梅毒实验室检测课件解析

2、原生质圆柱体上紧绕着3~4根周浆鞭毛，故运 动活跃，运动方式多样。
3、G-，但不易着色。Fantana镀银染色呈棕褐色。 4、在无活细胞的人工培养基中难培养，生长慢。 5、抵抗力极弱，对温度和干燥特别敏感；对青霉
素、四环素、红霉素等抗生素敏感。在干燥条件下不易 生存。肥皂水和一般消毒剂以及加温42℃以上均极易将其 杀灭。
TPPA/TPHA原理
TPPA试验原理与TPHA试验基本相同
TPPA试验用梅毒螺旋体致敏明胶颗粒 TPHA试验中梅毒螺旋体致敏羊红细胞
特点
梅毒螺旋体(Nichols株)全抗原
操作步骤
1. 试剂准备：试验前将试剂和待检标本恢复到室温。 2. 加稀释液：每份样本做4孔，加标本稀释液加至微量反应板
曾经认为FTA-ABS试验是检测梅毒的“金标 准”试验。
抗体作用
无保护作用，治疗监测。未经治疗的病人，其血清内的反应素可长 期存在。经正规治疗后，反应素可以逐渐减少至转为阴性。
原理和方法
反应原理
抗原抗体结合形成复合物，凝集成网状沉淀颗粒被肉 眼所见
抗原基本成分
心磷脂、卵磷脂和胆固醇
方法包括：
快速血浆反应素环状卡片试验(RPR) 不加热血清反应素(USR) 甲苯胺红不加热血清试验（TRUST） 性病研究实验室试验(VDRL)等。
② 加样：
吸取50μl血清(浆)与各圈中盐水作系列稀释，并 涂布满整个圈内。
③ 重复定性试验后两步。
凝集反应强度分级：
3+～4+：圆圈内出现中到大的红色絮状物，液 体清亮。
2+：圆圈内出现小到大的红色絮状物，液体较 清亮。
1+：圆圈内出现小的红色絮状物，液体浑浊。
—：圆圈内仅见红色集中于中央一点或均匀分 散。
非梅毒螺旋体抗原血清学试验
原理（抗心磷脂抗体）：
人体感染了梅毒螺旋体后，组织受到破坏，释放出来的 一种类脂成分，与梅毒螺旋体结合形成完全抗原，刺激 机体产生类脂质抗体（反应素）。
主要是IgM和IgG混合抗体。 抗体产生时间
感染3周-4周，硬下疳出现1周-2周 一般在感染后5～7周（或硬下疳出现后2～3周）产生。
梅毒螺旋体抗原血清学试验
试验原理
检测血中特异性抗梅毒螺旋体特异蛋白为抗 原的抗体（ IgG 和IgM ）。
特异性IgM型抗梅毒螺旋体抗体，感染2周后 即可测出。
实验方法
梅毒螺旋体颗粒凝集试验(TPPA) 梅毒螺旋体血球凝集试验(TPHA) 梅毒酶联免疫吸附试验（TP-ELISA） 梅毒免疫层析法-梅毒快速检测(RT) 荧光螺旋体抗体吸收试验（FTA-ABS） 化学发光免疫分析法（CLIA） 梅毒螺旋体蛋白印迹试验（WB）
风湿性心脏病 干燥综合征 毒品瘾者 慢性肾炎 肝硬化 老年
麻风 (是唯一产生慢 性生物学假阳性的感染 性 疾病)
妊娠的假阳性反应
这是一种生理情况下的生物学假阳性 假阳性发生率较低有报告为0.4%，滴度低。
假阳性问题
梅毒假阳性反应的处理
技术性假阳性反应一般是由于操作错误引起的假 阳性反应，经过重复试验即可除外。
稳定4℃ ～8 ℃ 保存12个月
不需灭活
反应板及结果 玻片，肉眼或 玻片，肉眼或 纸卡片，肉眼 纸卡片，肉眼
判断
显微镜
显微镜
注释
一期敏感性 （未经治疗）
二期敏感性 （未经治疗）
晚期敏感性 （未经治疗）
唯一用于检查脑 脊液的试验，诊 断神经梅毒
74%-87%
Hale Waihona Puke 100%98%结果容易判断 结果容易判断
77%-88% 100%
四种非特异性试验方法比较
抗原成分 抗原稳定性
血清试验前处理
VDRL
心磷脂、卵磷 脂、 胆固醇
不稳定,1天
需灭活
USR
同前+EDTA+氯 化胆碱
稳定4℃ ～8 ℃ 保存12个月
不需灭活
RPR
同前+EDTA+氯 化胆碱+活性 炭
稳定4℃ ～8 ℃ 保存12个月
不需灭活
TRUST
同前+EDTA+氯化胆碱 +甲苯胺红
梅毒的实验室诊断
病原体
为梅毒螺旋体，属于密螺旋体属，苍白密螺 旋体苍白亚种(Treponema pallidum
subspecies pallidum)
苍白螺旋体 密螺旋体属
苍白亚种 地方亚种 极细亚种
梅毒 地方性梅毒 雅司病
品他螺旋体
品他病
梅毒螺旋体的生物学特性
1、直径 0.10~0.15μm，有8~14个致密而规则的 小螺旋，两端尖直。
99%
77%-99% 100%
98%
77%-99% 100%
99%
RPR/TRUST检测流程
试验前期准备
RPR仪(水平旋转仪器) 必须滴！！ 试剂 50μl移液器、吸头 记号笔、废物缸 工作服 一次性手套、口罩、帽子 生物安全柜
梅毒自动旋转仪
测速:100转/MIN （±2转）
检测流程（定性）
对急性生物学假阳性反应，应做TPHA（TPPA） 等试验进行排除。
前带现象
原理
指二期梅毒患者非梅毒螺旋体抗原血清试验中， 有时血清中存在高浓度的抗体时出现的弱阳性、 不典型或阴性反应的结果。
处理
将血清稀释后再进行试验。
血清固定
耐血清性（血清固定）
指经抗梅毒治疗后，非梅毒螺旋体抗原血清试验 在一定时期内不阴转。早期的耐血清性常与治疗 量不足或不规则治疗、复发、再感染或有神经系 统梅毒等因素有关。
① 加样：
吸取50μl血清（浆）放在卡片圈中，并均匀地 涂布在整个圈内。
② 加抗原：
将抗原轻轻摇匀，用试剂盒提供的针头加1滴抗 原。
③ 反应：
将卡片置梅毒自动旋转仪8分钟立即在亮光下观 察结果。
检测流程（定量）
① 稀释液准备：
在圈内加入50μl生理盐水（根据需要确定稀释 度），勿将盐水涂开。
是由于患者有其他疾病或生理状态发生变化，使 梅毒血清试验出现阳性
急性生物学假阳性反应的疾病
➢ 风疹 ➢ 水痘 ➢ 传染性单核细胞增多症 ➢ 传染性肝炎 ➢ 上呼吸道感染 ➢ 肺炎球菌性肺炎 ➢ 病毒性肺炎 ➢ 牛痘疹
慢性生物学假阳性反应的疾病
系统性红斑狼疮 自身免疫性溶血性贫血 盘状红斑狼疮 结节性多动脉炎 类风湿性关节炎 桥本氏甲状腺炎
螺旋体检查是诊断早期现症梅毒的最佳方法， 对于患者的早期诊断、及时治疗、预后和尽 早切断传染源都有十分重要的意义。
如未见到梅毒螺旋体，并不能排除患梅毒的 可能性。
梅毒血清学检测方法
梅毒血清学检测分类
1. 非梅毒螺旋体抗原血清学试验 （非特异性梅毒抗体）
2. 梅毒螺旋体抗原血清学试验 （特异性梅毒抗体）
结果判断
1.观察加未致敏颗粒的第3孔，不出现凝集为 有效试验。
2. 观察凝集反应强度：分级如下。
4+：颗粒光滑覆盖整个孔底，有时边缘有折叠。 3+： 颗粒光滑覆盖大部分孔底。 2+：颗粒光滑集聚覆盖孔底，周围有一颗粒环。 1+： 颗粒光滑集聚覆盖孔底，周围有一明显颗粒 环。 ±：颗粒沉集孔底，中央形成一小点。 一：颗粒紧密沉积孔底中央。
梅毒的分期
梅毒的诊断
梅毒的诊断
早期梅毒（一期、二期和早期隐性梅毒）和晚期 梅毒（三期和晚期隐性梅毒）
必须依靠病史、症状及实验检查进行综合分析
梅毒的实验室检查
结果对诊断有决定性意义
常用梅毒实验室检测方法
病原学检测 血清学检测
病原学检查
取材方法
一期、二期梅毒时，取硬下疳、扁平 湿疣、黏膜斑等皮损部位组织液或淋 巴结穿刺术得到的组织液
梅毒螺旋体
传播途径
性接触是主要的传染途径
未经治疗的患者在感染后的1年内最具有传染性 随着病期的延长，传染性越来越小 到感染后2年，通过性接触一般无传染性 母婴传播 在妊娠7周时，梅毒螺旋体即可通过胎盘传染未经治疗
者，虽已无性传播（病期>2年），但妊娠时仍可传染给 胎儿 病期越长，传染性越小; 输血传染 间接传播：日常用品、接吻、哺乳、医疗器械等途径（接 触部位附有梅毒螺旋体） 。
清反应仍为阳性
早期梅毒硬下疳出现1周-2周后，血清可呈阳性。 经治疗后血清滴度可下降并阴性，故可作为疗效观
察、判愈、复发或再感染的指征。
假阳性问题
假阳性：非梅毒患者的血清反应呈阳性 ①技术性假阳性
由于标本的保存不当（如细胞污染或溶血）、试 剂质量差或过期、或实验室操作错误所造成。
②生物学假阳性
RPR定量试验
中等至大的凝块为阳性（圈4和7）有明确但 很小的凝块为弱阳性（圈2和3）颗粒均匀分 布（圈1,5,8-10）或稍粗糙（圈6）为阴性
临床意义
早期梅毒（一期、二期）经足量规则抗梅毒治疗后 3个月，VDRL试验抗体滴度下降2个稀释度，6个月 下降4个稀释度。
一期梅毒1年后转为阴性 二期梅毒2年后转为阴性。 晚期梅毒治疗后血清滴度下降缓慢，2年后约50%病人血
荧光螺旋体抗体吸收试验
（FTA-ABS）
原理
将有完整形态的梅毒螺旋体作为抗原，加上经吸 收剂（用Reiter螺旋体制备而成）吸收过的梅毒 患者血清形成抗原抗体复合物，再加入异硫氰酸 荧光素（FTIC）标记的抗人免疫球蛋白，与抗梅 毒螺旋体抗体结合，形成荧光的抗原抗体复合物。 在荧光显微镜下，螺旋体显出苹果绿色的荧光， 即为阳性反应。
孔内，第1孔100微升，第2～4孔各25微升。 3. 样本稀释：取血清25微升加至第1孔，混匀后取25微升至第
2孔，混匀后取25微升至第3孔，混匀后取25微升至第4孔， 混匀后弃去25微升。 4. 加对照液：第3孔加未致敏颗粒25微升，第4孔加致敏颗粒 25微升。 5. 混合：将反应板置振荡器振荡30秒。 6.反应：置有盖湿盒，孵育2 h，或放4℃冰箱过夜观察结果。