实验二___酵母菌发酵培养、RNA的提取及定量测定
酵母RNA的提取及RNA含量的测定(紫外吸收法)
生物化学实验报告题目：酵母RNA的提取及RNA含量的测定（紫外吸收法）姓名：学号：班级：时间：一、实验目的：1.掌握稀碱法提取酵母RNA的原理和方法。
2.掌握紫外线（UV）吸收法测定核酸浓度的原理。
3.熟悉紫外分光光度计的使用方法。
二、实验原理：1.酵母核酸中RNA含量较多，DNA则少于2%。
RNA可溶于碱性溶液，当碱被中和后，可加乙醇使其沉淀，由此即可得到粗RNA制品。
2.核酸及其衍生物，核苷酸、核苷、嘌呤和嘧啶有吸收UV的性质，其吸收高峰在260nm波长处。
测得未知浓度核酸溶液的A260nm值，即可以计算出其中RNA或DNA的含量。
该法操作简便，迅速，并对被测样品无损，用量也少。
三、实验器材：pH试纸，电子天平，试管1.5cm×15cm（×10），三角瓶200mL（×1），烧杯100mL（×1），量筒50mL（×1）、10mL（×1），吸管，离心机4000r/min，容量瓶100mL（×1），紫外分光光度计。
四、实验试剂：标准RNA溶液（100μg/mL），0.2%NaOH，酸性乙醇（500mL95%乙醇+5mLHCl），95%乙醇，无水乙醇，干酵母粉（市售）。
五、实验步骤：1.称取4g干酵母粉，放入200mL三角瓶中，加入40mL 0.2%NaOH溶液，沸水浴30min后冷水冷却，4000r/min离心15min。
留上清液加入95%酸性乙醇40mL，边加边搅拌，静置5~10min，再4000r/min离心5min，保留沉淀，在每次用10mL 95%乙醇洗涤沉淀，3000r/min离心5min，洗涤两次，再用无水乙醇100mL洗涤两次，每次3000r/min离心5min，收集到沉淀1.36g于滤纸上保存备用。
2.取0.2112gRNA样品，加入2mL 0.2%NaOH溶液和1mL水，溶解呈糊状。
再加40~50mL水，溶解，调pH为7，定容至100mL。
酵母RNA的提取实验报告
酵母RNA的提取实验报告实验报告：酵母RNA的提取一、实验目的1.学习和掌握酵母RNA的提取基本原理和方法。
2.了解RNA在生物体内的生物功能及其重要性。
3.培养实验技巧和操作能力，提高实验素养。
二、实验原理RNA（核糖核酸）是生物体内的重要生物分子之一，它参与蛋白质合成、基因表达等重要生命活动。
酵母是一种常用的真核生物模型，其RNA提取方法与人体、植物等真核生物类似。
本实验采用氯仿-异戊醇法提取酵母RNA。
主要步骤包括细胞破碎、离心分离、有机溶剂抽提、乙醇沉淀等。
三、实验步骤1.准备试剂和器材（1）试剂：氯仿、异戊醇、无水乙醇、DEPC水、RNA酶。
（2）器材：研钵、离心管、移液器、玻璃棒、氮气吹干器、分光光度计等。
2.酵母细胞破碎（1）在冰上用研钵将酵母细胞研磨成粉末。
（2）加入适量DEPC水，搅拌均匀。
（3）用玻璃棒将细胞碎片挑出，弃去上清液。
（4）加入适量DEPC水，搅拌均匀，重复上述步骤，直到细胞完全破碎。
3.离心分离（1）将破碎的酵母细胞溶液转移到离心管中。
（2）在4℃下，以12000rpm的转速离心15分钟。
4.有机溶剂抽提（1）用移液器将上清液小心地转移到另一个离心管中。
（2）加入等体积的氯仿-异戊醇混合液（氯仿：异戊醇=24：1），用玻璃棒搅拌均匀。
（3）在4℃下，以12000rpm的转速离心15分钟。
5.乙醇沉淀（1）将上清液转移到新的离心管中，并加入等体积的无水乙醇，用玻璃棒搅拌均匀。
（2）在4℃下，以12000rpm的转速离心15分钟。
6.洗涤和干燥（1）用移液器小心地将上清液吸出，留下沉淀物。
（2）加入适量75%乙醇，用玻璃棒搅拌均匀，去除残留的乙醇和水分。
（3）在氮气吹干器下将沉淀物吹干约5分钟。
7.RNA溶解与定量（1）加入适量DEPC水，将沉淀物溶解。
（2）用分光光度计测定RNA溶液的吸光度值（A260nm），计算RNA浓度。
四、实验结果与分析表1：酵母RNA提取结果本实验通过氯仿-异戊醇法成功地提取出了高浓度的酵母RNA。
酵母rna的提取实验报告
酵母rna的提取实验报告酵母RNA的提取实验报告引言：RNA是一种重要的生物分子，它在细胞内承担着转录和翻译的重要功能。
在分子生物学研究中，提取RNA是一项常见的实验操作。
本实验旨在通过提取酵母细胞中的RNA，探究RNA的提取方法和应用。
材料与方法：1. 实验材料：酵母细胞、细胞裂解缓冲液、RNA提取试剂盒、异丙醇、氯仿、异丁醇、乙醇、载玻片、显微镜等。
2. 实验步骤：a. 酵母细胞的培养与收获：将酵母细胞培养于培养基中，通过离心将细胞收获。
b. 细胞裂解：将收获的细胞用细胞裂解缓冲液裂解，以释放RNA。
c. RNA提取：使用RNA提取试剂盒，按照说明书中的步骤进行RNA提取。
d. 纯化RNA：通过异丙醇沉淀和氯仿萃取，去除DNA和蛋白质等杂质。
e. 洗涤与干燥：使用异丁醇和乙醇进行洗涤，最后将RNA干燥。
f. 检测RNA：将提取得到的RNA溶解于适当的缓冲液中，使用紫外可见光谱仪或显微镜观察RNA的浓度和纯度。
结果与讨论：通过上述实验步骤，我们成功地提取到了酵母细胞中的RNA。
在实验过程中，我们注意到以下几点：1. 细胞裂解的缓冲液选择：细胞裂解缓冲液的选择对RNA提取至关重要。
合适的缓冲液可以有效地破坏细胞膜，释放细胞内的RNA。
在本实验中，我们选择了一种经充分验证的缓冲液，以确保细胞能够完全裂解。
2. RNA提取试剂盒的使用：RNA提取试剂盒是一种常用的RNA提取方法。
它通过特定的试剂和离心步骤，将RNA从细胞裂解物中分离出来。
在本实验中，我们按照试剂盒的说明书进行操作，成功地提取到了RNA。
3. RNA的纯化：RNA的纯化是为了去除细胞裂解物中的杂质，如DNA和蛋白质。
在本实验中，我们使用了异丙醇沉淀和氯仿萃取的方法，成功地纯化了RNA。
这些方法可以有效地去除DNA和蛋白质，提高RNA的纯度。
4. RNA的检测：在实验中，我们使用紫外可见光谱仪或显微镜对提取得到的RNA进行检测。
通过观察RNA的浓度和纯度，我们可以评估提取的RNA是否适用于后续的实验操作。
酵母rna的提取实验报告
酵母rna的提取实验报告酵母RNA的提取实验报告。
实验目的，通过实验研究酵母RNA的提取方法，为后续的基因表达调控研究提供技术支持。
实验材料与方法：1. 实验材料，酵母细胞培养物、TRIzol试剂、异丙醇、氯仿、乙醇、DEPC水等。
2. 样品制备，取酵母培养物，离心收集酵母细胞，冰上洗涤去除培养基。
3. 细胞破碎，向酵母细胞中加入TRIzol试剂，用离心管摇匀，静置离心管5分钟。
4. RNA提取，加入氯仿，摇匀，离心分离上清液，上清液转移至新离心管中，加入异丙醇沉淀RNA。
5. RNA沉淀，离心沉淀RNA，弃上清液，加入乙醇洗涤RNA，再次离心沉淀RNA。
6. RNA溶解，用DEPC水溶解RNA，测定纯度和浓度。
实验结果：1. 细胞破碎，经过加入TRIzol试剂处理后，酵母细胞成功破碎，形成混浊的混合液。
2. RNA提取，通过氯仿萃取法，成功分离出上清液中的RNA，得到透明的上清液。
3. RNA沉淀，加入异丙醇后，观察到RNA在离心管底部形成白色沉淀。
4. RNA溶解，最终得到溶解度较高的RNA样品，纯度和浓度符合实验要求。
实验分析：本次实验采用的酵母RNA提取方法较为简单，通过TRIzol试剂的使用，成功实现了酵母细胞的破碎和RNA的提取。
氯仿的加入有效分离出RNA，异丙醇的沉淀步骤也取得了良好的效果。
最终得到的RNA样品纯度高，浓度适宜，可以用于后续的实验研究。
实验结论：本实验成功建立了一种适用于酵母细胞的RNA提取方法，为后续的基因表达调控研究提供了可靠的技术支持。
该方法操作简便，提取效果良好，适用于大规模样品的提取工作。
参考文献：1. Chomczynski P, Sacchi N. Single-step method of RNA isolation by acid guanidinium thiocyanate-phenol-chloroform extraction. Anal Biochem. 1987Apr;162(1):156-9.2. Schmitt ME, Brown TA, Trumpower BL. A rapid and simple method for preparation of RNA from Saccharomyces cerevisiae. Nucleic Acids Res. 1990 Jan25;18(10):3091-2.。
酵母中RNA的提取与含量测定
酵母中RNA的提取与含量测定酵母是一类广泛应用于工业生产中的微生物，具有高温抗性、高碱性和高盐度等特殊环境适应能力，可生产出酵母菌辅酶、乳酸、醋酸、酒精、面包等产品。
酵母的研究也成为生物学、生物技术等领域的重要课题之一。
RNA（核糖核酸）是生命体中发挥重要生物学功能的分子之一，能够参与DNA复制、转录和翻译等生命过程，是研究生物学、分子生物学和基础医学等领域的重要手段之一。
因此，酵母中RNA的提取与含量测定是酵母研究的重要内容之一。
酵母中RNA的提取方法主要包括以下几个步骤：1.预处理样品：将培养的酵母细胞通过离心和去除培养基中的各种杂质，得到净化后的酵母细胞。
2.细胞破碎：通过化学方法或物理方法对细胞膜进行破坏，将细胞内的RNA暴露出来。
3.溶解RNA：加入适量的含有RNA保护剂（如二硫苏糖）的缓冲液，使RNA得到保护，不会受到核酸酶的影响，可以得到RNA溶液。
4.精制RNA：通过酚/氯仿提取及异丙醇沉淀的方法分离出纯化的RNA。
5.分析RNA：通过吸光度测定、电泳或荧光分析等方法检测RNA的纯度和含量。
酵母中RNA的含量测定可通过紫外吸收光度法进行。
该方法利用RNA在260nm处的吸收峰和RNA在280nm处的吸收峰的比值，来计算RNA的浓度。
其计算公式为：RNA浓度 = OD260值× 40 ug/ml × 稀释倍数其中，OD260值为RNA样品的吸光度值；40ug/ml为RNA样品在260nm处的吸收系数；稀释倍数为样品的稀释倍数。
除紫外吸收光度法外，也可以采用其他方法如电泳或荧光分析来测定RNA的含量。
总之，酵母中RNA的提取和含量测定可为酵母研究提供重要的实验基础和理论支持，为探索酵母生物学和基因工程等应用领域提供更为广阔的前景和新的研究突破。
酵母RNA 的提取、鉴定和定量测定实验
用蒸馏水定容到刻度，混匀。取1.0 ml样品液稀释40
倍后，分别取2份2.0 ml的稀释液，加入2.0 ml的地衣 酚试剂，混匀，与标准曲线的各管同时臵沸水浴中加 热45分钟，冷却，测定O.D 670。
（3）RNA含量的计算 根据测得的O.D值，从标准曲线上查出相对应的 RNA含量，按下式计算出制品中RNA的百分含量：
核酸的分布
DNA：细胞核（95%） 细胞器（5%） RNA：细胞质（75%) 细胞核(10%) 细胞器(15%)
RNA以rRNA的数量最多（80％-85%)
核酸提取的主要步骤
破碎细胞
去除与核酸结合的蛋白质以及多糖、脂类等
生物大分子
去除其它不需要的核酸分子
沉淀核酸，去除盐类，有机溶剂等杂质
管号
试剂 标准RNA溶液 （ml） (100g/ml) 蒸馏水（ml） 地衣酚试剂 （ml） 0 1 2 3 4 5
0
2.0
0.4
1.6
0.8
1.2
1.2
0.8
1.6
0.4
2.0
0
2.0
2.0
2.0
2.0
2.0
2.0
（2）样品的测定 准确称取0.1 g提取的酵母RNA，放入小烧杯中，加少 量蒸馏水调成糊状，溶解，若不溶，则滴入少量5%-6% 氨水助溶，调pH至7.0，小心转移到25 ml容量瓶中，
醋酸纤维薄膜电泳装臵示意图
1. 滤纸桥 2. 电泳槽 3. 醋酸纤维素薄膜 4. 电泳槽膜支架 5. 电极室中央隔板
3．电泳
将点样后的膜条臵于电泳槽架上，放臵时， 无光泽面(即点样面)向下，点样端臵于负极，槽 架上以双层滤纸作桥垫，滤纸的一端与支架的前 沿对齐，另一端浸入电极槽的缓冲液中。用缓冲 液将滤纸全部浸润并驱除气泡。膜条与滤纸需贴 紧，待平衡5 min后通电，电压为160 V，电流为 0.4～0.7 mA/cm，通电30 分钟左右关闭电源。
酵母rna提取实验报告
酵母rna提取实验报告酵母RNA提取实验报告引言RNA提取是分子生物学研究中的重要步骤，它可以用于分析基因表达、克隆和测序等多种应用。
酵母RNA作为一种常见的模式生物体，在研究中也经常需要进行RNA提取实验。
本实验旨在通过酵母细胞提取RNA的方法，探索酵母RNA的纯化和分析技术。
材料和方法1. 酵母细胞培养液2. 离心管3. 离心机4. 细胞破碎液5. 氯仿6. 异丙醇7. 乙醇8. DEPC水9. 热盖式混合器10. 磁珠11. 离心管架12. 离心管架13. 紫外可见分光光度计实验步骤1. 收集酵母细胞并离心2. 加入细胞破碎液并用热盖式混合器破碎细胞3. 加入氯仿并离心，收集上清液4. 加入异丙醇和磁珠，混合悬浮5. 使用离心管架将磁珠沉淀，去除上清液6. 加入乙醇洗涤磁珠7. 用DEPC水溶解RNA8. 使用紫外可见分光光度计检测RNA浓度和纯度结果通过本实验方法，成功提取了酵母细胞中的RNA，并且得到了较高的纯度和浓度。
实验结果表明，所提取的RNA可用于后续的实验分析和研究。
讨论本实验采用了经典的酵母RNA提取方法，通过破碎细胞、沉淀RNA、洗涤和溶解等步骤，成功地提取了酵母细胞中的RNA。
实验结果表明，所提取的RNA具有较高的纯度和浓度，可以满足后续实验的需要。
然而，也需要注意到在实验过程中可能存在的污染和损失，需要进一步优化实验条件和技术。
结论通过本次实验，我们成功地提取了酵母细胞中的RNA，并得到了较高的纯度和浓度。
这为我们进一步研究酵母基因表达和调控提供了重要的实验基础。
同时，也为其他研究人员在酵母RNA提取方面提供了一种可靠的实验方法和参考。
总结酵母RNA提取实验是分子生物学研究中的重要步骤，通过本次实验，我们成功地提取了酵母细胞中的RNA，并得到了较高的纯度和浓度。
这为我们的研究提供了重要的实验基础和技术支持。
希望通过我们的努力，能够为相关领域的研究工作做出一定的贡献。
酵母rna的提取实验报告
酵母rna的提取实验报告实验目的：本实验旨在通过提取酵母细胞中的RNA，研究酵母细胞的基因表达情况。
实验步骤：1. 准备工作：将所需试剂及设备准备好。
包括酵母细胞培养液、收集酵母细胞的离心管、琼脂糖、Rnase-free水、DTE溶液、Tris-HCl缓冲液、氯仿、异丙醇、盐溶液等。
2. 收集酵母细胞：将酵母培养液离心，将细胞沉淀至离心管中。
使用离心机将细胞沉淀。
3. 细胞破碎：向离心管中加入30μL DTE溶液，充分混合。
将离心管置于冰上，加入等体积的琼脂糖。
轻轻翻转管子，使细胞与琼脂糖充分混合。
继续在冰上离心。
4. 分层：将离心管放入冰上15分钟，离心10000g，4°C，15分钟，将上清转移至新离心管中。
5. 分液：加入等体积的Tris-HCl缓冲液，混合均匀。
加入等体积的氯仿，轻轻翻转混合。
在冰上离心15分钟，以分离上层水相和下层有机相。
6. 收集RNA：将上层水相转移至新离心管中，加入等体积的异丙醇，充分混合。
在-20°C放置30分钟，使RNA充分沉淀。
离心12000g，4°C，15分钟，将上清抽离。
7. 洗涤：加入70%乙醇洗涤一次，离心12000g，4°C，5分钟，弃上清。
重复此步骤一次。
8. 干燥：将离心管开盖，室温下干燥15分钟。
加入Rnase-free水，重悬RNA。
实验结果：完成实验后，得到1μg/μL浓度的酵母RNA。
使用NanoDrop 光度计检测RNA纯度，A260/A280比值为2.0，显示RNA被成功提取。
使用琼脂糖凝胶电泳分析酵母RNA，显示主要为2个明显的条带，符合预期。
实验结论：本实验成功地提取了酵母细胞中的RNA，并证实RNA的纯度和完整性。
这为进一步研究酵母细胞的基因表达提供了基础。
生物化学实验报告-酵母RNA的提取与鉴定
实验五酵母RNA的提取与鉴定一、实验目的1.掌握稀碱法分离酵母RNA的原理与操作过程。
2.了解RNA的组分并掌握定性鉴定的具体方法。
二、实验原理1.酵母核酸中RNA含量较多，DNA含量则少于2%。
2.RNA可溶于碱性溶液，当碱被中和后，可加乙醇使其沉淀，有此可得粗RNA制品。
3.用碱液提取的RNA有不同程度的降解三、实验仪器1.离心机2.水浴锅3.电炉4.烧杯5.量筒四、实验试剂1.干酵母粉2.0.2%氢氧化钠溶液：2g氢氧化钠溶于蒸馏水并稀释至1000ml。
3.乙酸4.95%乙醇5.无水乙醚6.10%硫酸7.氨水9.5%硝酸银溶液：5g硝酸银溶于蒸馏水并稀释至100ml，贮于棕色瓶中。
1.苔黑酚-三氯化铁溶液：将100mg苔黑酚溶于100ml浓盐酸中，再加入100mgFeCl3.6H2O。
临用时配制。
五、实验步骤1.RNA的提取：（1）称取2g干酵母粉于100ml烧杯中，加入0.2%氢氧化钠溶液10ml，沸水浴加热30分钟，经常搅拌（如沸水浴过程中溶液蒸干可再加5~10ml氢氧化钠）。
然后加入乙酸数滴，使提取液呈酸性（pH 试纸检验），离心10-15分钟（4000r.p.m）。
（2）取上清液，加入2倍体积的95%乙醇，边加边搅，加毕，静止，待完全沉淀，过滤。
（3）滤渣先用95%乙醇洗2次，每次约5毫升，再用无水乙醚洗2次，每次也约5ml。
（4）洗涤时可小心地用玻璃棒搅动沉淀。
乙醚滤干后，滤渣即为粗RNA，可鉴定。
2.鉴定：（1）取上述RNA约0.5g，加10%硫酸5ml,加热至沸1—2分钟，将RNA水解。
（2）取水解液0.5ml，加入苔黑酚-三氯化铁溶液1ml，加热至沸1分钟，观察颜色变化。
（3）水解液2ml，加入氨水2ml和5%硝酸银溶液1ml，观察是否产生絮状嘌呤银化合物。
六、实验结果加热至沸1分钟后，溶液变成绿色；产生絮状嘌呤银化合物沉淀七、实验分析实验注意事项1.过滤时,洗涤不能带水,否则沉淀粘在滤纸上取不下来。
【精品】酵母RNA的提取与鉴定
【精品】酵母RNA的提取与鉴定
酵母是广泛应用于生物学研究的模式生物之一，因为它们具有较小的基因组，短的生命周期和适应性强。
在酵母研究中，提取RNA是常见的操作，因为RNA是在基因表达调控中起重要作用的分子之一。
本文将介绍酵母RNA的提取方法和鉴定实验。
1. 准备样品：将酵母转移到含有5 mL YPD培养基的试管中，在30°C下培养过夜。
2. 收集细胞：将培养的酵母细胞移至1.5 mL离心管中，离心2分钟，2000rpm。
将上清液倒掉。
3. 细胞破碎：加入300 ul裂解缓冲液含有β-丙硫氨酸（β-mercaptoethanol），使每个细胞含有至少0.5 mM β-丙硫氨酸。
用盐或玻璃珠打碎细胞，破碎细胞的进程中需要冷却架。
破碎细胞，离心2分钟，13000rpm。
4. 取RNA：将上清液转移到一个新的1.5 mL离心管中，加入等体积的酚/氯仿，混合搅拌，离心10分钟，13000rpm。
RNA会出现在水相中，将水相转移到一个新的离心管中。
6. 干燥：将离心管在室温下风干10-15分钟，或将RNA转移到新的离心管或板中，在室温下干燥。
1. 电泳：将提取的RNA在2%琼脂糖凝胶中电泳，根据RNA的分子量判断RNA提取过程中是否有降解。
2. 比色法：用比色法测定RNA的浓度，通常比色法可以快速精确地测定核酸浓度。
3. 分光光度法：分光光度法可以通过测量RNA的260 nm和280 nm吸收值，计算出RNA 纯度。
总之，提取酵母RNA是简单易行的，对于酵母基因表达研究是至关重要的，可以应用多种方法进行RNA鉴定。
酵母RNA的提取、组分鉴定和含量测定
定磷试剂含有还原剂抗坏血酸，抗坏血 酸很容易被空气中的氧所氧化，使定磷 试剂失效。因此可以改用钼酸铵试剂定 磷。核酸分子中的有机磷经强酸消化后 形成无机磷，在酸性条件下,无机磷与 钼酸铵结合形成黄色磷钼酸铵沉淀。
【思考题】
01 如何得到高产量RNA粗制品？ 02 验证RNA中核糖的办法，可否用以检验脱氧核糖，为什么？ 03 用你所学过的化学知识,分析3种催化剂：
【操作步骤】
RNA的提取：将5g酵母悬浮30mL0.04mol/L氢氧化钠 溶液中，并在乳钵中研磨均匀。将悬浮液转移至100毫 升锥形瓶中。在沸水浴上加热30分钟后，冷却。离心 (3000r/min)15分钟，将上清液缓缓倾入15 mL酸性乙 醇溶液中。注意要一边搅拌一边缓缓倾入。待核糖核酸 沉淀完全后，离心(3000r/min)3分钟。弃去清液。用 95％乙醇洗涤沉淀两次，乙醚洗涤沉淀一次后，再用乙 醚将沉淀转移至布氏漏斗中抽滤。沉淀可在空气中干燥。
标准曲线的制作
按上表编号及加入试剂。加毕，摇匀，置沸 水浴加热25min，取出后冷水冷却，以零号 管作对照,于670nm波长处测定各管光吸收 值。取测定的平均值,以RNA浓度为横坐标, 光吸收为纵坐标作图,绘制标准曲线。
样品的测定
取两支试管,各加入2.0mL样品注液,再加 2.0mL地衣酚-Cu2+试剂，如前述进行 测定.
RNA含量的计算
根据测得的光吸收值,从标准曲线上查出 相当该光吸收的RNA含量，计算出制品 中RNA的百分含量。
第一步
第二步
【注意事项】
01 样 品 中 蛋 白 质 含 量 较 高 时 , 应 先 用 5 % 三 氯 乙 酸 溶 液 沉 淀 蛋白质后再测定。
02 本 法 特 异 性 较 差 , 凡 属 戊 糖 均 有 反 应. 微 量 D NA 无 影 响 , 较 多DNA存在时,亦有干扰作用。如在试剂中加入适量 CuCl2 .2H2O可减少DNA的干扰。此外,利用RNA和 DNA显色复合物的最大光吸收不同,且在不同时间显示 最大色度加以区分。反应2min后,DNA在600nm呈现 最大光吸收,而RNA则在反应15min后,在670nm下呈 现最大光吸收。
酵母RNA的提取和定量测定
酵母RNA的提取和定量测定131140033 习盼一、实验目的：1、掌握稀碱法提取酵母RNA的原理和方法2、掌握用苔黑酚法测定RNA含量的原理和方法3、熟悉紫外分光光度计的基本原理和使用方法。
二、实验目的：酵母核酸中RNA含量较多，DNA少于2%。
RNA可溶于碱性溶液，当碱被中和后，加入乙醇可使其沉淀，由此即可得到粗RNA制品。
用碱液提取的RNA有不同程度的沉降。
在酸性条件下，RNA分子中的核糖基转变为α-呋喃甲醛，后者与苔黑酚（3,5-二羟甲苯）作用生成绿色复合物，可用比色法测定。
三、实验器材和试剂：器材：1、干酵母粉2、pH试纸3、电子天平4、烧杯（100ml）5、量筒6、抽滤瓶7、布氏漏斗8、吸管9.离心机10、水浴锅11、分光光度计试剂：1、0.2%NaOH溶液2、乙酸3、95%乙醇4、标准RNA溶液（0.1mgRNA/ml）4、苔黑酚一三氯化铁试剂四：实验步骤：1、RNA的提取：称取7.9692g干酵母粉于100ml烧杯中，加入0.2%NaOH溶液40ml，沸水浴加热30分钟，经常搅拌。
冷却，加入乙酸用石蕊试纸调节提取液pH至酸性（5~6），离心15分钟（4000r/min），取上清液，加入2倍体积的95%乙醇，边搅拌边加。
加完后静置10分钟，待完全沉淀后，抽滤。
滤渣先用95%乙醇洗两次（每次10ml），洗完离心5分钟（4000r/min），再用无水乙醚洗涤2次（每次10ml），抽滤得到滤渣即为粗RNA，可作测定含量用。
2、标准曲线的绘制：取六只试管，按下表操作：3、样品的测定：取0.0104gRNA粗品用蒸馏水溶解并用100ml容量瓶定容。
取1ml液体置于试管6中，加蒸馏水1.0ml，苔黑酚试剂2.0ml，连同上步6只试管一起沸水浴保温45min，冷却。
测定其A670nm。
根据标准曲线求得RNA的质量（mg）。
ω=m1/m2*100%式中ω：RNA的质量分数（%）m1:样液中测得的RNA质量（mg）m2:样液中样品的质量（mg）四、实验结果：提取的粗RNA质量为0.1951g。
推荐一个综合化学实验_酵母中RNA的提取和鉴定
2 实验步骤
2. 1 酵母中 RNA的提取 称取 5. 0g药用酵母于 100mL 锥形瓶中 ,加入 50mL 5%的氯化钠溶液 ,使成酵母悬浮液 , 再加入 20mL 5%的氯化钠溶液 ,搅匀 ,在 100W 功率 CQ2200型超声波清洗器里抽提 45m in,冷 却至室温 ,将混合物转入离心杯中 , 3000 r/m in离心 30m in。上清液经漏斗过滤于 150mL 烧杯 里 ,放于冰浴中冷却 20m in, 在搅拌下用 6mol/L 盐酸小心调节 pH 至 2. 5, 在冰 浴中 静置 20m in,使 RNA 沉淀完全 。以 3000 r/m in离心 15m in,弃去上清液 。沉淀用 70%乙醇洗两次 (每次约 10mL ) ,再用 95%乙醇洗两次 (每次约 10mL ) 。干燥 ,即得 RNA 制品 。 实验时间约为 2. 5h。 2. 2 紫外吸收法测定核酸含量 准确称取 0. 1～0. 2g RNA 粗制品 ,加少量蒸馏水调匀后 ,再加 30mL 水 ,用 50g /L 氨水溶 液调节 pH 至 6以助溶解 。氨水要慢慢地逐滴加入 ,调匀后再加第 2滴 ,以防局部因碱过多引 起 RNA 降解 。将溶液移入 50mL容量瓶中 ,稀释至刻度 。用以配置溶液 1和溶液 2。 溶液 1 取 2mL 稀释液加 2mL 水 ,摇匀后 ,吸出 2mL放入 50mL 容量瓶中 ,稀释至刻度 。 溶液 2 取 2mL 稀释液加 2mL 核酸沉淀剂 ,待充分沉淀后 ,离心 ,取 2mL 上清液置于 50mL 容量瓶中 ,稀释至刻度 。 以蒸馏水为空白 ,在 260nm 波长下 ,分别测定溶液 1和溶液 2的吸光度 A260 。 实验时间约为 1h。 2. 3 RNA组成成分的分析 取 5mL 上述实验配制的 RNA 溶液 ,加入 2mL 3mol/L 硫酸溶液 ,在沸水浴中加热 10m in, 将 RNA 水解 ,待冷却至室温后过滤 ,滤液用于下列实验 。 2. 3. 1 戊糖的检出 取 0. 5mL 水解液 ,加 1mL苔黑酚试剂 ,加热至沸 1m in,溶液呈蓝绿色 。 2. 3. 2 嘌呤碱的检出 取 2mL 水解液 ,加浓氨水和 10g /L 硝酸银溶液各 1mL。放置 10m in后 ,可看到白色嘌呤 银化合物的絮状沉淀 。
简述酵母RNA定量测定的原理
简述酵母RNA定量测定的原理酵母RNA定量测定是一种用于测定酵母细胞中RNA含量的技术。
RNA是一种核酸分子，参与了生物体内的基因转录和蛋白质合成等重要过程。
酵母细胞是一种经典的模式生物，在生物学研究中广泛应用。
酵母RNA定量测定可以帮助科研人员了解酵母细胞中RNA的表达水平，从而揭示细胞功能和生理过程的调控机制。
酵母RNA定量测定的原理主要涉及到RNA抽提、纯化和定量三个步骤。
首先是RNA的抽提。
在酵母细胞中，RNA主要存在于细胞质和细胞核中。
为了获得总的RNA样品，需要将细胞破碎并释放RNA。
常用的酵母细胞破碎方法包括机械破碎、酶解和化学方法等。
破碎后的细胞溶液中含有RNA、DNA和蛋白质等多种成分。
接下来的步骤就是纯化RNA并除去其他杂质。
其次是RNA的纯化。
纯化RNA的目的是使其从其他杂质中分离出来，以便进行后续的测定和分析。
最常见的RNA纯化方法是使用硅胶或磁珠结合RNA分子的特异性亲和性。
这种方法的原理是利用RNA和硅胶或磁珠表面间的氢键和疏水作用使RNA特异性地吸附在固相材料上，而其他杂质则可以通过洗涤步骤去除。
一般情况下，纯化后的RNA可以被溶解在适当的缓冲液中，以便后续测定和分析。
最后是RNA的定量。
RNA的定量是衡量RNA含量并计算RNA浓度的过程。
目前常用的RNA定量方法有比色法、吸光法和荧光法等。
其中，最常用的方法是吸光法。
吸光法是通过测量溶液在紫外或可见光区域的吸光度来定量RNA。
RNA在260 nm处吸光度较高，而在280 nm处蛋白质的吸光度较高。
因此，通过比较260 nm和280 nm处的吸光度可以估计RNA和蛋白质的相对含量。
通常情况下，酵母RNA定量测定还会结合核酸电泳分析来进一步验证RNA的完整性和纯度。
总体而言，酵母RNA定量测定的原理是通过将酵母细胞破碎并释放RNA，然后纯化RNA并除去其他杂质，最后通过吸光法来定量RNA。
这项技术能够准确测定酵母细胞中RNA的含量，帮助科研人员深入研究细胞的生命活动机制。
试验26酵母RNA的提取及组分鉴定
(二) RNA的水解 两管沉淀物中各加入1.5mol/L H2SO4 2.5ml后， 沸水浴10min，使其充分水解。 (三) RNA组分鉴定（取试管3支编号） 1. 磷酸试验：1号管，取钼酸铵试剂10滴， 加RNA水解液10滴摇匀，再加4%维生素C 6滴 混匀后，置沸水浴中加热5～10min，观察颜 色变化。 2. 核糖试验：2号管，取3,5-二羟基甲苯试 剂6滴，加RNA水解液10滴摇匀后，置沸水浴 中加热5～10min，观察颜色变化。 3. 嘌呤试验：3号管，取5% AgNO3 10滴， 加氨水2-3滴（至沉淀消散后），再加RNA水 解液10滴摇匀后，置沸水浴中加热约5～ 10min，观察颜色变化。
Байду номын сангаас
三、操作步骤 (一) 酵母中RNA的制备 1. 取0.5g干酵母置研钵中，加入0.04mol/L NaOH 4.0ml，磨3～5min，使其成匀浆； 2. 将酵母匀浆倒入1支大试管中，在沸水中加热 30min； 3. 把大试管中匀浆分别放入2支小试管中，配平； 4. 2000r/min离心15min，将两上清液分别倒入另 两小试管中，弃去沉淀； 5. 各加3mol/L HAc 2滴，立即摇匀酸化，用石蕊试 纸检查。 6. 上述溶液猛力摇匀后，徐徐倒入两支各盛有3ml 酸性乙醇的试管中，即有白色沉淀析出。 7. 2000r/min离心15min，倾去上清液，作下一步 实验。
酵母RNA的提取及组分鉴定
一、目的要求 了解RNA提取的原理，掌握RNA组分鉴定的 方法。
二、实验原理 酵母细胞中所含的核酸主要是RNA,DNA含量很 少，故本实验采用酵母提取RNA。由于酵母细 胞中所含的核蛋白不溶于水和稀酸，但能溶于 稀碱，所以先用稀碱加热煮沸处理，使RNA成 为可溶性的钠盐而与酵母中其它的成分分离。 然后加乙醇沉淀溶液中的RNA，最后加酸将其 完全水解，并用下列方法鉴定其中组分： (一) 钼酸铵试剂与无机磷酸结合生成的磷钼酸 易被还原生成钼蓝，以鉴定核酸中的磷。 (二) 3,5-二羟基甲苯与核糖在浓酸中共热呈绿 色，以鉴定核糖的存在。 (三) 嘌呤碱与硝酸银共热产生褐色的嘌呤银沉 淀，以鉴定嘌呤的存在。
实验二___酵母菌发酵培养、RNA的提取及定量测定
法进一步提高细胞壁的通透性，使得在细胞壁不破裂的情况下，让分子量
较小RNA透出细胞外，然后用酸中和，除去蛋白质和菌体后的上清液用乙醇 沉淀RNA。提取的RNA有不同程度的降解。稀碱法的提取时间短，提取率高
于浓盐法，更利于工业化生产。
（二）实验材料的选择 • 酵母细胞富含核酸，且核酸主要是RNA， 含量为干菌体的2.67%-10.0%，而DNA含量 较少，仅为0.03%-0.516%。为此提取RNA 多以酵母为原料。
二、实验原理
集，RNA 也易于分离。此外，抽提后的菌体蛋白质（占干菌体的50%）仍
具有很高的应用价值。 • 目前常用的RNA的制备方法
• 1）浓盐法：是用高浓度盐溶液处理，同时加热，以改变细胞壁的通透性，
使核酸从细胞内释放出来。成本低、适于大规模操作。 • 2）稀碱法: 是用氢氧化钠使酵母细胞壁变性、裂解，然后利用骤冷骤热
细菌细胞物质组成比
离子小分子 5%
• 30%化学 • 物质
磷脂 1% DNA 1% RNA 6%
• 70%水
蛋白质 15%
大分子
多糖 2%
• 线粒体与内质网的电子显微结构
思考题
• 1.核酸的溶解性质是什么?常用什么试剂
分离沉淀核酸?
• 2.为什么用酵母作为实验料？原如何使
RNA从酵母中释放出来？
L为比色皿厚度（1cm)。单位为mg/ml。
0.024（或0.020）表示1mg/ml RNA（或DNA）溶液测定的A260 值相当于0.024或0.020。
RNA 与DNA的化学组成
• • • • • • • DNA 嘌呤碱 A(腺嘌呤) G(鸟嘧啶) 嘧啶碱 C(胞嘧啶) T(胸腺嘧啶) 戊糖 D-脱氧核糖 酸 磷酸 RNA A G C U(尿嘧啶) D-核糖 磷酸
酵母RNA分离和定量测定(“鉴定”相关文档)共10张
➢ 量取上清，缓缓加入2倍体积的95%乙醇，边倒边搅，待沉淀完全 （静置片刻），再离心，3000r，3min，弃上清。向沉淀中加适量95% 乙醇（10mL）搅散转移到布氏漏斗抽干，重复一次。用乙醚洗沉淀2次。 干滤渣即RNA粗制品，称量并记录总量（M）。
➢ 准确称量50mg干滤渣（M2）用于苔黑酚法测RNA含量，其余的干 滤渣用于以下鉴定
五、实验操作
2. 鉴定
将用于鉴定的干滤渣转移到锥形瓶中，加入10%H2SO4 5mL，煮沸 （ （（用用1232））试）试mi核嘌磷 管管n后糖呤酸取取鉴1碱1mm定LL水水组解解分液液。，，加加入入2m1Lm氨L定水磷，试再剂加，沸入水1m浴L ，Ag观NO察，观察 p嘌干利掌干磷核用核6向稀准嘌R分学称 p布嘌嘌分布R掌 R稀62%H7H7NNN呤滤用握滤酸糖试糖沉碱确呤光会8氏呤呤光氏握碱--试 试AAAN11g与 渣 等 R渣 与 在 管 在 淀 法 称 与 光 用 漏 与 与 光 漏 R法00水干 水水a纸纸%%NNO硝即电即钼浓取浓中提量硝度苔斗硝硝度斗提解酵 解解（（AA））H酸R点R酸盐1盐加取5酸计黑及酸酸计及取提 产 母产 提产55，，4m0NN--银控铵酸酸适的银（酚抽银银（抽的0取生于 生取 生m77LAARRm））g水共制试中中量共法滤共共滤R66R的的的的 的粗粗2NNL干775NNAA解热剂，，热测装热热装R9沸原核核原 核制制000AA滤5可可nnN液产作与与产定置产产置水m理糖糖理 糖为为品品%mmA渣溶溶L，生用苔苔生生生R乙浴））及、、及 、析 变 变，，锥（于于N加嘌产黑黑嘌嘌嘌醇3比比方嘌嘌方 嘌出性性称称A形M0碱碱入呤生酚酚呤呤呤（色色法呤呤法 呤R含Rm时量量2瓶性性NN）i2盐磷（（盐盐盐1皿皿。碱碱。 碱量，并并n，mAA溶溶0，用基钼基基基3344和和和。应记记m，，L加,,液液00常55于氨L银酸银银银磷磷磷严录录个个可可--入），，搅二二苔水化，化化化酸酸酸格总总用用0搅再再拌羟羟黑，合后合合合.可可可控量量于于散用用。甲甲酚再物者物物物用用用制（（RR转乙乙苯苯法加NN的在的的的下下下MpM移醇醇AAH））测入））白还白白白述述述组组。到沉沉及及R1。。色原色色色方方方分分m布淀淀N高高絮剂絮絮絮法法法L鉴鉴A氏得得铁铁状抗状状状A含鉴鉴鉴定定漏到到g盐盐沉坏沉沉沉量定定定N及及斗RR酸酸O淀血淀淀淀，：：：NN单单抽3试试。酸。。。AA其，核核干粗粗剂剂（余观苷苷，制制共共或的察酸酸重品品热热硫干制制复。。产产酸滤备备一生生亚渣，，次特特铁用不不。殊殊）于能能的的的以作作绿绿作下为为色色用鉴RR（（下定NN66AA形77生生00成nn物物mm蓝活活定定色性性量量的实实））钼验验。。蓝材材（料料6。。603nm定量）。
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3、含量测定
• （1）取5mg RNA粗制品，用蒸馏水稀释至 50ml，此为RNA溶液A液（含量为0.1mg/ml)。 • （2）取A液1ml，再稀释至50ml，为B液。 • （3）取B液于厚度为1cm的石英比色杯，在 260nm波长处测定A值，以水为对照，计算 RNA含量、浓度和纯度。
计算
1）干酵母粉中RNA含量（%）
细菌细胞物质组成比
离子小分子 5%
• 30%化学 • 物质
磷脂 1% DNA 1% RNA 6%
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• 70%水
蛋白质 15%
大分子
多糖 2%
• 线粒体与内质网的电子显微结构
思考题
• 1.核酸的溶解性质是什么?常用什么试剂
分离沉淀核酸?
• 2.为什么用酵母作为实验料？原如何使
RNA从酵母中释放出来？
核糖体RNA(rRNA,82%)--蛋白质合成场所 RNA 转运RNA(tRNA,16%)--转运氨基酸 (6%) 信使RNA(mRNA,2%)--合成蛋白质的模板
蛋白质合成示意图
信使RNA(mRNA)在细胞核中合成后，从核孔进入到细胞 质中，与核糖体(rRNA)结合起来（如上图）。核糖体是 细胞内利用氨基酸合成蛋白质场所, 需要转运RNA（ tRNA）参与，在tRNA一端是携带氨基酸部位，另一端 有3个碱基，每个tRNA这3个碱基，都只能专一地与 mRNA上特定3个碱基配对。 tRNA种类很多，但是，每 种tRNA只能识别并转运1种氨基酸。当tRNA运载着1个 氨基酸进入到核糖体后，就以mRNA为模板，按照碱基 互补配对原则，把转运来氨基酸放在相应位置上。转运 完毕以后, tRNA离开核糖体, 又去转运下一个氨基酸。 当核糖体接受两个氨基酸以后，第二个氨基酸会被移至第 一个氨基酸位置上，并通过肽键与第一个氨基酸连接起 来，与此同时，核糖体mRNA上也移动3个碱基位置， 为接受新运载来氨基酸做准备。上述过程如此往复进行, 肽链不断地延伸, 直到mRNA上出现终止密码子为止。 肽链合成以后, 从mRNA上脱离, 再经过盘曲折叠, 最终合 成一个具有一定氨基酸顺序, 有一定功能蛋白质分子。
L为比色皿厚度（1cm)。单位为mg/ml。
0.024（或0.020）表示1mg/ml RNA（或DNA）溶液测定的A260 值相当于0.024或0.020。
RNA 与DNA的化学组成
• • • • • • • DNA 嘌呤碱 A(腺嘌呤) G(鸟嘧啶) 嘧啶碱 C(胞嘧啶) T(胸腺嘧啶) 戊糖 D-脱氧核糖 酸 磷酸 RNA A G C U(尿嘧啶) D-核糖 磷酸
•
核酸及其衍生物，核苷
酸、核苷、嘌呤和嘧啶有
吸收UV的性质，其吸收高 峰在260nm波长处。测得 未知浓度核酸溶液的 A260nm值，即可以计算出
其中RNA或DNA的含量。该
法操作简便，迅速，并对 被测样品无损，用量也少。
三、试剂
1. 酵母。
2．0.04mol氢氧化钠溶液。
3．乙酸。 4．95％乙醇。
• 2.核酸的提取：取5g干酵母,加入0.04mol NaOH溶液20ml提取，放入试管沸水浴加热30 分钟，并经常搅拌。 • 待冷却后加入乙酸5～8滴，使提取液呈pH5-6， 移至离心管里，离心10分钟(3500r／min)。 • 将上清液倒入另一离心管中，加入95％乙醇 20ml，边加边搅。加毕，冰浴10min后 4000r/min离心10分钟，去上清液，即可得到 核酸钠的白色沉淀。 • 用10ml的95%乙醇洗涤离心，再用10ml无水乙 醇洗涤沉淀离心，沉淀在空气中自然干燥得 到RNA粗制品。
= RNA重（g）/干酵母粉重（g）100% 2）RNA纯度（%） = RNA浓度（mg/ml）/ A液浓度(0.1mg/ml) 100%
A260 RNA或DNA浓度＝ N 0.024(或0.020) L
= A260 500/0.024/1000
式中△A260为B管稀释液在260nm波长处吸收值。N为稀释倍数，
法进一步提高细胞壁的通透性，使得在细胞壁不破裂的情况下，让分子量
较小RNA透出细胞外，然后用酸中和，除去蛋白质和菌体后的上清液用乙醇 沉淀RNA。提取的RNA有不同程度的降解。稀碱法的提取时间短，提取率高
于浓盐法，更利于工业化生产。
（二）实验材料的选择 • 酵母细胞富含核酸，且核酸主要是RNA， 含量为干菌体的2.67%-10.0%，而DNA含量 较少，仅为0.03%-0.516%。为此提取RNA 多以酵母为原料。
• 3.破酵母细胞时为什么要在沸水浴中进行?
四、操作步骤
•1.酵母菌的培养： 菌种麦氏培养基 一级种子豆芽汁培养基二级种子
活化
发酵 菌体收集
麦氏培养基：葡萄糖1.0g，KCL 1.8g，酵母汁2.5g，醋酸钠8.2g，琼脂15g，定容至1L 豆芽汁培养基 ：10%豆芽汁200ml，葡萄糖50g，水800ml，自然pH. 二级种子培养基：葡萄糖120g/L，酵母膏3.5g/L，硫酸铵3.5g/L，磷酸二氢钾2g/L， 七水硫酸镁0.8g/L,调节pH为5.0。 发酵培养基： ①流加糖液：350g/L葡萄糖液500mL，装入流加瓶，121摄氏度灭菌20min，备用。 ②基液：自来水2000mL，装入10L自控发酵罐内，121 摄氏度灭菌20min ③流加的营养液：硫酸铵60g，磷酸二氢钾15g，七水硫酸镁10g，用自来水配成 400ml，121摄氏度灭菌20min. ④碱液：10%的碳酸钠溶液。 ⑤消沫剂：消沫剂与水按1：1的比例配成80ml，121摄氏度灭菌20min，备用。
实验二 酵母菌发酵培养、RNA的提取
及定量测定
一、实验目的
•
掌握稀碱（NaOH）法分离酵母RNA的原理与方法
• 掌握紫外线（UV）吸收法测定核酸浓度的原理。
• 提取和制备RNA 的首要问题是选RNA 含量高的材料。微生物是工业上大
量生产核酸的原料，其中RNA 的提制以酵母最为理想，因为酵母核酸中主 要是RNA（2.67～10.0%），DNA 很少（0.03～0.516％），而且菌体容易收
二、实验原理
集，RNA 也易于分离。此外，抽提后的菌体蛋白质（占干菌体的50%）仍
具有很高的应用价值。 • 目前常用的RNA的制备方法
• 1）浓盐法：是用高浓度盐溶液处理，同时加热，以改变细胞壁的通透性，
使核酸从细胞内释放出来。成本低、适于大规模操作。 • 2）稀碱法: 是用氢氧化钠使酵母细胞壁变性、裂解，然后利用骤冷骤热