微生物的生理生化反应

微生物的生理生化反应

日期：2016年5月12日指导老师：张霞

实验原理

微生物对大分子的淀粉，蛋白质和脂肪不能直接利用，必须靠产生的胞外酶将大分子分解才能被微生物吸收利用。胞外酶主要为水解酶，通过加水裂解发电物质为较小的化合物，使其能被运输至细胞内。

一、大分子物质的水解实验

明胶由胶原蛋白经水解产生的蛋白质在25℃以上溶化，一下为凝胶。有些微生物可产生明胶酶水解该蛋白，明胶液化

二、糖发酵实验

绝大多数细菌都能利用糖类为碳源和能源，但是他们在分解糖类的能力上有很大差异。当发酵产生酸时，溴甲酚紫指示剂可以由紫色变为黄色。气体的产生可由倒置的德汉氏小管有无气泡来验证

三、IMVIC实验

吲哚实验

蛋白质中的色氨酸在某些细菌中与吲哚和对二甲基苯甲醛反应产生玫瑰吲哚为红色

甲基红实验

当细菌分解葡萄糖产酸且产酸量大时，加入甲基红指示剂由黄变红

伏普-实验

柠檬酸实验

某些细菌可以利用柠檬酸盐作为唯一碳源，在柠檬酸盐培养基上生长，分解柠檬酸盐生成碳酸盐

实验器材

大肠杆菌，枯草芽孢杆菌，产期肠杆菌，待测菌株

淀粉培养基A，明胶培养基B，葡萄糖发酵培养基C，乳糖发酵培养基D，葡萄糖蛋白胨培养基E，蛋白胨培养基F，柠檬酸培养基G

酒精灯，接种环，接种针，试管架

卢戈氏碘液，甲基红，吲哚试剂，5%甲萘酚，40%氢氧化钾

实验步骤

1、在A中接种大肠杆菌，枯草芽孢杆菌，待测菌株

2、在B中接种大肠杆菌，枯草芽孢杆菌，待测菌株

3、在C，D中分别接种大肠杆菌，变形杆菌，待测菌株

4、在E中接种大肠杆菌，产期肠杆菌，待测菌种

5、在F，G中接种大肠杆菌，产气肠杆菌，待测菌株

培养

G培养一周，其他培养2-3天

观察

A中滴加1-2滴卢戈氏碘液，黑色深浅表示菌株利用淀粉能力的强弱

B在4℃下放置30min，取出后滴加甲基红1-2滴静置，观察明胶液化情况

C，D直接观察颜色变化和产气情况

C

D

E中一组滴加1-2滴甲基红，观察颜色变化

另一组滴加3-5滴40%氢氧化钾，摇匀，再添加等量5%甲萘酚，用力震荡，放在37℃下15-30min，观察颜色变化

F中滴加2-3滴乙醚（通风橱内操作），剧烈摇匀，待液面分层后沿管壁加入2滴吲哚试剂（不可摇动），观察颜色变化、

G培养一周后直接观察颜色变化，以柠檬酸为唯一碳源生成柠檬酸盐而显蓝色为阳性，绿色为阴性

综上实验结果，待测菌株的生理生化反应为：

有强利用淀粉的能力；可分解明胶；利用葡萄糖和乳糖的能力较低；吲哚实验为阴性；甲基红实验为阴性，不产酸；伏-普实验为阴性；柠檬酸实验为阴性。

乳酸菌的厌氧培养