酸144g、十二烷基硫酸钠10g，加水溶解并稀释至约800mL，用盐酸调节pH值至8.1~8.8之间，加水稀释至1000mL。
（9）非还原型供试品缓冲液（4×）称取三羟甲基氨基甲烷3.03g、溴酚蓝20mg、十二烷基硫酸钠8.0g，量取甘油40m1，加水溶解并稀释至约80mL，用盐酸调节pH值至6.8，加水稀释至100mL。
sds聚丙烯酰胺凝胶电泳标准曲线_概述及解释说明
sds聚丙烯酰胺凝胶电泳标准曲线概述及解释说明1. 引言1.1 概述在生物化学研究领域中，SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳是一种常用的技术。
它被广泛应用于蛋白质分子量测定、鉴定和纯化等方面。
准确绘制和使用SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳标准曲线对于确定样品中蛋白质的相对分子量非常重要。
1.2 文章结构本文将围绕SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳标准曲线展开详细阐述与解释，主要包括以下几个部分：引言、SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳标准曲线概述、SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳方法与步骤解释、建立SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳标准曲线的实验步骤和要点解说明、结论与展望。
1.3 目的本文的目的是全面介绍和解释SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳标准曲线的概念、意义和用途。
同时，还将详细阐述如何进行样品制备与处理、凝胶制备与电泳条件的解释以及凝胶图谱分析方法的说明。
此外，本文还会详细描述实验步骤和要点，帮助读者建立SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳标准曲线，并对结果进行分析和解读。
最后，结论部分将总结研究目的、讨论研究结果的启示和展望未来的研究方向。
通过本文的阐述，读者将能够全面了解SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳标准曲线并正确应用于相关实验中。
2. SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳标准曲线概述2.1 SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳简介SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳是一种常用的蛋白质分离和分析技术。
其基本原理是根据蛋白质的分子量差异，利用SDS（十二烷基硫酸钠）和聚丙烯酰胺凝胶的作用，将蛋白质样品分离成不同迁移距离的条带。
2.2 标准曲线意义与用途标准曲线是根据已知浓度的标准样品制备的一系列溶液，通过测定这些溶液在SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳中的迁移距离和色谱峰面积得到。
标准曲线可以在定量分析时用于确定未知蛋白质样品的浓度。
2.3 研究背景与重要性在生物学、医学和生化等领域中，了解蛋白质样品的浓度是很重要的。
使用SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳标准曲线可以帮助我们准确计算样品中的蛋白质浓度。
这对于研究蛋白质功能、进行药物研发以及诊断和治疗疾病等具有重要意义。
sds-聚丙烯酰胺凝胶电泳 名词解释
sds-聚丙烯酰胺凝胶电泳是一种常用的蛋白质分离和分析技术，该技术通过在凝胶电泳过程中使用一种带有离子表面活性剂SDS（十二烷基硫酸钠）的聚丙烯酰胺凝胶，可以将蛋白质分子进行线性化处理，从而使其在电场中按照分子质量大小进行迁移，最终实现对蛋白质的分离和分析。
sds-聚丙烯酰胺凝胶电泳技术是生物化学和分子生物学领域中最重要的实验技术之一。
它被广泛应用于蛋白质的分离、鉴定和定量分析，并且对于蛋白质的结构和功能研究具有不可替代的作用。
在科学研究、医学诊断和生物工程领域中都有着重要的应用价值。
本篇文章将从以下几个方面来介绍sds-聚丙烯酰胺凝胶电泳技术，包括其原理、应用、实验操作步骤以及相关的意义和发展趋势。
一、原理sds-聚丙烯酰胺凝胶电泳技术的原理主要包括以下几个方面：1. SDS线性化蛋白质：SDS是一种带有强烈负电荷的表面活性剂，在凝胶电泳过程中，SDS可以与蛋白质分子中的亲水残基相结合，并使蛋白质分子呈线性状态，从而使蛋白质的电泳迁移速率与其分子质量成正比。
2. 分子质量分析：在电泳过程中，由于SDS的作用，所有蛋白质分子都被线性化处理，并且蛋白质分子的迁移速率只与其分子质量大小有关，因此可以根据蛋白质在凝胶中的迁移距离来推断其分子质量。
3. 分离效果：由于SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳技术对蛋白质进行了线性化处理，因此不同分子质量大小的蛋白质分子可以在凝胶中得到有效分离，形成清晰的电泳带。
二、应用sds-聚丙烯酰胺凝胶电泳技术主要应用于以下几个方面：1. 蛋白质分离与鉴定：通过sds-聚丙烯酰胺凝胶电泳技术，可以将混合蛋白质样品有效地分离并形成清晰的电泳带，便于后续的蛋白质鉴定和分析。
2. 蛋白质定量：在实验室中，可以利用sds-聚丙烯酰胺凝胶电泳技术对蛋白质样品进行定量分析，根据样品中的蛋白质含量来确定实验结果。
3. 蛋白质结构和功能研究：通过sds-聚丙烯酰胺凝胶电泳技术可以实现对不同蛋白质的分子量测定，为进一步的结构和功能研究提供重要数据支持。
sds聚丙烯酰胺凝胶电泳
sds聚丙烯酰胺凝胶电泳
SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）是一种常用的蛋
白质分离和分析方法。
工作原理：SDS（十二烷基硫酸钠）是一种阴离子表面活性剂，可以让蛋白质以线性二级结构展开。
在电泳过程中，SDS与蛋白质结合，给蛋白质赋予等电点电荷，使得蛋白
质以质量为依据进行分离。
聚丙烯酰胺是一种用于凝胶电
泳的材料，通过聚合后形成凝胶，可以限制蛋白质的运动，使其按照大小分子量在凝胶中迁移。
步骤：
1. 准备凝胶：将聚丙烯酰胺溶液制备成凝胶，通常是在平
板上铺设。
2. 样品预处理：将需要分离的蛋白质样品与SDS等混合，再加入还原剂，使其煮沸变性化。
这样可以让所有蛋白质
在电泳过程中以线性形式展开。
3. 输运样品：将蛋白质样品加入凝胶孔隙中。
4. 电泳：通电使蛋白质样品在凝胶中迁移，较大分子量的
蛋白质迁移速度较慢，较小分子量的蛋白质迁移速度较快。
5. 可视化：通过染色方法（如Coomassie蓝染色）将蛋白质可视化，并观察分析结果。
SDS-PAGE广泛应用于蛋白质分离、分析和纯化等领域，
例如鉴定蛋白质大小、检测蛋白质含量、分离复杂样品中
的蛋白质等。
SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳
在电场的作用下，小分子蛋白质可以 容易地通过凝胶孔径，而大分子蛋白 质则受到较大的阻力，无法通过，从 而实现蛋白质的分离。
SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳的应用
蛋白质组学研究
SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳是蛋白质 组学研究中常用的分离方法，可用于 蛋白质的表达、纯化、鉴定和功能研 究。
实时监测与数据分析
引入实时监测技术和数据分析软件，可以实时监测电泳进程并获 取更准确的数据，为后续分析提供有力支持。
应用拓展
临床诊断
SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳在临床诊断中发挥着越来越重要的作用， 可用于检测和鉴别疾病相关的蛋白质标志物。
生物医药研究
SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳在生物医药研究中广泛应用于蛋白质组 学、药物筛选和生物标志物发现等领域。
sds－聚丙烯酰胺凝胶电泳
目 录
• SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳简介 • SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳实验操作 • SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳的结果分析 • SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳的优缺点 • SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳的发展趋势
01 SDS－聚丙烯酰胺凝胶电 泳简介
SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳的定义
准备凝胶制备所需材料
根据实验需求，准备适量的丙烯酰胺、 N,N'-甲叉双丙烯酰胺、SDS、 TEMED等材料。
制备缓冲液
根据电泳条件选择适当的缓冲液，如 TAE或TBE，并配置适量的浓度。
准备样品
将待测样品进行适当处理，如超声破 碎或离心取样。
操作步骤
制备凝胶
点样
按照一定比例将丙烯酰胺、N,N'-甲叉双丙 烯酰胺、SDS、TEMED混合，加入适量的 水搅拌均匀后倒入电泳槽中。
蛋白质相对分子质量的测定——SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法
蛋白质相对分子质量的测定——SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法一、实验目的1、学会SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法原理。
2、掌握用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质相对分子质量的操作技术。
二、实验原理SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）是对蛋白质进行量化，比较及特性鉴定的一种经济、快速、而且可重复的方法。
该法主要依据蛋白质的分子量对其进行分离。
SDS与蛋白质的疏水部分相结合，破坏其折叠结构，并使其稳定地存在于一个广泛均一的溶液中。
SDS-蛋白质复合物的长度与其分子量成正比。
由于在样品介质和聚丙烯酰胺凝胶中加入离子去污剂和强还原剂后，蛋白质亚基的电泳迁移率主要取决于亚基分子量的大小，而电荷因素可以被忽略。
SDS-PAGE因易于操作和广泛的用途，使它成为许多研究领域中一种重要的分析技术。
Acr和bis单独存在或混合在一起时是稳定的，但在具有自由基团体系时就能聚合。
引发自由基的方法有化学法和光化学法两种。
化学法的引发剂是过硫酸铵（Ap），催化剂十四甲基乙二胺（TEMED）；光化学法是以光敏感物核黄素来代替过硫酸铵，在紫外光照射下引发自由基团。
采用不同浓度的acr、bis、Ap、TEMED使之聚合，产生不同孔径的凝胶。
因此可按分离物质的大小、形状来选择凝胶浓度。
SDS是十二烷基硫酸钠（sodium dodecyl sulfate）的简称，它是一种阴离子表面活性剂，加入到电泳系统中能使蛋白质的氢键和疏水键打开，并结合到蛋白质分子上（在一定条件下，大多数蛋白质与SDS的结合比为1.4gSDS/1g蛋白质），使各种蛋白质-SDS复合物都带上相同密度的负电荷，其数量远远超过了蛋白质分子原有的电荷量，从而掩盖了不同种类蛋白质间原有的电荷差别。
这样就使电泳迁移率只取决于分子大小这一因素，于是根据标准蛋白质分子量的对数和迁移率所作的标准曲线，可求得未知物的分子量。
三、实验器材及数据30%分离胶储存液、10%浓缩胶储存液、分离胶缓冲液、浓缩胶缓冲液、电泳缓冲液、样品溶解液、染色液、脱色液；标准蛋白，样品蛋白；电泳槽，移液管1ml，烧杯100ml四、注意事项1、acr和bis均为神经毒剂，对皮肤有刺激作用，操作时应戴口罩和手套，纯化应在通风处内进行。
(完整版)SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳实验报告
分子生物学实验报告实验名称：SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳班级：生工xxx姓名：xxx同组人：xxx学号：xxxx日期：xxxxSDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳1 引言SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）是目前分离蛋白质亚基并测定其分子量的常用方法，为检测电泳后凝胶中的蛋白质，一般使用考马斯亮蓝（CBB）染色[1]。
本次实验的目的在于学习聚丙烯酰胺凝胶电泳的原理，并掌握聚丙烯酰胺凝胶垂直板电泳分离蛋白质的操作技术。
2 材料和方法2.1实验原理2.1.1 聚丙烯酰胺凝胶的性能及制备原理2.1.1.1 性能聚丙烯酰胺凝胶的机械性能好，有弹性，透明，相对地化学稳定，对pH和温度变化比较稳定，在很多溶剂中不溶，是非离子型的，没有吸附和电渗作用。
通过改变浓度和交联度，可以控制孔径在广泛的范围内变动，并且制备凝胶的重复性好。
由于纯度高和不溶性，因此还适于少量样品的制备，不致污染样品。
2.1.1.2 制备原理聚丙烯酰胺凝胶是用丙烯酰胺（Acr）和交联剂甲叉双丙烯酰胺（Bis）在催化剂的作用下聚合而成。
聚丙烯酰胺凝胶聚合的催化系统有化学聚合和光聚合两种。
本实验是用化学聚合。
化学聚合的催化剂通常多采用过硫酸铵（AP）或过硫酸钾，此外还需要一种脂肪族叔胺作加速剂，最有效的加速剂是N,N,N’,N’-四甲基乙二胺（TEMED）。
在叔胺的催化下，由过硫酸铵形成氧的自由基，后者又使单体形成自由基，从而引发聚合反应。
叔胺要处于自由碱基状态下才有效，所以在低pH时，常会延长聚合时间；分子氧阻止链的延长，妨碍聚合作用；一些金属也能抑制聚合；冷却可以使聚合速度变慢。
通常控制这些因素使聚合在1小时内完成，以便使凝胶的性质稳定。
聚丙烯酰胺凝胶电泳和SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳有两种系统，即只有分离胶的连续系统和有浓缩胶与分离胶的不连续系统，不连续系统中最典型、国内外均广泛使用的是著名的Ornstein-Davis高pH碱性不连续系统，其浓缩胶丙烯酰胺浓度为4％，pH = 6.8，分离胶的丙烯酰胺浓度为12.5％，pH = 8.8。
sds聚丙酰胺凝胶电泳法
sds聚丙酰胺凝胶电泳法一、原理SDS聚丙酰胺凝胶电泳法（Sodium Dodecyl Sulfate-Polyacrylamide Gel Electrophoresis，简称SDS-PAGE）是一种常用的蛋白质分离和定量分析方法。
它基于蛋白质在电场作用下的电泳迁移性质，利用聚丙酰胺凝胶作为分离介质，通过SDS对蛋白质进行表面带负电荷的包被，使其在电场中按照分子质量大小进行分离。
二、步骤1. 制备凝胶：将聚丙酰胺和交联剂加入缓冲液中，搅拌均匀后，倒入凝胶模具中，插入梳子，待凝胶凝固。
2. 样品处理：将待分析的蛋白质样品与SDS-PAGE样品缓冲液混合，再加热至95℃，使样品中的蛋白质与SDS充分结合。
3. 蛋白质分离：将凝固的凝胶取出，放入电泳槽中，注入电泳缓冲液，将样品注入样品孔中，通电进行电泳分离。
4. 染色与成像：电泳结束后，将凝胶取出，进行染色处理，常用的染色剂有Coomassie蓝染液和银染液，然后进行成像。
三、应用SDS-PAGE广泛应用于生物化学和分子生物学领域，具有以下几个方面的应用：1. 蛋白质分离与纯化：SDS-PAGE可将复杂的蛋白质混合物按照分子质量大小进行分离，进而可进行纯化和提取目标蛋白质。
2. 蛋白质定量：通过与蛋白质质量标准品进行比较，可以估算待测蛋白质的相对分子质量。
3. 蛋白质组学研究：SDS-PAGE是蛋白质组学研究中最基本的技术手段之一，用于分析复杂蛋白质混合物中的不同蛋白质。
4. 蛋白质结构分析：通过SDS-PAGE与其他技术手段的结合，可以研究蛋白质的结构、功能和相互作用。
总结：SDS-PAGE作为一种常用的蛋白质分离和定量分析方法，在生物化学和分子生物学领域发挥着重要作用。
通过该方法，可以分离、纯化和定量各种蛋白质，为后续的研究提供基础数据。
同时，SDS-PAGE也为蛋白质组学研究和蛋白质结构分析等提供了重要的技术支持。
SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳
SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳该技术首先在1967年由Shapiro建立，1969年由Weber和Osborn进一步完善。
一、原理聚丙烯酰胺凝胶是由丙烯酰胺 (简称Acr) 和交联剂N，N’—亚甲基双丙烯酰胺（简称Bis）在催化剂作用下，聚合交联而成的具有网状立体结构的凝胶，并以此为支持物进行电泳。
聚丙烯酰胺凝胶电泳可根据不同蛋白质分子所带电荷的差异及分子大小的不同所产生的不同迁移率将蛋白质分离成若干条区带，如果分离纯化的样品中只含有同一种蛋白质，蛋白质样品电泳后，就应只分离出一条区带。
SDS是一种阴离子表面活性剂能打断蛋白质的氢键和疏水键，并按一定的比例和蛋白质分子结合成复合物，使蛋白质带负电荷的量远远超过其本身原有的电荷，掩盖了各种蛋白分子间天然的电荷差异。
因此，各种蛋白质-SDS 复合物在电泳时的迁移率，不再受原有电荷和分子形状的影响，而只是棒长的函数。
这种电泳方法称为SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（简称SDS—PAGE）。
由于SDS-PAGE 可设法将电泳时蛋白质电荷差异这一因素除去或减小到可以略而不计的程度，因此常用来鉴定蛋白质分离样品的纯化程度，如果被鉴定的蛋白质样品很纯，只含有一种具三级结构的蛋白质或含有相同分子量亚基的具四级结构的蛋白质，那么SDS—PAGE 后，就只出现一条蛋白质区带。
SDS—PAGE 可分为圆盘状和垂直板状、连续系统和不连续系统。
本实验采用垂直板状不连续系统。
所谓“不连续”是指电泳体系由两种或两种以上的缓冲液、pH 和凝胶孔径等所组成。
1．样品的浓缩效应在不连续电泳系统中，含有上、下槽缓冲液(Tris—Gly，、浓缩胶缓冲液(Tris—HCl，、分离胶缓冲液(Tris—HCl，，两种凝胶的浓度(即孔径)也不相同。
在这种条件下，缓冲系统中的HCl 几乎全部解离成Cl－，两槽中的Gly (pI＝，pK a=只有很少部分解离成Gly 的负离子，而酸性蛋白质也可解离出负离子。
sds聚丙烯酰胺凝胶电泳作用
sds聚丙烯酰胺凝胶电泳作用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳是一种常用的蛋白质分离技术，它利用SDS（十二烷基硫酸钠）和聚丙烯酰胺凝胶的特性，将蛋白质分离出来。
这种技术在生物化学、分子生物学、生物医学等领域中得到广泛应用。
SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳的原理是利用SDS将蛋白质分子的电荷中和，使其在电场中按照分子量大小进行迁移。
SDS是一种表面活性剂，它能够与蛋白质分子中的氢键和疏水作用相互作用，使蛋白质分子变成带有负电荷的线性分子。
这样，所有蛋白质分子的电荷都变得相同，它们在电场中的迁移速度只与分子量有关。
聚丙烯酰胺凝胶是一种高分子化合物，它能够形成一种网状结构，使蛋白质分子在凝胶中进行分离。
聚丙烯酰胺凝胶的孔径大小是可以调节的，因此可以根据需要选择不同的凝胶孔径，以实现对不同分子量的蛋白质进行分离。
SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳的操作步骤如下：1. 准备样品：将待分离的蛋白质样品加入SDS-PAGE样品缓冲液中，加入还原剂（如β-巯基乙醇）使蛋白质分子还原成单体状态。
2. 加载样品：将样品加入凝胶槽中，通常使用微量注射器或吸管进行操作。
3. 电泳：将凝胶槽放入电泳槽中，加入电泳缓冲液，通电进行电泳。
电泳时间和电压根据需要进行调节。
4. 染色：将凝胶取出，进行染色。
通常使用银染法或考马斯亮蓝染色法。
SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳可以实现对蛋白质的分离和定量。
在分离过程中，蛋白质分子按照分子量大小进行迁移，最终形成一条条带状物。
这些带状物可以通过染色或Western blotting等方法进行检测和定量。
SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳的优点是分离效果好、操作简单、成本低廉。
它可以用于分离各种类型的蛋白质，包括单一蛋白质、复合物、酶、抗体等。
此外，它还可以用于检测蛋白质的纯度和含量，以及研究蛋白质的结构和功能。
SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳是一种重要的蛋白质分离技术，它在生物化学、分子生物学、生物医学等领域中得到广泛应用。
它的原理简单、操作方便、分离效果好，是研究蛋白质的重要工具之一。
电泳中sds的作用
电泳中sds的作用电泳是一种在生物学和化学实验中常用的分离和分析技术，而十二烷基硫酸钠（SDS）则是电泳过程中不可或缺的一部分。
SDS具有许多重要的作用，包括溶解样品、分离蛋白质、提供质量标准和减少不均一性。
下面将详细介绍SDS在电泳中的作用及其原理。
首先，SDS在电泳中的一个重要作用是溶解样品。
电泳技术往往需要在水溶液中处理样品，而SDS是一种表面活性剂，可以有效地将溶液中的蛋白质分子包裹起来，并使其具有良好的溶解性。
SDS具有疏水性的烷烃尾部和亲水性的二十碳酸酯头部，这使得它能够与蛋白质结合并在水溶液中形成稳定的复合物。
通过与SDS相结合，溶解样品的蛋白质能够在电泳过程中更均匀地分布，并且可以被有效地输送到电泳凝胶中。
其次，SDS在电泳中起到分离蛋白质的作用。
在电泳过程中，SDS 会与蛋白质发生静电相斥的作用，使蛋白质带负电荷。
这样，当电场施加在电泳凝胶上时，带负电荷的蛋白质会朝着阳极迁移。
由于不同蛋白质的分子质量不同，它们在电场下的迁移速率也会不同，从而实现蛋白质的分离。
通过SDS电泳，可以将复杂的混合物中的蛋白质分离并测定其相对分子质量。
此外，SDS也是电泳中提供质量标准的重要组成部分。
为了准确测定蛋白质的相对分子质量，必须使用已知相对分子质量的标准品进行校正。
SDS-PAGE（聚丙烯酰胺凝胶电泳）是一种常用的电泳技术，使用SDS来提供这种质量标准。
在SDS-PAGE中，已知质量的蛋白质标准品被加入到电泳样品中。
通过与标准品一起进行电泳，可以通过相对迁移距离的比较来确定未知样品的相对分子质量。
SDS起到标准化样品迁移速率和提供质量标准的作用，确保了蛋白质测量结果的准确性和可重复性。
最后，SDS还能够减少样品不均一性。
样品中的蛋白质在电泳过程中常常会受到空间限制和电场效应的影响，导致蛋白质迁移的不均匀性。
而SDS的作用是使蛋白质带有相同的电荷密度，从而平衡迁移速率，减少迁移的不均匀性。
这种均匀迁移的效果使得蛋白质能够在电泳过程中更加准确地分离。
sds工作浓度
sds工作浓度
SDS（十二烷基硫酸钠）是一种表面活性剂，常用于生化实验中的蛋白质电泳。
在蛋白质电泳过程中，SDS用于给蛋白质分子赋予负电荷，使其呈线性构象，从而消除蛋白质本身的电荷差异，使蛋白质能够在电场中按照大小分离。
SDS的工作浓度通常是在蛋白质电泳缓冲液中使用。
典型的SDS 工作浓度为0.1%至0.5%（w/v）。
这表示每100毫升缓冲液中含有0.1克至0.5克的SDS。
需要注意的是，具体使用的SDS浓度可能会因实验条件、蛋白质样品的性质和目标电泳的分辨率等因素而有所变化。
实验室通常根据实验的具体要求来调整SDS的浓度。
在电泳缓冲液中添加SDS的目的是：
1.蛋白质线性化：SDS能够与蛋白质结合，使蛋白质呈现线性形
状，消除其自身电荷分布的影响，从而使蛋白质在电场中按照
大小分离。
2.电泳缓冲：SDS在电泳缓冲液中提供离子，有助于电流的传导，
确保蛋白质能够在电场中移动。
在使用SDS时，实验者应当注意操作规范，遵循实验室的安全操作流程，同时按照实验方案中的建议使用适当的浓度。
什么是SDS电泳
什么是SDS-PAGE电泳？什么是电泳？借用瑞典物理化学家，诺贝尔奖金获得者Arne Tiselius 所定义的：电泳是指荷电的胶体颗粒在电场中的运动。
聚丙烯酰胺凝胶电泳简称PAGE（Polyacrylamide gel electrophoresis ）,是以聚丙烯酰胺作为支持介质的一种常用电泳技术。
聚丙烯酰胺凝胶由单体丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺聚合而成。
聚合过程由自由基催化形成。
催化聚合的常用方法有两种：化学聚合法和光聚合法。
化学聚合以过硫酸铵（AP）为催化剂，以四甲基乙二胺为加速剂。
在聚合过程中TEMED 催化过硫酸铵产生自由基，后者引发丙烯酰胺单体聚合，同时甲叉双丙烯酰胺与丙烯酰胺链间产生甲叉键交联，从而形成三维网状结构。
PAGE根据其有无浓缩效应，分为连续性电泳和非连续性电泳两大类，连续电泳体系中缓冲液PH值及凝胶浓度相同。
带电颗粒在电场作用下，主要靠电荷和分子筛效应。
不连续系统中由于缓冲液离子成分、PH凝胶浓度及电位梯度的不连续性，带电颗粒在电场中涌动不仅有电荷效应，分子筛效应，还具有浓缩效应，因而其分离条带清晰度及分辨率均较前者佳。
不连续体系由电极缓冲液、浓缩胶及分离胶所组成。
浓缩胶是由AP催化而成的大孔胶，凝胶缓冲液为PH6.8的Tris-Hcl。
分离胶是由AP催化成的小孔胶，凝胶缓冲液为PH8.8的Tris-Hcl。
电极缓冲液时PH 8.3的Tris甘氨酸缓冲液。
2种孔径的凝胶，2种缓冲体系3种PH值使不连续孔径形成了凝胶孔径、PH值、缓冲液离子成分的不连续性，这是样品浓缩的主要因素。
蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶种电泳时，它的迁移率取决于它所带静电荷以及分子的大小、形状等因素。
如果加入一种试剂使电荷因素消除，那电泳迁移率就取决于分子的大小，就可以用电泳技术测定蛋白质的分子量。
1967年Shapiro等发现阴离子去污剂十二烷硫酸钠（SDS）具有这种作用。
1、样品如何让处理？根据样品分离目的的不同，可分为三种处理办法：还原SDS处理、非还原SDS 处理、带有烷基化作用的还原SDS处理。
sds凝胶电泳原理
SDS-PAGE（聚丙烯酰胺凝胶电泳）是一种用于分离蛋白质的常见技术，SDS （十二烷基硫酸钠）是其中的一个重要组成部分。
以下是SDS-PAGE的基本原理：
1. 凝胶制备：SDSPAGE中使用的凝胶通常是聚丙烯酰胺凝胶。
凝胶的浓度可以调整，用于分离不同大小范围的蛋白质。
通常使用较低浓度的凝胶用于分离大分子量的蛋白质，而较高浓度的凝胶则用于小分子量的蛋白质。
2. 蛋白样品处理：要分析的蛋白样品需要先经过SDS处理。
SDS是一种表面活性剂，能够赋予所有蛋白质负电荷，且在含有β-巯基丙醇等还原剂的条件下，使蛋白质保持在变性状态。
3. 电泳：处理过的蛋白样品被加载到凝胶的孔中，然后通过电泳进行分离。
由于SDS的存在，蛋白质在电场作用下会以一个已知的速度移动，且其迁移速度与其分子量成线性关系。
4. 蛋白分离：由于凝胶的结构和电场的作用，蛋白质将根据其分子量在凝胶中移动。
较小分子量的蛋白质会移动得更远，而较大分子量的蛋白质则会停留在凝胶的上部。
5. 电泳终止：电泳进行一定时间后，蛋白质已经根据分子量分离。
此时，电泳会被终止，凝胶可以被取出进行染色和可视化。
6. 染色和可视化：通常使用染色剂如银染或考马斯亮蓝染色来将蛋白质可视化。
这些染色剂与蛋白质结合，使其在凝胶上形成可见的带状条带。
SDS-PAGE广泛应用于生物化学和分子生物学研究中，可用于确定蛋白质的相对分子量、纯度，以及对比不同样品中的蛋白质组成。
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二. 实验原理
1)
SDS电泳的成功关键之一是电泳过程中, SDS电泳的成功关键之一是电泳过程中,待别 电泳的成功关键之一是电泳过程中 是样品制备过程中蛋白质与SDS的结合程度. SDS的结合程度 是样品制备过程中蛋白质与SDS的结合程度.影 响它们结合的因素主要有三个: 响它们结合的因素主要有三个: 溶液中SDS单体的浓度, SDS单体的浓度 溶液中SDS单体的浓度,当单体浓度大于 1mmol/L时大多数蛋白质与SDS结合的重量比 时大多数蛋白质与SDS 1mmol/L时大多数蛋白质与SDS结合的重量比 1:1.4,如果单休浓度降到0.5 mmol/L以下 为1:1.4,如果单休浓度降到0.5 mmol/L以下 两者的结合比仅为1: 0.4这样就不能消除蛋 时,两者的结合比仅为1: 0.4这样就不能消除蛋 白质原有的电荷差别,为保证蛋白质与SDS SDS的充 白质原有的电荷差别,为保证蛋白质与SDS的充 分结合,它们的重量比应该为1:4 1:4或 分结合,它们的重量比应该为1:4或1:3 样品缓冲液的离子强度.SDS电泳的样品缓冲液 样品缓冲液的离子强度.SDS电泳的样品缓冲液 离子强度较低,通常是10 10～ 离子强度较低,通常是10～100mmol/L 二硫键是否完全被还原
SDSSDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 PAGE) (PAGE)测定蛋白质分子量
授课教师: 授课教师:
一. 实验目的
学习 SDS-PAGE 测定蛋白质分子量的原 学习SDS PAGE测定蛋白质分子量的原 SDS理. 掌握垂直板电泳的操作方法. 掌握垂直板电泳的操作方法. 运用 SDS-PAGE 测定蛋白质分子量及染 运用SDS PAGE测定蛋白质分子量及染 SDS色鉴定. 色鉴定.
SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳,是在聚丙烯酰胺凝胶系统中 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳,
二. 实验原理
引进SDS 十二烷基磺酸钠) 引进SDS(十二烷基磺酸钠), SDS能断裂分子内和分 SDS( SDS能断裂分子内和分 子间氢键,破坏蛋白质的二级和三级结构, 子间氢键,破坏蛋白质的二级和三级结构,强还原剂能使 半胱氨酸之间的二硫键断裂, 半胱氨酸之间的二硫键断裂,蛋白质在一定浓度的含有强 还原剂的SDS溶液中, SDS分子按比例结合 SDS溶液中 分子按比例结合, 还原剂的SDS溶液中,与SDS分子按比例结合,形成带负 电荷的SDS 蛋白质复合物, SDS电荷的 SDS- 蛋白质复合物 , 这种复合物由于结合大量的 SDS, SDS,使蛋白质丧失了原有的电荷状态形成仅保持原有分 子大小为特征的负离子团块, 子大小为特征的负离子团块,从而降低或消除了各种蛋白 质分子之间天然的电荷差异,由于SDS SDS与蛋白质的结合是 质分子之间天然的电荷差异,由于SDS与蛋白质的结合是 按重量成比例的,因此在进行电泳时, 按重量成比例的,因此在进行电泳时,蛋白质分子的迁移 速度取决于分子大小.当分子量在15KD到200KD之间时, 15KD KD之间时 速度取决于分子大小.当分子量在15KD到200KD之间时, 蛋白质的迁移率和分子量的对数呈线性关系,符合下式: 蛋白质的迁移率和分子量的对数呈线性关系,符合下式: logMW=K-bX,式中:MW为分子量 为分子量, 为迁移率, logMW=K-bX,式中:MW为分子量,X为迁移率,k,b 均为常数, 均为常数,若将已知分子量的标准蛋白质的迁移率对分子 量对数作图,可获得一条标准曲线, 量对数作图,可获得一条标准曲线,未知蛋白质在相同条 件下进行电泳, 件下进行电泳,根据它的电泳迁移率即可在标准曲线上求 得分子量. 得分子量.
2.实验试剂 2.实验试剂
(7)10%过硫酸铵(AP) 10%过硫酸铵 过硫酸铵(AP) TEMED(四甲基乙二胺) (8)TEMED(四甲基乙二胺) 样品溶解液:SDS(100mg) 巯基乙醇(0.1ml) (9)样品溶解液:SDS(100mg)+巯基乙醇(0.1ml)+ 溴酚蓝(2mg) 甘油(2g) pH8.0Tris溴酚蓝(2mg)+甘油(2g) +0.05mol/L pH8.0TrisHCl(2ml),最后定容至10ml. HCl(2ml),最后定容至10ml. ),最后定容至 10)固定液: 50%甲醇 甲醇454ml,冰乙酸46ml混匀 混匀. (10)固定液:取50%甲醇454ml,冰乙酸46ml混匀. 11)染色液:称取考马斯亮蓝R250 0.125g, (11)染色液:称取考马斯亮蓝R250 0.125g,加上述固定液 250ml, 过滤后备用. 250ml, 过滤后备用. 12)脱色液:冰乙酸75ml,甲醇50ml, (12)脱色液:冰乙酸75ml,甲醇50ml,加蒸馏水定容至 1000ml. 1000ml. 13)电极缓冲液(内含0.1%SDS,0.05mol/LTris(13)电极缓冲液(内含0.1%SDS,0.05mol/LTris0.384mol/L甘氨酸缓冲液 0.384mol/L甘氨酸缓冲液pH8.3):称Tris6.0g,甘 氨酸28.8g, 甘氨酸缓冲液pH8.3): Tris6.0g, 氨酸28.8g, ):称 加入SDS1g,加蒸馏水使其溶解后定容至1000ml. 加入SDS1g,加蒸馏水使其溶解后定容至1000ml.
2) 3)
二. 实验原理
采用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测蛋白质分子量时,只 采用SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳法测蛋白质分子量时, SDS有完全打开二硫键, 蛋白质分子才能被解聚,SDS才能 有完全打开二硫键, 蛋白质分子才能被解聚,SDS 才能 定量地结合到亚基上而给出相对迁移率和分子量对数的线 性关系.因此在用SDS处理样品同时往往用巯基乙醇处理, SDS处理样品同时往往用巯基乙醇处理 性关系.因此在用SDS处理样品同时往往用巯基乙醇处理, 巯基乙醇是一种强还原剂, 巯基乙醇是一种强还原剂,它使被还原的二硫键不易再氧 从而使很多不溶性蛋白质溶解而与SDS定量结合. SDS定量结合 化,从而使很多不溶性蛋白质溶解而与SDS定量结合. 有许多蛋白质是由亚基( 如血红蛋白) 有许多蛋白质是由亚基 ( 如血红蛋白 ) 或两条以上肽链 如胰凝乳蛋白酶)组成的,它们在SDS SDS和巯基乙醇作用 (如胰凝乳蛋白酶)组成的,它们在SDS和巯基乙醇作用 解离成亚基或单条肽链,因此这一类蛋白质, 下,解离成亚基或单条肽链,因此这一类蛋白质,测定时 只是它们的亚基或单条肽链的MW MW. 只是它们的亚基或单条肽链的MW. 已发现有些蛋白质不能用SDS PAGE测定分子量 SDS测定分子量. 已发现有些蛋白质不能用 SDS-PAGE 测定分子量 . 如电 荷异常或构象异常的蛋白质,带有较大辅基的蛋白质( 荷异常或构象异常的蛋白质,带有较大辅基的蛋白质(某 些糖蛋白)以及一些结构蛋白,如胶原蛋白等. 些糖蛋白)以及一些结构蛋白,如胶原蛋白等.
二 .实验原理
带电质点在电场中向带有异相电荷的电极移动 , 这 带电质点在电场中向带有异相电荷的电极移动,
种现象称为电泳. 种现象称为电泳. 电泳分类:移动界面电泳,区带电泳,稳态电泳. 电泳分类:移动界面电泳,区带电泳,稳态电泳. 区带电泳是在半固相或胶状介质上加一个点或一薄 层样品溶液, 然后加电场, 层样品溶液 , 然后加电场 , 分子在支持介质上或支 持介质中迁移. 持介质中迁移 . 支持介质的作用主要是为了防止机 械干扰和由于温度变化以及大分子溶液的高密度而 产生的对流. 产生的对流. 区带电泳使用不同的支持介质, 早期有滤纸, 区带电泳使用不同的支持介质 , 早期有滤纸 , 玻璃 淀粉粒, 纤维素粉, 海砂, 海绵, 珠 , 淀粉粒 , 纤维素粉 , 海砂 , 海绵 , 聚氯乙烯树 以后有淀粉凝胶, 琼脂凝胶, 醋酸纤维素膜, 脂 ; 以后有淀粉凝胶 , 琼脂凝胶 , 醋酸纤维素膜 , 现在则多用聚丙烯酰胺(PAGE)和琼脂糖凝胶. 现在则多用聚丙烯酰胺(PAGE)和琼脂糖凝胶.
2.实验试剂 2.实验试剂
(1) 30%丙烯酰胺(Acr):称Acr30g,甲Bis)0.8g,加蒸馏水至100ml,过滤后置棕色瓶中, (Bis)0.8g,加蒸馏水至100ml,过滤后置棕色瓶中, 4℃贮存可用1-2月. 贮存可用1 10%SDS(十二烷基磺酸钠) (2)10%SDS(十二烷基磺酸钠) Tris-HCl缓冲液 称取Tris18.2g, 缓冲液: (3)1.5mol/L pH8.8 Tris-HCl缓冲液:称取Tris18.2g, 加入50ml 50ml水 1mol/L盐酸调pH8.8, 盐酸调pH8.8 加入50ml水,用1mol/L盐酸调pH8.8, 最后用蒸馏 水定容至100ml. 水定容至100ml. (4)1.0mol/LpH6.8Tris-HCl缓冲液:称取Tris12.1g,加 1.0mol/LpH6.8Tris-HCl缓冲液:称取Tris12.1g, 缓冲液 50ml水 1mol/L盐酸调 盐酸调pH6.8, 入50ml水,用1mol/L盐酸调pH6.8, 最后用蒸馏水 定容至100ml. 定容至100ml. 0.05mol/LpH8.0Tris-HCl缓冲液 称取Tris0.6g, 缓冲液: (5)0.05mol/LpH8.0Tris-HCl缓冲液:称取Tris0.6g,加 50ml水 1mol/L盐酸调 盐酸调pH8.0, 入50ml水,用1mol/L盐酸调pH8.0,最后用蒸馏水定 容至100ml. 容至100ml.
二. 实验原理
采用 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测蛋白质分子量时 , 采用SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳法测蛋白质分子量时, SDS往往采取2种以上测定方法结合使用. 往往采取2 种以上测定方法结合使用. 目前其他常用 测定相对分子量的方法有: 测定相对分子量的方法有: 聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳法测定蛋白质的相对分子量 有浓缩样品特点,可分次加样;不需解离亚基, (有浓缩样品特点,可分次加样;不需解离亚基,适 宜测定球蛋白, 而对纤维蛋白有误差. 电泳需2000 宜测定球蛋白 , 而对纤维蛋白有误差 . 电泳需 2000 伏特小时) 伏特小时) 凝胶层析法测定蛋白质相对分子量(特点方法简单, 凝胶层析法测定蛋白质相对分子量(特点方法简单, 样品用量少,而且有时不需纯物质, 样品用量少,而且有时不需纯物质,一般不引起生物 活性物质的变化.局限性是pH pH6 的范围内, 活性物质的变化.局限性是pH6-8的范围内,线性关 系比较好, 但在极端pH pH时 系比较好 , 但在极端 pH 时 , 蛋白质有可能因变性而 偏离. 偏离.)