猪繁殖与呼吸综合征病毒纯化方法的建立

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猪繁殖与呼吸综合征病毒间接ELISA检测方法的建立

猪繁殖与呼吸综合征（porcine reproductive andrespiratory syndrome，PRRS）又名“猪蓝耳病”，是由猪繁殖与呼吸综合征病毒（Porcine reproductive and respiratory syndrome virus，PRRSV）引起的一种主要以妊娠母猪严重繁殖障碍以及仔猪呼吸道症状及高死亡率为特征的高度接触性传染病[1]。

PRRS于1987年在美国首次发现，1991年荷兰中央兽医研究所首次分离得到病毒，我国在1996年首次报道[2]。

在我国，猪群感染PRRSV后出现混合感染、继发感染的现象非常严重，这与PRRSV的感染机制有关。

PRRSV感染机体后以机体免疫系统细胞为靶细胞，从而抑制免疫系统功能，导致其他病原极易乘虚而入。

无论感染了传统PRRSV 还是高致病性PRRSV，被感染的猪均会表现出猪呼吸障碍等多种症状，临床上多与副猪嗜血杆菌、大肠杆菌、链球菌、支原体等有关。

试验证明，高致病性PRRSV感染可以加剧副猪嗜血杆菌感染，引发严重的临床表现[3]。

由于PRRSV可在宿主体内的巨噬细胞中进行复制，导致无症状的持续感染。

该病毒通过鼻黏膜和上呼吸道上皮细胞进入宿主体内，并在鼻黏膜、呼吸系统的巨噬细胞以及淋巴组织中进行原发性复制。

随后通过血液循环到达继发性复制部位，如大脑、心、肺、胸腺、脾、肝、淋巴结、肾、肾上腺、小肠、睾丸等。

病毒可进入易感妊娠母猪体内，跨越胎盘感染胎儿。

PRRS血清学诊断方法是应用最广泛的动物疫病诊断方法。

关于PRRSV的血清学诊断，国内外己建立了多种检测PRRSV抗体的方法，主要有免疫过氧化物酶单层实验（immuno peroxidase monolayer assay，IPMA）[4]、间接免疫荧光检测方法（indirect immunoin fluscent assay，IFA）[5]、血清中和试验（Serum Neutralization，SN）[6]以及酶联免疫吸附测定试验（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）。

一步法RT—PCR检测猪繁殖与呼吸综合征病毒的方法建立及应用

ＰｏｃｎｐｒｄｕｔｖｎｓｉａｏｙＳｎｏｒｓｒｉｅＲｅｏｃｉｅａｄＲｅｐｒｔｒｙｄｒｍｅＶｉｕ
Байду номын сангаас
ＣＩｉａｇｅａ．Ａ —ｇｎｔ１Ｑ（ｉｇａＡａｅｙｏｎｍｎｅｒａｃｎｌ，ｉｉｇ８０１）ＱｎｈｉｃｄｍｆｉａａｄＶｔｉｒＳｉｃＸｎｎ１０６Ａｅｎｙｅｓ
摘要：根据ＧｎＢｎ公布的猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒（ＲＳ美洲型毒株Ｖ２３ｅｅａｋＰＲＶ）Ｒ一３２序列设计了一对特异性引物Ｐ／２扩增片段为５８ｐ从而建立了检测ＰＲＶ的一步法ＲＰＲ蛤测方法，异性试验表明，引物均不１Ｐ，０ｂ，ＲＳＴ— Ｃ特该能扩增其它常见的与繁殖障碍有关的病毒基因。敏感性实验表明，引物可以检测到１～ＴＩ的病毒含量。利用该该０ＣＤ。方法对青海某猪场中２０份临床上疑似ＰＲＲＳ的组织进行检测，中ｌ其６份样品呈ＰＲＶ阳性结果，ＲＳ阳性率为８％，０表明建立的该方法完全可以快速检测组织中的ＰＲＶ。ＲＳ关键词：猪繁殖与呼吸综合征；病毒；Ｔ— ＣＲＰＲ；中图分类号：８１４￥５．文献标识码：Ａ文章编号：０３７５（０００－０４０１０－９０２１）１０－３０ＥｓａｉｈｅｎｐｌａｉｎｏｅｓｅＲＴ．ｔｂｌｍｎｔａｄＡｐｉｔｏｆＯｎ．ｔｐｓｃＰＣＲｔｃｅＤｅｅｔｄ

高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立

，
．
［摘
要］根据Ｇｎａｋ公布的２高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒毒株和５株ＰＲＶ经典ｅＢｎ４株ＲＳ
毒株的保守区基因序列，用ＰｉｅＥｐｅｓ３０软件设计并合成实时荧光定量ＰＲ（ｅｌｉｅ使ｒｒｘｒｓ．ｍＣＲａ —ｔｍ
．
ｆｒｄｔｃｉｎ。ｄｆｅｅｔｔｎａｄｑａｔｔｔｎｏ０ｅｅｔｏｉｒｎｉｉｎｕｎｉｉｆＨＰ — ＰｆａｏａｏＲＲＳａｄｃａｓｃｌＰＲＲＳＶｎｌｓｉａＶ
．
Ａｋｏｏｃｎｒｔｏｆｎｗｎｃｎｅｔａｉｎｏ
・
６・
中国兽药杂志
２１０２４（）６～１／灿，６５：０刘等
，
高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒实时荧光定量ＰＲ检测方法的建立Ｃ
刘灿，孙丰廷，宁宜宝，张文利，王海光英聪，坚，Ｔｔ，一陈Ｓ
３．Ｇｕｎｄｎｎｕｏ—ＰｈｒｃｕｉｌＣｏＬｄａｇｏｇＷｉｓｎＢｉａｍａｅｔａ．，ｔ．，Ｇｕｎｚｏ１３６ｃａｇｈｕ５１５
，
Ｃｉａｈｎ）
ＡｂｔａｔｉｍｅｓａｄｐｒｂｒｅｉｎｄｗｉｉｅＥｘｒｓ０ａｄｓｎｈｓｚｄａｃｒｉｇｔｈ０ｓｒｅｓｒｃ：ＰｒｒｎｏｅｗｅｅｄｓｇｅｔＰｒｍｒｐｅｓ３ｎｙｔｅｉｅｃｏｄｎｏｔｅｃｎｅｖｄｈ

猪繁殖与呼吸综合征病毒单克隆抗体的制备及鉴定

无交叉反应，免疫荧光染色试验表明３株单克隆抗体均可不同程度地识别细胞中的病毒而呈现特异性荧光。Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ说明６Ａ４、７Ｆ２能够分别特异性识别２５ｋｕ和１５ｋｕ蛋白。试验初步表明６Ａ４、３Ｆ１具有中和抗体活性，７Ｆ２不具有抗体依赖性增强（ａｎｔｉｂｏｄｙｄｅｐｅｎｄｅｎｔｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ，ＡＤＥ）作用，但可以应用于ＰＲＲＳＶＮ蛋白
收稿日期：２０１３ — ０７－０２
ａｎｄｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙｓｙｎｄｒｏｍｅｖｉｒｕｓ，ＰＲＲＳＶ）是影响养猪
基金项目：国家自然科学青年基金项目（３１２０１９１３）；农业微生物国家重点实验室开放课题（Ａｍｌｋｆ２０１２０３）作者简介：唐娜（１９８２一），女，助理研究员，江苏连云港人，博士研究生，主要从事预防兽医学与疫苗免疫学研究。＊通讯作者
检测。
关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒；单克隆抗体；特性鉴定
中图分类号：￥８５８．２８文献标识码：Ａ
文章编号：１００７ — ５０３８（２０１３）１１ — ００２７ — ０５
猪繁殖与呼吸综合征病毒（Ｐｏｒｃｉｎｅｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅ

猪繁殖与呼吸综合征病毒的防控和净化措施

猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）属于动脉炎病毒属的一种RNA病毒，能导致种猪群的繁殖障碍，及后备猪群的呼吸道疾病。

本病重在防控，一旦发病需采取清除措施。

1急性发病期配种母猪的控制程序接受产仔率将要下降10%~15%的事实，制订计划以期望提高配种目标。

可增加后备猪的数量，也可减少淘汰母猪的数量。

检查每批次妊娠母猪数量，再做相应的淘汰，以确保批次生产的完整性。

如果可能的话，从已经感染过PRRSV的猪场购买后备母猪，这样保证大多数（虽然不是全部）的后备母猪具有一定的免疫力。

如果是自留后备母猪，应让本场的这些后备母猪尽早感染PRRSV。

为了让后备母猪尽可能早地感染PRRSV，需要将后备母猪与断奶仔猪群或育肥猪群混群适应3~4d，以便让后备猪充分接触病毒。

如果有疫苗，可以考虑对引进的后备猪进行免疫接种，免疫方法请遵守兽医意见。

后备母猪与病毒接触或免疫疫苗后，至少要6周才能配种。

本交与人工授精配合进行，执行8周。

饮水中加阿司匹林。

2猪群的免疫PRRSV活疫苗适用于断奶仔猪和非怀孕母猪（后备母猪），之后这些免疫猪应在隔离条件下饲养8周。

这种方式稳定猪群的免疫状态的风险较低，另外的好处是降低断奶后仔猪的病毒血症。

某种PRRS疫苗并不能对所有PRRSV 毒株产生免疫力，因此重要的是要保证疫苗的毒株与猪场流行的毒株有较好的匹配性。

应当制订合理的返饲程序，以便新引进的未感染的后备母猪能够充分接触猪场中流行的毒株。

可以将一根粗壮的绳索系在保育舍的猪圈中并放置5d，断奶仔猪会玩耍并会咀嚼此绳索，其排泄的病毒与唾液会留在绳索上。

然后将此粗绳索再放到后备猪舍，供后备猪咬食，PRRSV会通过绳索将病毒传至新引进的未感染的后备猪。

也可以采取替代方法，如扁桃体拭子或者血清也可以作为自家疫苗使用。

但是一定要注意，这些方法也会散播其他病原，而不仅仅是PRRSV。

3猪群的净化净化PRRSV的方法取决于病毒在整个猪群中的状态。

PRRSV在感染一段时间后，可能会从母猪群和育肥猪群中消失，但是，其仍会在3~12周龄的第1阶段和第2阶段饲养期的猪中流行。

猪繁殖与呼吸综合征病毒SYBRGreenI实时荧光定量PCR检测方法的建立

重的病毒性传染病，其病原是猪繁殖与呼吸综合征病
毒（Ｐｏｒｃｉｎｅｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅａｎｄｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙｓｙｎｄｒｏｍｅｖｉ —
１５．１ｋｂ￣１５．５ｋｂ，含７个开放阅读框（ｏｐｅｎｒｅａｄｉｎｇｆｒａｍｅ，ＯＲＦ），其中ＯＲＦ７是高度保守的区域。
吴忆春
（滨州职业学院生物工程学院，山东滨州２５６６０３）
摘要：为建立猪繁殖与呼吸综合征病毒（ＰＲＲｓＶ）ＳＹＢＲＧｒｅｅｎ工实时荧光定量ＰＣＲ检测方法，采用Ｒｒｒ＿
ＰＲＲＳＶ自从１９８７年第一次在美国被发现以后，已经
ｒｕｓ，ＰＲＲＳＶ），以母猪繁殖障碍、仔猪及育肥猪呼吸道症状和高病死率为特征＿１］。该病已被世界动物卫生
收稿日期：２０１２ — １０ — ０６基金项目：滨州职业学院科学研究基金项目（１０ｘｙｋｔ０６）
ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙｓｙｎｄｒｏｍｅ，ＰＲＲＳ）是一种对养猪业危害严
须通报的传染病。ＰＲＲＳＶ是有囊膜的单股正链ＲＮＡ病毒，属于动脉炎病毒科动脉炎病毒属，约
ＰＣＲ扩增ＰＲＲＳＶＮ基因２６６ｂｐ片段，并克隆到ｐＭＤ１８一Ｔ载体中，以纯化的重组质粒为模板进行荧光定量

高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪伪狂犬病病毒双重PCR检测方法的建立及初步应用

ＰＣＲ试剂盒检测结果完全一致。因此，该双重ＰＣＲ方法能够用于ＨＰ — ＰＲＲＳＶ和ＰＲＶ单项或混合感染的
临床样品快速鉴别检测。
关键词：双重ＰＣＲ；高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒；猪为狂犬病病毒
动物医学进展。２０１３，３４（１０）：８５ — ８８
ＰｒｏｇｒｅｓｓｉｎＶｅｔｅｒｉｎａｒｙＭｅｄｉｃｉｎｅ
高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪伪狂犬病病毒双重ＰＣＲ检测方法的建立及初步应用
程亮亮，祁克宗，占松鹤，朱良强，秦爱建。
（１．安徽农业大学动物科技学院，安徽合肥２３００３６；２．安徽省动物疫病预防与控制中心，安徽合肥２３００２２；３．扬州大学兽医学院，江苏扬州２２５００９）
猪伪狂犬病（Ｐｓｅｕｄｏｒａｂｉｅｓ，ＰＲ）是由猪伪狂
犬病病毒（Ｐｓｅｕｄｏｒａｂｉｅｓｖｉｒｕｓ，ＰＲＶ）引起的一种
异信息，在此基础上设计合成一对ＨＰ — ＰＲＲＳＶ的特
异性检测引物，再结合根据ＰＲＶｇＢ基因保守序列
征病毒（Ｈｉｇｈｐａｔｈｏｇｅｎｉｃｐｏｒｃｉｎｅｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅａｎｄ

猪繁殖与呼吸综合征病毒一步法RT-PCR检测方法的建立及应用

4542023猪繁殖与呼吸综合征病毒一步法R T-PC R检测方法的建立及应用陈雷兆丰华生物科技(福州)有限公司福州350014摘要为解决当前猪繁殖与呼吸综合征病毒毒株类型复杂、各毒株之间交叉免疫保护不佳的现状,本研究针对N SP2基因保守区域设计1对特异性引物,通过条件优化,建立一种能够快速区分经典株、高致病性毒株和N A D C30-l i ke毒株的检测方法。

该方法与C SFV、PC V2、PR V、PED V、T G EV无交叉反应。

对不同毒株类型进行检测,结果显示该方法特异性强,能够将经典株、高致病性猪蓝耳病毒株和类N A D C30株进行快速区分,为猪群快速区分PR R SV感染类型及疫苗的选择、使用提供科学防控依据。

关键词猪繁殖与呼吸综合征经典毒株高致病性毒株N A D C30-l i ke毒株文献标识码:A文章编号:1003-4331(2023)04-0027-04D evel opm ent and appl i cat i on of one st ep R T-PC R m et hod f or t he det ct i onof porci ne reproduct i ve and res pi rat ory s yndrom e vi rusChen Lei(J of unhwa Bi ot echnol ogy(Fuz hou)Co.Lt d,Fuz hou350014)A bs t ract I n or der t o di s t i nct i on t he com pl ex t ypes of por ci ne r epr oduct i ve and r espi r at or y s yndr om e vi r us(PR R SV)s t r ai ns and t he poor cr os s-i m m une pr ot ect i on am ong t he s t r ai ns,a m et hod was es t abl i s hed t o di st i ngui s h di f f er entt ypes ofPR R SV,i ncl udi ng t he cl as⁃si calst r ai n,t he hi ghl y pat hogeni c s t r ai n and t he N A D C30-l i ke st r ai n by t he condi t i on of opt i m i z at i on.The r es ul t i ndi cat ed t hat i t has no cr os s r eact i on wi t h CSFV,PCV2,PR V,PED V and TG EV.A nd t he det ect i on of di f f er ent t ypes of vi r us s t r ai ns showed t hat t he m et hod was s peci f i c and coul d di st i ngui s h t he t hr ee t ypes of vi r us st r ai ns qui ckl y,t hat's pr ovi des a r api d di scr i m i nat i on and s el ect i on bas i s ofPR R S vacci nes f or pr event i on and cont r olofepi dem i c di seas es.K ey w ords Por ci ne r epr oduct i ve and r es pi r at or y syndr om e Cl ass i cals t r ai n H i ghl y pat hogeni c st r ai n N A D C30-l i ke st r ai n猪繁殖与呼吸综合征(Pr oci ne r epr oduct i ve andr es pi r at or y s yndr om e,PR R S)主要是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PR R SV)Ⅰ型和Ⅱ型引起的一种以母猪繁殖障碍和仔猪呼吸道疾病为主要特征的传染病[1]。

猪繁殖与呼吸综合征病毒nsp7蛋白的表达与纯化

ＡｆｅｕｉｃｔｏｔｅｒｃｍｂｎｎｒｔｉｓａａｙｅｙＳ — ｔｒｐｒｆａｉｎ，ｈｅｏｉａｔｐｏｅｎｗａｎｌｚｄｂＤＳＰＡＧ七ａｄｗｅｔｒｌｔＴｈｍ— ｉｎｓｅｎｂｏ．ｅｉ
ｍｕｎｇｅｉｉｙｏｐｒｔｉｓｅａｕｔｄｂＳ．ｏｎｃｔｆｎｓ７ｐｏｅｎｗａｖｌａｅｙＥＩＩＡＴｈｅｒｓｌｓｓｏｄｔａｈｅｎｓ７ｐｒｔｉｅｕｔｈｗｅｈｔｔｐｏｅｎ
２Ｋｅａｏａｏｙｏｉｌｍｍｕｏｏｙｏｈｉｉｔｙｏｒｕｔｒ／ｎｎＰｏｉｃａｙＬｂｒｔｒ．ｙＬｂｒｔｒｆＡｎｍａＩｎｌｇｆｔｅＭｎｓｒｆＡｇｉｌｅＨｅａｒｖｎｉｌＫｅａｏａｏｙｃｕ
ｏｉｌｍｍｕｏｏｙＨｅａａｅｆＡｇｉｕｔｒｌＳｉｎｅ，ｈｎｚｏ５０２Ｃｈｎ）ｆＡｎｍａＩｎｌｇ，ｎｎＡｃｄｍｙｏｒｃｌｕａｃｅｃｓＺｅｇｈｕ４００，ｉａ
ｗａｘｅｓｄｕｃｅｓｕｌｙａｈｅｅｏｂｎａｒｔｉｄｉｍｕｌｇｉａｃｉｉｙｗｈｃｏｄｓｅｐｒｓｅｓｃｓｆｌｎｄｔｒｃｍｉｎｔｐｏｅｎｈａｍｎｏｏｃｌａｔｖｔｉｈｃｕｌ
中图分类号：８８￥２文献标志码：Ａ文章编号：１０ —３６（０２０ —０４ —００４２８２１）５１１４

猪繁殖与呼吸综合征荧光定量PCR检测方法建立及其应用的开题报告

猪繁殖与呼吸综合征荧光定量PCR检测方法建立及其应用
的开题报告
题目：猪繁殖与呼吸综合征荧光定量PCR检测方法建立及其应用
背景：猪繁殖与呼吸综合征是由猪冠状病毒引起的病毒性疾病，能够导致猪的生长发育迟缓、呼吸急促、发热等症状，给养殖业带来很大的经济损失。

荧光定量PCR 技术是一种高效、灵敏的检测方法，已广泛应用于猪繁殖与呼吸综合征的诊断和病原学研究。

目的：本研究旨在建立一种灵敏、高效的猪繁殖与呼吸综合征荧光定量PCR检测方法，并应用于临床样本检测。

方法：首先，设计并合成猪繁殖与呼吸综合征的引物与探针，优化PCR反应体系和条件，确定荧光定量PCR检测方法的最佳参数；然后，收集猪繁殖与呼吸综合征阳性和阴性样本进行检测，并对检测结果进行分析和验证；最后，应用该方法对实际临床样本进行检测，并进行分析和统计。

预期结果：建立一种经过验证的猪繁殖与呼吸综合征荧光定量PCR检测方法，具有高敏感性、高特异性和重复性，可以应用于大规模的病原监测和临床诊断，有助于及时诊断和控制猪繁殖与呼吸综合征的流行。

同时，为研究猪冠状病毒的流行病学特征和病原学机制提供了有力的工具和手段。

意义：猪繁殖与呼吸综合征是一种严重的猪病，对养殖业造成了很大的损失和威胁。

建立一种灵敏、高效的荧光定量PCR检测方法，可以及时诊断和控制病情，降低疫情发生的风险和经济损失。

此外，对于研究病原学和流行病学机制，也有很重要的意义。

猪繁殖与呼吸综合征病毒单克隆抗体的研制和初步应用

【要１Ｍａｃ１５细胞扩增猪繁殖与呼吸综合征病毒（ＲＳＴＺ摘ｒ一４ＰＲＶ）１株，制备免疫原来免疫ＢＢｃ小鼠，脾ＡＬ／取
细胞与骨髓瘤细胞融合。间接ＥＩＡ（ＬＳ筛选杂交瘤细胞。亚克隆后获得了３株能稳定分泌单克隆抗体的杂ＬＳｉＩＡ）Ｅ交瘤细胞株，别命名４６Ｆ、Ｅ一３３８Ａ３其中４６Ｆ、Ｅ一３抗体亚类为ＩＧａＦ一３为ＩＧｉＥＩＡ分Ｂ一２８５Ｃ、Ｆ一，Ｂ一２８５Ｃｇ２，３８Ａｇ。ｉＬＳ试验结果表明，３株抗体均能与１株临床分离的ＰＳ发生特异性反应，与其它常及ＰＣＶ２均无反应性；接荧光抗体试验（Ｆ间ＩＡＴ）果表明，得到的３株抗体均能与ＰＲＲＳ反应产生特异结所Ｖ性荧光，些结果为进一步开展ＰＲＶ检测奠定了基础。这ＲＳ关键词：繁殖与呼吸综合征病毒；单克隆抗体；性；定猪特鉴猪繁殖与呼吸综合征（ｏｃｅｒｐｏｕｔｅａｄｒｓｉＰｒｉｅｒｄｃｉｎｅｐｒｎｖａｔｒｙｄｏ，ＲＳ是由猪繁殖与呼吸综合征病毒（ｏ— ｏｙｓｎｒｍｅＰＲ）Ｐｒ
按常规方法，免疫小鼠的脾细胞与Ｓ２０按照１：取Ｐ／５的比例混合于融合管内，０／ｎ心１ｎ弃去上清１５０ｒｍｉ离０ｍｉ，液，振融合管底，沉淀细胞松散均匀，４轻使置Ｏ℃ 水浴中预热，后在４然５Ｓ内缓慢滴加预热的ＰＥＧ溶液１ｍｌ边加边晃，融合管，后在９然０Ｓ内缓慢加入不完全ＤＭＥ培养基，止Ｍ终融合，置１ｎ后以１５０ｒｍｉ心１ｎ弃上清液，静０ｍｉ０／ｎ离０ｍｉ，加入ＨＡＴ培养基，浮细胞，入适量饲养细胞后，匀分悬加混装９６孔细胞培养板，７℃ 、Ｃ。养箱内培养，５ｄ后３５Ｏ培第用ＨＴ培养基换出１２／ＨＡＴ培养基，１第０ｄ后用ＨＴ培养基换出全部ＨＡＴ培养基，细胞培养液变黄即可开始待筛检。

高致病性猪繁殖与呼吸综合征(JXA1-R株)活疫苗病毒含量荧光定量PCR方法的建立

［摘要］为快速、准确测定高致病性猪繁殖与呼吸综合征（ＨＰ— ＰＲＲＳ）活疫苗（ＪＸＡ１一Ｒ株）的病毒含量，根据ＧｅｎＢａｎｋ中该病毒的保守基因序列设计合成了引物和探针，优化反应条件，建立了其活疫苗病毒含量的荧光定量ＰＣＲ方法。用该方法测定疫苗样品的病毒含量，每头份稀释１００倍后，ｃｔ均值为１７．０８，病毒拷贝数均值为４．６１ × １０ｃｏｐｙ／ｔｘＬ。将建立的荧光定量ＰＣＲ与传统的ＴＣＩＤ。方法进行相关性分析，相关系数ｒ＝０．８３，表明该方法可用于ＨＰ— ＰＲＲＳ活疫苗半成品及成品的病毒含
ａｃｃｏｒｄｉｎｇｔｏｔｈｅｃｏｎｓｅｒｖｅｄｇｅｎｅｓｏｆＰＲＲＳＶａｖａｉｌａｂｌｅｉｎＧｅｎＢａｎｋ，ａｎｄｒｅａｃｔｉｏｎｐａｒａｍｅｔｅｒｓｗｅｒｅｏｐｔｉｍｉｚｅｄｔｏ
（ＣｈｉｎａＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＶｅｔｅｒｉｎａｒｙＤｒｕｇＣｏｎｔｒｏｌ，Ｂｅｉｉｆｎｇ１０００８１，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｏｄｅｔｅｃｔｔｈｅｖｉｒａｌｔｉｔｒｅｏｆｈｉｇｈｌｙｐａｔｈｏｇｅｎｉｃｐｏｒｃｉｎｅｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅａｎｄｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙｓｙｎｄｒｏｍｅ（ＨＰ—ＰＲＲＳ）

猪繁殖与呼吸综合征RT-PCR诊断方法的建立

江西农业学报２１，（）１０—１２０２２７：４４４
ＡｅａＡｇｉｕｕａｉｎｘｔｒｈｒｅＪａｇｉｅ
猪繁殖与呼吸综合征ＲＴ—ＰＲ诊断方法的建立Ｃ
杨克礼李勇，，段正赢，黄祥勇，刘泽文，锐梁望旺，郭，袁芳艳周丹娜，，田永祥￥
繁殖与呼吸障碍综合征诊断方法有多种，如检测病原的有病毒分离、免疫组化、免疫荧光试验等方法，检测抗体来自１材料和方法
１１试验病料及对照毒株自江西、．湖南、湖北、广西等省市部分发病猪场采集的８份猪血清、６肺脏、脾脏、淋巴
收稿日期：０２一Ｏ２１５—０８基金项目：湖北省研究与开发计划项目（０１Ｂ００；２１ＢＢ８）湖北省农业科技创新中心资助项目（０１６０－００３；２１－２０１－０）动物胚胎工程及分子
ｔｒｙｄｒｍｅ．ｏｓｎｏｙ
Ｋｅｒｓｏｃｎｅｒｄｃｉｅａｄｒｓｉａｏｙｄｏ；Ｒ —ＰＲ；Ｄｉｇｏｉ；Ｅｐｄｍｏｏｙｙｗｏｄ：ＰｒｉｅｒｐｏｕｔｎｅｐｒｔｒｓｎｒｍｅＴｖｙＣａｎｓｓｉｅｌｇｉ
及免疫学的研究进展［］安徽农业科学，００３（３：７６Ｊ．２１，１）６１８
—
６９７ｌ．
［］ｉ，ｕｎ，ｉｇ，ｔ．ｕｐｓｏｒｎｐｏｕ — ７ＬＧＨａｇＪＪｎｅａＳｐｒｓｎｏｐｃｅｅｒｃａＰ１ｅｉｆｏｉｒｄ

类NADC30猪繁殖与呼吸综合征病毒FJZ03株感染性克隆的构建及鉴定

中国预防兽医学报Chinese Journal of Preventive Veterinary Medicine第42卷第11期2020年11月V ol.42No.11Nov.2020doi ：10.3969/j.issn.1008-0589.201911018类NADC30猪繁殖与呼吸综合征病毒FJZ03株感染性克隆的构建及鉴定勾明郗1,2，林志锋3，邓小莺1,2，黄晓紫1,2，毛婉1,2，徐叶3，李娜1,2，杨小燕1,2，魏春华1,2*，刘建奎1,2*（1.龙岩学院生命科学学院，福建龙岩364000；2.福建省家畜传染病防治与生物技术重点实验室，福建龙岩364000；3.福建农林大学动物科技学院，福建福州350002）摘要：为构建类NADC30猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV ）FJZ03株的感染性克隆，本研究将该株病毒全基因组分成6段，通过同义突变将其中的A 14378G ，引入了Mlu I 酶切位点为分子标记。

经RT-PCR 分别扩增后，克隆至改造后的载体pSK 中构建中间质粒。

经测序鉴定各质粒正确后，分段连接至pSK 中构建全长cDNA 克隆质粒pSK-FJZ03。

将鉴定正确的pSK-FJZ03转染Marc-145细胞并传代，收集出现CPE 后的病毒液，经RT-PCR 扩增后的产物经Mlu I 酶切和测序鉴定；同时采用激光共聚焦试验鉴定，获得的拯救病毒命名为RvFJZ03。

分别测定RvFJZ03在Marc-145细胞与潴肺泡巨噬细胞（PAMs ）中的生长曲线，比较拯救病毒与亲本病毒的生长特性。

将获得的拯救病毒RvFJZ03在Marc-145细胞中连续传代，对不同代次的重组病毒分别测定病毒效价，并经RT-PCR 扩增后通过Mlu I 酶切和测序鉴定。

测序鉴定结果表明，正确构建了感染性克隆质粒pSK-FJZ03；将其转染Marc-145细胞后并传至第3代出现典型CPE ，经激光共聚焦试验、RT-PCR 及测序鉴定表明拯救了重组病毒RvFJZ03。

猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒RT—PCR检测方法的建立

Ｖ０．７Ｎｏ６１２．
Ｄｅ．ｃ
２００６
文章编号：６２— ８１２０）６— ０２— ３１７６７（０６００７０
猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒ＲＴ—ＰＣＲ检测方法的建立
吴庭才张武提李银聚张春杰王威，，，，
体的特异性诊断方法十分必要。
反转录一聚合酶链式反应（ｅｅｓＴａｓｒｔｎ—ｐｌｅａｅＣａｎＲａｔｎＴ—ＰＲ）术是２Ｒｖｒｅｒｎｃｉｉｐｏｏｍｒｓｈｉｅｃｏ，ＲｙｉＣ技０
世纪８０年代建立起来的高新生物技术，它能够以ＲＡ为模板特异的扩增出目的基因片段，ＲＡＮ在Ｎ
维普资讯
第２７卷第６期
２００６年１２月
河南科技大学学报：自然科学版
ＪｕｎｌｆＨｅａｉｅｓｔｆＳｉｎｅａｄＴｃｎｌｇ：ｔｒｌｃｅｃｏｒａｎｎＵｎｖｒｉｏｃｅｃｎｅｈｏｏｙＮａｕａｉｎｅｏｙＳ
基金项目：南省科技攻关项目（４４５００）河０２００１作者简介：庭才（９３一）男。南镇平人．教授，士，要从事畜禽传染病防控方回的研究吴１６。河副博主
收稿日期：０６— ５—２２００２
（．１河南科技大学动物科技学院，河南洛阳４１０；．阳县城关乡农业服务中心，７０３２宜河南宜阳４１０）７６０

高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒基因缺失标记疫苗ELISA鉴别诊断方法的建立

ＤＥＶＥＬｏＰＭＥＮＴｏＦＥＬＩＳＡＤＩＦＦＥＲＥＮＴＩＡＴＩｏＮＤＩＡＧＮＯＳＩＳＦＯＲＡＤＵＡＬ－ＭＡＲＫＥＲＶＡＣＣＩＮＥｏＦＰｏＲＣＩＮＥＲＥＰＲｏＤＵＣＴＩＶＥＡＮＤＲＥＳＰＩＲＡＴｏＲＹ
Ｃｊ
同
致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒基因缺失标记疫苗ＥＬＩＳＡ鉴别诊断方法的建立
孙晶，周艳君，姜一峰，徐彦召，童武，童光志
（中国农业科学院上海兽医研究所，上海２００２４１）
摘要：为了配合（Ｐｏｒｃｉｎｅｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅａｎｄｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙｓｙｎｄｒｏｍｅｖｉｒｕｓ，ＰＲＲＳＶ）基因标记疫苗株（ｒＨＮ４Ａ２５＋ＮＰ４９株）的临床
ＥＬＩＳＡ．Ｔｈｅｏｐｔｉｍａｌｃｏａｔｉｎｇｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｏｆａｎｔｉｇｅｎｗａｓ５００ｎｇ／ｗｅｌ１．ｏｐｔｉｍａｌｓｅｒｕｍｄｉｌｕｔｉｏｎｗａｓ１：４０，ａｎｄｔｈｅｃｕｔｏｆＳ／Ｐｖａｌｕｅｗａｓ０．１５．Ｔｈｅｒｅｐｒｏｄｕｃｉｂｉｌｉｔｙｔｅｓｔｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｃｏｅｆｉｆｃｉｅｎｔｓｏｆｖａｒｉａｔｉｏｎｏｒｆｉｎｔｒａ —ａｎｄｉｎｔｅｒ－ａｓｓａｙｗｅｒｅｌｏｗｅｒｔｈａｎ１０％．２５ａａ — ＥＬＩＳＡｍｅｔｈｏｄｗａｓ

猪繁殖与呼吸综合征病毒培养工艺的优化

4552023鼠肝脏组织结构病变和肝功能受损的研究报道很多,但是围产期氟摄入对子代小鼠肝脏结构和肝功能有无影响、影响有多大鲜有报道。

本试验观察到中氟组和高氟组仔鼠肝脏的结构发生了明显的病理变化,甚至出现肝细胞局部坏死、细胞核溶解等病变。

同时A LT和A ST含量极显著高于对照组,肝脏功能受损严重,且随着试验组氟含量的不断升高,肝脏损伤加重。

试验表明,围产期摄入的氟可以通过胎盘屏障到达胎儿体内,对胎儿的肝脏造成不良影响,同时也为研究人氟摄入对子代健康成长的影响提供一定的理论依据。

参考文献:[1]D ai w i l e A P,Si vanes an S,T ar al e P,et al.R ol e of f l uor i de i n⁃duced hi s t one t r i m et hy l at i on i n devel opm ent of s kel et alf l uor os i s[J].Envi r on T oxi colPhar,2018,57:159-165.[2]A dedar a I A,O j uade T J D,O l abi yi B F,et al.T aur i ne am e⁃l i or at es r enal oxi dat i ve dam age and t hyr oi d dys f unct i on i n r at s chr oni cal l y expos ed t o f l uor i de[J].B i olT r a El em R es, 2017,175(2):388-395.[3]王量,范红结.过量氟对动物机体的影响[J].中国畜牧兽医,2014,41(4):119-122.[4]张慧慧,李瑞,王婧,等.添加G SH对氟中毒小鼠肾脏SO D和C A T活性的影响[J].山西农业科学,2018,46(10):1631-1633.[5]王丽.不同剂量钙对氟中毒大鼠肝脏损伤的影响[D].太原:山西农业大学,2019.[6]Song G H,H uang F B,G ao J P,et al.Ef f ect s of Fl uor i de onD N A dam age and cas pas e-m edi at ed apopt os i s i n t he l i verofr at s[J].B i olT r ace El em R es,2015,166(2):173-182.[7]姜宜成,沈成兴.抗氧化酶基因转染治疗心血管疾病的研究进展[J].中国心血管杂志,2012,17(1):70-72.猪繁殖与呼吸综合征病毒培养工艺的优化张永香兆丰华生物科技(福州)有限公司福州350014摘要[目的]优化猪繁殖与呼吸综合征病毒(C H-1a株)在高度敏感的M ar c-145克隆细胞上的产毒工艺,完全实现病毒的无血清培养工艺并增加病毒的收次,以提升疫苗的产能和品质。

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猪繁殖与呼吸综合征病毒纯化方法的建立
田书苗１，２，郅玉宝２，王林建２，乔松林２，郭军庆２，陈静２，柴书军２，张改平１，２，杨艳艳２
（１．河南农业大学牧医工程学院，河南郑州４５０００２；２．河南省农业科学院动物免疫学重点实验室，河南郑州４５０００２）
摘要：采用差速离心、膜包超滤浓缩和Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４ＦａｓｔＦｌｏｗ（４ＦＦ）凝胶层析相结合的策略纯化猪繁殖与呼吸综合征病毒（ＰＲＲＳＶ），建立了一种温和纯化ＰＲＲＳＶ的方法。通过ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ和检测病毒含量、蛋白含量等方法分析纯化效果。用纯化后的病毒免疫ＢＡＬＢ／ｃ雌性小鼠，通过免疫过氧化物酶单层细胞试验（ＩＰＭＡ）检测其免疫原性，并与超速离心沉淀病毒的纯化方法相比较，评估纯化病毒的免疫效果。结果显示，４ＦＦ纯化后的病毒ＴＣＩＤ５０提高了５０倍，与超离方法相比，４ＦＦ纯化法将病毒原液杂蛋白的去除比率由９７．５１％提高到９９．６８％，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ显示未见明显杂蛋白条带，ＩＰＭＡ结果显示４ＦＦ纯化病毒的免疫原性较好，特异性较强，消除了免疫后小鼠血清与Ｍａｒｃ－１４５细胞蛋白的非特异性反应。结果表明，４ＦＦ纯化方法优于超离纯化方法，前者的建立为制备单克隆抗体和规模化纯化ＰＲＲＳＶ疫苗的工艺开发奠定基础。
收稿日期：２０１５－１２－２４；修回日期：２０１６－０１－２０基金项目：国家自然科学基金项目（３１２７２５４６）；河南省农科院科研发展专项资金项目（２０１４８４０５）作者简介：田书苗（１９９０－），女，河南安阳人，硕士生，Ｅ－ｍａｉｌ：１５０５８３９２５２@ｑｑ．ｃｏｍ。通信作者：张改平，院士，Ｅ－ｍａｉｌ：
中国兽医科学２０１６，４６（０５）：５６８－５７２ＣｈｉｎｅｓｅＶｅｔｅｒｉｎａｒｙＳｃｉｅｎｃｅ
中国兽医科学
第４６卷
DOI：１０．１６６５６／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７３－４６９６．２０１６．０５．００６中图分类号：Ｓ８５２．６５９．２文献标志码：Ａ文章编号：１６７３－４６９６（２０１６）０５－０５６８－０５
关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒；纯化；Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４ＦＦ层析
Development of a purification method for porcine reproductive and respiratory syndrome virus
TIAN Shu-miao１，２，ZHI Yu-bao２，WANG Lin-jian２，QIAO Song-lin２，GUO Jun-qing２，CHEN Jing２， CHAI Shu-jun２，ZHANG Gai-ping１，２，YANG Yan-yan２
（１． College of Animal Science and Veternary Medicine，Henan Agricultural University，Zhengzhou ４５０００２，China; ２． Key Laboratory of Animal Immunology，Henan Academy of Agricultural Sciences，Zhengzhou ４５０００２，China）
1 材料与方法
1.1 病毒株、细胞及小鼠美洲型ＰＲＲＳＶ变异株ＨＮ０７－１、Ｍａｒｃ－１４５细胞
株均由河南省农业科学院动物免疫学实验室保存。６～８周龄ＳＰＦ级ＢＡＬＢ／ｃ纯系雌性小鼠购自郑州大学医学院实验动物中心。 1.2 主要试剂
ＤＭＥＭ培养基干粉、胎牛血清均购自Ｇｉｂｃｏ公司。胰蛋白酶购自Ｓｏｌａｒｂｉｏ公司。ＥＤＴＡ二钠购自国药集团化学试剂有限公司。液体ＡＥＣ酶底物试剂盒购自北京中杉金桥生物技术有限公司。ＨＲＰ－山羊抗鼠抗体、ＨＲＰ－山羊抗猪抗体均购自Ａｂｂｋｉｎｅ公司。猪抗ＰＲＲＳＶ阳性血清由河南省农业科学院保存。 1.3 仪器设备
Abstract：Ａｍｅｔｈｏｄｗｉｔｈｔｈｅｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｔｉｏｎ，ｔａｎｇｅｎｔｉａｌｆｌｏｗｆｉｌｔｒａｔｉｏｎａｎｄ４ＦａｓｔＦｌｏｗＳｅｐｈａｒｏｓｅｇｅｌｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙｗａｓｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄｔｏｐｕｒｉｆｙｔｈｅｐｏｒｃｉｎｅｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅａｎｄｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙｓｙｎｄｒｏｍｅｖｉｒｕｓ（ＰＲＲＳＶ）．Ｔｈｅｎｔｈｅｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙｗａｓａｎａｌｙｚｅｄｂｙｄｅｔｅｃｔｉｎｇｖｉｒｕｓｐａｒｔｉｃｌｅｓａｎｄｐｒｏｔｅｉｎｃｏｎｔｅｎｔｓ，ａｎｄｆｕｒｔｈｅｒａｎａｌｙｚｅｄｂｙＳＤＳ－ＰＡＧＥａｎｄｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ．ＴｈｅＢＡＬＢ／ｃｆｅｍａｌｅｍｉｃｅｗｅｒｅｉｍｍｕ－ｎｉｚｅｄｗｉｔｈｔｈｅｐｕｒｉｆｉｅｄｖｉｒｕｓａｎｄｔｈｅｎｉｍｍｕｎｏｇｅｎｉｃｉｔｙｗａｓｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙＩＰＭＡ．Ｆｉｎａｌｌｙ，ｔｈｅｒｅｌｉａｂｉｌｉｔｙｏｆ４ＦＦｍｅｔｈｏｄｗａｓｅｖａｌｕａｔｅｄｂｙｃｏｍｐａｒｉｎｇｗｉｔｈｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｏｆｓｅｄｉｍｅｎｔａｔｉｏｎｕｌｔｒａｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｔｉｏｎ．Ｉｎｒｅ－ｓｕｌｔｓ，ｔｈｅＴＣＩＤ５０ｏｆｖｉｒｕｓｐｕｒｉｆｉｅｄｂｙ４ＦＦｗａｓｉｎｃｒｅａｓｅｄｂｙ５０ｔｉｍｅｓ．Ｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｔｈｅｓｅｄｉｍｅｎｔａｔｉｏｎｕｌ－ｔｒａｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄ，４ＦＦｗｏｕｌｄｉｎｃｒｅａｓｅｔｈｅｒｅｍｏｖａｌｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙｏｆｉｍｐｕｒｉｔｙｐｒｏｔｅｉｎｆｒｏｍ９７．５１％ｔｏ９９．６８％．ＳＤＳ－ＰＡＧＥｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｖｉｒｕｓｐｕｒｉｆｉｅｄｂｙ４ＦＦｓｈｏｗｅｄｎｏｏｂｖｉｏｕｓｉｍｐｕｒｉｔｙｐｒｏｔｅｉｎｂａｎｄｓ．Ｔｈｅｒｅ－ｓｕｌｔｓｏｆＩＰＭＡｉｎｄｉｃａｔｅｄｔｈａｔｖｉｒｕｓｐｕｒｉｆｉｅｄｂｙ４ＦＦｈａｄｂｅｔｔｅｒｉｍｍｕｎｏｇｅｎｉｃｉｔｙ，ｈｉｇｈｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ，ｗｈｉｃｈｅ－ｌｉｍｉｎａｔｅｄｔｈｅｎｏｎｓｐｅｃｉｆｉｃｒｅａｃｔｉｏｎｂｅｔｗｅｅｎｔｈｅｓｅｒｕｍｏｆｔｈｅｉｍｍｕｎｉｚｅｄｍｉｃｅａｎｄｔｈｅｐｒｏｔｅｉｎｏｆＭａｒｃ－１４５ｃｅｌｌ．Ｔｈｅｓｅｒｅｓｕｌｔｓｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｅｔｈａｔｔｈｅｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙｏｆｔｈｕｓｉｎｇ４ＦＦｉｓｂｅｔｔｅｒｔｈａｎｔｈａｔｏｆｓｅｄｉｍｅｎｔａｔｉｏｎｕｌｔｒａｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｔｉｏｎ．Ｔｈｅｒｅｆｏｒｅｏｕｒｒｅｓｅａｒｃｈｗｏｕｌｄｌａｙｔｈｅｆｏｕｎｄａｔｉｏｎｆｏｒ
ｚｈａｎｇｇａｉｐｉｎｇ２００３@ｙａｈｏｏ．ｃｏｍ．ｃｎ；杨艳艳，研究员，Ｅ－ｍａｉｌ：２７１２８１１０５@ｑｑ．ｃｏｍ
第５期
田书苗等：猪繁殖与呼吸综合征病毒纯化方法的建立
５６９
ｐｒｅｐａｒｉｎｇｔｈｅｍｏｎｏｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏｄｙａｎｄｌａｒｇｅ－ｓｃａｌｅｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆＰＲＲＳＶｖａｃｃｉｎｅｓ． Key words：ｐｏｒｃｉｎｅｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅａｎｄｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙｓｙｎｄｒｏｍｅｖｉｒｕｓ；ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ；ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４ＦＦ
ＰＲＲＳＶ是有囊膜的、单股正链ＲＮＡ病毒，属于尼多病毒目动脉炎病毒科，直径大约５０～６５ｎｍ，表面相对平滑，病毒粒子形态多样，但以球形为主［４］。ＰＲＲＳＶ基因组长约１５ｋｂ，具有多顺反子结构，含１０个开放阅读框（ｏｐｅｎｒｅａｄｉｎｇｆｒａｍｅｓ，ＯＲＦｓ），包括ＯＲＦ１ａ、ＯＲＦ１ｂ、ＯＲＦ２ａ、ＯＲＦ２ｂ、ＯＲＦ３、ＯＲＦ４、ＯＲＦ５ａ、ＯＲＦ５、ＯＲＦ６、ＯＲＦ７等。其中ＯＲＦ１ａ和ＯＲＦ１ｂ长度约占病毒基因组全长的８０％，主要编码病毒的非结构蛋白，参与病毒的增殖。ＯＲＦ２ａ、ＯＲＦ２ｂ、ＯＲＦ３、ＯＲＦ４、ＯＲＦ５ａ分别编码五种糖蛋白，是病毒次要的结构蛋白［５］；ＯＲＦ５编码ＧＰ５蛋白，是病毒主要的糖基化结构膜蛋白，可刺激机体产生中和抗体；ＯＲＦ６编码Ｍ蛋白即非糖基化膜基质蛋白，ＧＰ５蛋白与Ｍ蛋白通过二硫键形成异源二聚体［６－７］；ＯＲＦ７编码Ｎ蛋白即核衣壳蛋白，约占病毒总蛋白含量的３０％，刺激机体产生非中和性抗体，并且抗体出现最早，含量最多，持续时间最长［８］。ＰＲＲＳＶ作为一种囊膜病毒，在宿主外的生存受温度、ｐＨ、光照和培养基的影响。ＰＲＲＳＶ的热稳定性差，其感染力随着温度的增加而降低。ＰＲＲＳＶ在ｐＨ６．５～７．５时保持稳定，在其他条件下病毒的感染能力下降［９］。ＰＲＲＳＶ能在肺泡巨噬细胞（ＰＡＭ）、猴胚胎肾上皮细胞（Ｍａｒｃ－１４５）等细胞上生长，并均能产生明显的细胞病变（ＣＰＥ）。［１０］
病毒，对仪器设备的要求较高。对于有囊膜结构的病毒来说，超速离心沉淀病毒和蔗糖的高黏稠和高渗透性会对病毒颗粒造成损伤，导致病毒感染能力下降。近年来，随着层析技术的快速发展，Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４ＦＦ凝胶层析正逐步用于病毒纯化，为避免ＰＲＲＳＶ囊膜结构破坏和ＰＲＲＳＶ感染能力的下降，采用差速离心、膜包超滤浓缩和Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４ＦａｓｔＦｌｏｗ（４ＦＦ）凝胶层析相结合的策略纯化ＰＲＲＳＶ，建立了一种温和纯化ＰＲＲＳＶ的方法，为制备单克隆抗体和规模化纯化ＰＲＲＳＶ疫苗奠定了基础。