不同烟草品种花粉粒形态的激光共聚焦扫描显微镜观察_何川生
烟草花粉活力鉴定方法筛选
烟草花粉活力鉴定方法筛选首先，准备工作。
在鉴定烟草花粉活力之前，需要准备一些必要的试剂和设备，如：1.恒温培养箱：用于提供花粉萌发的温度和湿度条件。
2.显微镜：用于观察花粉颗粒的形态和活力。
3.青霉素涂布皿：用于培养花粉萌发。
4.目数适中的玻片和盖玻片：用于制备花粉悬液和观察花粉。
接下来，进行烟草花粉活力鉴定的步骤如下：步骤一：鲜花采集和花粉收集选择处于花粉释放期的烟草植株，傍晚或早晨适宜采集。
首先将外层被子叶、内层被子叶和雄蕊取下，并在显微镜下进行操作，以保证搜集纯净的花粉。
然后用清洁的玻璃杯将花粉收集起来。
步骤二：制备花粉悬液取少量采集到的花粉放入少量蒸馏水中，用玻璃棒轻轻搅拌，使花粉均匀分散在水中。
然后将悬液过滤，去除其中的杂质，得到纯净的花粉悬液。
步骤三：制备培养基将适量的蔗糖和琼脂加入无菌蒸馏水中，搅拌均匀，加热至溶解。
然后将溶液倒入青霉素涂布皿，使其凝胶化。
步骤四：花粉萌发实验取一块培养基凝胶，用无菌的玻璃棒在上面均匀涂抹一层花粉悬液，并放入恒温培养箱中，保持适宜的温度和湿度。
观察花粉在培养基上的萌发情况，并记录萌发率。
步骤五：鉴定花粉活力萌发率较高的花粉颗粒通常表明花粉活力较高，反之则较低。
根据萌发情况和萌发率，对不同花粉进行鉴定和筛选。
在鉴定过程中，还可以使用显微镜观察花粉颗粒的形态和活力。
如果花粉颗粒呈饱满而充实的状态，且胞质活泼，表明其活力较高；如果呈干瘪或变色的状态，胞质发生变化，表明其活力较低。
综上所述，通过以上鉴定方法和步骤，可以对烟草花粉活力进行有效的筛选和鉴定。
通过筛选出高活力的花粉颗粒，可以为烟草杂交育种提供有力的支持。
烟草花粉活力鉴定方法筛选
烟草花粉活力鉴定方法筛选李宗平，张俊杰*，彭灏，王文明，郭宇龙，徐世平，陈茂胜，李进平（湖北省烟草科研所，中国烟草白肋烟试验站，武汉430030）摘要：以白肋烟B37花粉为试验材料，对花粉活力鉴定方法进行了分析比较，并设计了培养配方、培养温度、培养时间等15种花粉活力鉴定方法。
结果表明，花粉离体培养萌发测定花粉活力是较为理想的烟草花粉活力鉴定方法，其中葡萄糖（3%）+硼酸（50 mg/L）+CaCL2（20 mg/L）、蔗糖（10%）+硼酸（50 mg/L）+CaCL2（20 mg/L）25 ℃恒温暗箱保湿培养3 h，花粉萌发率最高，新鲜花粉活力分别为86.8%和91.3%。
关键词：花粉；萌发；花粉管中图分类号：Screening for Optimum Method of Tobacco Pollen Vigor EvaluationLI Zongping, ZHANG Junjie*, PENG Hao, WANG Menming,GUO Yulong, XU Shiping, CHEN Maoshen, LI Jinping(Burley Tobacco Experimental Station of CNTC, Tobacco Research Institute of Hubei Province, Wuhan 430030, China)Abstract: With the experimental material of Burley B37 pollen, various tobacco pollen vigor evaluation methods were compared. The results indicated that pollen germination was the best method for identifying pollen vigor. With the formula of 3% glucose, 50 mg/l boric acid, 20 mg/l CaCl2 and 10% sucrose, 50 mg/l boric acid, 20 mg/l CaCl2, cultivating 3 h under 25℃ constant temperature, the percentage of pollen germination was the highest. The pollen vigor was 86.8% and 91.3% respectively.Key words: pollen; germination; pollen tube植物花粉活力即花粉萌发力（germinability）是指花粉在适宜条件下萌发的能力[1]。
烟草叶片表面腺毛形态的扫描电镜观察
［１２］ 张友玉，陈良碧．烟草叶片组织结构的扫描电镜观察方法［Ｊ］．电子显 微学报，２０００，１９：１５４－１５７．
［１３］ Ｇｏｆｆｒｅｄａ ＪＣ， Ｓｚｙｍｋｏｗｉａｋ ＥＪ， Ｓｕｓｓｅｘ ＩＭ， ｅｔ ａｌ． Ｃｈｉｍｅｒｉｃ ｔｏｍａｔｏ ｐｌａｎｔｓ ｓｈｏｗ ｔｈａｔ ａｐｈｉｄ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ａｎｄ ｔｒｉａｃｙｌｇｌｕｃｏｓｅ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ａｒｅ ｅｐｉｄｅｒｍａｌ ａｕｔｏｎｏｍｏｕｓ ｃｈａｒａｃｔｅｒｓ［Ｊ］．Ｐｌａｎｔ Ｃｅｌｌ．，１９９０，２：６４３－６４９．
合物称为“烟油”）。烟草腺毛的形态结构与其分泌功能 有密切的关系［４￣７］，对烟草腺毛形态和密度的研究已有 一些文献报道［８￣１１］。本文用扫描电镜对烟草叶片表面腺 毛的形态进行了观察，以期为烟草叶片表面腺毛形态 与功能关系的探讨提供依据。 １ 材料与方法 １．１ 植物材料
烟草（Ｎｉｃｏｔｉａｎａ ｔａｂａｃｕｍ Ｌ． ）栽培品种 Ｋ３４６ 种植
［２］ Ｗａｇｎｅｒ ＧＪ， Ｗａｎｇ Ｅ， Ｓｈｅｐｈｅｒｄ ＲＷ． Ｎｅｗ ａｐｐｒｏａｃｈｅｓ ｆｏｒ ｓｔｕｄｙｉｎｇ ａｎｄ ｅｘｐｌｏｉｔｉｎｇ ａｎ ｏｌｄ ｐｒｏｔｕｂｅｒａｎｃｅ， ｔｈｅ ｐｌａｎｔ ｔｒｉｃｈｏｍｅ ［Ｊ］． Ａｎｎ． Ｂｏｔ． （Ｌｏｎｄ．），２００４，９３：３－１１．
［８］ 刘云，陈今朝，韩善华．烟草叶片腺毛的研究［Ｊ］．四川师范大学学报 （自然科学版），２００３，２６（７）：４１４－４１６．
［９］ 杨铁钊，李伟，李钦奎，等．烤烟叶面腺毛密度及其分泌物变化动态 的相关分析［Ｊ］．中国烟草科学，２００５．（１）：４３－４６．
4种山茶属植物花粉形态的扫描电子显微观察
4种山茶属植物花粉形态的扫描电子显微观察薛晓明;周用武;方彦【摘要】为了给山茶属植物的研究提供孢粉学资料,验证花粉形态在植物识别与鉴定应用中的可行性,应用扫描电子显微镜对山茶科山茶属4种植物的花粉表面微形态进行了观察和研究.结果表明,4种山茶属植物花粉在形状、大小、P/E值和外壁纹饰等方面均存在明显的种间差异,其花粉外壁纹饰分属不同的类型:金花茶(Camellia nitidissima)网状,凹脉金花茶(Camellia im pressinervis)近脑纹状(近蠕虫状纹饰),蒙自连蕊茶(Camellia forrestii)皱波状,贵州连蕊茶(Camellia costi)皱网状,其中,贵州连蕊茶的网脊上密布疣点(疣状突起),可能是一个进化特征；4种植物的P/E值和P值呈明显的正相关(r2=0.8272),具有较大的P/E值和P值的两种连蕊茶组植物处于较高的进化地位,山茶属不同种植物花粉外壁纹饰和P/E值反映了物种间的差异,也反映出近缘物种间一定的进化和亲缘关系,可为组间分类及进化关系研究提供孢粉学依据.%In order to provide palynological information for genus Camellia plant, and verify the feasibility of plant recognition and identification using pollen, four cultivars pollen morphology of Camellia were observed under SEM. The results indicated that obvious differences existed among pollen morphology of four species on shape, size, P/E and exine ornamentation. Exine ornamentation could be recognized as Camellia nitidissima , Camellia impressinervis, Camellia forrestii and Camellia costi. Verrucate in the lophoreticulate of C. Costi could be defined as evolution characteristics. Correlation analysis of P/E and P (r2 =0. 827 2) showed obvious positive correlation. Two species of C. Fraternal with high P/E and P should be in the evolution of high status. The pollen exineornamentation and P/E of different species of Camellia could reflect revolution relationship in certain degree and would serve as palynology basis for study of species classification and revolution relationship.【期刊名称】《贵州农业科学》【年(卷),期】2012(040)005【总页数】4页(P25-28)【关键词】山茶属;花粉;扫描电子显微镜;纹饰;P/E值【作者】薛晓明;周用武;方彦【作者单位】南京森林警察学院国家林业局野生动植物物证鉴定中心,江苏南京210046;南京森林警察学院国家林业局野生动植物物证鉴定中心,江苏南京210046;南京森林警察学院国家林业局野生动植物物证鉴定中心,江苏南京210046【正文语种】中文【中图分类】S572花粉是种子植物特有的结构，其形状大小、萌发孔的数目和位置，以及外壁的纹饰等具有种的特异性，可以作为植物识别和鉴定的分类依据。
一种鉴定烟草内生真菌多样性的方法[发明专利]
![一种鉴定烟草内生真菌多样性的方法[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/39b697e776c66137ef061928.png)
专利名称：一种鉴定烟草内生真菌多样性的方法
专利类型：发明专利
发明人：张鹏,李盼盼,袁晓龙,申国明,高林,李金海,李青成,高加明,王瑞
申请号：CN201711202160.4
申请日：20171127
公开号：CN109837334A
公开日：
20190604
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明提出了一种鉴定烟草内生真菌多样性的方法，包括烟草基因组DNA的提取、PCR扩增真菌的ITS‑rDNA基因、PCR产物的测序、克隆文库的构建测序、Blast序列比对和系统发生树的构建。
本发明提供一种快速鉴定烟草内生真菌多样性的方法，实现通过烟草DNA的提取，直接利用真菌的ITS‑rDNA基因进行扩增，节约了时间成本，突破了传统的分离鉴定方法，省去了大量菌丝样本的获得和培养，同时也可以鉴定到一些不可培养的内生真菌种类，会很大程度上提高工作效率；同时通过克隆文库的构建测序，不但可以降低实验成本，也有效的提高了烟草内生真菌多样性获得的几率，对于快速检测烟草内生真菌的种类、有目的的进行目标菌丝的分离纯化具有重要的指导意义。
申请人：中国农业科学院烟草研究所
地址：266000 山东省青岛市崂山区科苑经四路11号
国籍：CN
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西瓜花粉自发荧光特征与荧光成像效果分析
西瓜花粉自发荧光特征与荧光成像效果分析乔飞;江雪飞;张彦【摘要】With watermelon pollen as the material,the spectrum and intensity of the autofluorescenee were investigated,and the photographyof the autofluorescence of pollens were optimized combined with Apotome microscope.The results showed that the maximum intensity of autofluorescence was in blue spectrum;The intensity of autofluorescence in fresh pollens fluctuated only slightly during storage;And the autofluorescence was located mainly on the reticula.After staining the pollens with aniline blue,calcofluor white,propidiumiodide,acridine orange respectively,the other parts could also be fluorescent in specific channels.Therefore,the optimized method could be not only suitable for observing the size,shape,reticulum,aperture and germ furrow,but also indicate the distribution of chemical composition.%以西瓜的花粉为材料,研究西瓜花粉自发荧光的光谱特征、荧光强度,并结合结构照明显微技术优化花粉自发荧光成像方法.结果表明:西瓜花粉的自发荧光在蓝色波段最强;新鲜花粉在储藏过程中荧光强度变化不大;西瓜花粉的自发荧光主要位于花粉外壁网纹上;分别用苯胺蓝、Calcofluor white、碘化丙啶、吖啶橙对西瓜花粉染色后,花粉的其他部位在不同荧光通道下也可以呈现荧光.因此,本研究建立的方法不仅可用于分析西瓜花粉的大小、形态、外壁纹理、萌发孔、萌发沟等形态特征,还可以反映花粉表面荧光物质分布的特征.【期刊名称】《热带作物学报》【年(卷),期】2017(038)012【总页数】5页(P2355-2359)【关键词】花粉;西瓜;荧光;染色;结构照明显微镜【作者】乔飞;江雪飞;张彦【作者单位】中国热带农业科学院热带作物品种资源研究所农业部华南作物基因资源与种质创制重点开放实验室海南儋州 571737;海南大学热带农林学院,海南海口 570228;卡尔蔡司(上海)管理有限公司,上海200131【正文语种】中文【中图分类】Q944.57花粉是种子植物特有的结构，具有较强的遗传保守性，不同种类植物的花粉粒在形状、大小、外壁和纹理等方面都有着明显的差别。
烟草种子表面微生物电镜观察与计数
*本研究为国家烟草专卖局科教司94～060课题资助项目 本文承蒙合肥经济技术学院方宇澄教授审阅,谨致谢意张大鸣原料学系副主任微生物专业硕士研究生收稿日期1997-03-18烟草种子表面微生物电镜观察与计数张大鸣 冯 王韦 于黎莎(合肥经济技术学院原料学系 安徽 230052) 摘 要 本研究对45个烟草品种的种子表面微生物进行了扫描电镜观察,结果表明:93.3%被观察品种的种子表面有微生物着生,其中包括某些多细胞丝状微生物,单细胞杆状与球状微生物。
利用改进后的分离方法,对我国10个烟草生产主要推广品种进行了种子表面微生物计数,结果表明,每克供试品种的烟草种子细菌数量平均为2.3×105～1.9×107个,放线菌数量为3.9×101～4.1×102个,真菌数量为2.0×103～3.8×104个。
主题词 烟草种子 表面微生物 电镜观察 计数 烟草是一种重要的经济作物。
烟草的种子很小,平均千粒重为0.06～0.09g [1,4]。
Tso (1991)认为,1克种子约有10000～11000粒。
Lucas(1975)认为,烟草种子是几种烟草病原物的携带者,可导致苗期和大田期烟草病害。
华致甫等(1994)的研究表明,烟草种子赤星病的带菌率为18%,野火病的带菌率为8%～16%。
由于烟草种子小,比重轻,种子表面微生物的观察和计数难度较大。
因此,国内外文献中对烟草种子带菌数量和种子表面微生物的着生方式等尚未见报道。
本研究旨在利用扫描电子显微镜对烟草种子表面微生物的形态和着生方式进行观察,配合实验室内平板计数法测定不同来源与不同品种烟草种子表面微生物的主要类群与数量。
1 材料与方法1.1 烟草种子本研究供扫描电镜观察的种子包括烤烟品种23个,白肋烟品种6个,晒晾烟品种8个及香料烟品种8个。
供平板计数的烟草种子多为我国烟草生产中的主要推广品种,包括烤烟品种6个,晒晾烟品种2个及香料烟品种2个。
[烟草亚细胞定位]农杆菌瞬时侵染烟草-激光扫描共聚焦法
![[烟草亚细胞定位]农杆菌瞬时侵染烟草-激光扫描共聚焦法](https://img.taocdn.com/s3/m/e8c47eb56f1aff00bfd51e41.png)
[植物科学领域]利用农杆菌侵染烟草进行体内瞬时表达的方法Method for transient expression in vivo by infecting tobacco with Agrobacterium一、原理（Principle）烟草叶片的瞬时表达系统常用来进行基因的亚细胞定位监测，监测蛋白在细胞中分布的位置，从而对其功能进行预测。
通过基因翻译的蛋白与绿色荧光蛋白构成融合蛋白，在激光共聚焦仪器下观测绿色荧光的分布，判断蛋白表达的部位。
同时，还可根据荧光的光强度检测蛋白的表达量。
该过程是经根癌农杆菌介导的，进而将目的基因整合到到烟草的细胞内的。
Tobacco leaf transient expression systems are often used to monitor the subcellular localization of genes, monitor the distribution of proteins in cells, and predict their function. The gene translated protein and green fluorescent protein constitute a fusion protein. The distribution of green fluorescence is observed under a laser confocal instrument to determine the protein expression site. At the same time, the expression level of the protein can also be detected based on the light intensity of the fluorescence. This process is mediated by Agrobacterium tumefaciens, which integrates the gene of interest into tobacco cells.二、材料与试剂1. 携带表达载体的农杆菌菌株（通常表达载体由35S启动子驱动）2. 2-4周的烟草植株3. LB培养基4. 乙酰丁香酮5. MES: 2-(N-吗啉代)乙磺酸6. 抗生素7. 注射器Materials and reagents1. Agrobacterium strain carrying an expression vector (usually the expression vector is driven by the 35S promoter)2. Tobacco plants for 2-4 weeks3.LB medium4.Acetosyringone5.MES: 2- (N-morpholino) ethanesulfonic acid6.Antibiotics7. syringe三、仪器1. 50 ml 离心管2. 光谱仪3. 紫外灯4. 荧光显微镜Third, the instrument1. 50 ml centrifuge tube2. spectrometer3. UV lamp4. fluorescence microscope四、步骤1. 挑取单克隆于5 ml LB液体培养中，28~30°C震荡培养。
云南烟草病虫害防治课件3李为争精讲
四、烟草病害防治的主要方法
（四）农业防治 ? （1）轮作和间作套种：需考虑病原物在土壤中的存活年限、
病原物的寄主范围和前茬作物三个方面。“四年两头种烟” 的轮作可以控制烟草黑胫病； ? （2）调整播栽期：控制烟草生育期，使烟草最容易感病的 时期和病原物大量侵入的时期错开； ? （3）加强栽培管理：主要是平衡营养供应、土壤整理、及 时的水分供应、烟草植株控制合理密度。尤其是肥水管理 是病害防治中最关键的因素； ? （4）卫生栽培、清洁田园，选用无病中苗。
上必须表现出相同症状的病害； ? 从接种发病的植物上能再次分离到这种病原物。
柯赫氏法则的局限性
? 不能证实尚不能在合成培养基上培养的专性寄生物，或者 未找到合适的接种方法使寄主发病的生物；
? 非侵染性病害，或者非生物因素和生物因素共同作用引起 的病害；
? 两种病原生物之间存在协同现象的病害； ? 寄主体外致病生物，例如某些土壤病菌不直接寄生在植物
?重治轻防的错误思想导致错失最佳防治时机，带药移栽落 实不力，单一防治往往造成顾此失彼！
?有效药剂的缺乏使防治工作更加被动。 ?目前没有特效药物，农用链霉素仅具有一定的预防作 用。
（二）烟草野火病的症状与防治
? 先形成褐斑，随后相邻病斑愈合成不规则大斑，上有不规则轮纹，表 面产生粘稠菌脓。天气干燥时病斑开裂脱落，叶片破碎。
行，及时拔除田间病株。 （4）适合轮作的有小麦、玉米、谷子、芝麻、甘薯，不适合与茄科植物
和十字花科植物轮作； （5）移栽后适当断水炼苗，团棵末期浇上旺长水。 （三）抗病毒药剂：博联生物菌素、菌克毒克、金叶宝、83-增效剂、植
病灵、病毒必克、菌毒清、病毒A等。体现一个“早”字，移栽前1次， 每隔7-10 d用药一次，需要2-3次。
云南烟草病虫害防治课件4(李为争)剖析
（六）加强田间管理：
1、“分类指导，控水增温，促根护根”：
栽后2周检查根系发育，明确高风险烟田：还苗慢、根系差、土 壤湿粘、根冠比失衡、“根黑腐”烟苗；
抓住高温少雨时机，加强前期田间管理，促根抑病 早中耕高培土；在前期低温多雨过后则应早揭膜中耕培土 早摘除下部老叶 对于高风险烟田控制大水浇烟，可早揭膜或两侧开膜散湿增 温，促根快发； 对于已经存在根系生长受阻甚至褐变腐烂的烟苗，在使用甲 基托布津或甲霜灵时，采用拌药土封窝护根代替药液灌根。
提醒： 对于有机质含量较高的烟田，在保健栽培中应增施充 分腐熟的有机肥（精有机肥），以免烟株贪青晚熟； 石灰或白云石粉可隔年使用，不必连年使用； 在施肥中尽量不使用含铁的肥料。
（五）高质量移栽
秋深翻、早起垄、高畦宽垄，大穴深栽、栽实；不用简易移栽器！ 剔除病苗、弱苗、虚苗；定根水适量（半斤-1斤） 移栽时可以适当窝施基质材料，增强根部的通透性， 如果移栽时土壤湿粘，可以穴施有机物（如秸秆腐熟粉碎物）以
前期多雨时：多次剪叶促根、适当迟栽有助于防治青枯病、 花叶病
遇成苗慢、苗弱时可以推广膜下小苗早栽！！！
早栽，盖膜晚 适期移栽，及时盖膜
（四）平衡的营养供应与吸收
1、围绕建立以烟为主的耕作制度，坚决执行合理轮作，并坚持 土壤改良，创造有利于烟株发育而抑制病害的土壤生态条件。所 有的烟田都尽可能轮作。作物轮作是当前防治根茎病害最有效的 措施！
系统施药：带药移栽、栽后10天左右、揭膜前、雨季之前。若使用微 生物农药防治青枯病，第一次剂量要大，且不能混用化学农药！防治 叶斑病：打顶前、初烤期、初发期、流行期（连阴雨或大雾前）；
交替用药：选择连阴雨之前或雨后晴日的上午10点或下午4点前后， 喷1次，3－5天后再交替喷施其它杀菌剂1次，然后视田间病情发展情 况喷洒。为了促进成熟落黄，可以混喷1％～2％的磷酸二氢钾。对于 分层落黄明显营养平衡的烟田，田间仅有零星的赤星病大斑时，适 当防治即可。如果叶片上新出现较多小病斑，则应立即组织防治。
用激光扫描共聚焦显微镜定量检测烟草花粉自发荧光强度
用激光扫描共聚焦显微镜定量检测烟草花粉自发荧光强度何川生;卢秀萍
【期刊名称】《中国烟草科学》
【年(卷),期】1998(019)004
【摘要】应用激光扫描共聚焦显微镜对３个类型共６个烟草材料的花粉自发荧光强度进行了定量检测，发现不同类型及品种之间花粉自发荧光强度存在明显差异，应用ＬＳＣＭ检测烟草花粉自发荧光强度可做为烟草品种鉴别的重要依据。
【总页数】3页(P30-32)
【作者】何川生;卢秀萍
【作者单位】云南省烟草科学研究所;云南省烟草科学研究所
【正文语种】中文
【中图分类】S572.023
【相关文献】
1.烟草种子不同成熟时期形态特征的激光扫描共聚焦显微镜观察 [J], 卢秀萍;何川生;孔光辉
2.激光扫描共聚焦显微镜在花粉研究中的应用 [J], 刘振国;华子义
3.用激光扫描共聚焦显微镜观察雪松花粉和花粉管 [J], 李国平;黄群策;秦广雍
4.不同类型烟草花粉自发荧光强度比较研究 [J], 何川生;卢秀萍;许介眉
5.激光扫描共聚焦显微镜对一串红花粉粒的三维重建 [J], 丁亮;沈明山;邵寒娟;陈睦传
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利用可见—近红外光谱鉴定不同香型风格烤烟的方法
利用可见—近红外光谱鉴定不同香型风格烤烟的方法Method of Identifying Flue-cured Tobacco with Different Aroma Types Based on Visible and Near-Infrared SpectroscopyWANG Yiding，ZHAO Mingqin*，FU Bo，YUE Heng（National Tobacco Cultivation and Physiology and Biochemistry Research Center of Henan Agricultural University，Zhengzhou *****，China）Abstract：In order to achieve rapid discrimination of different Flue-cured tobacco aroma types，visible and near-infrared spectroscopy was used to obtain the characteristic spectral information of intrinsic chemical composition of three types of flue-cured tobacco including the full，middle and clean aroma types. The full-wave band of original characteristic spectra were selected for spectral pretreatment by normalized treatment，Savitzky-Golay，multiplicative scatter correction and standard normal variate. The principal component analysis （PCA）was applied to perform the clustering analysis，and a qualitative discrimination model of the three flue-cured tobacco arama styles combined with partial least squares-discriminant analysis （PLS-DA）was built. The results showed that the calibration and validation sets of PLS-DA model were identified as having good performance with an accuracy of 100%. The results suggested that this method using visible and near-infrared spectroscopy is good for classification and identification of tobacco with different aroma types. This study provides a new method for rapid and accurate identification of different flue-cured tobaccoaroma types.Keywords：Vvisible and near-infrared spectroscopy；Fflue-cured tobacco；Aaroma type；Pprincipal component analysis；Ddiscriminant analysis烤烟在我国种植栽培历史悠久，种植范围广泛，是我国重要的经济作物之一。
三种烟草品种基因组DNA傅里叶红外光谱研究
第３４卷，第４期 光谱学与光谱分析Ｖｏｌ畅３４，Ｎｏ畅４，ｐｐ９６７‐９７１２０１４年４月 ＳｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙａｎｄＳｐｅｃｔｒａｌＡｎａｌｙｓｉｓＡｐｒｉｌ，２０１４ 三种烟草品种基因组ＤＮＡ傅里叶红外光谱研究邱 璐１，杨海艳１，杨春胜１，刘 鹏２，范树国１，刘仁明３，周林宗４１畅楚雄师范学院化学与生命科学系，云南楚雄 ６７５０００２畅楚雄师范学院数学系，云南楚雄 ６７５０００３畅楚雄师范学院电子与物理科学系，云南楚雄 ６７５０００４畅楚雄师范学院地理系，云南楚雄 ６７５０００摘 要 利用傅里叶红外光谱（ＦＴＩＲ）研究三种烟草品种ＤＮＡ的差异，旨在对烟草品种进行亲缘关系分析和品种鉴定。
研究结果显示，三种烟草品种ＤＮＡ红外光谱较为相似，均有四个明显的特征峰，１１０３ｃｍ－１是ＤＮＡ磷酸二酯键的对称伸缩振动，１２３６ｃｍ－１是ＤＮＡ磷酸二酯键的非对称伸缩振动，１４００ｃｍ－１是ＤＮＡ糖苷键的伸缩振动，１６２２ｃｍ－１是ＤＮＡ中是胞嘧啶Ｃ４—Ｃ５＝Ｃ６的环伸缩振动。
通过平滑、标准化处理、二阶求导、提取主成分和系统聚类分析建立了ＤＮＡＦＴＩＲ光谱数据聚类分析模型。
使用该模型对三个烟草品种进行鉴定，鉴定正确率为１００％。
使用该模型对三个烟草品种进行亲缘关系分析，云烟８７与Ｋ３２６聚为一类，距离系数为０畅００３，ＤＮＡ相似度为９９畅７％，红大单独聚为一类。
聚类正确率达１００％。
该项研究为烟草品种鉴定及遗传育种提供了参考。
关键词 傅里叶红外光谱（ＦＴＩＲ）；烟草；基因组ＤＮＡ；主成分分析；系统聚类；亲缘关系中图分类号：Ｏ６５７畅３ 文献标识码：Ａ ＤＯＩ：１０畅３９６４／ｊ畅ｉｓｓｎ畅１０００‐０５９３（２０１４）０４‐０９６７‐０５ 收稿日期：２０１３‐０９‐１６，修订日期：２０１４‐０１‐１０ 基金项目：云南省重点建设学科项目（０５ＹＪＪＳＸＫ０３），云南省高校科技创新团队项目（ＩＲＴＳＴＹＮ），云南省高校应用生物学重点实验室项目，国家自然科学基金项目（１１０６４００１）资助 作者简介：邱 璐，女，１９６５年生，楚雄师范学院化学与生命科学系教授 ｅ‐ｍａｉｌ：ｑｉｕｌｕ＠ｃｘｔｃ畅ｅｄｕ畅ｃｎ引 言 烟草（ＮｉｃｏｔｉａｎａｔａｂａｃｕｍＬ畅）具有重要的经济价值，为茄科烟属一年或多年生作物。
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2 结果与讨论
2. 1 不同类型烟草花粉的形态特征( 表1) 2. 1. 1 烤烟( N . t abaccum ) 花粉为近球形, 花粉粒 大小( Lm ) 为35. 7( 29. 07～42. 48) × 33. 29( 27. 32 ～ 38. 6) , 具3～4条孔沟, 沟在极面上没有交会, 形成宽大 的 沟 界 极 区; 沟 端 呈 清 晰 的 35°左 右 夹 角, 沟 宽 约 5. 98Lm, 沟长约18. 57Lm ; 萌发孔清晰可见, 具3孔, 孔 较 大, 呈 椭 圆 形, 孔 的 直 径 ( Lm ) 达 12. 05 ( 9. 05 ～ 14. 39) ×9. 78( 7. 01～12. 85) , 花粉表面纹饰模糊, 壁 层次不清, 外壁内表面光滑, 内壁花粉原生质 体圆球 形, 内壁表面光滑, 花粉管原始体粗大( 见封二图版1, 2) 。 2. 1. 2 晒烟( N . t abaccum ) 所 观察 的3个 晒烟 品 种, 花 粉 大 小 与 烤 烟 大 小 相 近, 为 37. 18 ( 34. 39 ～
三沟稀四沟 三沟稀四沟 三沟稀四沟
三裂圆形
圆形
38. 60( 36. 35- 40. 12)
三沟稀四沟
三裂圆形
圆形
35. 42( 33. 76- 37. 28)
三沟稀四沟
三裂圆形
圆形
34. 27( 33. 43- 35. 97)
三沟稀四沟
萌发孔形态
萌发孔大小( Lm)
椭圆形 椭圆形 椭圆形 椭圆形 椭圆形 椭圆形 椭圆形 椭圆形 椭圆形 椭圆形 椭圆形 椭圆形 椭圆形 椭圆形 椭圆形 椭圆形
35. 27( 32. 17- 36. 78)
三裂圆形 三裂圆形 三裂圆形 三裂圆形 三裂圆形 三裂圆形
近圆形 近圆形 近圆形 近圆 近圆形 圆形
37. 78( 34. 12- 39. 98) ×
35. 12( 33. 05- 37. 97) 36. 77( 33. 89- 39. 73) ×
34. 18( 32. 19- 35. 89) 32. 88( 30. 07- 34. 27) ×
36. 23( 33. 77- 38. 52) × 33. 39( 31. 87- 35. 97)
35. 07( 32. 71- 37. 99) × 33. 11( 34. 58- 35. 63) 31. 77( 29. 09- 34. 11)
三沟 三沟 三沟 三沟 三沟
三裂圆形
圆形
33. 09( 30. 15- 35. 23)
X 收稿日期: 1998-11-16.
何川生等 不同烟草品种花粉粒形态的激光共聚焦扫描显微镜观察
31
40. 69) Lm ×36. 25 ( 34. 39～ 39. 73) Lm , 具3 ～4条 孔 沟, 有 宽大的沟界极 区; 沟端夹角 约30°左右, 沟宽 约 4. 08Lm, 沟长约15. 21Lm; 萌发孔清晰, 具3孔, 孔大, 椭圆形稀圆形, 孔的直径( Lm ) 为12. 13( 9. 00～13. 17) ×10. 12( 9. 00～12. 10) , 花粉表面纹饰模糊, 壁层次不 清( 见封二图版3, 4) 。 2. 1. 3 野生烟( N . alat a. N . Gl utinosa ) 所观察的
三沟
三裂圆形 三裂圆形 三裂圆形 三裂圆形
近圆形 近圆形 椭圆形 圆形
34. 07( 32. 18- 36. 93) × 31. 77( 30. 08- 34. 99)
34. 09( 31. 87- 37. 93) × 32. 77( 29. 98- 35. 63)
33. 57( 30. 51- 35. 66) × 28. 75( 25. 27- 31. 33) 34. 33( 30. 75- 36. 83)
10. 01( 9. 70- 12. 18) 10. 15( 8. 73- 12. 57) ×
8. 01( 7. 22- 10. 53) 11. 27( 9. 08- 12. 10) ×
8. 25( 7. 01- 10. 10) 12. 17( 9. 29- 13. 50) ×
9. 10( 8. 75- 11. 15) 11. 01( 9. 05- 13. 10) ×
花粉形态
花粉大小( Lm)
沟的类型
极面观 三裂圆形 三裂圆形 三裂圆形 三裂圆形 三裂圆形
赤道面观 近圆形 近圆形 近圆形 近圆形 圆形
38. 12( 35. 44- 41. 56) × 35. 79( 31. 67- 38. 56)
38. 19( 35. 33- 39. 89) × 34. 98( 32. 27- 36. 98)
15. 17( 14. 38- 18. 39) × 10. 39( 8. 73- 14. 75)
14. 75( 13. 37- 16. 78) × 10. 17( 8. 90- 13. 77)
15. 21( 14. 17- 17. 28) × 11. 05( 9. 53- 13. 77)
14. 58( 13. 71- 16. 99) × 9. 99( 9. 10- 12. 87)
三沟稀四沟 三沟稀四沟 三沟稀四沟 三沟稀四沟
三裂圆形 三裂圆形 三裂圆形
椭圆形 近圆形 圆形
36. 87( 34. 59- 39. 98) ×
32. 59( 30. 73- 34. 77) 37. 04( 35. 12- 40. 70) ×
35. 26( 33. 38- 37. 96) 40. 73( 38. 75- 42. 48)
烟草是一种重要的经济作物, 已有几百年的种植 历史, 对烟草的认识相当深入, 但对烟草花粉的研究却 起步较晚。由于烟草花粉粒很小, 形态不一, 肉眼无法 进行识别。利用普通光学显微镜观察, 受放大倍数、视 野反差的限制, 效果不够理想, 扫描电镜的出现, 使花 粉形态研究进入亚显微和超显微水平, 但由于制样技 术复杂、观察成本高, 使这一技术具有一定的局限性。 随着光学、视频、计算机等技术的飞速发展而诞生的激 光 扫描共 聚焦显微 镜( L aser Scanning Conf ocal Micro scope, L SCM ) 开创了花粉粒形态研究的一个新领 域[ 1] 。本文首次利用这一新的显微技术, 系统地研究了 37种烟草花粉粒的形态, 并试图找出其间存在的差异, 以此做为烟草花粉形态描述的补充, 在此基础上探索 利用花粉形态和微结构在育种及品种资源鉴定上应用 的可能性。
13. 79( 10. 87- 14. 59) × 10. 10( 9. 75- 12. 15)
14. 77( 13. 01- 16. 89) × 10. 98( 9. 77- 12. 81)
12. 75( 10. 09- 13. 78) × 9. 01( 8. 77- 11. 53)
13. 12( 11. 11- 15. 43) × 10. 12( 9. 75- 12. 33)
品种 烤烟 VA . 312
VA. 309 VA. 260 VA. 871 VA. 427 VA. 436 Q ual 946 Ox 2007 M RS-5 M RS-3
K 3 26 C HN-NO. 7
M eck 82 12 R G 34 14 91 47
表 1 不同烟草品种( 9种) 花粉粒形态特征
30
中国烟草学报 1999 年 3 月 第 5 卷 第 1 期
不同烟草品种花粉粒形态的激光共聚焦扫描 显微镜观察X
何川生1 卢秀萍2 黄学跃2 赵立红2 许介眉1
1四川联合大学生物 系 成都 610064 2 云南省烟草科学研究所
摘 要
对野 生烟、烤 烟、晒 烟花粉进行 了激光共 聚焦扫描显 微镜观察, 发现不 同品种烟 草花粉 的形态、大小 存在明 显的差 异, 可以做为烟草分类、进化研究的重要依据。 关键词: 野生烟 烤烟 晒烟 花粉 形态 激光共聚焦扫描显微镜
38. 77( 36. 53- 43. 77)
三裂圆形
圆形
38. 26( 35. 37- 40. 69)
三裂圆形
圆形
36. 25( 34. 39- 39. 73)
三裂圆形
圆形
35. 05( 32. 87- 39. 97)
三裂圆形
圆形
46. 38( 42. 71- 48. 97)
三裂圆形
圆形
42. 98( 38. 45- 43. 39)
1 材料和方法
1. 1 材料及来源 供 试的 37 个 烟草 品 种 均采 自 本 研 究所 试 验 基地 ,
其中烤烟品种32个, 晒烟品种3个, 野生烟种2个。取即 将开放的花朵于室内用小镊子剥取花药, 每采一种花 粉须将小镊子洗净, 避免混杂, 收集到的花粉样品用冰 醋酸浸泡保存。 1. 2 花粉的处理及制片方法
三裂圆形
圆形
33. 58( 30. 77- 35. 89)
三裂圆形
圆形
32. 18( 29. 75- 34. 53)
三裂圆形
圆形
30. 51( 29. 07- 32. 66)
三裂圆形
圆形
31. 36( 29. 37- 33. 77)
三裂圆形
圆形
38. 77( 35. 66- 40. 27)
三裂圆形
圆形
中国烟草学报 1999 年 3 月 第 5 卷 第 1 期
沟的类型
三沟稀四沟 三沟稀四沟 三沟稀四沟 三沟稀四沟 三沟稀四沟 三沟稀四沟 三沟稀四沟 三沟稀四沟 三沟稀四沟 三沟稀四沟 三沟稀四沟 三沟稀四沟 三沟稀四沟 三沟稀四沟 三沟稀四沟 三沟稀四沟 三沟稀四沟 三沟稀四沟 三沟稀四沟 三沟稀四沟 三沟稀四沟