常用pH缓冲溶液的配制和pH值教学教材
常用pH缓冲溶液的配制和pH值
（一）溶液配制注意事项1．药品要有较好的质量试剂分为优级纯（保证试剂，Guaranteed reagent，G．R．）、分析试剂（Antalytical reagent，A．R．）化学纯（Chemical pure，C．P．）和实验试剂（Laboratory reagent，L．R．）等等。
工业用的化学试剂，杂质较多，只在个别情况下应用，如配洗液用的硫酸、配干燥剂的氯化钙等。
2．药品称量要精确。
3．配制试剂用水应用新鲜的去离子水或双蒸馏水，比电阻值在50万欧姆以上，pH在5.5~7.0之间才可应用，在组织培养等特殊用途时应注意此项要求，配制一般化验用溶液只要求用双蒸馏水或去离子水。
４．配好后的溶液，应立即除菌处理（如高压灭菌、抽滤或加抑菌物质），以防杂菌生长。
（二）0.067（1/15）Mol/L磷酸缓冲液1．1/15Mol/L磷酸二氢钾溶液的配制：称取磷酸二氢钾（KH2PO4，A．R．）9.08g，用蒸馏水溶解后，倾入 1 000ml容量瓶内，再稀释至刻度（1 000ml）。
2．１/15Mol/L磷酸二氢钠溶液的配制：称取无水磷酸氢二钠（Na2HPO4，A.R.）9.47g（或者Na2HPO4·2H2O11.87g）用蒸馏水溶解后，放入 1 000ml容量瓶内，再加蒸馏水稀释至刻度（1 000ml）。
3．按附表的比例，配制成不同pH值的缓冲溶液。
附表1 磷酸盐缓冲液配制法（单位：毫升）pH 1/15Mol/L Na2HPO4 1/15Mol/L KH2PO4 pH 1/15Mol/L N a2HPO4 1/15Mol/L KH2PO45.8 8.0 92.0 7.1 66.6 23.45.9 9.9 90.1 7.2 72.0 28.06.0 12.2 87.8 7.3 76.8 23.26.1 15.3 84.77.3 80.8 19.26.2 18.6 81.47.5 84.1 15.96.3 22.4 77.6 7.6 87.0 13.06.4 26.7 73.37.7 89.4 10.66.5 31.8 68.27.8 91.58.56.6 37.5 62.5 7.9 93.2 6.86.7 43.5 56.5 8.8 94.7 5.36.8 49.6 50.4 8.1 95.8 4.26.9 55.4 44.6 8.2 97.0 3.07.0 61.1 38.9 8.4 98.0 2.0（三）0.15Mol/L PB液附表2 0.15Mol/LPB液配制法pH 0.15Mol/L Na2HPO4（ml）0.15Mol/L NaH2PO4（ml）6.4 26.5 73.56.6 37.5 62.57.0 61.0 39.07.2 72.0 28.07.4 81.0 19.07.6 87.0 13.0Na2HPO4·2H2O分子量=175.05 0.15Mol/L溶液含26.7g/L。
常用pH缓冲溶液的配制和pH值
常用pH缓冲溶液的配制和pH值25℃下0.1mol/l磷酸钾缓冲液的配制来源：互联网作者：未知发布时间：2006-09-25你会看到这个提示，那是因为你的系统无法识别某栏目的模型信息，或者你新建模型后，没为这个模型设计单独的模板。
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3.磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液pH 0.2M Na2HPO4/ml 0.1M柠檬酸/ml pH 0.2M Na2HPO4/ml 0.1M柠檬酸/ml2.2 0.40 19.6 5.2 10.72 9.282.4 1.24 18.76 5.4 11.15 8.852.6 2.18 17.82 5.6 11.60 8.402.83.17 16.83 5.8 12.09 7.913.04.11 15.896.0 12.637.373.24.94 15.066.2 13.22 6.783.4 5.70 14.30 6.4 13.85 6.153.6 6.44 13.56 6.6 14.555.453.8 7.10 12.90 6.8 15.454.554.0 7.71 12.29 7.0 16.47 3.534.2 8.28 11.72 7.2 17.39 2.614.4 8.82 11.18 7.4 18.17 1.834.6 9.35 10.65 7.6 18.73 1.274.8 9.86 10.14 7.8 19.15 0.855.0 10.30 9.70 8.0 19.45 0.55Na2HPO4分子量＝141.98 0.2M溶液含28.40g/LNa2HPO4·2H2O分子量＝178.05 0.2M溶液含35.61g/LC6H8O7·H2O分子量＝210.14 0.1M溶液含21.01g/L4.柠檬酸-氢氧化钠-盐酸缓冲液回复人：leeping,▲(@ )时间：2006-3-292楼9:02:44 编辑pH 钠离子浓度/M 柠檬酸C6H8O7·H2O/g 氢氧化钠NaOH/g 浓盐酸HCl/ml 终体积/L2.2 0.20 210 84 160 103.1 0.20 210 83 116 103.3 0.20 210 83 106 104.3 0.20 210 83 45 105.3 0.35 245 144 68 105.8 0.45 285 186 105 106.5 0.38 266 156 126 10使用时可以每升中加入1g酚，若最后pH有变化，再用少量50%氢氧化钠溶液或浓盐酸调节，冰箱保存。
缓冲溶液配制与pH值测定
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HCl (0.1 mol·L-1)，NaOH (0.1 mol·L-1,1 mol·L-1)， pH=4的HCl，pH＝10的NaOH， pH=4.00标准缓冲溶液，pH=9.18标准缓冲溶液, 甲基红溶液, 广泛pH试纸, 精密pH试纸, 吸水纸等。
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11
② 缓冲容量与缓冲组分比值的关系
?
NaH2PO4和Na2HPO4各10mL
精密pH试纸
1.8mL0.1 mol·L-1NaOH
?
2mL NaH2PO4和18mLNa2HPO4
?
说明哪一试管中缓冲溶液的缓冲容量大。
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五、注意事项 ⑴ 实验室安全问题。 ⑵ 缓冲溶液的配制要注意精确度。 ⑶ 了解pH计的正确使用方法，注意电极的保护。
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表1 缓冲溶液的配制与pH值的测定
实验号 甲 乙 丙
理论pH值 4.0 7.0 10.0
各组分的体积/mL (总体积50mL)
0.1mol·L-1HAc 0.1mol·L-1NaAc 0.1mol·L-1 NaH2PO4 0.1mol·L-1 Na2HPO4
0.1mol·L-1 NH3·H2O
0.1mol·L-1 NH4Cl
实验3 缓冲溶液的配制与pH值的测定
一、实验目的
(1)了解缓冲溶液的配制原理及缓冲溶液的性质； (2)掌握溶液配制的基本实验方法，学习pH计的使用 方法
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二、 实验原理
(1) 基本概念：在一定程度上能抵抗外加少量酸、碱或 稀释，而保持溶液pH值基本不变的作用称为缓冲作用 。具有缓冲作用的溶液称为缓冲溶液。
各种PH值的磷酸盐缓冲液配制
各种PH值的磷酸盐缓冲液配制2014-06-27 10:33:48 来源：生物秀知道浏览次数：24342 网友评论 0 条磷酸盐缓冲液取磷酸二氢钠38.0g，与磷酸氢二钠5.04g,加水使成1000ml,即得。
磷酸盐缓冲液(pH2.0)甲液:取磷酸16.6ml，加水至1000ml，摇匀。
乙液：取磷酸氢二钠71.63g，加水使溶解成1000ml。
取上述甲液72.5ml与乙液27.5ml混合，摇匀，即得。
磷酸盐缓冲液(pH2.5)取磷酸二氢钾100g，加水800ml，用盐酸调节pH至2.5,用水稀释至1000ml。
磷酸盐缓冲液(pH5.0)取0.2mol/L磷酸二氢钠溶液一定量,用氢氧化钠试液调节pH值至5.0，即得。
磷酸盐缓冲液(pH5.8)取磷酸二氢钾8.34g与磷酸氢二钾0.87g,加水使溶解成1000ml，即得。
磷酸盐缓冲液(pH6.5)取磷酸二氢钾0.68g,加0.1mol/L氢氧化钠溶液15.2ml，用水稀释至100ml，即得。
磷酸盐缓冲液(pH6.6)取磷酸二氢钠1.74g、磷酸氢二钠2.7g与氯化钠1.7g，加水使溶解成400ml，即得。
磷酸盐缓冲液(含胰酶)(pH6.8)取磷酸二氢钾6.8g,加水500ml使溶解,用0.1mol/L氢氧化钠溶液调节pH值至6.8；另取胰酶10g，加水适量使溶解，将两液混合后,加水稀释至1000ml，即得。
磷酸盐缓冲液(pH6.8)取0.2mol/L磷酸二氢钾溶液250ml，加0.2mol/L氢氧化钠溶液118ml，用水稀释至1000ml，摇匀，即得。
磷酸盐缓冲液(pH7.0)取磷酸二氢钾0.68g，加0.1mol/L氢氧化钠溶液29.1ml，用水稀释至100ml，即得。
磷酸盐缓冲液(pH7.2)取0.2mol/L磷酸二氢钾溶液50ml与0.2mol/L氢氧化钠溶液35ml，加新沸过的冷水稀释至200ml，摇匀，即得。
磷酸盐缓冲液(pH7.3)取磷酸氢二钠1.9734g与磷酸二氢钾0.2245g,加水使溶解成1000ml，调节pH值至7.3，即得。
各种pH-乙酸缓冲溶液的配置
醋酸－醋酸钠缓冲液(pH3.6、pH3.7、pH3.8、pH4.5、pH4.6、pH6.0)的配
制
醋酸－醋酸钠缓冲液(pH3.6)
取醋酸钠5.1g,加冰醋酸20ml，再加水稀释至250ml,即得。
醋酸－醋酸钠缓冲液(pH3.7)
取无水醋酸钠20g,加水300ml溶解后，加溴酚蓝指示液1ml及冰醋酸60～80ml，至溶液从蓝色转变为纯绿色，再加水稀释至1000ml，即得。
醋酸－醋酸钠缓冲液(pH3.8)
取2mol/L醋酸钠溶液13ml与2mol/L醋酸溶液87ml,加每1ml含铜1mg 的硫酸铜溶液0.5ml,再加水稀释至1000ml，即得。
醋酸－醋酸钠缓冲液(pH4.5)
取醋酸钠18g,加冰醋酸9.8ml,再加水稀释至1000ml,
醋酸－醋酸钠缓冲液(pH4.6)
取醋酸钠5.4g,加水50ml使溶解，用冰醋酸调节pH值至4.6，再加水稀释至100ml，即得。
醋酸－醋酸钠缓冲液(pH6.0)
取醋酸钠54.6g，加1mol/L醋酸溶液20ml溶解后，加水稀释至500ml。
0.1M醋酸－醋酸钠缓冲液(pH4.5)
PH=PKa-lg（[HAc]/[Ac-]）
4.5=4.76-lg（[HAc]/[Ac-]）
lg（[HAc]/[Ac-]）=0.25
[HAc]/[Ac-]=1.8/1
如果配制溶液1升，那么
需要冰醋酸的质量是0.1×1.8/2.8×60=3.86克
需要无水醋酸钠的质量是0.1×1/2.8×82=2.93克
即把3.86克冰醋酸和2.93克醋酸钠加入到接近1升的蒸馏水水中，充分搅拌，定容至1升即可。
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常用缓冲溶液的配制和PH计校正溶液配置方法
常用缓冲溶液的配制和P H计校正溶液配置方法精选文档TTMS system office room 【TTMS16H-TTMS2A-TTMS8Q8-常用缓冲溶液的配制方法1．甘氨酸–盐酸缓冲液（L）X毫升 mol/L甘氨酸+Y毫升 mol/L HCI，再加水稀释至200毫升甘氨酸分子量 = ， mol/L甘氨酸溶液含克/升。
2．邻苯二甲酸–盐酸缓冲液（ mol/L）X毫升 mol/L邻苯二甲酸氢钾 + mol/L HCl，再加水稀释到20毫升邻苯二甲酸氢钾分子量 = ， mol/L邻苯二甲酸氢溶液含克/升3．磷酸氢二钠–柠檬酸缓冲液Na2HPO4分子量 = ， mol/L溶液为克/升。
Na2HPO4·2H2O分子量 = ， mol/L溶液含克/升。
C 4H2O7·H2O分子量 = ， mol/L溶液为克/升。
4．柠檬酸–氢氧化钠-盐酸缓冲液①使用时可以每升中加入1克克酚，若最后pH值有变化，再用少量50%氢氧化钠溶液或浓盐酸调节，冰箱保存。
5．柠檬酸–柠檬酸钠缓冲液（ mol/L）柠檬酸C 6H 8O 7·H 2O ：分子量， mol/L 溶液为克/升。
柠檬酸钠Na 3 C 6H 5O 7·2H 2O ：分子量， mol/L 溶液为克/毫升。
6．乙酸–乙酸钠缓冲液（ mol/L ）Na 2Ac·3H 2O 分子量 = ， mol/L 溶液为克/升。
7．磷酸盐缓冲液（1）磷酸氢二钠–磷酸二氢钠缓冲液（）Na2HPO4·2H2O分子量 = ， mol/L溶液为克/升。
Na2HPO4·12H2O分子量 = ， mol/L溶液为克/升。
Na2HPO4·2H2O分子量 = ， mol/L溶液为克/升。
（2）磷酸氢二钠–磷酸二氢钾缓冲液（1/15 mol/L）1M溶液为克/升。
Tris溶液可从空气中吸收二氧化碳，使用时注意将瓶盖严。
pH标准缓冲溶液及常用pH缓冲溶液的配制
1.67
1.67
1.67
1.68
1.68
1.69
1.69
1.69
不同温度时的pH值(pH in different temperatures)
45C
50C
55C
60C
70C
80C
90C
95C
-
1.70
1.71
1.72
1.72
1.74
1.77
1.79
1.81
-
酒石酸 盐标准 缓冲溶 液
在25C时，用无二 氧化碳的水溶解外 消旋的酒石酸氢钾
把50.0 ml0.05 mol/L NaHPO与26.9 ml0.1
mol/L NaOH混合均匀，加水稀释至100ml
12.0
13
氯化钾-氢氧化钠
把25.0 ml 0.2 mol/L KCl与66.0 ml 0.2 mol/L NaOH
混合均匀，加水稀释至100ml
13.0
酸，再加水稀释至1L
2.3
3
一氯乙酸-氢氧化钠
在200ml水中溶解2g一氯乙酸后，加40gNaOH
溶解完全后再加水稀释至1L
2.8
4
邻苯二甲酸氢钾-盐酸
把25.0 ml 0.2 mol/L的邻苯二甲酸氢钾溶液与6.0 ml
0.1 mol/L HCl混合均匀，加水稀释至100ml
3.6
5
邻苯二甲酸氢钾-氢氧
不同温度时的pH值(pH in different temperatures)
0 °C
5C
10C
15C
20C
25C
30C
35C
40C
9.46
各种PH值的磷酸盐缓冲液配制
各种PH值的磷酸盐缓冲液配制磷酸盐缓冲液取磷酸二氢钠38.0g，与磷酸氢二钠5.04g,加水使成1000ml,即得。
磷酸盐缓冲液(pH2.0)甲液:取磷酸16.6ml，加水至1000ml，摇匀。
乙液：取磷酸氢二钠71.63g，加水使溶解成1000ml。
取上述甲液72.5ml与乙液27.5ml混合，摇匀，即得。
磷酸盐缓冲液(pH2.5)取磷酸二氢钾100g，加水800ml，用盐酸调节pH至2.5,用水稀释至1000ml。
磷酸盐缓冲液(pH5.0)取0.2mol/L磷酸二氢钠溶液一定量,用氢氧化钠试液调节pH值至5.0，即得。
磷酸盐缓冲液(pH5.8)取磷酸二氢钾8.34g与磷酸氢二钾0.87g,加水使溶解成1000ml，即得。
磷酸盐缓冲液(pH6.5)取磷酸二氢钾0.68g,加0.1mol/L氢氧化钠溶液15.2ml，用水稀释至100ml，即得。
磷酸盐缓冲液(pH6.6)取磷酸二氢钠1.74g、磷酸氢二钠2.7g与氯化钠1.7g，加水使溶解成400ml，即得。
磷酸盐缓冲液(含胰酶)(pH6.8)取磷酸二氢钾6.8g,加水500ml使溶解,用0.1mol/L氢氧化钠溶液调节pH值至6.8；另取胰酶10g，加水适量使溶解，将两液混合后,加水稀释至1000ml，即得。
磷酸盐缓冲液(pH6.8)取0.2mol/L磷酸二氢钾溶液250ml，加0.2mol/L氢氧化钠溶液118ml，用水稀释至1000ml，摇匀，即得。
磷酸盐缓冲液(pH7.0)取磷酸二氢钾0.68g，加0.1mol/L氢氧化钠溶液29.1ml，用水稀释至100ml，即得。
磷酸盐缓冲液(pH7.2)取0.2mol/L磷酸二氢钾溶液50ml与0.2mol/L氢氧化钠溶液35ml，加新沸过的冷水稀释至200ml，摇匀，即得。
磷酸盐缓冲液(pH7.3)取磷酸氢二钠1.9734g与磷酸二氢钾0.2245g,加水使溶解成1000ml，调节pH值至7.3，即得。
缓冲溶液的配制和PH计校正溶液配置方法
缓冲溶液的配制和PH计校正溶液配置方法缓冲溶液是由一种酸和一种碱或它们的盐所组成的溶液，能够稳定pH值。
缓冲溶液通常用于实验室的化学分析、生物学实验和工业生产中。
下面是一种常见的缓冲溶液的配制方法：1.选择合适的酸和碱：首先要根据需要稳定的pH值选择合适的酸和碱。
常用的酸包括盐酸、硫酸和醋酸，常用的碱包括氢氧化钠和氢氧化铵。
2.确定理论浓度：根据所需缓冲溶液的体积和理论浓度，计算所需的酸和碱的摩尔量。
3.酸和碱的配制：将所需量的酸和碱分别加入不同的容器中，并用去离子水稀释，直至达到理论浓度。
4.混合酸和碱：将酸和碱的溶液缓慢地倒入一个干净的容器中，同时搅拌，直到达到所需pH值。
5.最后的稳定性调整：如果溶液的pH值不稳定，可以使用其他酸或碱来调整pH值，直到稳定。
PH计校正溶液配置方法：pH计是一种用于测量溶液酸碱性的仪器，它需要定期校正以保证测量的准确性。
下面是一种常见的pH计校正溶液的配置方法：1.选择标定溶液：根据pH计的测量范围和需求，选择两个标定溶液。
一般来说，一种标定溶液应该是酸性的（pH值低于7），另一种标定溶液应该是碱性的（pH值高于7）。
常用的酸包括盐酸和硫酸，常用的碱包括氢氧化钠和氢氧化铵。
2.确定理论浓度：根据所需标定溶液的体积和理论浓度，计算所需的酸和碱的摩尔量。
3.酸和碱的配制：将所需量的酸和碱分别加入不同的容器中，并用去离子水稀释，直至达到理论浓度。
4.调整pH值：使用pH计测量标定溶液的实际pH值，如果与预期值不相符，使用其他酸或碱来调整pH值，直到达到所需的实际pH值。
5.校正pH计：按照pH计的使用说明书，将pH计插入标定溶液中，根据pH计的操作步骤进行校正。
6.记录和保管：记录标定溶液的批号、浓度和pH值，并妥善保存，以备后续校正或参考。
在配制缓冲溶液和pH计的校正溶液时，注意使用精密的仪器和试剂，并严格按照操作规程进行操作，以保证实验的精确性和准确性。
常用缓冲溶液的配制和PH计校正溶液配置方法
常用缓冲溶液的配制和P H 计校正溶液配置方法Prepared on 24 November 2020常用缓冲溶液的配制方法1．甘氨酸–盐酸缓冲液（L）X毫升 mol/L甘氨酸+Y毫升 mol/L HCI，再加水稀释至200毫升甘氨酸分子量 = ， mol/L甘氨酸溶液含克/升。
2．邻苯二甲酸–盐酸缓冲液（ mol/L）X毫升 mol/L邻苯二甲酸氢钾 + mol/L HCl，再加水稀释到20毫升邻苯二甲酸氢钾分子量 = ， mol/L邻苯二甲酸氢溶液含克/升3．磷酸氢二钠–柠檬酸缓冲液Na2HPO4分子量 = ， mol/L溶液为克/升。
Na2HPO4·2H2O分子量 = ， mol/L溶液含克/升。
C4H2O7·H2O分子量 = ， mol/L溶液为克/升。
4．柠檬酸–氢氧化钠-盐酸缓冲液①使用时可以每升中加入1克克酚，若最后pH值有变化，再用少量50%氢氧化钠溶液或浓盐酸调节，冰箱保存。
5．柠檬酸–柠檬酸钠缓冲液（ mol/L）柠檬酸C6H8O7·H2O：分子量， mol/L溶液为克/升。
柠檬酸钠Na3 C6H5O7·2H2O：分子量， mol/L溶液为克/毫升。
6．乙酸–乙酸钠缓冲液（ mol/L）Na 2Ac·3H 2O 分子量 = ， mol/L 溶液为克/升。
7．磷酸盐缓冲液（1）磷酸氢二钠–磷酸二氢钠缓冲液（）Na 2HPO 4·2H 2O 分子量 = ， mol/L 溶液为克/升。
Na 2HPO 4·12H 2O 分子量 = ， mol/L 溶液为克/升。
Na2HPO 4·2H 2O 分子量 = ， mol/L 溶液为克/升。
（2）磷酸氢二钠–磷酸二氢钾缓冲液（1/15 mol/L ）1M溶液为克/升。
Tris溶液可从空气中吸收二氧化碳，使用时注意将瓶盖严。
11．硼酸–硼砂缓冲液（硼酸根）硼砂Na2B4O7·H2O,分子量=;溶液（=硼酸根）含克/升。
常用标准缓冲溶液的配制
常用标准缓冲溶液在化学分析、仪器分析、生物化学等领域有广泛的应用。
它们通常用于标定传感器、校准仪器、测定物质特性等。
下面将详细介绍如何配制常用标准缓冲溶液。
一、磷酸盐标准缓冲溶液磷酸盐标准缓冲溶液通常用于pH测量。
具体配制方法如下：1. 称取约2克磷酸二氢钾，用纯水溶解。
2. 加入约700ml纯水。
3. 用氢氧化钠溶液调整溶液pH至7.0。
可以使用0.1N氢氧化钠溶液进行调pH。
4. 稀释至总容量为1000ml，这样就得到了磷酸盐标准缓冲溶液。
二、乙酸-乙酸钠缓冲液乙酸-乙酸钠缓冲液常用于PH计的校准。
其配制方法如下：1. 称取无水乙酸钠（28.85g）及乙酸（3mL，约27ml）溶于约500mL纯水中。
2. 用盐酸（1+1）溶液调整溶液pH至3.6～3.8。
3. 稀释至总容量约700mL。
三、纳氏试剂缓冲溶液纳氏试剂是一种常用的显色剂，常用于水质分析等工作中。
缓冲溶液的配制如下：1. 称取三乙醇胺9～15g，加少量纯水溶解，再加入氢氧化钠溶液至pH值约10，即得基本缓冲液。
2. 称取酒石酸钾钠20g及碘化钾2g溶于纯水，稀释至基本缓冲液总容量约50ml，然后慢慢加入碘化汞钾溶液（4%w/v）4～5滴，即得纳氏试剂缓冲溶液。
四、磺基水杨酸标准缓冲溶液磺基水杨酸标准缓冲溶液常用于电位滴定分析，其配制方法如下：1. 称取24克磺基水杨酸，加入约600毫升蒸馏水，完全溶解。
2. 用氢氧化钠溶液调整溶液pH至5.4，使其符合滴定分析要求。
可以使用0.1N氢氧化钠溶液进行调pH。
3. 稀释至总容量约1000ml，这样就得到了磺基水杨酸标准缓冲溶液。
需要注意的是，在配制标准缓冲溶液时，必须严格遵守实验室安全规范，包括正确处理化学药品、避免交叉污染、避免蒸发皿破裂等。
同时，也应注意保护实验环境的卫生和安全，如保持实验台整洁、避免有毒废料的排放等。
此外，对于不同类型和浓度的标准缓冲溶液，可能需要不同的配制步骤和注意事项。
各种PH值的磷酸盐缓冲液配制
各种PH值的磷酸盐缓冲液配制2014-06-27 10:33:48 来源：生物秀知道浏览次数：24342 网友评论 0 条磷酸盐缓冲液取磷酸二氢钠38.0g，与磷酸氢二钠5.04g,加水使成1000ml,即得。
磷酸盐缓冲液(pH2.0)甲液:取磷酸16.6ml，加水至1000ml，摇匀。
乙液：取磷酸氢二钠71.63g，加水使溶解成1000ml。
取上述甲液72.5ml与乙液27.5ml混合，摇匀，即得。
磷酸盐缓冲液(pH2.5)取磷酸二氢钾100g，加水800ml，用盐酸调节pH至2.5,用水稀释至1000ml。
磷酸盐缓冲液(pH5.0)取0.2mol/L磷酸二氢钠溶液一定量,用氢氧化钠试液调节pH值至5.0，即得。
磷酸盐缓冲液(pH5.8)取磷酸二氢钾8.34g与磷酸氢二钾0.87g,加水使溶解成1000ml，即得。
磷酸盐缓冲液(pH6.5)取磷酸二氢钾0.68g,加0.1mol/L氢氧化钠溶液15.2ml，用水稀释至100ml，即得。
磷酸盐缓冲液(pH6.6)取磷酸二氢钠1.74g、磷酸氢二钠2.7g与氯化钠1.7g，加水使溶解成400ml，即得。
磷酸盐缓冲液(含胰酶)(pH6.8)取磷酸二氢钾6.8g,加水500ml使溶解,用0.1mol/L氢氧化钠溶液调节pH值至6.8；另取胰酶10g，加水适量使溶解，将两液混合后,加水稀释至1000ml，即得。
磷酸盐缓冲液(pH6.8)取0.2mol/L磷酸二氢钾溶液250ml，加0.2mol/L氢氧化钠溶液118ml，用水稀释至1000ml，摇匀，即得。
磷酸盐缓冲液(pH7.0)取磷酸二氢钾0.68g，加0.1mol/L氢氧化钠溶液29.1ml，用水稀释至100ml，即得。
磷酸盐缓冲液(pH7.2)取0.2mol/L磷酸二氢钾溶液50ml与0.2mol/L氢氧化钠溶液35ml，加新沸过的冷水稀释至200ml，摇匀，即得。
磷酸盐缓冲液(pH7.3)取磷酸氢二钠1.9734g与磷酸二氢钾0.2245g,加水使溶解成1000ml，调节pH值至7.3，即得。
11、缓冲溶液的配制与pH值的测定
实验缓冲溶液的配制与pH值的测定缓冲溶液的配制与pH值的测定一、实验目的⑴了解缓冲溶液的配制原理及缓冲溶液的性质；⑵掌握溶液配制的基本实验方法，学习pH计的使用方法。
实验原理⑴基本概念：在一定程度上能抵抗外加少量酸、城或稀釋，而保持溶液pH值基本不变的作用称为缓冲作用。
具有缓冲作用的溶液称为缓冲溶液。
⑵缓冲溶液组成及计算公式：缓冲溶液一般是由共枫酸碱对组成的，例如弱酸和弱酸盐，或弱碱和弱碱盐o 如果缓冲溶液由弱酸和弱酸盐（例如HAc-NaAc）组成，则C H ' Ac 1 g 奂pH=pKa—Vc 0c⑶缓冲溶液性质:N抗＜/＜抗稀释作用：因为缓冲溶液中具有抗酸成分和抗减成分，所以加入少童强酸或賤破，其pH值基本上是不变的。
稀释缓冲溶液时，酸和磁的浓度比值不改变，适当稀释不影响其pH值。
b・缓冲容量：缓冲容量是衡量缓冲溶液缓冲能力大小的尺度。
缓冲容童的大小与缓冲组分浓度和缓冲组分的比值有关。
缓冲组分浓度越大，缓冲容童越大；缓冲组分比值为时，缓冲容量最大。
三、实验仪器与试剂仪器：pHS — 3C酸度计，试管，量简(lOOmL,10mL),烧杯(lOOmL, 50mL),吸量管(10mL)等。
试剂：HAc(0.1 mol-U\1 mol-L_1), NaAc(0.1 mol-L1,1 mol-L1), NaH2PO4 (0.1 mol-L*1), Na2HPO4 (0.1 mol-L1),NH3-H2O (0.1 mol-L1), NH4CI (0.1 mol-L1),HCI (0.1 mol-L1), NaOH (0.1 mol-L-1,1 mol-U1),pH=4的HCI, pH = 10的NaOH,pH=4.00标准缓冲溶液，pH=9.18标准缓冲溶液，甲基红溶液，广泛pH试纸，精密pH试纸，吸水纸等。
四、实验步骤⑴缓冲溶液的配制与pH值的测定依表1进行实验。
并将实验数据记录（溶液留作后面实验用）。
常用pH缓冲液配置方法及注意事项
常用pH缓冲溶液的配制和pH值一、常用溶液的配制（一）溶液配制注意事项1．药品要有较好的质量试剂分为优级纯（保证试剂，Guaranteed reagent，G．R．）、分析试剂（Antalytical reagent，A．R．）化学纯（Chemical pure，C．P．）和实验试剂（Laboratory reagent，L．R．）等等。
工业用的化学试剂，杂质较多，只在个别情况下应用，如配洗液用的硫酸、配干燥剂的氯化钙等。
2．药品称量要精确。
3．配制试剂用水应用新鲜的去离子水或双蒸馏水，比电阻值在50万欧姆以上，pH在5.5~7.0之间才可应用，在组织培养等特殊用途时应注意此项要求，配制一般化验用溶液只要求用双蒸馏水或去离子水。
４．配好后的溶液，应立即除菌处理（如高压灭菌、抽滤或加抑菌物质），以防杂菌生长。
（二）0.067（1/15）Mol/L磷酸缓冲液1．1/15Mol/L磷酸二氢钾溶液的配制：称取磷酸二氢钾（KH2PO4，A．R．）9.08g，用蒸馏水溶解后，倾入1000ml容量瓶内，再稀释至刻度（1000ml）。
2．1/15Mol/L磷酸二氢钠溶液的配制：称取无水磷酸氢二钠（Na2HPO4，A.R.）9.47g（或者Na2HPO4·2H2O 11.87g）用蒸馏水溶解后，放入1000ml容量瓶内，再加蒸馏水稀释至刻度（1000ml）。
3．按附表的比例，配制成不同pH值的缓冲溶液。
附表1 磷酸盐缓冲液配制法（单位：毫升）（三）0.15Mol/L PB液附表2 0.15Mol/LPB液配制法Na2HPO4·2H2O分子量=175.05 0.15Mol/L溶液含26.7g/L。
Na2HPO4·12H2O分子量=358.22 0.15Mol/L溶液含53.7g/L。
NaH2PO4·H2O分子量=138.00 0.15Mol/L溶液含20.7g/L。
NaH2PO4·2H2O分子量=156.03 0.15Mol/L溶液含23.4g/L。
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常用p H缓冲溶液的配制和p H值（一）溶液配制注意事项1．药品要有较好的质量试剂分为优级纯（保证试剂，Guaranteed reagent，G．R．）、分析试剂（Antalytical reagent，A．R．）化学纯（Chemical pure，C．P．）和实验试剂（Laboratory reagent，L．R．）等等。
工业用的化学试剂，杂质较多，只在个别情况下应用，如配洗液用的硫酸、配干燥剂的氯化钙等。
2．药品称量要精确。
3．配制试剂用水应用新鲜的去离子水或双蒸馏水，比电阻值在50万欧姆以上，pH在5.5~7.0之间才可应用，在组织培养等特殊用途时应注意此项要求，配制一般化验用溶液只要求用双蒸馏水或去离子水。
４．配好后的溶液，应立即除菌处理（如高压灭菌、抽滤或加抑菌物质），以防杂菌生长。
（二）0.067（1/15）Mol/L磷酸缓冲液1．1/15Mol/L磷酸二氢钾溶液的配制：称取磷酸二氢钾（KH2PO4，A．R．）9.08g，用蒸馏水溶解后，倾入1 000ml容量瓶内，再稀释至刻度（1 000ml）。
2．１/15Mol/L磷酸二氢钠溶液的配制：称取无水磷酸氢二钠（Na2HPO4，A.R.）9.47g（或者Na2HPO4·2H2O11.87g）用蒸馏水溶解后，放入1 000ml容量瓶内，再加蒸馏水稀释至刻度（1 000ml）。
3．按附表的比例，配制成不同pH值的缓冲溶液。
附表1 磷酸盐缓冲液配制法（单位：毫升）pH 1/15Mol/L Na2HPO4 1/15Mol/L KH2PO4 pH 1/15Mol/L N a2HPO4 1/15Mol/L KH2PO45.8 8.0 92.0 7.1 66.6 23.45.9 9.9 90.1 7.2 72.0 28.06.0 12.2 87.8 7.3 76.8 23.26.1 15.3 84.77.3 80.8 19.26.2 18.6 81.47.5 84.1 15.96.3 22.4 77.6 7.6 87.0 13.06.4 26.7 73.37.7 89.4 10.66.5 31.8 68.27.8 91.58.56.6 37.5 62.5 7.9 93.2 6.86.7 43.5 56.5 8.8 94.7 5.36.8 49.6 50.4 8.1 95.8 4.26.9 55.4 44.6 8.2 97.0 3.07.0 61.1 38.9 8.4 98.0 2.0（三）0.15Mol/L PB液附表2 0.15Mol/LPB液配制法pH 0.15Mol/L Na2HPO4（ml）0.15Mol/L NaH2PO4（ml）6.4 26.5 73.56.6 37.5 62.56.8 49.0 51.07.0 61.0 39.07.2 72.0 28.07.4 81.0 19.07.6 87.0 13.0Na2HPO4·2H2O分子量=175.05 0.15Mol/L溶液含26.7g/L。
Na2HPO4·12H2O分子量=358.22 0.15Mol/L溶液含53.7g/L。
NaH2PO4·H2O分子量=138.00 0.15Mol/L溶液含20.7g/L。
NaH2PO4·2H2O分子量=156.03 0.15Mol/L溶液含23.4g/L。
（四）0.2Mol/L PB缓冲液附表3 0.2mol/L PB缓冲液配制法pH 0.2 Mol/L Na2HPO4（ml）0.2Mol/L NaH2PO4（ml）5.8 8.0 92.06.0 12.3 87.76.2 18.5 81.56.4 26.5 73.56.6 37.5 62.56.8 49.0 51.07.0 61.0 39.07.2 72.0 28.07.4 81.0 19.07.6 87.0 13.07.8 91.5 8.58.0 94.7 5.30.2Mol/L Na2HPO4·2H2O溶液35.61g/LNa2HPO4·12H2O溶液含71.64g/L0.2Mol/LNaH2PO4·H2O溶液含27.60g/LNaH2PO4·2H2O溶液含31.21g/L欲配0.1Mol/L PB缓冲液则在0.2Mol/L PB缓冲液的基础上加H2O稀释1倍即可。
欲配制PBS液时，则在溶液中加0.85％的NaCl 溶液即可。
（五）无钙镁离子磷酸缓冲盐水（PBS）（0.15Mol/L PH 7.2）NaCl8.0gKCl0.2gNa2HPO4 1.15 g（如为Na2HPO4·12H2O，则为2.89g）KH2PO4 0 .2g将上述试剂依次溶于1 000ml去离子水中，完全溶解后，115℃高压灭菌10min~15min，存在4℃冰箱中备用。
此液可用于配制和稀释细胞分散剂以及洗涤细胞培养物。
（六）硼酸盐缓冲液（Borate saline buffer）文章来自：医药园()整理：zfg 1．硼酸（Ｈ3BO3）0.2Mol/L硼酸：硼酸12.37g加水至1 000ml。
2．硼砂（Na2B4O7）0.05Mol/L硼砂：硼砂19.07g加水至1 000ml。
附表4 不同pH的0.2Mol/L硼酸缓冲液配制法pH 0.05Mol/L硼砂（ml）0.2Mol/L硼酸（ml）pH 0.05Mol/L 硼砂（ml）0.2Mol/L硼酸（ml）7.4 1.0 9.0 8.2 3.5 6.57.6 1.5 8.5 8.4 4.5 5.57.8 2.0 8.0 8.7 6.0 4.08.0 3.0 7.0 9.0 8.0 2.0（七）巴比妥缓冲液1．pH8.2离子强度0.05Mol/L巴比妥缓冲液巴比妥钠47.6g蒸馏水 3 000ml1.17N HCl 55.0ml（1.17 N HCl=193ml浓HCl加1 807ml蒸馏水）⑴将4.76g巴比妥钠溶于3 000ml蒸馏水。
⑵加1.17 N HCl 55ml。
⑶用HCl调节pH到8.2，并加蒸馏水至4 265ml。
2．pH8.4 0.06Mol/L巴比妥缓冲液巴比妥 1.84g巴比妥钠10.30g加蒸馏水至 1 000.00ml3．pH8.6 0.06Mol/L巴比妥缓冲液巴比妥 1.66g巴比妥钠12.76g加蒸馏水 1 000.00ml（八）0.2Mol/L醋酸盐缓冲液见表附表5附表5 0.2Mol/L醋酸盐缓冲液配制法pH 0.2Mol/LTris（ml）0.1Mol/LHCl（ml）pH 0.2Mol/LTris（ml）0.1Mol/LHCl（ml）23℃37℃23℃37℃9.10 8.95 25 5 8.06 7.90 25 27.58.92 8.76 25 7.5 7.96 7.82 25 30.08.75 8.60 25 10.5 7.87 7.73 25 32.58.62 8.48 25 12.5 7.77 7.63 25 35.08.50 8.37 25 15.5 7.66 7.52 25 37.58.40 8.27 25 17.5 7.54 7.40 25 40.08.32 8.18 25 20.0 7.36 7.22 25 42.5（九）三羟甲基甲烷—盐酸缓冲液（Tris—HCl缓冲液）不同pH，0.05Mol/L25ml0.2Mol/L三羟甲基氨基甲烷加хml0.1NHCl，加水稀释至100ml（见下表）附表6 Tris—HCl缓冲液配制法pH 0.2Mol/LTris(ml) 0.1NHCl(ml) pH 0.2Mol/LTris(ml) 0.1NHCl(ml)23℃37℃23℃37℃9.10 8.96 25 5 8.05 7.90 25 27.58.92 8.78 25 7.5 7.96 7.82 25 30.08.74 8.60 25 10.0 7.87 7.73 25 32.58.62 8.48 25 12.5 7.77 7.63 25 35.08.50 8.37 25 15.0 7.66 7.52 25 37.58.40 8.27 25 17.5 7.54 7.40 25 40.08.32 8.18 25 20.0 7.36 7.22 25 42.58.23 8.10 25 22.5 7.20 7.05 25 45.08.14 8.00 25 25.0 25三羟甲基氨基甲烷（Tris）分子量=121.140.2Mol/L三羟甲基氨基甲烷：Tris24.23g，加水至1 000ml。
0.1NHCl：取HCl8.6ml，加水至1 000ml。
（十）0.5Mol/L pH9.5碳酸盐缓冲液NaHCO3 3.70gNa2CO3 0.60g溶于600.00ml蒸馏水中即得。
不用时塞紧瓶塞，以免吸收空气中二氧化碳使PH下降。
最好小量配制。
（十一）甘油磷酸缓冲液1．配制pH8.0磷酸缓冲液0.1Mol/L Na2HPO4 94.50ml0.1N NaH2PO4 5.50ml混合即可2．9份甘油与1份pH8.0磷酸缓冲液混合，即为甘油磷酸缓冲液。
用途：用于免疫荧光试验。
（十二）Hank’s液1．贮存液NaCl 80.00gKCl 4.00gNa2HPO4·12H2O 1.52gKH2PO4 0.60g葡萄糖 4.00g0.4％酚红液50.00ml双馏水加至100.00ml115℃高压灭菌15min，冰冻保存。
2．工作液贮存液1份双馏水9份115℃高压灭菌15min。
临用时用灭菌的5.6％NaHCO3液调pH值至7.2左右（溶液呈橙红色）。
（十三）萘（钠）氏试剂（Nessler’s reagent）配方1：氯化汞 6.0g碘化钾12.4g20％NaOH 30ml加蒸馏水至100ml配方2：碘化汞11.5g碘化钾8g蒸馏水50ml （完全溶解后）过滤，加20％NaOH 50ml。
用途：检测溶液中氨离子。
（十四）阿氏（Alsever’s）液葡萄糖 2.05g柠檬酸钠0.80g氯化钠0.42g蒸馏水100ml 溶解后，以10%柠檬酸调节pH至6.1，过滤，分装，10磅10min灭菌，4℃保存。
（十五）青、链霉素混合液（简称S．P．液或双抗液）青霉素（40万U）5支链霉素（200万μg）1支分别溶于100ml灭菌无离子水中或共同溶于200ml灭菌无离子水中，混合后分装小瓶，置-10℃~-20℃冰箱保存备用（1万单位μg/ml）。
临用时，按1%的量加入营养液或其他溶液中，最后浓度是青霉素100U/ml，链霉素100ug/ml。
（十六）洗液（清洁液）配方1：重铬酸钾150g蒸馏水300ml浓硫酸 3 000ml 将重铬酸钾加入蒸馏水中，使之自然溶解或水浴溶解，亦可在大坩埚中加热溶解，然后慢慢加入浓硫酸，边加边搅拌，见发热过剧则稍停，冷却后再继续加。