使用image J检测Western Blot条带灰度值
老司机带你解锁ImageJ实用技巧（下）
老司机带你解锁ImageJ实用技巧（下）今天我们继续来聊一聊ImageJ的高阶使用技巧。
问题三、为什么总是全部圈起来的灰度值，有没有大神指导呢求助！本问题涉及免疫印迹（Western Blot）分析，提问者不能分别得到每个条带的值。
灰度值0为纯黑，255为纯白，灰度值与光密度值（OD值）的关系如下图所示：以灰度来统计WB条带的话，无条带的纯白255左右，条带越黑着色越深灰度值反而越小，这与我们的认知不符。
步骤：1. File -> Open -> 打开需要分析的WB条带。
2. Image –> Type -> 8-bit, 将图像转换为8-bit的灰度图片；Image-> Invert，黑白反转，得到如下图片：3. Analyze -> Calibrate, 校正光密度值Function中选择Uncalibrated OD，左下方Global calibration，勾选表示有多张图片打开时对所有图片进行此操作。
否则只对当前图片进行此操作。
4. 在工具栏中选择矩形工具——Rectangular, 最左边的为矩形工具，选择条带：键盘上按数字1，弹出如下提示框：点Yes，键盘上按数字3，得到如下：5. 工具栏中选择直线工具——Straight，下图最右边的为直线工具，按住Shift键使用直线工具画竖线将步骤4的峰进行分割：6. 选择魔棒工具——Wand tool，分别点击分割好的峰，即可得到结果，保存结果（File -> Save as…）即可：7. WB统计分析一般将对照组标准化为100%或1，上述结果6个条带前3个为对照组。
在Excel中，先计算对照组3个的平均值（AVERAGE(B2:B4)）：然后所有B列的数值除以对照组平均值，此时对照组的均值为1：8. 将所得数据放入Graphpad prism绘图即可：拓展：弯曲的WB条带应如何使用ImageJ拉直？1. 使用Segmented line沿着倾斜条带画间断线段：2. 双击Segmented line，设置线段的宽度至包含所有条带：3. 点击菜单栏Edit -> Selection-> Straighten，倾斜的WB条带即可拉直：问题四、如何统计SEM图片小球数量？步骤：1. 打开ImageJ软件，File -> Open打开SEM图片。
ImagJWB定量分析
一、利用ImagJ对WB条带进行灰度分析1、File——》open 打开WB片子2、把图片转化成灰度图片image——》type——》8-bit3、消除背景影响process——》subtract background 选择50基本可以4、设置定量参数analyze——》set measurements，点击面积，平均密度和灰度值及Integrated Density5、设置单位analyze——》set scale ，在“unit of length”的方框里输入“pixels”6、把图片转换成亮带，Edit——》invert7、选择FreehandSelection，尽量把条带圈起来，点击键盘m（小写），出来IntDen灰度值8、复制数据IntDen进行分析二、利用ImagJ对WB条带进行密度分析1、File——》open 打开WB片子2、如条带不正，需修正image——》transform——》rotate调节angle值，直到条带水平为止3、选中矩形选项，圈中第一个条带，然后analyze——》gels——》select firstlane（快捷键ctrl+1），然后移动第一个条带上的矩形到第二个条带上，analyze——》gels——》select second lane（快捷键ctrl+2），最后analyze——》gels——》plotlanes4、选中直线工具，将开口的波峰关闭5、选中魔棒工具，点击波峰可以显示波峰下面积，即条带的密度值6、以第一个数值为基数，其他数值与第一个数值的比值为相对密度*/link?url=iFFzpXWQu3ULvbjcoe0ME-Oi1oVTR3ANKR6xYvQXfMPUjK3Re5lnNI2kRpSadvUdXUPUr9 zJvJau9y3P4ZyoMxZR8ghHwpvUJeqRj1vn5Ty*如果有数据产生，一般是批量多次western blot结果的一个统计数据一般采取方差分析或者t检验分析就可以了*纵坐标我看文献上是用的检测蛋白的灰度值比上内参的灰度值。
10分钟Get！大牛教你用imageJ对Westernblot条带进行灰度分析！
10分钟Get！大牛教你用imageJ对Westernblot条带进行
灰度分析！
科研人员做的western blot实验一般需要对其结果扫描后进行灰度分析，一般使用的软件为Image 。
采用Image J 软件对蛋白质印迹实验结果（Western Blot）进行灰度半定量分析，是分子生物学实验中比较常用的方法，可实现对WB实验结果进行准确、简单和快速的分析。
ImageJ分析Westernblot条带图
Step 1:打开Image J, 导入图片→Image→Type→8 bit
Step 2:选择工具框中第一个矩形框选项，选中所有的条带
Step 3:点击Analyze→Gels→Plot Lanes
Step 4:选用工具框中的直线工具，将开口波峰封闭
Step 5:选用工具框中的魔棒工具，点击相应的波峰，相应area值
ImageJ分析Westernblot条带图
Step 1:打开Image J, 导入图片。
Image→Type→8 bit
Step 2:扣除背景P→rocess→Subtract Background→选择50 pixels和Lightbackground
Step 3:设定参数→Analyze→Set Measures→按照下图勾选参数
Step 4:设定参数→Analyze→Set scale→unit of length选项改为pixels
Step 5:图像分割→Edit→Invert→选用椭圆或自定义工具选中条带
Step 6:Analyze→Measure→得到 IntDen值Step 7:重复Step5、6，得到所有条带的IntDen值
以上实用干货来源于课程
30分钟精通Image J图片处理。
ImageJ Western 量化 拿走不谢
ImageJ实用技巧之Western blot量化
原创2016-05-26 李莫愁博士实验万事屋
ImageJ对医学生来讲最常用的功能是WesternBlot量化和细胞计数，又以前者最常见。
不是所有的WB都需要量化，看审稿人的要求，好了，今天内容比较枯燥，我们一步一步来学习image J量化Western blot的条带吧！
首先下载安装Image J,温馨提示软件在网上有下载。
安装完image J，打开一张要量化的图片如下图：
点击选择方形选框工具，按住左键，在图片上拖动，选择需要分析的条带区域，如图中黄色方框所示。
依次选择，如下图，Select First Lane选项后会出现以上对话框，直接点击Yes 即可：
当选区出现1表示选择成功：
然后选择，Analyze→Gels→Plot Lanes，就会弹出山峰样的图。
峰的面积即灰度值，但是这几个峰连在了一起要先把他们分开，点击直线工具，画直线。
点击选择魔棒工具，然后分别点击每个峰的下方区域，然后就会弹出各个峰面积的结果，分别与六个条带的灰度值相对应，表示六个条带所代表的目的蛋白的表达水平。
使用同样的方法也可以对beta-actin进行量化，最后通过标准化计算得到该Western Blot的量化结果，至于如何将量化结果变成审稿人要求的柱状图，就留给你们自己思考。
干货▎ImageJ分析WesternBlot蛋白条带灰度值
干货▎ImageJ分析WesternBlot蛋白条带灰度值聊点学术，一键关注“你已经是个成熟的条带了，要学会自己分析！”“连Western blot都没学好，又让我学Image J，我......”This is the dividing line.Image J分析蛋白条带灰度值首先解释一下，为什么要分析灰度值？灰度的概念是使用黑色调表示物体，即用黑色为基准色，不同的饱和度的黑色来显示图像。
采用ECL发光时，蛋白条带发出的荧光会曝光在胶片上，留下的黑色条带。
然而胶片扫描后为蓝色背景、黑色条带，这并不是单纯的黑灰白颜色。
因此，我们首先得在Photoshop 中将整张图片去色，使彩色图片变成黑白图片，形成近灰色背景、黑色条带的图片类型。
此时，条带的深浅和面积综合代表着蛋白的量。
灰度值分析自然就成为我们的首选。
延伸说一下，免疫组织化学染色(IHC)结果本身为近白色背景、棕黄色阳性表达，这时我们就不能直接用灰度反映阳性表达强弱了，而是积分吸光度，也就是咱们常说的平均光密度(IOD)。
如果你真的想用灰度计算IHC结果，显然你需要将图片转为灰度图再计算。
此处不表。
分析图文步骤如下：Image J软件界面↓1. 图片转换为黑白图：首先使用Photoshop打开胶片扫描图片，点击“图像>调整>去色”，将彩色图片转化为黑白图片，并使用裁剪工具将目标条带裁剪至合适大小后另存图片。
2.打开Image J软件：2.1.打开图片文件：File>Open；将图片转化为8bit类型：Image>Type>8-bit。
(此步骤的目的是为了将图片的每个像素用8bit表示，这样的话，整个图片的灰度将分为256个级别，即黑、灰、白的像素模式；若保留原始的16bit格式或RGB格式，图片灰度级别会呈指数增长，并有其它颜色混入，造成计算误差。
)2.2.将整张图片背景灰度均一化，消除图片背景影响：Process>Subtract Background，默认数值为50即可。
Image J和Graphpad如何对Western Blot条带灰度分析
Image J和Graphpad如何对Western Blot条带灰度分析WB是研究蛋白表达的一个经典方法。
对于一些时间点或者是不同组织蛋白表达量的分析就涉及到量的变化。
一些凝胶成像软件带有此分析工具，比如Quantity One，Bandscan，Gel-Pro Analyzer等成像系统专用软件。
除了这些软件，还有一个比较简单的综合性质图像处理软件Image J可以很方便的进行灰度分析。
而且Image J是开源性质的免费软件，可以在其官网直接下载使用。
对Western Blot条带进行数值化有两种方法——灰度分析和光密度分析。
灰度是计算机图像分析仪根据图像颜色深浅分为256个级别。
灰度值越小物体颜色越深。
光密度是指光线通过溶液或某一物质前的入射光强度IO与该光线通过溶液或物质后的透射光强度Ib比值的对数OD=log（IO/Ib）；图像分析中，入射光和透射光强度分别被切片上最亮区域的平均灰度值和待测目标平均灰度值取代，则图像分析系统的光密度值=log（切片标本最亮区域的平均灰度值（g0）/待测目标的平均灰度值（g））。
光密度值越大，物体颜色越深，阳性物质相对含量越大。
对于灰度值来说，切片标本制作时染色时间长短，以及测量时显微镜照明光源电压的大小对其影响很大。
而光密度是一个比值。
是通过计算一张切片标本最亮区域的平均灰度值与该切片标本中待测目标的平均灰度值的比值，再根据数学公式计算而来的，所以受切片标本染色时间长短及照明光源电压关系很小。
然而有研究实践显示，灰度值与光密度值二者之间存在着线性关系，都可以用来进行WB定量分析。
同样，Image J软件进行WB条带定量分析时也存在两种方法，此处只列举一种方法，具体步骤如下。
1、下载安装，并打开Image J软件。
2、导入WB条带图片。
File→Open→弹出对话框→选择文件夹→找到WB条带。
3、把图片转化成灰度图片：Image→Type→8-bit。
这时WB图片将会随之改变。
Western Blot图片灰度分析 -Image J
Western Blot图片灰度分析-Image J2010年02月21日星期日08:19This method is the Gel Analysis method outlined in the ImageJ documentation:Gel Analysis.You may prefer to use it instead of the methods outlined below.There will likely be very little difference in the results between the various methods.1.Open your file.2.Go to Analyze>Gels>Gel Analyzer Options and click the boxes for Label With Percentages, Outline Lanes and Invert Peaks.3.Choose the Rectangular Selection tool.Draw a rectangle around your first lane.Encompass some area of the lane above and below the band of interest.Edit July2009:Note that for a gel with the lanes oriented vertically as shown here(i.e.the visible bands are horizontal across the image),you want to make your bounding rectangle taller than it is wide.However,if you have the image rotated so that the lanes are running horizontally,you need to make your bounding rectangle at least twice as wide as it is tall,at which point Image-J will recognize that your lanes are horizontal and it will allow you to move the box up or down the image to enclose the neighboring lanes.4.Press the1button(or go to Analyze>Gels>Select First Lane).A new window will pop up with a copy of your image and a label over your first rectangular selection.e the arrow keys to move the rectangle over the next lane.Press2(or go to Analyze>Gels>Select Next Lane)to place a selection around the lane.Repeat this for each lane on the membrane,moving the box and pressing2to place the selection.6.When finished,press3(or go to Analyze>Gels>Plot Lanes),which pops up a new window witha profile plot of each lane.7.Now choose the Straight Line selection tool.At the base of each peak,draw a line from one side of the peak to the other.This encloses the area of the peak.The tails to either side of the peak are the background signal.Note that if you have many lanes,the later lanes will be hidden at the bottom of the profile plot.To see these lanes,press and hold the space bar,and use the mouse to drag the profile plot upwards.8.When each peak has been closed off at the base with the Straight Line tool,choose the Magic Wand(Wand tracing tool)from the tool palette.ing the spacebar and mouse,drag the profile plot back down until you are at the top peak. With the wand,click inside the peak.Repeat this for each peak as you go down the profile plot.10.When each peak has been selected,go to Analyze>Gels>Label Peaks.This labels each peak with its size expressed as a percentange of the total size of all the measured peaks.You can go to the Results window and choose Edit>Copy All to copy the results for placing in a spreadsheet.Note:If you accidentally click in the wrong place with the Magic Wand,the program still records that clicked area,and it will factor into the total area used to calculate the percentages.Obviously this would skew your results if you click in areas that aren't peaks.Therefore,if you should click in the wrong place,simply go to A nalyze>Gels>Label Peaks to plot the current results,which displays these incorrect values,but more importantly resets the counter for the Results window. If you now go back to the Profile Plot and click in the peaks with the Magic Wand,the Results window clears and starts over.When you're sure you've clicked in the correct peaks without accidentally clicking in any wrong areas,you can go back to Analyze>Gels>Label Peaks and get the correct results.教程下载：/files/uv1JN-8*NsvjXs-Lfcz2XiblWXipjZeuSt02X5Nh6CZO1ky1uGEz9J3K0brzHT 7WWaM4jhg4JlSmcJGniGt8TQMIrak7s1fQ/imageJ.pdf。
image J灰度检测
ImagJ是一款简单的图像处理与分析软件，可以用来进行WB定量分析。
一、利用ImagJ对WB条带进行灰度分析
1、File——》open 打开WB片子
2、把图片转化成灰度图片
image——》type——》8-bit
3、消除背景影响
process——》subtract background 选择50基本可以
4、设置定量参数
analyze——》set measurements，点击面积，平均密度和灰度值及Integrated Density
5、设置单位
analyze——》set scale ，在“unit of length”的方框里输入“pixels”
6、把图片转换成亮带，Edit——》invert
7、选择Freehand
Selection，尽量把条带圈起来，点击键盘m，出来IntDen灰度值
8、复制数据IntDen进行分析
二、利用ImagJ对WB条带进行密度分析
1、File——》open 打开WB片子
2、如条带不正，需修正
image——》transform——》rotate
调节angle值，直到条带水平为止
3、选中矩形选项，圈中第一个条带，然后analyze——》gels——》select first
lane（快捷键ctrl+1），然后移动第一个条带上的矩形到第二个条带上，analyze——》gels——》select second lane（快捷键ctrl+2），最后analyze——》gels——》plotlanes
4、选中直线工具，将开口的波峰关闭
5、选中魔棒工具，点击波峰可以显示波峰下面积，即条带的密度值
6、以第一个数值为基数，其他数值与第一个数值的比值为相对密度。
imageJ软件分析westernblot灰度值
imageJ软件分析westernblot灰度值ImagJ是一款简单的图像处理与分析软件，可以用来进行WB定量分析。
一、利用ImagJ对WB条带进行灰度分析1、File——》open 打开WB片子2、把图片转化成灰度图片image——》type——》8-bit3、消除背景影响process——》subtract background 选择50基本可以4、设置定量参数analyze——》set measurements，点击面积，平均密度和灰度值及Integrated Density5、设置单位analyze——》set scale ，在“unit of length”的方框里输入“pixels”6、把图片转换成亮带，Edit——》invert7、选择FreehandSelection，尽量把条带圈起来，点击键盘m，出来IntDen灰度值8、复制数据IntDen进行分析二、利用ImagJ对WB条带进行密度分析1、File——》open 打开WB片子2、如条带不正，需修正image——》transform——》rotate调节angle值，直到条带水平为止3、选中矩形选项，圈中第一个条带，然后analyze——》gels——》select firstlane（快捷键ctrl+1），然后移动第一个条带上的矩形到第二个条带上，analyze——》gels——》select secondlane（快捷键ctrl+2），最后analyze——》gels——》plotlanes4、选中直线工具，将开口的波峰关闭5、选中魔棒工具，点击波峰可以显示波峰下面积，即条带的密度值6、以第一个数值为基数，其他数值与第一个数值的比值为相对密度。
imagelab 算条带灰度值
imagelab 算条带灰度值摘要：1.介绍ImageLab 及其功能2.解释条带灰度值的概念3.说明如何使用ImageLab 计算条带灰度值4.讨论计算条带灰度值的应用和重要性正文：ImageLab 是一款功能强大的图像处理软件，广泛应用于生物学、医学和材料科学等领域。
它能够实现多种图像处理功能，例如图像增强、滤波、分割、测量等，为科研工作者提供了极大的便利。
在ImageLab 中，条带灰度值是一个重要的参数，用于衡量图像中条带区域的灰度水平。
条带灰度值是指图像中条带区域的平均灰度值。
在生物学和生物技术领域，条带常常出现在电泳图、Western Blot 和免疫组化等实验图像中。
这些条带通常表示蛋白质或其他生物大分子的分布情况，对于分析实验结果具有重要意义。
因此，计算条带灰度值是ImageLab 中常见的操作之一。
要使用ImageLab 计算条带灰度值，可以按照以下步骤进行：1.打开ImageLab 软件，导入需要处理的图像文件。
2.使用ImageLab 的分割功能，将图像中的条带区域与背景进行区分。
可以使用阈值分割、区域生长等方法实现。
3.对分割后的条带区域进行灰度值计算。
可以选择整个区域，也可以选择特定的子区域。
计算方法可以是求平均值、中值或众数等。
4.根据计算结果，可以对条带的灰度值进行分析，例如比较不同实验条件下条带的灰度值差异，评估实验结果的可靠性等。
计算条带灰度值在生物学和医学研究中具有重要应用。
通过分析条带灰度值，科研工作者可以更准确地评估实验结果，为研究提供有力的支持。
此外，条带灰度值的计算还可以应用于图像的定量分析，例如测量条带的面积、长度等参数，进一步挖掘图像中的有价值信息。
总之，ImageLab 是一款实用的图像处理软件，能够帮助科研工作者轻松地计算条带灰度值，为实验结果的分析提供有力支持。
用ImageJ对Western DNA和Blot图片灰度分析
用ImageJ对W estern Blot图片灰度分析教程收集于互联网来源中生网The good news is that even if you don't have access t o a photo editing program such as Photoshop, you can now do all the same analyses using free programs. My favorite option is the freely available ImageJ from the National Institut es of Health.The homepage for ImageJ is here: /ij/index.html wherein you can find links t o the download, document ation, additional plugins and so on.Once ImageJ is inst alled, open it up and open your scanned film file. We'll start the ImageJ section by duplicating the method outlined above for Phot oshop.1. Open your file.2. Under Image>Type click on 8-bit t o convert the image to grayscale.3. Go to the menu Process>Subt ract Background. Try a rolling ball radius of 50. This removes some of the background coloration from your image.4. Go to Analyze>Set Measurements, and click the boxes for Area, Mean Gray Value, and Int egrated D ensit y.5. Go to Analyze>Set Scale, and ent er "pixels" in the box next t o Unit of length.6. Go to Edit>Invert (or hit Ct rl+Shift+I) t o invert the colors on the image. Now the dark areas are light, and the light areas are dark. As outlined above, this has the benefit of making the measured values for bands increase with increasing prot ein expression.7. Choose the F reehand Selection tool from the t ool palette.8. Draw a line around the boundary of your first band. As above, you need to use your own judgement aboutwhere t he edges of the band are, and what is simply background noise.9. Hit the m key to take a measurement of the enclose area that you select ed. The Result s window should pop up, and each of the measurements you select ed in step 4 should appear. Not e that the Integrated Density column is simply the Area and Mean Gray Value columns multiplied together.10. Use the Freehand Selection tool to select the next band, and press m to take the measurement. Repeat this for each of you bands, including the st andard.11. When you are finished, you can go to the Edit menu in the Results window, and choose Copy All. You can then paste the results into a spreadsheet for lat er use.教你使用ImageJ分析电泳条带灰度比-ImageJ使用教程ImageJ这套软件可以自动帮你你计算细胞数，也可以定量分析DNA电泳或是Western blot条带。
Image-J-对WB进行灰度分析
Image J 对WB条带进行灰度分析Image J软件：Windows 版本第一步：软件安装1.下载地址：2.下载windows 32位带Java版本，双击软件安装。
第二步：界面介绍1.软件界面第三步：图片分析1.下图为样板图片2.导入图片：File> Open> Sample1.jpg图片导入后，Sample1.jpg在新的窗口中打开3.图片类型设置：Image> Type> 8 bit4.去除图片背景：Process> Subtract Background> …4.1Subtract Background 窗口：Rolling ball radius 设为50 pixels，勾选light background，可选preview，点击“OK”确定5.工具栏:选择“矩形选框”6.最大化“Sample1.jpg”窗口，便于矩形选择，矩形选择第一个泳道7.标记“矩形选框”为1：矩形选择后，调整矩形至合适大小，按下数字键“1”，或者Analyze> Gels> Select Fist Lane。
8.选择“泳道2”：拖动“1”的矩形框，会出现两个矩形选框，拖动矩形框至泳道2，调整位置，并按下数字键“2”，Image J 会自动调整大小使“矩形框2”与“矩形框1”保持同一水平。
9.继续拖动，会出项新的“矩形选框”，调增至泳道3，并按下数字键“2”（注意：是按下数字键“2”），重复9至6个泳道全部选择。
10.所有泳道选择后，按下数字键“3”，出现分析图谱。
11.“直线”封闭峰：工具栏选择“直线”，从起峰处至落峰处。
11.计算峰值：工具栏> Wand(tracing) tool,点下刚才封闭的区域，峰值结果出现在新的窗口中。
计算结果：。
ImageJ分析western步骤
点击file →ope n→任意一张图
点击再点击
，左右鼠标键可改变图片大小，以便分析，图片大小不影响数据。
点击再点倒数第二项，减去背景，保存原设置值。
点击
再点invert
点击再点 set measurements,勾选如下
Ok确定
Mean Gray Value:平灰度值
Integrated Density:总灰度值
点击，在区域内可改变大小，最好刚刚圈住每个印记，
不改变方框大小，移到旁边黑色区域，计算背景面积
点击，measure
再把方框移到每个组别，仍点击
所有值将会依次出现，
如果中间改变方框大小，那么必须再重新将方框移到黑色区域，计算背景面积。
所有印记的真实值=系统出现值-同样方框下的背景值。
ImageJ和Graphpad如何对WesternBlot条带灰度分析【干货】每日生物评论
ImageJ和Graphpad如何对WesternBlot条带灰度分析【干货】每日生物评论摘要手把手教你利用Image J和Graphpad软件对Western Blot条带进行灰度分析和柱状图构建，看艾美捷干货分享。
WB是研究蛋白表达的一个经典方法。
对于一些时间点或者是不同组织蛋白表达量的分析就涉及到量的变化。
一些凝胶成像软件带有此分析工具，比如Quantity One，Bandscan，Gel-Pro Analyzer等成像系统专用软件。
除了这些软件，还有一个比较简单的综合性质图像处理软件Image J可以很方便的进行灰度分析。
而且Image J是开源性质的免费软件，可以在其官网直接下载使用。
对Western Blot条带进行数值化有两种方法——灰度分析和光密度分析。
灰度是计算机图像分析仪根据图像颜色深浅分为256个级别。
灰度值越小物体颜色越深。
光密度是指光线通过溶液或某一物质前的入射光强度IO与该光线通过溶液或物质后的透射光强度Ib比值的对数OD=log（IO/Ib）；图像分析中，入射光和透射光强度分别被切片上最亮区域的平均灰度值和待测目标平均灰度值取代，则图像分析系统的光密度值=log（切片标本最亮区域的平均灰度值（g0）/待测目标的平均灰度值（g））。
光密度值越大，物体颜色越深，阳性物质相对含量越大。
对于灰度值来说，切片标本制作时染色时间长短，以及测量时显微镜照明光源电压的大小对其影响很大。
而光密度是一个比值。
是通过计算一张切片标本最亮区域的平均灰度值与该切片标本中待测目标的平均灰度值的比值，再根据数学公式计算而来的，所以受切片标本染色时间长短及照明光源电压关系很小。
然而有研究实践显示，灰度值与光密度值二者之间存在着线性关系，都可以用来进行WB定量分析。
同样，Image J软件进行WB条带定量分析时也存在两种方法，此处只列举一种方法，具体步骤如下。
1、下载安装，并打开Image J软件。
Westen blot 灰度测定方法
WB灰度计算image j
1.载入图片：File----open---选中文件
2.图片处理：
（1）改变类型：RGB转化为8-bit（灰度图）
（2）去除背景：（灰背景影响计算）process---subtract background---默认50.0 light background---OK（CTRL加加号放大，加减号缩小）
3.分析方法一：
（1）选择分析范围：矩形工具框选分析泳道
（3）analyze---gels---select first lane---yes
（4）绘图：analyze---plot lanes（几个条带对应几个峰值）
（5）计算每一个峰值的面积：峰的根部分隔开，用直线工具画竖的知县分割成闭合区域
（6）计算面积：魔棒工具，分别点击每一个峰值的区域，得到面积数据（面积对应灰度值，蛋白质量越多则灰度面积越大）
蛋白质跑之前内参调齐肉眼即可判断趋势。
4.分析方法二：
矩形工具单独框选后命名（除了第一个ctrl+1以外都ctrl+2，最后一个ctrl+3可以挪到旁边，框框大小必须一样）
nalyze---plot lanes绘图后，得到单独分割的峰图，直接选择魔棒工具（更加精确也可以直线封闭），选择面积计算即可
#一般需要与目的蛋白的分子量相差5kd以上。
ImageJ分析电泳条带灰度
教你使用ImageJ分析电泳条带灰度比-ImageJ使用教程
摘要：ImageJ这套软件可以自动帮你你计算细胞数，也可以定量分析DNA电泳或是Western blot条带。
ImageJ这套软件可以自动帮你你计算细胞数，也可以定量分析DNA电泳或是Western blot条带。
step 1.首先打开软件后，开启图档
step 2.请先做校正，选择Analyze底下的Calibrate选项，再选择校正的模式，使用Uncalibrate OD，再按ok
按下ok之后会出现校正的图形
Step 3.在要分析的第一条(first lane)加上一个长型框(工具列第一个选项)，再按下Analyze/Gels/select first Lane快速键(Ctr+1)，此时框架中会出现一个号码1，之后可以移动框架到第二个lane再选择Analyze/Gels/select second Lane快速键(Ctr+2)，当然可以一直加下去，最后按Analyze/Gels/plot Lanes快速键(Ctr +3)。
Step 4.分析以后会出现图型表示你刚选择的框内的影像强度，此时可以看到有几个比较高的区段，就是我们想定量的band，使用直线工具(工具列第五个选项)先将图形中高点为有band 的区域和没有band的区域分开再，使用魔术棒工具(工具列第八个选项)点选要分析的区域。
Step 5.当我们点选分析时，在result的对话视窗会出现分析的数据，依序点选就会出现每个band的值。
注：当我们选择分析的条带也可以是横向选取，就可以只比较相同大小的DNA的含量，同样也可以应用在western blot或其它类似实验条带的分析上。
WB灰度值测定
Image J测到了WB条带灰度值关于用Image J量化westernblot条带灰度值,在网上一直盛传着两种操作方法,然鹅~小伙伴们却一直不确定到底哪种才是正确的测量灰度方法，甚至将灰度与光密度弄混淆。
今天咱们一起就这个机会学习下，请先看看你是用以下那种方法测量灰度值?以下是两种方法的具体操作。
方法一:1、打开Image J软件→左上角file→Open 选择自己的条带图片（事先把条带摆正)2、把图片转化成灰度图片：Image→type→8—bit3、第一个矩形工具→选上所有条带4、analyze→Gels→select first lane→Gels→plot lanes（在这第四步也可以分开选取，如：框选第一个条带→analyze→Gels→select firstlane→将第一个框拖移到余下条带→Gels→select nextlane）5、选中直线工具，将开口波峰关闭6、选中魔棒工具(正数第七个）,点击波峰，就得出所有area值。
方法二1、打开Image J软件→左上角file→Open 选择自己的条带图片（事先条带弄正）2、把图片转化成灰度图片：Image→type→8—bit3、扣除背景:Process→Subtract Background→50pixels 并勾选Light Background5、设定参数：Analyze→set measurement→勾选Area、Mean gray value、Min & max gray value、Integrated density6、Analyze→set scale→unit of length选项里改为pixels，确定6、图像分割。
Edit→Invert→选中椭圆圈（手残党首选）/不规则圆圈（心灵手巧党义无反顾），手动圈上单个条带7、Analyze→Measurement即得到Intden,重复6、7步就得到所有Intden值小伙伴们，你们是哪种方法呢?首先先把结论说出来，其实两者得出的area和Intden严格来说都不是灰度值，前者是面积而后者是光密度值,但用来量化WB条带都是OK的。