液相数据处理052 4
多组分高效液相色谱数据的计算机程序处理
满意。为此，我们利用Ｃ Ｒ Ａ所具有的Ｂ 上 述不足之处。
该程序用于处理已存盘的色谱数据。程序结
构见 下图：
结果用表格形式打印，有九项内容：峰号、
名称 、保留时 间，以及根据面积和峰 高值计算的 结果各三项。 在对 游离氨基酸 的结 果进行处理时 ，最后给
出三项总计结果：总浓度、支／ 芳比值、必需氨 （ 一）参数设置、色谱选择调入
对涉及统 一 的色谱分析 方式和打 印输 出格式 基酸总 理 怼 。 该程 序也 曾用于胆 汁 中八种结合胆汁酸 的色 邪
的参数， ＭＥ ＨＯ 、Ｆ 如 Ｔ Ｄ ＯＭＡ Ｔ等， 在程序内设
置， 些随分析 条件需经常变动的参数， 某 如 Ｓ Ｏ ＥＭＩ ＡＲ Ａ等， Ｉ Ｐ Ｔ方式输入。 Ｌ Ｐ ， Ｎ， Ｅ 用 Ｎ Ｕ 鉴定 所必 需的 Ｉ 表在 程序外 设 置， 积 Ｉ Ｄ 面 Ｄ
用。
［Ｓｉａｚ Ｃ ｒｏ ｔｎ － ３ Ｂ Ｓ 》 ２ ｈ ｄｕ ｐｒｉ 《 Ｒ Ａ Ｉ ］ ｍ ｏ ａｏ 禖 Ｃ Ａ Ｃ
（ 收稿 日 期： １８ 年 ６月 ２ ９９ ８日）
谱数据处理 上 。 参 考 文 献
［Ｓｉａ ｕ ｒ ｒｔｎ 《 ｈｏ ａ ｐｃ Ｒ Ａ １ ｈ ｄ Ｃ ｐ ａｏ Ｃ ｒ ｔ ａ Ｃ ３ ］ ｍ ｚ ｏｏ ｉ ｍ ｏ －
Ｉ ｓｒ ｃ ｉｎ ａ ａ ｎ ｔｕ ｔｏ Ｍ ｎｕ ｌ 》
表设于 ＦＬ Ｏ ＩＥ ， Ｉ 峰高 Ｄ表设于 ＦＴ ｌ ＩＥ ， 由程序调
色谱 调入内存并按规定方式作图。 （ 二）色谱峰数据的 屏幕编辑 调 入内存的色谱 数据经程序处理后 ，列表在 屏幕 上 舷 显示 ，共有 峰号 、成 分名 、Ｉ 号、峰 面 Ｄ 积、峰 高、保 留时间、标准保 留时 间、保留时间 相对 误差八项 。屏幕每幅显示 １ 个峰的上述内容 ２ 后 暂停，供分析 比较 判断并记录 。Ｃ Ｎ Ｏ Ｔ后换幅 （戏 最后 两个峰及后续 的 １ ㄉ 上 幅 ０个峰 ）显 示，直至 经 Ｉ 表鉴定 出的峰全部显示完止。 Ｄ 据 上 述项 目，结 合色谱图，可确定 当前鉴定 结 果是否 正确 ，从而确定重复鉴 定峰的取舍、错 误鉴定峰的改正等。 有 两种方式进行 修改。删除方式可 将重复鉴 定的峰数据删去 ，只保留正确 鉴定 的。更改方式 可改 正鉴定错误的峰或 未鉴定出的峰。 修改后 的结 果重 新在屏幕 上显示 ，可进 一步 修改 ，直到确认满意为止。 （ 三）结果输出打印
高效液相软件操作方法
高效液相软件操作方法
以下是高效液相软件操作方法：
1. 创建项目：打开高效液相软件后，选择“新建项目”，输入项目名称和相关信息，创建新的项目。
2. 输入试样信息：在新建项目后，可输入试样信息，包括样品名称、样品编号、分析日期等。
输入完毕后，保存信息。
3. 创建实验方法：在新建项目中，可创建实验方法。
点击“实验方法”选项卡，选择“新建方法”，输入方法名称和相关信息，设置实验条件和参数。
4. 导入样品：在“样品”选项卡中，选择“导入样品”，选择需要分析的样品列表，将样品导入到项目中。
5. 运行实验：选择实验方法后，点击“运行实验”，系统将开始执行实验方法。
实验结果将自动保存。
6. 数据分析：在“分析结果”选项卡中，可查看和分析实验结果。
根据需要选择分析方法，进行数据分析和结果呈现。
7. 数据输出：在数据分析后，可将分析结果输出为PDF、Excel等格式。
选择
“输出数据”选项卡，设置输出格式和参数，将分析结果输出到指定位置。
以上是高效液相软件的基本操作方法，具体操作方法可能因不同厂家软件版本略有不同。
液相操作法
PE-HPLC的操作说明
一、脱气
1、溶剂瓶备好，拧紧瓶盖
2、打开氦气钢瓶，分压一小格的压力即可，打开脱气开关
3、此时转动溶剂瓶盖上方的出气阀，使溶剂瓶中多余的空气除去
4、待空气排完，可关闭瓶盖上方的出气阀和氦气开关
5、更换溶剂时重新脱气
二、开机（工作站只能控制泵和检测器，自动进样器和柱温箱单独
控制）
1、先打开泵、检测器、自动进样器电源开关，柱温箱随时开机不
分先后，再打开Link开关。
2、打开泵的Purge 阀，进行溶剂排气，此时可用泵控制流量。
3、降低流量，关上Purge 阀。
三、操作
1、打开工作站，点击RUN-Take Control，等待工作站与仪器
连接通讯上。
2、编辑序列、方法、报告，以相应的文件名保存，还有谱图路径
保存，点击SET UP
3、点击Modify进行修改，Details可显示当前参数。
4、打开泵，平衡色谱柱
5、按自动进样器上的start，开始进样采集数据。
Real-time
窗口观察图谱。
四、关机先关工作站，再关仪器电源。
液相数据处理
外标法特点
是实验室最常用的定量方法，定量结果准确
特点： 1）不需所有峰都流出或被检测到 2）需要标准样品 3）进样量必须准确 4）仪器必须有良好的稳定性 5）只对所测组分作校正
9
9
Shimadzu International Trading (Shanghai) Co. Limited
浓度 目标 内标
定量方法
面积归一化 外标法 内标法 标准加入法
6
6
Shimadzu International Trading (Shanghai) Co. Limited
面积归一化法
不能作为准确定量的方法，仅在特定情况下使用
公式： 特点：
Ci%
Байду номын сангаас
Ai
Ai
100%
1）无需做校正，简便，快速 2）进样量不严格要求 3）所有组分都流出并且被检测到 4）所有组分的响应因子都相同
Standard为整数，浓度由低到高依次为1、2、3、4、5… …
114
14
Shimadzu International Trading (Shanghai) Co. Limited
数据处理参数
积分参数：（Width, Slope, Drift, T.DBL等）
定性参数：保留时间及允许误差（时间窗，时间带）
7
7
Shimadzu International Trading (Shanghai) Co. Limited
浓度 C1 C2 C3 C4
8
外标法
面积 A1
A2
峰面积
A4 A3
标准曲线
A2 A3
A1
A4
C1
C2
高效液相色谱涉及的数据处理基本公式解析
高效液相色谱涉及的数据处理基本公式解析（宁波大学海洋学院赵百添）1.保留时间t R2.调整保留时间t'R扣除死时间后的保留时间,也称折合保留时间。
在实验条件（温度、固定相等）一定时，t'R只决定于组分的性质，因此，t'R（或t R）可用于定性分析。
反映了被分析的组分与色谱柱中固定相发生相互作用，而在色谱柱中滞留的时间，它更确切地表达了被分析组分的保留特性。
3.死时间t M不被固定相滞留的组分，从进样到出现最大峰值所需的时间。
关系：t R=t'R+ t M4.保留体积V R从进样开始到某组分在柱后出现浓度极大值时流出溶剂的体积,又称为洗脱体积。
V R＝F × t R5.死体积V M不被固定相滞留的组分，从进样到出现最大峰值所需的流动相体积。
V M＝F × t M6.调整保留体积V'R扣除死体积后的保留体积。
V'R＝V R－V M或V'R＝F×t'R7.分配系数K指一定温度下,处于平衡状态时，组分在固定相中的浓度和在流动相中的浓度之比，以K表示。
分配系数反映了溶质在两相中的迁移能力及分离效能，是描述物质在两相中行为的重要物理化学特征参数。
分配系数与组分、流动相和固定相的热力学性质有关，也与温度、压力有关。
在条件（流动相、固定相、温度和压力等）一定，样品浓度很低时（Cs、Cm 很小）时，K只取决于组分的性质，而与浓度无关。
这只是理想状态下的色谱条件，在这种条件下，得到的色谱峰为正常峰；在许多情况下，随着浓度的增大，K减小，这时色谱峰为拖尾峰；而有时随着溶质浓度增大，K也增大，这时色谱峰为前延峰。
因此，只有尽可能减少进样量，使组分在柱内浓度降低，K恒定时，才能获得正常峰。
在同一色谱条件下，样品中K值大的组分在固定相中滞留时间长，后流出色谱柱；K 值小的组分则滞留时间短，先流出色谱柱。
混合物中各组分的分配系数相差越大，越容易分离，因此混合物中各组分的分配系数不同是色谱分离的前提。
液相色谱故障处理
液相色谱故障处理背景介绍液相色谱（Liquid Chromatography，简称LC）是化学分析中常用的一种分析技术，它以液体为移动相，在色谱柱中进行化合物的分离。
液相色谱是一种高效、灵敏和精确的分离和定量分析技术，广泛应用于药物、化学、生物、环境等领域的分析试验中。
然而，在实验操作过程中，难免会出现仪器故障，下面将介绍常见液相色谱故障及其处理措施。
常见故障及处理措施流量异常1.缓冲液流量异常原因：缓冲液中的盐分浓度过高，柱子内部出现盐颗粒等堵塞物抑制缓冲液流动，或者柱子内部压力过大等等。
解决方法：检查缓冲液中盐分浓度是否合适，清洁柱子。
2.流量计问题原因：流量计故障或者气泡引起的不稳定。
解决方法：检查流量计并更换或调整。
3.泵压异常原因：泵装置故障或挡板不启动。
解决方法：检查泵装置、更换出现问题的部件。
峰形异常1.前驱峰过宽原因：注入体积过大、流速过快、柱子内部存在异物等等。
解决方法：检查注射器、调整流速、清洗柱子。
2.分离不良原因：柱子老化、柱内填充物流速不匹配等等。
解决方法：检查柱子是否到期、更换柱子。
3.后峰异常原因：柱内填充物表面污秽和老化，柱子内部流速不匹配。
解决方法：更换柱子内部填充物。
噪声问题1.底噪过高原因：仪器的部分环境噪声，如压力传感器、泵装置等等。
解决方法：检查周围环境是否干净，其他仪器是否产生干扰。
2.漂移噪声原因：流动相组成不稳定，温度变化大等等。
解决方法：检查液相分离液压力、温度等。
结论液相色谱检测是化学分析中常用的测试技术，流量、峰形和噪声都是故障发生的常见原因，只有全面分析各种原因，并找到相应的解决方法，才能顺利进行实验，保证实验准确性和可靠性。
液相色谱事务汇总集 液相色谱如何操作
液相色谱事务汇总集液相色谱如何操作液相色谱关于多数人来说都是很好上手的仪器了，但是就算是用过几年、经过丰厚的剖析员都会习气于一些错误的操作，常常招致一些仪器毛病。
便当快捷的剖析过程当然紧要，但是为了多做样品而疏忽了一些必不可少的步骤，常常得失相当，哪些操作不能做？哪些懒儿不能偷？那些小概率的毛病师傅没教怎样办？液相运用过程中有哪四大关键要素要留意？活动相不过滤由于尘埃或其它任何杂质微粒都会磨损柱塞、密封环、缸体和单向阀，因而应预先除去活动相中的任何固体微粒。
活动相可以在玻璃容器内蒸馏，而常用的方法是滤过，可接受Millipore滤膜（0.2μm或0.45μm）等滤器。
泵的入口都应连接砂滤棒（或片）。
输液泵的滤器应常常清洗或改换。
运用后没有适时清洗泵活动相不应含有任何腐蚀性物质，含有缓冲液的活动相不应保存在泵内，特别是在停泵过夜或更长时间的情形下。
假如将含缓冲液的活动相留在泵内，由于蒸发或走漏，以至只是由于溶液的静置，就可能析出盐的微细晶体，这些晶体将和上述固体微粒一样损坏密封环和柱塞等。
因而，必需泵入纯水将泵充分清洗后，再换成合适于色谱柱保管和有利于泵维护的溶剂（关于反相键合硅胶固定相，能够是甲醇或甲醇—水）。
活动相走空泵工作时要留心避开溶剂瓶内的活动相被用完，否则空泵运转也会磨损柱塞、缸体或密封环，最后产生漏液。
没有活动相流出，又无压力指示怎样办？可能是泵内有大量气体，这时可翻开泄压阀，使泵在较大流量（如5ml/min）下运转，将气泡排尽，也可用一个50ml针筒在泵出口处帮忙抽出气体。
另一个可能原因是密封环磨损，需改换。
压力和流量不稳了？原因可能是气泡，需求扫除；或者是单向阀内有异物，可卸下单向阀，浸入丙酮内超声清洗。
有时可能是砂滤棒内有气泡，或被盐的微细晶粒或繁殖的微生物局部梗塞，这时，可卸下砂滤棒浸入活动相内超声除气泡，或将砂滤棒浸入稀酸（如4mol/L硝酸）内疾速除去微生物，或将盐溶解，再立刻清洗。
液相数据处理
液相数据处理液相数据处理是化学分析领域中常用的数据处理方法之一，它主要用于处理色谱、色谱质谱联用（LC-MS）、毛细管电泳（CE）等技术产生的数据。
本文主要介绍液相数据处理的四个步骤：预处理、分析、解释和报告，并在此基础上探讨了数据处理中常见的问题和应对策略。
一、预处理预处理是数据处理的第一步，也是整个数据处理过程中最为关键的一步。
预处理的目的是将原始数据转换成更为规范和易于分析的数据集，包括数据清理、缺失值填补、标准化等操作。
数据清理：数据清理是预处理的第一步，其目的是去除数据中的异常值、噪声、重复值等。
异常值的存在会导致数据的偏移和误差，噪声会对数据分析和模型建立产生干扰，重复值则会影响模型的稳定性。
数据清理可以手动完成，也可以通过各种算法实现，如建立数据异常检测模型或程序实现。
缺失值填补：数据缺失是数据处理中常见的问题，其分为随机性缺失和非随机性缺失。
随机性缺失指缺失数据出现的次数和位置没有规律，可以随机填补或直接删除；非随机性缺失指缺失数据出现的位置有规律或者缺失数据的值与其他数据有关，需要通过插补或者其他算法来填补缺失数据。
标准化：标准化是将原始数据转换为一种统一的格式，以方便进行分析。
常用的标准化方法有最大最小值标准化和Z-score标准化。
最大最小值标准化是将原始数据值缩放到[0,1]的范围内，而Z-score标准化是将原始数据值缩放到平均值为0，标准差为1的标准正态分布上。
二、分析分析是数据处理的核心步骤，其目的是从处理后的数据中提取信息，关键是确定有效的信息特征和有效的分析方法。
特征选择：特征选择是从处理后的数据中选择对处理目标最相关的特征。
特征选择可以通过相关性分析、主成分分析等方法实现。
分析方法：根据处理目标的不同，分析方法也不同。
无论是定量分析还是定性分析，都需要根据处理目标和数据特征选择最合适的分析方法。
常见的分析方法包括聚类分析、主成分分析、线性回归分析、分类分析等。
液液相平衡数据的测定
xi i
i
x j l j qi [ln( j ji ) 1 ( NC
j 1 j 1 j 1
NC
NC
NC
ji
j
i 1 i
)]
ij
x
j 1 j
NC
i
j
xi qi
x q
j 1 j
NC
j
ln ij
uij RT
u ij u ji
uii 0
li
Z ( i qi ) i 1 2
热力学的两大应用领域
化工过程分析——能量的合理利用 相平衡热力学——相分离过程的极限
原 料 I 原料 提纯 去除有害 反应物 II 反 应 未反应的反应 物循环使用 III 产物 纯化 产 品
实验内容
1、采用乙醇为内标物，测定内标曲线； 2、测定常压一定温度下的醋酸甲酯（1）－甲醇（2）—水 （3）三元体系汽液相平衡数据，不少于5个，而且要有组 成分布，能画出相图；
含一个部分互溶对的三角相图
褶点：是结线长度接近于零，表示部分互溶度的极限，超过 该点就进入单相区。 结线：其与溶解度曲线的交点G、H是此温度下，该三元系 的两个平衡液相组成。
综合型实验 液液相平衡数据的测定
一、实验目的：
1、加深理解掌握《化工热力学》课程的内容；
2、通过测定常压下醋酸甲酯-甲醇--水三元系统液液平衡数 据，了解和掌握用平衡釜法测定液液相平衡数据的方法；
3、初步掌握汽相色谱分析方法，卡尔菲休微量水分分析方 法；
4、激发学生的求知欲，增强学生发现问题、解决问题的能
反相液相色谱法实验数据处理图
1、根据标准溶液和未知样品溶液色谱图和保留时间，标出未知样品溶液中每一个峰代表什么化合物。
苯标准溶液
联苯标准溶液
蒽标准溶液
表4-1结果记录表Fra bibliotek流动相苯
萘
联苯
蒽
tR
tR
tR
tR
甲醇-水
3.845
5.043
5.890
8.063
2、根据标准溶液中萘在不用浓度下的峰面积，采用最小二乘法，求出在该色谱峰下萘的回归曲线。
表4-2对应于各浓度的峰面积值
浓度（ug/mL）
5
10
20
40
100
峰面积
605196
1188782
1712929
4010414
9404236
未知样品中萘的峰面积：1523297
3、根据萘的回归曲线和未知样品溶液色谱图中萘的峰面积，计算出未知样品溶液中萘的含量。
液相数据处理PPT学习教案
Slope的设定
Slope
Slope
Slope<峰斜率，作为峰计算 Slope
Slope>峰斜率，作为噪声滤除 Slope
Slope≈峰斜率，积分不稳定，须手动设定 第18页/共33页
Drift值的设定(自动校正)
谷宽<半峰高宽度 T2<T1
谷宽>半峰高宽度 T2>T1
第20页/共33页
第10页/共33页
选择内标物应注意
理化性质与待测物相近 色谱响应与待测物相近 与待测物有良好的分离，但不能相距太远 与待测物的峰面积比为0.7-1.3最好，因此要
根据待测物的浓度确定内标物的添加量
第11页/共33页
定量计算常用术语
Integration parameters ：积分参数，规定计算出峰面积的方法。
基本积分参数
Width：半峰宽，峰的半高宽，排除峰宽小于最小峰宽的峰 Slope：斜率，用来判断出峰起点、终点以及滤除低平噪声 Drift：漂移，判断相邻峰的积分方式
设定值为0时，积分仪将自动判断 如Drift与基线至峰谷连线较接近时，积分面积值可能变化较大
T.DBL：时间变参，根据时间自动改变峰宽和斜率 Minimum area：最小峰面积，排除面积小于该值的峰
Ｔ.DBL的设定
T.DBL：时间变参，根据时间自动改变峰宽和斜率
等度洗脱时，出峰时间越长，峰越宽 设定值为0时，根据宽度自动判断 默认值为1000，此时该参数不起作用
在实际使用中，一般使用默认设定
第21页/共33页
积分锁定
Integration Off to On：锁定某一时间范围的峰，使之不计算积分
液相数据处理
通则0512高效液相色谱法
高效液相色谱法：系采用高压输液泵将规定的流动相泵入装有填充剂的色谱柱，对供试品进行分离测定的色谱方法。
注入的供试品，由流动相带入色谱柱内，各组分在柱内被分离，并进入检测器检测，由积分仪或数据处理系统记录和处理色谱信号。
1.对仪器的一般要求和色谱条件高效液相色谱仪由高压输液泵、进样器、色谱柱、检测器、积分仪或数据处理系统组成。
色谱柱内径一般为3.9～4.6mm，填充剂粒径为3～10μm。
超高液相色谱仪：是适应小粒径（约2μm）填充剂的耐超高压、小进样量、低死体积、高灵敏度检测的高效液相色谱仪。
（1）色谱柱反相色谱柱：以键和非极性基团的载体为填充剂填充而成的色谱柱。
常见的载体有硅胶、聚合物复合硅胶和聚合物等；常用的填充剂优十八烷基硅烷键合硅胶、辛基硅烷键合硅胶和苯基键合硅胶等。
正相色谱柱：用硅胶填充剂，或键合极性基团的硅胶填充而成的色谱柱。
常见的填充剂有硅胶、氨基键合硅胶和氰基键合硅胶等。
氨基键合硅胶和氰基键合硅胶也可用作反向色谱。
离子交换色谱柱：用离子交换填充剂填充而成的色谱柱。
有阳离子交换色谱柱和阴离子交换色谱柱。
手性分离色谱柱：用手性填充剂填充而成的色谱柱。
色谱柱的内径和长度，填充剂的形状、粒径与粒径分布、孔径、表面积、键合基团的表面覆盖度、载体表面基团残留量，填充的致密与均匀程度等均影响色谱柱的性能，应根据被分离物质的性质来选择合适的色谱柱。
温度会影响分离效果，品种正文中未指明色谱柱温度时系指室温，应注意室温变化的影响。
为改善分离效果可适当提高色谱柱的温度，但一般不宜超过60℃。
残余硅羟基未封闭的硅胶色谱柱，流动相的pH值一般应在2～8之间。
残余硅羟基已封闭的硅胶、聚合物复合硅胶或聚合物色谱柱可耐受更广泛pH值的流动相，适合于pH值小于2或大于8的流动相。
（2）检测器最常用的检测器为紫外-可见分光检测器，包括二极管阵列检测器，其他常见的检测器有荧光检测器、蒸发光散射检测器、示差折光检测器、电化学检测器和质谱检测器等。
液相基本操作步骤
液相基本操作步骤(一)、开机：1、打开计算机,进入Windows NT （或Windows 2000）画面,并运行Bootp Server程序(打开电脑将自动运行)。
2、打开1100 LC 各模块电源。
(由下至上打开)3、待各模块自检完成后(灯变成黄色)，双击Instrument 1 Online图标，化学工作站自动与1100LC通讯，进入的工作站画面如下所示。
5、把流动相放入溶剂瓶中。
6、打开Purge阀。
(第三层的黑色旋扭往左旋)7、单击Pump图标(鼠标左键),出现参数设定菜单，单击Setup pump选项，进入泵编辑画面。
8 、设Flow 5ml/min，单击OK。
9、单击Pump图标，出现参数设定菜单，单击Pump control选项，选中On，单击OK，则系统开始Purge，直到管线内（由溶剂瓶到泵入口）无气泡为止,切换通道继续Purge，直到所有要用通道无气泡为止。
10、单击Pump图标，出现参数设定菜单，单击Pump Control选项，选中Off，单击Ok关泵，关闭Purge 阀。
（二）数据采集方法编辑：1、开始编辑完整方法：●从“Method”菜单中选择“Edit entire method”项，如上图所示选中除“Data analysis”外的三项，单击Ok，进入下一画面。
2、方法信息：●在“Method Comments”中加入方法的信息（如：方法的用途等）。
●单击Ok 进入下一画面。
3、泵参数设定：（以二元泵为例）●在“Flow”处输入流量,如1ml/min，在“stop time”处输入运行时间,在“Solvent B”处输入70.0,(A=100-B) ,也可Insert 一行”Timetable” ,编辑梯度。
在“Pressure Limits Max”处输入柱子的最大耐高压，以保护柱子。
●单击Ok进入下一画面。
5、柱温箱参数设定:●在”Temperature”下面的方框内输入所需温度,并选中它,点击”more>>”键,如图所示,选中”Same as left”---使柱温箱的温度左右一致。
液相色谱常见问题及处理方法
液相色谱常见问题及处理方法HPLC灵敏度不够的主要原因及解决办法1、样品量不足，解决办法为增加样品量2、样品未从柱子中流出。
可根据样品的化学性质改变流动相或柱子3、样品与检测器不匹配。
根据样品化学性质调整波长或改换检测器4、检测器衰减太多。
调整衰减即可。
5、检测器时间常数太大。
解决办法为降低时间参数6、检测器池窗污染。
解决办法为清洗池窗。
7、检测池中有气泡。
解决办法为排气。
8、记录仪测压范围不当。
调整电压范围即可。
9、流动相流量不合适。
调整流速即可。
10、检测器与记录仪超出校正曲线。
解决办法为检查记录仪与检测器，重作校正曲线。
为什么HPLC柱柱压过高柱压过高是HPLC柱用户最常碰到的问题。
其原因有多方面，而且常常并不是柱子本身的问题，您可按下面步骤检查问题的起因。
1、拆去保护预柱，看柱压是否还高，否则是保护柱的问题，若柱压仍高，再检查；2、把色谱柱从仪器上取下，看压力是否下降，否则是管路堵塞，需清洗，若压力下降，再检查；3、将柱子的进出口反过来接在仪器上，用10倍柱体积的流动相冲洗柱子，（此时不要连接检测器，以防固体颗粒进入流动池）。
这时，如果柱压仍不下降，再检查；4、更换柱子入口筛板，若柱压下降，说明您的溶剂或样品含有颗粒杂质，正是这些杂质将筛板堵塞引起压力上升。
若柱压还高，请与厂商联系。
一般情况下，在进样器与保护柱之间接一个在线过滤器便可避免柱压过高的问题，SGE提供的Rheodyne 7315型过滤器就是解决这一问题的最佳选择。
液相色谱中峰出现拖尾或出现双峰的原因是什么？1、筛板堵塞或柱失效，解决办法是反向冲洗柱子，替换筛板或更换柱子。
2、存在干扰峰，解决办法为使用较长的柱子，改换流动相或更换选择性好的柱子如何解决HPLC进行分析时保留时间发生漂移或急速变化漂移现象1、温度控制不好，解决方法是采用恒温装置，保持柱温恒定2、流动相发生变化，解决办法是防止流动相发生蒸发、反应等3、柱子未平衡好，需对柱子进行更长时间的平衡快速变化现象1. 流速发生变化，解决办法是重新设定流速，使之保持稳定2、泵中有气泡，可通过排气等操作将气泡赶出。
高效液相色谱仪操作手册(戴安全自动)
液相色谱操作规程-U3000(全自动)一、操作前准备:1.1流动相的配制:1.1.1根据所供试品的性质、相关的文献资料、工作经验等按比例配制流动相。
1.1.2根据流动相的性质确定采用有机膜(0.45um)还是水相膜(0.45um)对流动相进行过滤。
1.1.3将过滤后的流动相进行超声脱气10~15分钟。
1.2对照品供试品处理:1.2.1称取或量取适量的对照品或供试品,用适当的溶剂(最好采用流动相或流动相的主成分)进行充分溶解(也可借助超声波进行超声溶解),使其浓度为0.1~1mg/mL(根据检测结果再适当调节溶液的浓度)。
1.2.2根据对照品或供试品的性质确定采用有机针头滤膜(0.45um)还是水相针头滤膜(0.45um)进行过滤。
1.3色谱柱的选择:根据样品的性质选择适当的色谱柱。
二、开机:2.1打开电源,打开仪器接线板电源开关;2.2打开电脑显示器电源,打开电脑主机电源,启动电脑;2.3依次打开泵、自动进样器、柱温箱、检测器的电源;等待各个部件自检完成2.4双击屏幕右下角“服务管理器”快捷图标,出现对话界面后点击“启动仪器控制器”启动,等显示“本地仪器控制器运行空闲”,关闭界面。
2.5双击在桌面上的Chromeleon 7图标(工作站主程序)。
2.6在左下方点击仪器,则在右边会自动显示该仪器控制面板2.7 旋开泵上的排液阀(两圈以上);设置A通道为100%,点击“冲洗”,然后再出现的对话框中点击“忽略并执行”;(默认冲洗5分钟);然后用同样的方法分别“冲洗”流路中其他通道气泡;排完气泡后关闭排液阀;2.8设置流动相的比例及流速后,点击“马达”。
此时泵自动会以设置的流速进行运行。
2.9在控制面板“自动进样器”控制框中,分别执行“灌注注射器”,“清洗缓冲环”,“清洗针外壁”,执行“到进样位置”;(操作过程中注意注射器有没有气泡。
如有先机器排气,如果不行手动拆除排气泡。
)3.0 在控制面板“柱温箱”控制框中,设置准备分析样品所使用的柱温箱温度。
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数据处理试题（0524）考号：_____________ 得分：____________
第一部分：实验测定
一、标准样品（标样）的测定
1、标准样品的配制
配制含环丙沙星、达氟沙星、恩诺沙星及沙拉沙星一定浓度的标准溶液
2、测定
按国标《动物性食品中氟喹诺酮类药物残留检测高效液相色谱法》（农业部1025号公告-14-2008）中规定的色谱条件测定，得标样谱图.
二、加标样的测定
1、样品制备
（1）采样
准确称取牛肉样品（空白）2.0000g于50mL具塞离心管中，加入浓度为
10.00ug/mL抗生素标准溶液0.02mL。
平行3次
（2）提取
准确移取20.0mL磷酸盐缓冲液在每份已称量好的牛肉样品中；将离心管置于漩涡振荡器上，中速振荡5min；用空离心管和纯化水在托盘天平上进行配平，然后高速离心（10000r，5min）；将上清液倒15.0ml放入25mL烧杯中，以备过柱用。
（3）净化
将固相萃取柱在固相萃取仪上安装好，用5mL的刻度吸管分两次、每次吸取3.0mL共6.0mL的甲醇活化，再用5mL的刻度吸管分两次、每次吸取3.0mL共6.0mL 的水进一步活化；取离心所得上清液5.0mL过柱；用水2.0mL清洗，挤干；用流动相2.0mL洗脱；并用5mL试管收集洗脱液；用2mL的一次性注射器吸取洗脱液，并将收集的洗脱液过0.22μm 有机系膜，直接装在样品瓶中，做好标记，供色谱测定。
按标准样品的方法测定，得到加标样1谱图、加标样2谱图、加标样3谱图。
三、试样的测定
除不加标外，其他均按加标样品方法进行，得到试样图谱
四、结果计算
1、定性:当加标样与标样组分的保留时间相差±0.05min 时可认为是同一药物
2、残留量
请按下式计算空白加标样品中环丙沙星、达氟沙星、恩诺沙星及沙拉沙星质量分数（残留量）X
s 13
2s AC VV A V M
X ＝
X ：加标样中环丙沙星、达氟沙星、恩诺沙星及沙拉沙星的残留量， A ：加标样中相应药物的峰面积； As:标准溶液中对应药物的峰面积 C S ：标准溶液中对应药物的浓度； V 1：提取用磷酸盐缓冲液的体积 V 2：过萃取柱所用上清液体积； V 3：洗脱用流动相体积 M ：加标样的质量
3、加标回收率
10100%m m m -⨯加标
P ＝
回收率以三份平行加标样中待测成分的绝对质量来计算
4、精密度
100%⨯RSD
RSD 值以三份平行加标样中待测成分的质量分数来计算
1ml=1000ug 1mg=1000ug
附：质量分数保留小数点后二位；加标回收率保留三位有效数字；质量分数平均值保留小数点后二位。
第二部分：数据处理（15分）
请填写下列表格（表1为1分，其他为14分）
表2.2。