物体表面、手的细菌检测方法-食品伙伴网

物体表面与工人手细菌总数检测方法

物体表面与工人手细菌总数检测方法ICSQ/SL 西安申兰生物医学工程有限公司企业标准Q/SL 06-0012011 ,物体表面与工人手细菌总数的检测规程2011-08-15发布 2011-09-01实施发布西安申兰生物医学工程有限公司Q/SL 06-001,2011目次前言 ..................................................................... ............. II 1 范围 ..................................................................... ............ 1 2 规范性引用文件 ..................................................................... .. 1 3 职责 ..................................................................... ............ 1 4 抽样 ..................................................................... ............ 1 5 采样方法 ..................................................................... ........ 1 6 检验方法 ..................................................................... ........ 1 7 结果计算 ..................................................................... ........ 1 8 记录(见表A.1 表A.2) (1)IQ/SL 06-001,2011前言本标准是根据Q/SL 9000-2011《质量手册》中的要求而制定。

手、设备表面微生物取样方法

手、设备表面微生物取样方法一、携带物品：酒精灯、75%酒精棉球若干、不锈钢剪、镊子、棉签、10ml生理盐水、一次性手套。

备注：不锈钢剪、镊子、棉签、10ml生理盐水须经高温蒸汽灭菌；10ml生理盐水根据实际所需准备多支；一次性手套需经辐照灭菌；二、操作方法：1、手取样点燃酒精灯，取样人员戴上一次性手套，用棉签蘸取少许无菌生理盐水涂抹车间人员手正背面，反复两次，在涂抹时要转动棉签，使各部位能均匀。

完成后用不锈钢剪剪去取样人员手持部段，然后将棉签投入10ml生理盐水中，盖上试管盖。

2、设备表面取样点燃酒精灯，取样人员戴上一次性手套，用棉签蘸取少许无菌生理盐水涂抹设备平滑表面（面积自己预先估计一个大概数值，25、50或100cm2等），反复涂抹两次，在涂抹时要转动棉签，使各部位能均匀。

完成后用不锈钢剪剪去取样人员手持部段，然后将棉签投入10ml生理盐水中，盖上试管盖。

三、细菌及大肠菌群的培养（具体操作时以GB4789.2-2010和GB4789.3-2003为准）样液稀释：将放有棉棒的试管充分振摇。

配成1：10样液。

根据污染情况，进行十倍递增稀释，吸取1ml 的1：10样液加9ml无菌生理盐水中，混匀，此液为1：100稀释液，以此类推。

细菌总数：1、以无菌操作，选择1～2个稀释度各取1ml样液分别注入到无菌平皿内，每个稀释度做两个平皿，及时将冷却至46℃左右的平板计数琼脂培养基倾注平皿，每皿约15-20ml，转动平皿使其充分混合均匀。

2、待琼脂凝固后，将平皿翻转，置36℃±1℃培养48 h后计数。

3、结果报告：报告每25、50或100cm2数食品接触面或每只手的菌落数。

大肠菌群：1、以无菌操作，选择3个稀释度各取1ml样液分别接种到乳糖胆盐发酵管内，每个稀释度接种三管。

2、将乳糖胆盐发酵管置于36℃±1℃培养24±2h。

所有乳糖胆盐发酵管都不，则可报告为大肠菌群阴性，如有产气者，根据标准做证实实验。

台面和手部菌落总数测定方法

3、试剂
3.1 PCA培养基（121℃，灭菌15分钟）
3.2 VRBA培养基
3.3 0.85%灭菌生理盐水
4、检验程序
4.1样品采集：
4.1.1操作台面：将经灭菌的内径为5cm X 5cm的灭菌规格板放在被检物体表面，用灭菌过的镊子夹取浸有生理盐水的脱脂棉在规格板内进行取样，用脱脂棉擦洗两次后立即放入装有10ml灭菌生理盐水的试管中，加盖。
X = A/2×10
X —大肠菌群数
A —平板上的平均菌落数
***食品有限公司
文件编号
FW-QC-QI-008
版号
A1
文件名称：
台面和手部菌落总数、大肠菌群的测定
页次
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生效日期
2009.04.01
1、范围
适用于平和坊食品有限公司操作台面、设备、工具和工人手部表面菌落总数、大肠菌群的测定。
2、设备与材料
2.1生化培养箱37±1℃
2.2恒温水浴锅46±1℃
2.3培养皿
***食品有限公司
文件编号
FW-QC-QI-008
版号
A1文件Βιβλιοθήκη 称：台面和手部菌落总数、大肠菌群的测定
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生效日期
2009.04.01
4.3大肠菌群测试：将已采集的样品在6h内送实验室，每支采样管充分混匀后取1m L样液，放人灭菌平皿内，倾注VRBA!]J6f;D_H2c#X_^137390培养基15ml。每个样品平行接种两块平皿，待凝固后翻转平皿置37℃士1'C培养18-24h，计数平板上紫红色菌落数。
Y2 = A/S×10
Y3=A×10
K_BF_{_h1`L1F:q_G137390式中_K x_B_iD_i137390:

食品接触面微生物检验规程

食品接触面微生物检验规程食品接触面微生物检验规程1、标准要求●直接接触食品的生产设备设施：菌落总数≤10个/cm2，大肠菌群（MPN /cm2）：阴性；●员工手部、一次性手套、工作服等食品接触面；菌落总数≤10个/cm2；大肠菌群（MPN /cm2）：阴性；●生产车间空气落菌：清洁区：≤10cfu/平皿；次清洁区：≤50cfu/平皿；非清洁区：≤100cfu/平皿；●包装卷膜、饼托等内包材；菌落总数≤10个/cm2，大肠菌群（MPN /cm2）：阴性2、检验方法2.1菌落总数2.1.1：涂抹法适用于直接接触食品的生产设备设施；员工手部、一次性手套、工作服等食品接触面；包装卷膜、饼托等内包材；2.1.2 仪器设备：高压灭菌器、恒温培养箱、天平、锥形瓶。

2.1.3试剂及培养基：营养琼脂培养基；生理盐水。

2.1.4操作2.1.4.1样品采集2.1.4.1.1将生理盐水以50ml分装入锥形瓶中用高压灭菌器灭菌。

2.1.4.1.2将灭菌滤纸浸沾生理盐水在内包装材料（塑料瓶内壁、复合薄膜袋内表面）、生产器具和人员手部的表面檫拭，面积约为25c㎡，然后将带菌棉签放入有50ml生理盐水的锥形瓶中，充分振荡后作原液备用。

2.1.4.2测定：将原液取1ml于平板中，再将灭菌营养琼脂倒入平板内并转动平皿，使混合均匀，待凝固后倒转放入生化培养箱中（36+1）℃培养（48+ 2）h。

2.1.4.3 计数：以菌落计数法计菌落数。

2.1.5 结果计算生产器具和生产人员手部每25c㎡表面的细菌总数=平皿上菌落的平均数2.2 自然沉降法适用于生产车间空气落菌2.2.1 仪器与设备：高压灭菌器、恒温培养箱、器皿、天平。

2.2.3 试剂及培养基：营养琼脂培养基、生理盐水。

2.2.4 操作2.2.4.1将营养琼脂培养基在高压灭菌器中灭菌后制成营养琼脂平板。

2.2.4.2根据现场面积的大小及环境状况，选择有代表性的位置设置采样点（高出地面1.2m～1.5m），室内面积> 30㎡设3个以上采点，室内对角线交叉处的中点及与中点等距离的四角的各点取样（四角距离壁1m处），室内面积≤30㎡设内、中、外对角线三点取样（内外距离墙1m）。

物体表面及手的检测

物品和物体表面消毒效果监测1、采样方法(1）采样时间：消毒处理后医疗操作前。

(2)采样面积：被采表面小于100cm²，时，取全部表面;被采表面大于等于100cm²时，取100cm²。

（3）采样方法：将5cm×5cm 灭菌规格板放在被检物体表面，用浸有含相应中和剂的无菌洗脱液（中和剂＋洗脱液)的棉试子一只，在规格板内横竖往返均匀涂擦各5次，并随之转动棉试子,剪去手接触部位,将棉试子放入装有10ml 含相应中和剂的无菌洗脱液(中和剂＋洗脱液)的试管内,在试管上标明科室、检品所在房间和物品或物体表面的名称及采样面积，立即送至检验科细菌室。

若采样面积大于等于100cm²，应连续采样四个点（即采样100cm²）。

2、检验方法（1）细菌总数检测〔cfu /cm²〕：将试管内的棉试子用力振打80次，无菌操作吸取1。

0ml 接种于灭菌平皿内，加入溶化冷至45一48℃的营养琼脂15一18ml,边倒入边摇匀,待凝固后放入 37℃培养箱培养 48h ，计数菌落数 cfu / cm²。

计算：cfu/cm²=平板上菌落数×稀释倍数／采样面积（cm²） ,不规则物品或物体表面报告单位为 cfu／件。

（2）致病菌检测①检测原则：致病菌的检测依据污染情况进行相应指标的检测。

②金黄色葡萄球菌检测取采样液1.0ml ,接种于 5ml SCDLP 液体培养基中→36℃±1℃增菌 24h→取1白金耳环上述增菌液，在血平板上作划线分离→36℃±℃培养24h→观察菌落特征→鉴定→报告。

③乙型溶血性链球菌检测取样品1.0ml，接种于1％葡萄糖肉汤→37℃增菌24h→取1白金耳环增菌液在血平板上作划线分离→36℃±1℃培养24h→观察菌落→鉴定→报告。

④沙门氏菌属、志贺氏菌属、非发酵菌群等致病菌的检测参照相关检测方法。

食品接触面表面微生物检测规程

⾷品接触⾯表⾯微⽣物检测规程⾷品微⽣物检测1 ⽬的对洁净区操作⼈员、洁净区的表⾯定期进⾏微⽣物检测，以避免⼈为因素污染产品。

2 范围本规程适⽤于检测洁净区操作⼈员⼿部、⼯作服和洁净区表⾯的菌落总数。

3 职责3.1实验室检验员负责对菌落总数进⾏测试并予以记录。

3.2品管部主管负责对测试结果进⾏审核。

4 内容4.1本检测规程采⽤接触平⽫法。

4.2器具、培养基及测试条件；4.2.1器具、培养基4.2.1.1培养箱、培养⽫、营养琼脂培养基。

4.3洁净区操作⼈员微⽣物检测4.3.1步骤：4.3.1.1取已灭菌并在50±5℃保温的液态营养琼脂培养基，在层流净化台上倒⼊已灭菌的培养⽫中（18-20ml/⽫）。

4.3.1.2打开培养⽫上盖，以培养基表⾯接触测试⾯轻压2-3秒，盖上盖⼦。

4.3.1.3以75%酒精擦拭消毒测试⾯。

4.3.1.4将培养⽫放置于30-35℃培养箱中培养48⼩时。

4.3.2测试⾯之选择：4.3.2.1 ⼿部：以⼿掌内侧⾯为主要测试⾯。

4.3.2.2 ⼯作服：以袖⼝、肘部、腹部为主要测试⾯。

4.3.3 测试频率与标准：（见下表）洁净级别警告限（菌落数/25cm2）监测频率⼿⼯作服100001次/班10000331次/班100000551次/⽉4.3.4异常情况处理：4.3.4.1异常情况：指测试结果超过规定标准，或出现病原菌的情况。

4.3.4.2出现异常情况，⽴即查找污染源，并进⾏彻底的清洁消毒。

4.3.4.3对在此期间⽣产的产品的微⽣物污染情况进⾏调查，必要时采取应急措施。

4.3.4.4对⽣产部门进⾏⼈员个⼈卫⽣及清洁规范的教育和培训。

4.3.4.5⼀个⽉内再进⾏测试，直到合格或找出污染源并消除为⽌。

4.4洁净区表⾯微⽣物检测4.4.1洁净区微⽣物测试点选择表⾯微⽣物监测的采样点数⽬及其布局根据以下⼏个⽅⾯设置：4.4.1.1空调系统验证的结果4.4.1.2房间的⼤⼩和布局4.4.1.3房间的⽤途4.4.1.4与产品的距离4.4.1.5⼈流物流⽅向对于同⼀洁净区，每个相同的取样物体在其不同的地⽅采2个样。

物体表面与工人手细菌总数检测方法

物体表面与工人手细菌总数检测方法ICSQ/SL 西安申兰生物医学工程有限公司企业标准Q/SL 06-0012011 , 物体表面与工人手细菌总数的检测规程2011-08-15 发布2011-09-01 实施发布西安申兰生物医学工程有限公司Q/SL 06-001,2011目次、八前言.......... II 1 范围........ 1 2 规范性引用文件.. 1 3 职责........ 1 4 抽样........ 1 5 采样方法... 1 6 检验方法... 1 7 结果计......... 1 8 记录（见表A.1 表A.2） (1)IQ/SL 06-001,2011、八前言本标准是根据Q/SL 9000-2011 《质量手册》中的要求而制定。

本标准由质量部提出。

本标准批准人: 张冠中。

本标准由质量部归口。

本标准起草部门: 质量部。

本标准主要起草人: 孟阳。

本标准所代替标准的历次版本发布情况为:本标准代替Q/SL 07-03,2006 。

IIQ/SL 06-001,2011物体表面与工人手细菌总数的检测规程1 范围适用于与产品接触的所有物体表面及工人手的细菌总数的检测。

2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。

凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。

凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。

GB 15980-1995 一次性使用医疗用品卫生标准GB 15981-1995 消毒与灭菌效果的评价方法及标准GB 2828 逐批检查计数抽样程序及抽样表（适用于连续批的检查）Q/SL 9761,2011 监视和测量装置控制程序Q/SL 08-001,2011 实验室管理制度职责3 质量部负责对本检验规程实施。

4 抽样按GB 2828《逐批检查计数抽样程序及抽样表（适用于连续批的检查）》。

空气、物体表面、医务人员手的监测方法

空气、物体表面、医务人员手的监测方法采样及检查原则：采样应具有一定数量和代表性，采样后必须尽快对样品按要求指标进行检测，送检时间不得﹥6小时，若样品保存在冰箱内送检时间不﹥24小时。

一、空气监测：1、采样时间：消毒处理后，操作前2、采样方法：平板沉降法（1）布点方法：室内面积≤30ｍ²，设内、中、外对角线3点，两端距墙1米；室内面积＞30ｍ²，设东、西、南、北4角及中央5点，其中东、西、南、北均距墙1米。

洁净手术室9个点。

（2）采样方法：将直径为9cm普通营养琼脂平板在室内各采样点处，采样高度为距地面0.8--1.5米，采样时将平板盖打开，扣放于平板旁，暴露5、15、30分钟，盖好立即送检。

( 3)注意事项：采样前，关好门、窗，在无人走动的情况下，静止10min 进行采样。

二、医务人员手的监测：1、采样时间：在接触病人和从事医疗活动前进行采样或消毒后立即采样。

2、采样面积及方法：放被检人（五指并拢），用浸有无菌盐水的棉拭子在双手指屈面从指根到指端往返涂擦各 2 次(双手涂擦面积约60平方厘米），并随之转动采样棉拭子，剪去操作者手接触部位，将棉拭子投入 5ml 无菌盐水试管内，立即送检。

三、物体表面监测1、.采样时间：在消毒处理后4小时内进行采样。

2、.采样方法：用5cm×5cm的标准灭菌规格板，放在被检物体表面，用浸有无菌盐水的棉拭子1支，在规格板内横竖往返均匀涂擦各5次，并随之转棉拭子，连续采样4个，采样面积100cm2剪去手接触部位后，将棉拭子投入5ml含无菌盐水试管内，立即送检。

门把手等不规则物体表面用棉拭子直接涂擦采样4.注意事项：采集样本要有足够的数量且具有代表性，如层流洁净手术室，选择具有代表性采样地点（如手术台、治疗车、无影灯把手等）；采样时，棉拭子处于湿润状态，如处于饱和状态可将多余的采样液在采样管壁上挤压去除。

禁止使用干棉拭子采样。

四、消毒液的监测1、常用消毒液有效成分含量测定2、使用中消毒液细菌监测：1ml使用中消毒液+9ml中和剂3、结果判定：使用中的灭菌用消毒液、无细菌生长。

表面微生物五指手套测定法

五指手套测定法一、目的检测生产车间空气、操作人员手部、与食品有直接接触面的机械设备的微生物指标，生产区域环境当中病原微生物的监控，达到规定标准，以控制食品成品的质量。

二、原理通过培养基上菌种的生长情况，检测表面微生物是否达标‘三、仪器材料1.培养基：（1）沙氏葡萄糖琼脂培养基：按照使用说明书称取适量培养基于纯化水中，加热溶化后过滤，用PH计调节pH值至适当范围（略高0.2～0.4），保证灭菌后培养基pH值为5.6±0.2，按需要分装，在121±1℃灭菌15分钟，使用前进行培养基性能确认并做空白培养。

（2）大豆酪蛋白消化物琼脂培养基：按照使用说明书称取适量培养基于纯化水中，加热溶化后过滤，用PH计调节pH值至适当范围（略高0.2～0.4），保证灭菌后培养基pH值为7.3±0.2，按需要分装，在121±1℃灭菌15分钟，使用前进行培养基性能确认并做空白培养。

(1)配方：（g/L）蛋白胨葡萄糖琼脂pH值5.6±0.2 10.0 40.0 15.0 25 ℃用法：称取本品 65.0g,加热搅拌溶解于 1000ml 纯化水(或蒸馏水)中,121℃高压灭菌15 分钟,冷却至50℃左右时,倾入无菌平皿,备用。

质量控制：在36±1℃培养18-24小时。

质控菌株菌株编号生长情况其它特征黑曲霉菌ATCC1015 +++ 白色菌落酵母菌ATCC18790 +++ 白色菌落白色念珠菌CMCC(F)98001 +++ 白色菌落(2)配方：（g/L）胰蛋白胨17.0大豆蛋白胨氯化钠磷酸氢二钾葡萄糖pH值7.3 ± 0.2 3.0 5.0 2.5 2.5 25℃质量控制：在36±1℃培养18-24小时。

质控菌株菌株编号生长情况其它特征金黄色葡萄球菌ATCC25923 良好有黄色色素大肠埃希氏菌ATCC25922 良好白色大菌落沙门氏菌ATCC14028 良好无色大菌落单增李斯特氏菌ATCC19114 良好白色小菌落四、检测方法——样品的获得1.手：单手五指同时请按培养基表面2-3秒，1个手套每皿，双手分别取样。

物体表面、手的细菌检测方法-食品伙伴网

物体表面、手的细菌检测方法 - 食品伙伴网物体表面、手的细菌检测方法1 采样及检测原则采样后必须尽快对样品进行相应指标的检测;送检时间不得超过4h，若样品保存于0,4?条件时。

送样时间不得超过12h。

2 物体表面采样及检查方法2.1采样面积222 被采样品的表面积,100cm，取全部表面;被采样品的表面积?100cm，取100cm。

2.2采样方法用浸有灭菌水的棉拭子1支，放在被检物体表面，横竖往返各涂抹5次，并随之转动棉拭子。

将棉拭子放入装有10ml灭菌水的试管中送检。

2.3 细菌菌落总数检查2.3.1 用1ml灭菌吸管吸取1:10稀释液1ml，沿管壁徐徐注入含有9ml灭菌生理盐水的试管内，振摇试管，混合均匀，做成1:100的稀释液。

2.3.2另取1ml灭菌吸管，按上条操作顺序，做10倍递增稀释液，如此每递增稀释一次，即换用一支1ml灭菌吸管。

2.3.3选择2~3适宜的稀释度，分别在作10倍递增稀释的同时，即以吸取该稀释度的吸管移取1ml稀释液于灭菌平皿中，每个稀释度作两个平皿。

2.3.4稀释液移入平皿后，应及时将凉至46?营养琼脂培养基注入平皿约15ml，并转动平皿使混合均匀。

同时将营养琼脂培养基倾入加有1ml稀释液的灭菌平皿内作空白对照。

2.3.5待琼脂凝固后，翻转平板，置36?1?恒温培养箱内培养48?2h。

2.3.6 菌落计数方法做平板菌落计数时，可用肉眼观察，必要时用放大镜检查，以防遗漏。

在记下平板的菌落数后，求出同稀释度的各平板平均菌落总数。

2.3.7结果计算:2 表面细菌菌落总数(cfu/cm)= 平皿上菌落的平均数×采样液稀释倍数2 采样面积(cm)3人员手采样及检查方法3.1 采样面积及方法被检人五指并拢，将浸有灭菌水的棉拭子一支在双手指曲面从指根到指端来回涂擦各两2次(一只手涂擦面积30cm)，并随之转动采样棉拭子，将棉拭子放入装有10ml 灭菌水的试管中。

3.1.1 用1ml灭菌吸管吸取1:10稀释液1ml，沿管壁徐徐注入含有9ml灭菌生理盐水的试管内，振摇试管，混合均匀，做成1:100的稀释液。

人手及物体表面菌检验方法的验证

人手及物体表面菌检验方法的验证一、验证目的人手及物体表面菌检验采用的是棉签擦拭法和RODAC平板接触法，计算其回收率确定该方法是否适合用于人手及表面菌的检验。

二、适用范围适用于人手及物体表面菌检验方法验证的实施。

三、职责品保部负责验证方案的起草、取样及对样品的检验，及验证记录，并加以分析后，起草验证报告。

品保部主管负责验证数据及结果的审核。

四、参照标准GB/T19973.1-2005五、验证内容1. 仪器设备及试剂15ml试管、洗耳球、酒精灯、灭菌锅、1.0ml移液管、RODAC平板2．验证用菌种金黄色葡萄球菌（ATCC6538）第代大肠杆菌（ATCC25922）第代铜绿假单胞菌（ATCC27853）第代3.操作步骤3.1菌液的制备取经30℃～35℃培养18～24小时的金黄色葡萄球菌、大肠杆菌与铜绿假单胞菌的营养琼脂斜面培养物，用0.03mol/L的磷酸盐缓冲液（PBS）洗下，10倍稀释至10-6~10-7约为50~100cfu/ml的菌悬液备用。

3.2人手及物体表面接种分别向无菌物体表面接种1ml金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、铜绿假单胞菌的菌悬液，接种面积小于25cm2，并在层流下进行干燥。

验证结束后用75%的酒精擦洗染菌表面。

3.3操作方法3.3.1RODAC平板接触法将无菌的RODAC平板的培养基部分直接平帖试验对象上以一定的力压在测试点上，维持10秒钟后盖上平板。

置于29℃～31℃倒置培养72小时后，置于室温下倒置培养72小时后计数。

用同样的方法重复操作四次。

3.3.2棉签擦拭法将经灭菌的内径为5cm×5cm的灭菌规格板放在试验物体表面，用一浸有灭菌生理盐水的棉签在其内涂抹10次，然后剪去手接触部分棉棒，将棉签放入含10mL灭菌生理盐水的采样管内。

摇匀取1mL倒平板，每次倒三个平板。

在 32℃下倒置培养48小时后计数。

用同样的方法重复操作四次。

4.试验要进行三次独立操作，每次试验的回收率要≥70%方可认为该方法合适。

(完整版)食品接触面的微生物检验

食品接触面的微生物检验1原理食品接触面分为人员手、设备、器具等食品直接接触，其表面存在有微生物，为更好控制微生物生长繁殖，以大肠菌群、菌落总数为主要检测指标。

2检验材料虎红琼脂培养基、营养琼脂培养基、乳糖胆盐发酵培养液、无菌棉球、无菌水、酒精棉球、酒精灯、镊子3检验方法3.1人员手检验（发酵法)3.1.1样品采集被检人双手五指并拢，用一浸湿生理盐水的棉签在右手指曲面，从指尖到指端来回涂擦10次,然后剪去手接触部分棉棒,将棉签放入含10ml灭菌生理盐水的采样管内。

3.1.2细菌菌落总数的检测将已采集的样品在6h内送实验室，每支采样管充分混匀后取1ml样液，放入灭菌平皿内，倾注营养琼脂培养基，每个样品平行接种两块平皿，置36±1℃培养48小时，计数平板上细菌菌落数.Y＝A＊10（Y为工人手表面细菌菌落总数，cfu/只手；A为平板上平均细菌菌落数）3.1.3大肠菌群的检测每支采样管充分混匀后取1ml样液，分别放入10ml乳糖胆盐发酵管中，每个样品平行接种3管，置36±1℃培养24小时。

如所有发酵管都不产气，则可报告为大肠菌群阴性；如有产气者，则按下列程序进行。

3.1.4分离培养：将产气的发酵管用接种环分别以划线法转接于伊红美兰琼脂平板上，置36±1℃温箱内，培养18～24小时，取出观察菌落形态.3.1.5证实试验:在每个平板上，挑取可疑菌落(紫黑色或淡紫红色，有或略有或没有金属光泽的菌落）1~2个进行革兰氏染色，同时接种乳糖发酵管，置36±1℃培养24±2小时进行复发酵试验，观察产气情况。

凡乳糖管产气、革兰氏染色为阴性的芽孢杆菌即可报告为大肠菌群阳性.3.2设备、器具等的检验(纸片法)3.2.1将面积为25cm2的大肠菌群检测纸片用无菌水浸湿后立即贴于被检物表面，每份检样贴2张,30s后取下,置于无菌塑料袋中。

3.2.2将已采样的纸片置37℃培养16－18小时，观察纸片颜色变化情况.3.2.3若纸片保持蓝紫色不变为大肠菌群阴性,纸片变黄并在黄色背景上呈现红色斑点或片状红晕为阳性。

物体表面细菌监测

物体表面细菌监测1.目的规范物体表面采样及监测标准操作规程。

2.适用范围2.1 医院感染监控重点科室，每月常规监测。

2.2 发生医院感染暴发流行。

3、职责医院感染管理专职人员或兼职人员应遵守本程序。

4.程序方法监测对象：选择有代表性的可能污染表面采样时间：选择消毒处理后，4小时内进行采样面积：100cm24.1 25cm2细菌定量采样皿培养法：①使用时将采样器去盖，在待测物品上直接接触10秒钟后加盖（采样皿为一样本面积不得少于10cm2）。

②将采样皿置35～37℃温箱培育18－24小时，直接细菌计数（细菌个数／cm2）和分离鉴定细菌。

4.2 棉拭子涂擦法：对物体表面采样时，将内径为5×5 cm2的灭菌规格板放在被检物表面，用浸有灭菌生理盐水的棉拭子，在规格板空心处涂抹5次（往返为一次）；移动规格板，按同样方法涂抹采样，连续采样4次（采样4次为一样本）剪掉或烧去手接触部分。

将棉拭子放入装有10亳升的灭菌生理盐水的采样管中，送实验室进行培养鉴定细菌和细菌计数。

门把手等小型物体则用棉拭子直接涂擦物体表面，以每件为单位计算，较大门把手等则按面积（cm2）计算。

5、结果判断5.1 一、二类区域细菌总数≤5 CFU/cm2，并未检出致病菌为消毒合格。

5.2 三类区域细菌总数≤10 CFU/cm2，并未检出致病菌为消毒合格。

5.3四类区域细菌总数≤15 CFU/cm2，并未检出致病菌为消毒合格。

5.4 母婴同室、婴儿室、新生儿室及科病房的物体表面不得检出沙门菌为合格。

6、参考文献6.1中华人民共和国卫生部.消毒技术规范（2002年版）.20026.2杨华明，易滨.现代医院消毒学.北京：人民军医出版社，2002。

食品手、工作服、接触面等微生物检验.

生产车间微生物情况验证文件山东东阿史美生阿胶保健股份有限公司目录1 验证立项申请表2 验证方案审批表3 验证小组成员表4 验证时间安排5 验证方案6验证报告的审批7验证证书8验证报告9验证小组会签表10验证记录山东东阿史美生阿胶保健股份有限公司验证立项申请表验证方案的审批1.1 验证小组成员1.2 验证时间安排于年月对生产车间微生物情况进行验证。

生产车间工作人员手、设备接触面、工作服微生物情况验证方案1 概述微生物形体微小，必须凭借仪器等设备手段或经长时间培养才能被肉眼所观察到。

由于微生物分布的广泛性、繁殖快，对食品、药品的生产影响较大，应尽可能的减少微生物的污染，确保产品的安全性。

另一方面，微生物又有其有益的一面，人类可利用微生物生产药品、食品，处理环境污染等。

我公司生产车间微生物情况的验证主要目的是对食品生产环境的安全性检查，工作人员手消毒后的微生物、清洁后接触面的微生物、清洁后换工作服之前，进行验证。

保生产车间微生物情况符合本公司食品生产的条件。

2验证目的：检查确认生产车间微生物（手、设备接触面、工作服）情况适合本公司生产食品的条件。

3验证范围本方案适用于本公司食品生产车间的工作人员手，生产设备接触面，工作服表面微生物情况的验证。

4验证职责由化验室、质管部组成微生物检查验证小组，化验室负责验证的具体实施，包括采样、记录、检测、报告等工作，质管部负责对验证全过程的执行情况进行监督和复核工作。

5 验证内容5.1按照公司内部标准对工作人员手消毒后的微生物、清洁后接触面的微生物、清洁后工作服，进行验证。

（手＜50cfu／个、接触面、衣服＜50cfu／100cm2 ）5.2手、接触面、工作服微生物情况的验证5.2.1工作人员手的验证采样时间：在生产工人进入车间之前，消毒后或加工过程中消毒后采样。

采样方法：被检人五指并拢，用浸湿无菌生理盐水的无菌棉签在双手指曲面从指根到指端往返涂擦2次（一只手涂擦面积约为30 cm2 ），并随之转棉签，剪去手接触部位后，并将棉签投入10ml无菌生理盐水的采样管中，混匀后，检验。

物体表面微生物监测标准操作规程

物体表面微生物监测标准操作规程1.目的规范物体表面采样及监测标准操作规程。

2.适用范围医院感染高风险部门，每季度进行检测。

发生有暴发流行。

3.采样时间潜在污染区、污染区消毒后采样，清洁区根据现场情况确定。

4.职责医院感染管理专职人员或兼职人员应遵守本程序。

5.采样面积被采表面＜100cm2，取全部表面；被采表面≥100cm2，取100cm2。

6.采样方法用5 cm×5 cm1~4个规格板面积，剪去手接触部分，将棉拭子放入装有10 ml采样液的试管中送检。

门把手等小型物体则采用棉拭子直接涂抹物体采样。

若采样物体表面有消毒剂残留时，采样液应含相应中和剂。

消毒剂相应中和剂浓度（%）含氯消毒剂硫代硫酸钠复合含氯消毒剂硫代硫酸钠+吐温80+卵磷脂过氧乙酸硫代硫酸钠过氧化氢硫代硫酸钠+吐温80+卵磷脂碘酊碘伏硫代硫酸钠+吐温80甲醛双甲酮+马林戊二醛甘氨酸+吐温80乙醇吐温80+卵磷脂氯已定吐温80+卵磷脂苯扎溴铵吐温80+卵磷脂注：配制各种中和剂均使用磷酸盐缓冲液（PBS）为基础溶剂。

7. 检测方法将采样管40℃~45℃的熔化营养琼脂每皿倾注15ml~20ml；36℃±1℃恒温箱培养48h，计数菌落数，必要时分离致病性微生物。

8.结果计算：规则物体表面：物体表面菌落总数(CFU/cm2)= 平均每皿菌落数×洗脱液稀释倍数.........（）采样面积(cm2)小型物体表面的结果计算，用cfu/件表示。

9.结果判定I、II类环境：物体表面细菌菌落总数≤5 cfu/cm2。

III、IV类环境：物体表面细菌菌落总数≤10 cfu/cm2。

参考文献GB15982-2012 医院消毒卫生标准。

第六章食品的卫生细菌学检验-食品伙伴网.

食物中毒，泌尿系、呼吸道感染等鼠疫
植物寄生菌，曾从人体肠道及化脓扁桃体中分离到
耶尔森氏菌属 (Yersinia)
欧文氏菌属 (Erwinia)
鼠疫耶尔森氏菌 (Y.pestis)
草原居民欧文氏菌 (E.herbicola)
二、大肠菌群的测定意义
1、粪便污染的指标菌：大肠菌群或大肠杆菌
2、以大肠菌群作为粪便指标菌原因
（二）餐具大肠菌群快速检验(纸片法)
使用方法： 1. 采样6—10份。 • 碗、盘、杯等每份贴纸片两张，用无菌生理盐水湿润纸片后，立即贴于食具内侧表面，30秒后取下，置于原塑料袋内。筷子以5只为一份样品，用吸管吸取生理盐水湿润纸片后，立即将筷子进口端（约5cm）抹拭两张，放入原塑料袋内。
3.培养： • 将接种好的纸片轻轻压平（可叠放），在36℃下培养15－24h观察结果。 4.结果判定: 1) 纸片上出现紫红色斑点,其周围有黄圈者,为阳性. 2) 纸片为一种着色,无菌落生长者为阴性. 3) 纸片呈紫兰色,有紫红色斑点，其周围地黄圈者阴性. 4) 酸性食品接种后,纸片变黄,经培养后无紫红色斑点为阴性
2、平板菌落计数的选择
（1）、选取菌落数在30～300之间的平板（SN标准要求为25～250个菌落），若有二个稀释度均在30～300之间时，比值小于或等于2取平均数，比值大于2则其较小数字。
（2）、如均大于300，则取最高稀释度的平均菌落数乘以稀释倍数报告（3）、如均小于30，则以最低稀释度的平均菌落数乘稀释倍数报告（4）、如菌落数有的大于300，有的又小于30，不在 30～300之间，以最接近300或30的平均菌落数乘以稀释倍数报告（5）、如所有稀释度均无菌落生长，则应按小于1乘以最低稀释倍数报告。

表面微生物五指手套测定法

五指手套测定法一、目的检测生产车间空气、操作人员手部、与食品有直接接触面的机械设备的微生物指标，生产区域环境当中病原微生物的监控，达到规定标准，以控制食品成品的质量。

二、原理通过培养基上菌种的生长情况，检测表面微生物是否达标‘三、仪器材料1.培养基：（1）沙氏葡萄糖琼脂培养基：按照使用说明书称取适量培养基于纯化水中，加热溶化后过滤，用PH计调节pH值至适当范围（略高0.2～0.4），保证灭菌后培养基pH值为5.6±0.2，按需要分装，在121±1℃灭菌15分钟，使用前进行培养基性能确认并做空白培养。

（2）大豆酪蛋白消化物琼脂培养基：按照使用说明书称取适量培养基于纯化水中，加热溶化后过滤，用PH计调节pH值至适当范围（略高0.2～0.4），保证灭菌后培养基pH值为7.3±0.2，按需要分装，在121±1℃灭菌15分钟，使用前进行培养基性能确认并做空白培养。

(1)配方：（g/L）蛋白胨葡萄糖琼脂pH值5.6±0.2 10.0 40.0 15.0 25 ℃用法：称取本品 65.0g,加热搅拌溶解于 1000ml 纯化水(或蒸馏水)中,121℃高压灭菌15 分钟,冷却至50℃左右时,倾入无菌平皿,备用。

质量控制：在36±1℃培养18-24小时。

质控菌株菌株编号生长情况其它特征黑曲霉菌ATCC1015 +++ 白色菌落酵母菌ATCC18790 +++ 白色菌落白色念珠菌CMCC(F)98001 +++ 白色菌落(2)配方：（g/L）胰蛋白胨17.0大豆蛋白胨氯化钠磷酸氢二钾葡萄糖pH值7.3 ± 0.2 3.0 5.0 2.5 2.5 25℃质量控制：在36±1℃培养18-24小时。

质控菌株菌株编号生长情况其它特征金黄色葡萄球菌ATCC25923 良好有黄色色素大肠埃希氏菌ATCC25922 良好白色大菌落沙门氏菌ATCC14028 良好无色大菌落单增李斯特氏菌ATCC19114 良好白色小菌落四、检测方法——样品的获得1.手：单手五指同时请按培养基表面2-3秒，1个手套每皿，双手分别取样。

物体表面消毒效果监测标准操作规程(医院管理规章制度)

2.将冷至40℃～45℃的熔化营养琼脂培养基每皿倾注15ml～20ml，36℃±1℃恒温箱培养48h,计数菌落数。
3.怀疑与医院感染暴发有关时，进行目标微生物的检测。
四、结果计算：
1.物体表面菌落总数（cfu/cm2）=平均每皿菌落数×洗脱液稀释倍数/采样面积（㎝2）。
2.小型物体表面的结果计算，用cfu/件表示。
4.被采表面＜100cm2，取全部表面。
5.被采表面≥100cm2取100cm2。
6.剪去手接触部分，将棉拭子放入装有10ml无菌检验用洗脱液的试管中送检。
7.门把手等小型物体用棉拭子直接涂抹物体表面采样。
8.采样物体表面有消毒剂残留时，采样液应含相应中和剂。
三、检测方法：
1.充分震荡采样管后，取不同稀释倍数的洗脱液1.0ml接种平皿。
五、结果判定：
1.洁净手术部、其他洁净场所，非洁净手术部（室）、非洁净骨髓移植病房、产房、介入诊疗科、新生儿病房、器官移植病房、烧伤病房、重症监护病房、血液病病区等；物体表面细菌菌落总数≤5cfu/cm2。
2.儿科病房、母婴同室、妇产科检查室、人流室、治疗室、注射室、换药室、输血科、消毒供应室、血液透析室、急诊室、化验室、各类普通病室、感染疾病科门诊及其病房等，物体表面细菌菌落总数≤10cfu/cm2。
物体表面消毒效果监测标准操作规程
制订者：
审核者：
日期：
一、采样时间：在消毒处理后或怀疑与医院感染暴发有关时进行采样。
二、采样方法：
1.用5cmx5cm灭菌规格板放在被检物体表面。
2.用浸有无菌0.03mol/L磷酸盐缓冲液（PBS）或生理盐水采样液的棉拭子1支。
3.在规格板内横竖往返各涂抹5次，并随之转动棉拭子，连续采样4个规格板面积。

表面微生物检测基本方法

空气、食品接触面微生物检查措施、检查原则1、目旳：检测生产车间空气、操作人员手部、与食品有直接接触面旳机械设备旳微生物指标，生产区域环境当中病原微生物旳监控，达到规定原则，以控制食品成品旳质量。

2、参照原则：中华人民共和国国标《一次性使用卫生用品卫生原则》GB15979－1995、《HACCP原理与实行》、中华人民共和国国标《公共场合空气微生物检查措施细菌总数测定》GB/T 18204.1－、中华人民共和国进出口商品检查行业原则SN 0169-92/SN 0172-92/ SN 0170-92、出入境检查检疫局二000四年《出入食品微生物检查培训教材》中《出入食品生产厂卫生细菌检查措施》、日本东京冷冻食品检查措施。

3、采样与检测措施：3.1空气旳采样与测试措施3.1.1样品采集：(1)取样频率：a)车间转换不同卫生规定旳产品时，在加工迈进行采样，以便理解车间卫生打扫消毒状况。

b)全厂统一放长假后，车间生产前，进行采样。

c)产品检查成果超内控原则时，应及时对车间进行采样，如有检查不合格点，整治后再进行采样检查。

d)实验性新产品，按客户规定频率采样检查。

e)正常生产状态旳采样，每周一次。

（2）采样措施在动态下进行，室内面积不超过30 m2，在对角线上设里、中、外三点，里、外点位置距墙1 m；室内面积超过30 m2，设东、西、南、北、中五点，周边4点距墙1 m。

采样时，将含平板计数琼脂培养基旳平板(直径9 cm)置采样点(约桌面高度)，并避开空调、门窗等空气流通处，打开平皿盖，使平板在空气中暴露5 min。

采样后必须尽快对样品进行相应指标旳检测，送检时间不得超过6h，若样品保存于0～4℃条件时，送检时间不得超过24h。

3.1.2菌落培养：（1）在采样前将准备好旳平板计数琼脂培养基平板置37℃±1℃培养24 h，取出检查有无污染，将污染培养基剔除。

（2）将已采集样品旳培养基在6 h内送实验室，细菌总数于37℃±1℃培养48h观测成果，计数平板上细菌菌落数。

人员手部及设备卫生的微生物测定标准

人员手部及设备卫生的微生物测定标准(总2页)--本页仅作为文档封面，使用时请直接删除即可----内页可以根据需求调整合适字体及大小--1、目的为防止或减少微生物对食品的污染，对清洗消毒后的人员手部、工器具、设备进行微生物检测，确保其微生物限值可控。

2、范围本标准适用于所有与产品直接接触的人员手部、工器具、设备等。

3、职责：化验员负责本标准的实施。

4、仪器设备及器具：灭菌剪子、镊子。

灭菌具塞广口瓶。

灭菌生理盐水。

灭菌棉签，灭菌的金属制规格板。

编号用的白板笔。

手提式高压蒸气灭菌锅。

电热恒温培养箱。

酒精灯。

75%的酒精棉球。

消毒橡皮手套。

其他微生物实验所需用样品。

5、采样方法：设备表面、机械器具：用浸有灭菌生理盐水的棉签在被检物体表面（取与食品直接接触或有一定影响的表面）取25cm2的面积，在其内涂抹10次，然后剪去与手接触部分棉棒，将棉签放入10ml灭菌生理盐水的试管内送检。

人员手部：被检人五指并拢，用浸有灭菌生理盐水的棉签在右手指曲面，从指尖到指端来回涂抹10次，然后剪去与手接触部分棉棒，将棉签放入10ml灭菌生理盐水的试管内送检。

采样注意事项：擦拭时棉签要随时转动，保证擦拭的准确性。

6、细菌总数. 样液稀释：将放有棉签的试管充分振摇，此液位1:10稀释液，如污染严重，可十倍递增稀释，吸取1:10样液加入9ml无菌生理盐水中，混匀，此液为1:100稀释液。

无菌操作以无菌操作，选择1-2个稀释度各取1ml样液分别注入到无菌平皿中，每个稀释度做两个平行样，将已融化灭菌冷却至46℃的平板计数琼脂倾入平皿中，每个约15-20ml，充分混合。

冷却凝固后，将平皿翻转，放入培养箱36℃±１℃，培养48h±2h。

7、卫生指标工作台表面细菌菌落总数≤20 CFU/cm2工人手表面细菌菌落总数≤300CFU／只手８、监测频率每月检测一次。