细菌的各种计数法
细菌菌落计数
直接法 血球记数板 活菌染色：美蓝、吖啶橙、TTC
01
间接法
02
目录
直接法—血球记数板
细菌计数板和血球计数板都用来侧微生物的总菌数。血球计数板用来测较大微生物如酵母菌和霉菌孢子的总数，细菌计数板用来测细菌的总菌数。两种计数板的构造相似，不同的是细菌计数板的深度仅为血球计数板深度的1/5。
平板菌落计数法(Colony-counting Methods)
一个活菌在合适的培养基表面，逐渐生长成一个 肉眼可见的菌落（菌落形成单位，colony forming unit, CFU），从而得知原始活菌含量。 涂布平板法Spread Plate 浇注平板法Pour Plate
间 接 法
间 接 法—平板l）=某一稀释度的平均菌落数 ×10×稀释度 注意事项见实验讲义
菌落数
1
2
平均
1
2
平均
1
2
平均
每毫升中 总活菌数
1
0.1ml
1
2
3
4
5
6
广泛用于生物制品检验(如活菌制剂)，以及食品、饮料和水(包括水源水)等的含菌指数或污染程度的检测。
疾病诊断 泌尿系感染性疾病的诊断------尿培养
细菌感染及药物治疗效果 临床病人 实验动物
适用领域：
3、菌落计算方法
3、菌落计算方法 （1）菌落计数方法 做平板菌落计数时，可用肉眼观查，必要时用放大镜检查，以防遗漏。在记下各平板的菌落数后，求出同稀释度的各平板平均菌落总数。 （2）菌落计数的报告 ①平板菌落数的选择 选取菌落数在30～300之间的平板作为菌落总数测定标准。一个稀释度使用两个平板，应采用两个平板平均数，其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数，若片状菌落不到平板的一半，而其余的一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘2以代表全皿菌落数。
微生物菌落总数计数方法
微生物菌落总数计数方法微生物菌落总数计数方法有很多种，下面列举了其中的50种方法并对其进行详细描述：1. 胶平板法：将微生物样品通过稀释后均匀涂布在富营养培养基上，培养后统计菌落数量。
2. 液体计数法：使用专门的装置进行微生物菌落计数，例如波形计数器。
3. 膜过滤法：将微生物样品通过膜过滤器，然后将膜放到富养分培养基上进行培养和计数。
4. 容积法：将微生物样品通过稀释，然后使用容积计数器对其进行计数。
5. 水平采样法：将微生物样品通过固体培养基，然后根据采样水平进行菌落计数。
6. 微阵列计数法：使用微阵列技术进行微生物菌落计数，高通量，自动化程度高。
7. 波数计数法：通过光学检测装置对微生物样品的波数进行计数。
8. 流式细胞技术：通过流式细胞仪对微生物样品中的细胞进行计数和分析。
9. PCR技术：通过定量PCR对微生物样品中的特定基因进行定量，从而间接计算出微生物菌落总数。
10. 分光光度计法：通过分光光度计测定微生物样品中生物的光学密度，进而计算其菌落总数。
11. 过膜法：利用薄膜将微生物分布均匀后计数。
12. 电子计数法：通过电子显微镜进行微生物菌落计数。
13. 温度计数法：根据微生物在不同温度下的生长特性进行计数。
14. 荧光法：利用荧光染料对微生物菌落进行标记并计数。
15. 光学显微镜法：利用光学显微镜对微生物进行直接观察和计数。
16. 超声波法：利用超声技术将微生物分散均匀后计数。
17. 图像分析法：对微生物样品在图像上的特征进行分析，并计算菌落总数。
18. 颜色计数法：通过颜色反应对微生物菌落进行计数。
19. 电泳计数法：通过蛋白电泳对微生物进行计数。
20. 微型生物反应器法：利用微型生物反应器的特性对微生物进行计数。
21. 电化学法：通过电化学技术对微生物样品进行计数。
22. 生物传感器法：利用生物传感器对微生物进行快速计数。
23. 感光计数法：利用光敏感材料对微生物进行计数。
24. 气溶胶计数法：利用气溶胶技术对微生物进行计数。
如何计算食品中微生物的数量
食品中微生物数量的计算方法主要有：
1. 直接计数法（光测定法）：这是一种传统的计数方法，它通过显微镜或扫描计数仪来直接计数。
这种方法适用于能被杀死并能通过显微镜或扫描仪观察的微生物，如细菌和酵母。
2. 显微镜检视法：这是一种基于显微镜的计数方法，它可以在显微镜下观察到各种微生物，包括细菌、酵母、霉菌和原生动物。
通过计数每个视野中的微生物数量，可以计算出总体积中的微生物数量。
3. 电子探测器计数法：这是一种基于电子探测器的计数方法，它使用电子探测器来检测微生物的代谢活动或物理特征，如细胞大小、密度或形状。
这种方法适用于各种类型的微生物，包括细菌、酵母和霉菌。
4. 培养基计数法：这是一种基于培养基的计数方法，它通过在培养基中生长微生物来计数。
通过在特定培养基中培养样品，可以观察到微生物的生长和繁殖，并使用显微镜或电子探测器进行计数。
需要注意的是，食品中微生物数量的计算方法取决于所使用的实验室技术和设备，以及所研究的微生物类型和数量。
在进行食品微生物数量计算时，应该遵循相关的实验室操作规程和质量控制措施，以确保结果的准确性和可靠性。
微生物活菌计数方法
杂菌数 亿/g
细菌杂菌 (亿 / g ) 10 8 19 .3 10 4
100 0.19 10 .10 0.1
重复 1 2 3 菌落 平均数
稀释倍数 （霉菌在马丁培养基 上） 103 104 105 6 / / 7 / / 8 / / 7.0 /
3
/
霉菌数 个/g 0.69×106
两个稀 释倍数 度菌落 数之比 / / / 1.1 2.5 / /
菌数 亿 /g,mL 25.3 3.2 0.38 0.30 / 0.032 0.015
无法数 无法数 无法数 313 289 无法数 32 15 315 38 32 136 5 3
3.2 标准差
标准差(Standard Deviation) ：各数据偏离平均数的距离 （离均差）的平均数，它是离差平方和平均后的方根。用δ表 示。标准差体现随机变量取值与其期望值的偏差。 标准 NY411-2000 固氮菌肥料的7.2.6.2。
浮液的浓度在一定范围内与透光度成反比，与光密度成正 比，所以，可用光电比色计测定菌液，用光密度(OD值)表 示样品菌液浓度。根据浊度计算出细菌的数量。该方法一 般可以估计出细菌的数量级。
经常用于一些特殊的微生物的快速计数，如光合细菌和
藻类的测数。但是由于该方法仅能估测菌数，不能准确定 量，而且由于一些颗粒和添加剂的作用，不能正确反映该 样品的质量，所以在质检过程中不予采用。
微生物活菌平板计数方法和技术
微生物肥料和食用菌菌种质检中心 曹凤明
微生物计数方法种类
1. 2. 3.
直接计数法 核酸计数法 活菌计数法（培养法）
MPN（Most-Probable-Number ）最大可能数法 混菌法 平板技术法
微生物计数方法
微生物计数方法微生物计数是许多领域中重要的分析方法，包括环境科学、食品科学、医学和生物技术。
正确的计数方法能够准确地估计样品中微生物的数量，对于研究和工业应用都是至关重要的。
下面将介绍几种常用的微生物计数方法。
血细胞计数器法是一种使用显微镜进行微生物计数的经典方法。
该方法使用血细胞计数器对微生物样品进行计数，每个格子中的微生物数量被计算出来，然后进行统计分析。
此方法的优点是准确性高，但是耗时长，操作繁琐，需要熟练的操作人员。
流式细胞术是一种使用流式细胞仪进行微生物计数的现代方法。
该方法将微生物样品通过流式细胞仪进行计数和分析，能够快速准确地测定样品中的微生物数量和种类。
此方法的优点是速度快、精度高、可自动化操作，但是设备成本高，维护成本也较高。
自动细胞计数器法是一种使用自动细胞计数仪进行微生物计数的现代方法。
该方法使用自动细胞计数仪对微生物样品进行计数，能够快速准确地测定样品中的微生物数量和种类。
此方法的优点是速度快、精度高、可自动化操作，而且设备相对较为经济实惠，易于推广应用。
平板计数法是一种常用的细菌计数方法。
该方法将微生物样品涂布在平板上，培养后计算菌落数量，从而得出样品中的细菌数量。
此方法的优点是简单易行、成本低，但是结果受培养条件和操作者技能水平的影响，准确性相对较低。
不同的微生物计数方法具有不同的优缺点，应根据具体的研究目标和实际情况选择合适的方法。
为了提高计数的准确性，需要注意样品的采集、保存、制备和处理等方面的问题，确保样品的质量和代表性。
微生物的分离与计数是微生物学中重要的实验技术之一。
通过分离和计数，我们可以获得微生物群体的相关信息，如种类、数量、生长状况等，对于微生物学研究、应用以及工业生产等领域都具有重要的意义。
选择合适的培养基：根据目标微生物的种类和生长需求，选择适合的培养基。
培养基应具有营养丰富、透明度高、易于观察等特点。
制备样品：从目标环境中采集样品，如土壤、水、食品等，并进行预处理，以去除不需要的杂质和大型生物。
几种常用的细菌计数方法
几种常用的细菌计数方法常用的细菌计数方法主要有显微镜计数法、平板计数法、膜过滤法和浑浊度法等。
下面将逐一介绍这些方法。
显微镜计数法是最基本的细菌计数方法之一、将细菌培养液取少量放在显微镜载玻片上，用显微镜观察并计数细菌个数。
这种方法需要操作技巧熟练，适用于较稀疏的细菌培养液，但不适用于高密度的细菌培养液，并且仅能得到一个粗略的细菌数量。
平板计数法是一种较为常用的细菌计数方法。
将稀释后的细菌培养液均匀涂在含有培养基的平板上，经过一段时间的培养后，可以通过数独落在平板上形成的菌落数量来估计初始细菌数量。
通常将膨胀菌落数乘以相应的稀释倍数从而得到细菌的数量。
平板计数法的优点是简单易行，适用于大量细菌的计数，但该方法只适用于能够在固体培养基上生长的细菌。
膜过滤法是一种通过滤除细菌并计数膜上细菌数量的方法。
将细菌培养液通过微孔膜过滤器，在膜上滤除细菌，然后将膜放在富含营养物的培养基上进行培养，形成菌落后进行计数。
与平板计数法相比，膜过滤法更适用于含有颗粒物的液体或空气中的细菌计数。
膜过滤法的优点是操作相对简单，适用于含有较多颗粒物或固体物质的液体的细菌计数，但该方法仅适用于能够通过过滤的培养液。
浑浊度法是一种通过测量培养液的浑浊度来估计细菌数量的方法。
利用光密度计或比色计测量细菌培养液的吸光度或浑浊度，并通过细菌密度与浑浊度之间的关系来计算细菌数量。
这种方法不需要进行涂片或过滤步骤，适用于细菌数量较多的情况。
然而，浑浊度法有一定的局限性，因为细菌的大小、形状和组成可能对浑浊度产生影响，而且需要事先建立浑浊度和细菌数量间的校准曲线。
除了以上介绍的方法，还有一些其他的细菌计数方法，如Flow cytometry（流式细胞仪）、Most probable number（最可能数）等，这些方法各有特点，可以根据实际需要选择合适的方法进行细菌计数。
细菌计数方法的选择应根据实验的目的、样品性质和操作条件等因素来确定。
细菌总数的测定方法
细菌总数的测定方法
测定细菌总数的方法通常包括以下几种：
1. 显微镜计数法：将待测样品制成适当浓度的悬浮液，然后使用显微镜观察计数。
这种方法常用于观察对显微镜可见的大型细菌。
2. 平板计数法：将待测样品制成适当稀释度的悬浮液，然后在固体培养基上均匀涂布。
经过适当时间后，可数出单个菌落的数量，并根据稀释倍数计算出细菌总数。
3. 涂布计数法：将待测样品制成适当稀释度的悬浮液，通过草屑涂布或涂布棒均匀涂布在固体培养基上。
经过适当时间后，可数出涂布上细菌的总数。
4. 易液化琼脂凝胶计数法：将待测样品制成适当稀释度的悬浮液，与液化琼脂凝胶混合，然后倒入琼脂凝胶平板上固化。
经过适当时间后，可数出液化琼脂凝胶上细菌的总数。
5. 流式细胞仪计数法：将待测样品进行适当稀释后，通过流式细胞仪对样品中的细菌进行单个细胞的计数和分析。
这种方法快速、准确，适用于大批量的细菌计数。
需要注意的是，不同的方法适用于不同类型的细菌和样品，选择合适的方法对准
确测定细菌总数十分重要。
此外，测定细菌总数时需要注意消毒、防止交叉感染等实验操作安全。
细菌计数方法
细菌计数1.计数器测定法：即用血细胞计数器进行计数。
取一定体积的样品细胞悬液置于血细胞计数器的计数室内，用显微镜观察计数。
由于计数室的容积是一定的，因而根据计数器刻度内的细菌数，可计算样品中的含菌数。
本法简便易行，可立即得出结果。
本法不仅适于细菌计数，也适用于酵母菌及霉菌孢子计数。
2、电子计数器计数法:电子计数器的工作原理是测定小孔中液体的电阻变化，小孔仅能通过一个细胞，当一个细胞通过这个小孔时，电阻明显增加，形成一个脉冲，自动记录在电子记录装置上。
该法测定结果较准确，但它只识别颗粒大小，而不能区分是否为细菌。
因此，要求菌悬液中不含任何碎片。
3、活细胞计数法常用的有平板菌落计数法，是根据每个活的细菌能长出一个菌落的原理设计的。
取一定容量的菌悬液，作一系列的倍比稀释，然后将定量的稀释液进行平板培养，根据培养出的菌落数，可算出培养物中的活菌数。
此法灵敏度高，是一种检测污染活菌数的方法，也是目前国际上许多国家所采用的方法。
使用该法应注意：①一般选取菌落数在30～300之间的平板进行计数，过多或过少均不准确；②为了防止菌落蔓延，影响计数，可在培养基中加入O．001％2，3，5一氯化三苯基四氮唑(TTC)；③本法限用于形成菌落的微生物。
广泛应用于水、牛奶、食物、药品等各种材料的细菌检验，是最常用的活菌计数法。
4、比浊法比浊法是根据菌悬液的透光量间接地测定细菌的数量。
细菌悬浮液的浓度在一定范围内与透光度成反比，与光密度成正比，所以，可用光电比色计测定菌液，用光密度(OD值)表示样品菌液浓度。
此法简便快捷，但只能检测含有大量细菌的悬浮液，得出相对的细菌数目，对颜色太深的样品，不能用此法测定。
5、测定细胞重量法此法分为湿重法和干重法。
湿重法系单位体积培养物经离心后将湿菌体进行称重；干重法系单位体积培养物经离心后，以清水洗净放人干燥器加热烘干，使之失去水分然后称重。
此法适于菌体浓度较高的样品，是测定丝状真菌生长量的一种常用方法。
微生物活菌计数方法
2.1 母液（基础液）的制备
样品混合均匀：很重要 固体样品：称取10g左右样品加入到100mL无 菌水（ 500mL三角瓶）中，静置20min。 液体样品：量取10.0ml样品加入到90mL无菌 水（500mL三角瓶）中，静置20min 。 分散菌体：将三角瓶置于摇床上200r/min振荡 30min，即成母液菌悬液。
6.
彻底、操作过程是否合乎无菌要求。
2.3 平板的培养
将涂布好平板放在适宜的条件下培养
如： 温度条件 气体条件 培养时间 平板倒置培养
2.4 菌落识别和计数
1. 2. 3.
4.
通过菌落识别、涂片染色、镜检观察，确定 有效菌。（必要时做生化实验） 选择性培养基上长出的菌落并非都是有效菌， 培养基的选择性是相对的。 一种有效菌只在一种特定培养基上计数，不 同培养基上同一种有效菌不能累加。 细菌杂菌（包括放线菌）在培养细菌的培养 基上计数；霉菌和真菌杂菌在真菌培养基上 计数。但也不能重复计数。
3. 电子计数器计数法 工作原理是测定小孔中液体的电阻变化，小 孔仅能通过一个细胞，当一个细胞通过这个小孔 时，电阻明显增加，形成一个脉冲，自动记录在
电子记录装置上。
该法测定结果较准确，但它只识别颗粒大小，
而不能区分是否为细菌。因此，要求菌悬液中不
含任何碎片。不适于微生物肥料产品的检测。
核酸计数法
稀释、加样和涂布注意事项
1.
整个程序应在无菌间或超净台内进行，操作人员时刻有 无菌概念 适宜稀释度：根据标准或企业提供的信息选择稀释度。 系列稀释时不同的稀释度应更换吸管（移液管），加样
细菌计数方法范文
细菌计数方法范文细菌计数是一种量化细菌数量的方法，可以通过不同方法适用于不同场合和目的。
在医学、生物学、食品安全和环境科学等领域，细菌计数是非常重要的实验技术之一、本文将介绍几种常见的细菌计数方法。
1.目视计数法目视计数法是最简单和最直接的细菌计数方法。
它适用于菌数较少的样品，并且需要在固体培养基上进行。
具体方法是将待测样品加入已经凝固的培养基上，通过目视观察并计算每个培养基上的细菌克隆数量。
由于细菌数量较少，这种方法的误差可能较大。
2.参考法计数参考法计数是通过比较待测细菌数量与已知含量的标准参考细菌数量来进行计数的方法。
通常使用溶液稀释的方法进行。
将待测细菌样品稀释至一定浓度，然后取一定体积的稀释液接种于固体培养基上，根据所接种菌落的数量反推回待测样品中细菌的数量。
这种方法可以减小误差。
3.筛选法计数筛选法计数多用于水样等微生物数目非常庞大或者菌群极其复杂的情况。
它通过将待测样品滤过微孔膜，然后在膜上形成的菌落进行计数。
这种方法可以用于计数较小的细菌，而且可以直接观察到细菌的形态和颜色。
4.流式细胞仪计数流式细胞仪是一种高吞吐量的自动化细胞分析仪器，可以用于细菌计数。
该仪器通过将微生物样品通过紧密的物理管道，使用激光和荧光的相互作用原理，可以同时检测细胞的大小、颜色、形态和荧光等特征，并根据这些信息进行细胞计数。
流式细胞仪计数的优点是快速、高效、准确，适用于大规模细菌计数。
5.PCR法计数PCR法计数是一种基于多聚酶链式反应（PCR）的细菌计数方法。
通过PCR对细菌基因组中特定的DNA序列进行扩增，并使用荧光染料标记，然后通过荧光信号进行测定。
这种方法可以快速定量检测细菌数量，但由于PCR反应的特异性和产物的准确性，需要经过精确的实验设计和数据分析。
总结起来，细菌计数是一种重要的实验技术，可以通过目视计数、参考法计数、筛选法计数、流式细胞仪计数和PCR法计数等多种方法进行。
不同的方法适用于不同的场合和目的，可以根据具体需求选择合适的方法进行细菌计数。
细菌总数的计算方法
细菌总数的计算方法一、直接计数法直接计数法是通过对细菌进行可见光显微镜观察，并使用计数室将细菌数量统计出来。
这种方法可以对样品中的所有细菌进行计数，包括活细菌和死细菌。
1.视觉法：这种方法利用显微镜对细菌进行观察和计数。
首先，将样品涂布在载玻片上，然后在显微镜下使用适当的目镜和物镜来观察细菌，使用计数室将细菌数量统计出来。
2.过滤法：这种方法适用于样品中细菌数量很大的情况。
首先，将样品经过滤器过滤，然后将过滤器放在培养基上进行培养，最后对培养基上细菌进行计数。
3.流式细胞仪法：这种方法适用于样品中的细菌数量很小的情况。
流式细胞仪会将细菌进行分散并单个通过激光束，然后通过光散射、荧光标记等方法对细菌进行计数和鉴定。
二、间接计数法间接计数法是通过测量细菌的生长特性来估计细菌总数。
这种方法可以很快得到结果，但只能对活细菌进行计数。
1.湿涂法：这种方法基于细菌在固体培养基上形成的菌落数来估计细菌数量。
首先，将样品通过稀释后涂布在固体培养基上，培养一段时间后，观察并计算形成的菌落数。
2.光密度法：这种方法利用测量细菌培养液中的光密度来估计细菌数量。
细菌培养液的光密度与细菌浓度呈正相关关系，可以通过分光光度计等仪器来测定光密度。
3.ATP酶法：这种方法基于细菌细胞内的ATP含量与细菌数量呈正相关关系。
通过检测样品中的ATP含量，可以估计细菌数量。
细菌总数的计算方法并不仅限于上述的几种，科学家们还在不断发展和改进计数方法。
但无论哪种方法，准确性都是一个重要考量因素。
因此，在进行细菌计数时，需要选择适当的方法，并结合标准曲线、稀释方法等进行校正和验证，以保证结果的准确性。
细菌计数方法
细菌计数1、计数器测定法:即用血细胞计数器进行计数。
取一定体积的样品细胞悬液置于血细胞计数器的计数室内,用显微镜观察计数。
由于计数室的容积就是一定的(O、1mm3),因而根据计数器刻度内的细菌数,可计算样品中的含菌数。
本法简便易行,可立即得出结果。
本法不仅适于细菌计数,也适用于酵母菌及霉菌孢子计数。
2、电子计数器计数法:电子计数器的工作原理就是测定小孔中液体的电阻变化,小孔仅能通过一个细胞,当一个细胞通过这个小孔时,电阻明显增加,形成一个脉冲,自动记录在电子记录装置上。
该法测定结果较准确,但它只识别颗粒大小,而不能区分就是否为细菌。
因此,要求菌悬液中不含任何碎片。
3、活细胞计数法常用的有平板菌落计数法,就是根据每个活的细菌能长出一个菌落的原理设计的。
取一定容量的菌悬液,作一系列的倍比稀释,然后将定量的稀释液进行平板培养,根据培养出的菌落数,可算出培养物中的活菌数。
此法灵敏度高,就是一种检测污染活菌数的方法,也就是目前国际上许多国家所采用的方法。
使用该法应注意:①一般选取菌落数在30～300之间的平板进行计数,过多或过少均不准确;②为了防止菌落蔓延,影响计数,可在培养基中加入O.001％2,3,5一氯化三苯基四氮唑(TTC);③本法限用于形成菌落的微生物。
广泛应用于水、牛奶、食物、药品等各种材料的细菌检验,就是最常用的活菌计数法。
4、比浊法比浊法就是根据菌悬液的透光量间接地测定细菌的数量。
细菌悬浮液的浓度在一定范围内与透光度成反比,与光密度成正比,所以,可用光电比色计测定菌液,用光密度(OD值)表示样品菌液浓度。
此法简便快捷,但只能检测含有大量细菌的悬浮液,得出相对的细菌数目,对颜色太深的样品,不能用此法测定。
5、测定细胞重量法此法分为湿重法与干重法。
湿重法系单位体积培养物经离心后将湿菌体进行称重;干重法系单位体积培养物经离心后,以清水洗净放人干燥器加热烘干,使之失去水分然后称重。
此法适于菌体浓度较高的样品,就是测定丝状真菌生长量的一种常用方法。
统计活菌数目常用方法
统计活菌数目常用方法
统计活菌数目常用方法有：
1. 流式细胞术：通过将细菌样本稀释，并利用流式细胞仪测量细菌在流速下通过细胞孔的数目，以估计活菌数目。
2. 表面计数：将细菌样本均匀涂布在培养基上，并进行恰当的培养条件。
然后使用显微镜观察并计数活菌的数目。
3. 过筛法：通过过滤细菌样本，使较大的细胞被滤去，只保留较小的活菌，然后将过滤膜培养，并进行活菌的计数。
4. 冷冻储存法：将细菌样本冷冻保存，并在适当的时间间隔内解冻一部分样本，并进行适当的培养条件下计数活菌的数目。
5. 颜色指示剂法：使用特定的染色剂或化学试剂，可与活菌进行反应并产生特定颜色的变化，然后通过测量颜色变化的强度或浓度来估计活菌的数目。
注意：以上方法仅为常见且常用的细菌活菌数目统计方法，实际操作中可能还会有其他方法和技术的应用。
实验10-细菌计数
实验10 细菌计数返回目录一、显微镜直接计数法【原理】显微镜直接计数法是将小量待测样品的悬浮液置于一种特别的具有确定面积和容积的载玻片上(又称计菌板)，于显微镜下直接计数细菌的一种简便、快速、直观的方法。
该法适用于各种单细胞菌体的纯培养悬浮液，目前国内外常用的计菌板有：血细胞计数板、Peteroff-Hauser计菌板以及Hawksley计菌板等，血球计数板适用于菌体较大的酵母菌或霉菌孢子的计数，后两种计菌板适用于一般细菌的计数。
这几种计数板的原理和部件相同，只是细菌计数板较薄，盖玻片和载玻片之间的距离只有0.02mm，可以使用油镜观察。
而血球计数板较厚，不能使用油镜。
这里介绍血球计数板方法计数酵母菌数量。
血球计数板是一块特制的厚型载玻片，载玻片上有4条槽所构成的3个平台。
中间的平台较宽，其中间又被一短横槽分隔成两半，每个半边上面各有一个计数区，计数区的刻度有两种：一种是一个大方格分为16个中方格(四角的四个大方格)，每个中方格又分25个小方格；另一种是一个大方格分成25个中方格(中央的一个大方格)，而每个中方格又分成16个小方格，即计数区都由400个小方格组成(图1-3-12)。
图1-3-12 血细胞计数板构造计数区（一个大方格）边长为1mm，则计数区的面积为l mm2，每个小方格的面积为1/400mm2。
盖上盖玻片后，计数区的高度为0.1mm，所以计数区的体积为0.1mm3，每个小方格的体积为l/4000mm3。
使用血球计数板计数时，先要测定每个小方格中微生物的数量，再换算成每mL菌液(或每g样品)中微生物细胞的数量。
已知：1ml体积＝10mm×10mm×10mm＝1000mm3所以：1ml体积应含有小方格数为1000mm3／(1／4000mm3)＝4×106个小方格。
因此：每ml菌悬液中含有细胞数＝4×106×每个小格中细胞平均数×菌液稀释倍数。
细菌计数的方法
细菌计数的⽅法疑难问题：复习资料“对细菌进⾏计数只能采⽤涂布分离法，⽽不能⽤划线分离法”，这句话认为是错误的。
都知道划线分离法是不能⽤来计数的，因为只有划线的后期才有可能是单菌落，此话错在“细菌进⾏计数只能采⽤涂布分离法”，那么细菌的计数⽅法有哪些？测定微⽣物⽣长的⽅法很多，各种⽅法均有其优缺点，也不是在任何情况下都适⽤。
在微⽣物学⼯作中⼀般常⽤的是平⽫菌落计数法、计数器法和⽐浊法等。
1．计数板测定法（必修3第71）即⽤⾎细胞计数板进⾏计数。
取⼀定体积的样品细胞悬液置于⾎细胞计数板的计数室内，⽤显微镜观察计数。
由于计数室的容积是⼀定的（0.1mm 3），因⽽根据计数板刻度内的细菌数，可计算样品中的含菌数。
本法不仅适于细菌计数，也适⽤于酵母菌及霉菌孢⼦计数。
2．⽐浊法（必修3第71）⽐浊法是根据菌悬液的透光量间接地测定细菌的数量。
细菌悬浮液的浓度在⼀定范围内与透光度成反⽐，与光密度成正⽐，所以，可⽤光电⽐⾊计测定菌液，⽤光密度（OD值）表⽰样品菌液浓度。
此法简便快捷，但只能检测含有⼤量细菌的悬浮液，得出相对的细菌数⽬，对颜⾊太深的样品，不能⽤此法测定。
3．活细胞计数法（选修1—涂布分离法）常⽤的有平板菌落计数法，是根据每个活的细菌能长出⼀个菌落的原理设计的。
取⼀定容量的菌悬液，作⼀系列的倍⽐稀释，然后将定量的稀释液进⾏平板培养，根据培养出的菌落数，可算出培养物中的活菌数。
此法灵敏度⾼，是⼀种检测污染活菌数的⽅法，也是⽬前国际上许多国家所采⽤的⽅法。
使⽤该法应注意：①⼀般选取菌落数在30～300之间的平板进⾏计数，过多或过少均不准确；②为了防⽌菌落蔓延，影响计数，可在培养基中加⼊０.001%2，3，5⼀氯化三苯基四氮唑（TTC）；③本法限⽤于形成菌落的微⽣物。
⼴泛应⽤于⽔、⽜奶、⾷物、药品等各种材料的细菌检验，是最常⽤的活菌计数法。
4．电⼦计数器计数法电⼦计数器的⼯作原理是测定⼩孔中液体的电阻变化，⼩孔仅能通过⼀个细胞，当⼀个细胞通过这个⼩孔时，电阻明显增加，形成⼀个脉冲，⾃动记录在电⼦记录装置上。
细菌计数的方法
细菌计数-基本资料细菌计数 counting of bacteria指测计酵母、细菌等的细胞数。
有总菌计数和活菌计数两种计数法。
后者是测计试样中的活细菌数。
二者都是先把试样稀释成适于测计的浓度，再用种种方法进行细胞数的测计。
一般认为用细胞计数器测计更为精确。
有的方法是把细胞用血球容量计进行离心沉淀，从其刻度的容积进行换算；还有一种方法是比浊法。
在测计固氮细菌时，可用凯氏定氮法测定有机氮（或是蛋白态氮），然后换算成细菌数。
进行活菌计数时，先把样品稀释，然后将一定量稀释样品混入依菌性质制成的溶融状态的琼脂培养基中进行平面培养，再根据菌落数进行统计。
对已鉴别过的菌种或具有某种特定性质的细菌来说，活菌计数比较简单，但对土壤微生物区系量的分析就比较复杂了。
细菌计数-各种计数1、计数器测定法：即用血细胞计数器进行计数。
取一定体积的样品细胞悬液置于血细胞计数器的计数室内，用显微镜观察计数。
由于计数室的容积是一定的(O.1mm3)，因而根据计数器刻度内的细菌数，可计算样品中的含菌数。
本法简便易行，可立即得出结果。
本法不仅适于细菌计数，也适用于酵母菌及霉菌孢子计数。
2、电子计数器计数法:电子计数器的工作原理是测定小孔中液体的电阻变化，小孔仅能通过一个细胞，当一个细胞通过这个小孔时，电阻明显增加，形成一个脉冲，自动记录在电子记录装置上。
该法测定结果较准确，但它只识别颗粒大小，而不能区分是否为细菌。
因此，要求菌悬液中不含任何碎片。
3、活细胞计数法常用的有平板菌落计数法，是根据每个活的细菌能长出一个菌落的原理设计的。
取一定容量的菌悬液，作一系列的倍比稀释，然后将定量的稀释液进行平板培养，根据培养出的菌落数，可算出培养物中的活菌数。
此法灵敏度高，是一种检测污染活菌数的方法，也是目前国际上许多国家所采用的方法。
使用该法应注意：①一般选取菌落数在30～300之间的平板进行计数，过多或过少均不准确；②为了防止菌落蔓延，影响计数，可在培养基中加入O．001％2，3，5一氯化三苯基四氮唑(TTC)；③本法限用于形成菌落的微生物。
常用的微生物检验方法
常用的微生物检验方法
微生物检验是一种常用的检验方法，可以用于检测食品、药品、环境等领域中的微生物污染。
常用的微生物检验方法包括菌落计数法、涂片法、培养方法、PCR等。
1. 菌落计数法
菌落计数法是一种基于细菌在培养基上生长形成菌落的方法。
该方法可以用于检测食品、饮料、水等中的微生物数量。
菌落计数法的优点在于可以定量检测微生物数量，但缺点是需要时间较长，且对于某些菌种可能不适用。
2. 涂片法
涂片法是将样品在玻片上涂抹后在显微镜下观察细菌形态、数量、分布等特征的方法。
该方法常用于病原微生物的检测，如细菌、真菌、病毒等。
涂片法的优点是快速、简便，但可能存在假阳性和假阴性的问题。
3. 培养方法
培养方法是将样品放置在含有适宜营养成分的培养基上进行培养，观
察细菌在培养基上的生长情况。
该方法适用于各类微生物的检测，但需要时间较长。
同时，培养方法还可以用于微生物的分离、鉴定和纯化。
4. PCR
PCR是一种基于DNA扩增的方法，可以在短时间内检测微生物的存在。
该方法的优点在于高度敏感、快速、准确，但存在样品的预处理和设备的昂贵问题。
总之，不同的微生物检验方法各有优缺点，选用合适的方法可以提高检测的准确性和可靠性。
菌的计数方法总结
菌的计数方法总结引言菌的计数方法是微生物学中一项重要的技术，用于确定菌落的数量和浓度。
菌的计数可以帮助科学家了解菌群的变化、评估食品安全和制定防控措施。
本文将总结几种常用的菌的计数方法，包括直接计数法、间接计数法和分子生物学方法。
直接计数法直接计数法是一种直接测定细胞数的方法，可以通过显微镜观察细胞数，在细胞计数盘中简单且直观地对菌群进行计数。
直接计数法的常用技术包括：1. 线性计数法线性计数法是一种适用于稀释菌液的计数方法。
将菌液适当稀释后，用显微镜在细胞计数盘中计数，并根据稀释倍数计算原始菌液中的菌落数量。
线性计数法简单易行，适用于大量菌落和均匀分布的菌群计数。
2. 平板计数法平板计数法是一种用于较浓稠菌液的计数方法。
将菌液分别加入琼脂平板，使其均匀分布，培养一段时间后，在每个菌落上使用计数棒或显微镜进行计数。
根据菌落的分布情况和稀释倍数，可以计算出原始菌液中的菌落数量。
平板计数法适用于菌群相对浓集的情况。
间接计数法间接计数法是通过测定菌群其他特征间接推算出菌数的方法。
这些特征可以是生物化学特征、光学特性或流体力学特性。
常用的间接计数法包括：1. pH指示法pH指示法是一种利用菌群产生的酸碱度对菌数进行估计的方法。
菌群在培养基中生长代谢会产生酸或碱，进而改变培养基的酸碱度。
通过测定菌液的pH值，可以间接估计出菌数的多少。
pH指示法简单易行，但需要选取合适的指示剂和培养条件。
2. ATP测定法ATP测定法是一种利用生物体内三磷酸腺苷（ATP）含量来间接估计菌数的方法。
ATP是细胞内的能量储存物质，细菌数量与ATP含量成正比。
通过测定菌液中ATP的含量，可以推算出菌数的多少。
ATP测定法精确度高，但需要使用特殊的试剂和仪器。
分子生物学方法分子生物学方法是一种基于菌群DNA或RNA的技术，用于准确测定菌数和分类鉴定。
常用的分子生物学方法包括：1. PCR法PCR法（聚合酶链式反应）是一种通过扩增菌群DNA来检测和计数菌数的方法。
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1、计数器测定法：即用血细胞计数器进行计数。
取一定体积的样品细胞悬液置于血细胞计数器的计数室内，用显微镜观察计数。
由于计数室的容积是一定的(O.1mm3)，因而根据计数器刻度内的细菌数，可计算样品中的含菌数。
本法简便易行，可立即得出结果。
本法不仅适于细菌计数，也适用于酵母菌及霉菌孢子计数。
2、电子计数器计数法:电子计数器的工作原理是测定小孔中液体的电阻变化，小孔仅能通过一个细胞，当一个细胞通过这个小孔时，电阻明显增加，形成一个脉冲，自动记录在电子记录装置上。
该法测定结果较准确，但它只识别颗粒大小，而不能区分是否为细菌。
因此，要求菌悬液中不含任何碎片。
3、活细胞计数法常用的有平板菌落计数法，是根据每个活的细菌能长出一个菌落的原理设计的。
取一定容量的菌悬液，作一系列的倍比稀释，然后将定量的稀释液进行平板培养，根据培养出的菌落数，可算出培养物中的活菌数。
此法灵敏度高，是一种检测污染活菌数的方法，也是目前国际上许多国家所采用的方法。
使用该法应注意：①一般选取菌落数在30～300之间的平板进行计数，过多或过少均不准确；②为了防止菌落蔓延，影响计数，可在培养基中加入O．001％2，3，5一氯化三苯基四氮唑(TTC)；③本法限用于形成菌落的微生物。
广泛应用于水、牛奶、食物、药品等各种材料的细菌检验，是最常用的活菌计数法。
4、比浊法比浊法是根据菌悬液的透光量间接地测定细菌的数量。
细菌悬浮液的浓度在一定范围内与透光度成反比，与光密度成正比，所以，可用光电比色计测定菌液，用光密度(OD值)表示样品菌液浓度。
此法简便快捷，但只能检测含有大量细菌的悬浮液，得出相对的细菌数目，对颜色太深的样品，不能用此法测定。
5、测定细胞重量法此法分为湿重法和干重法。
湿重法系单位体积培养物经离心后将湿菌体进行称重；干重法系单位体积培养物经离心后，以清水洗净放人干燥器加热烘干，使之失去水分然后称重。
此法适于菌体浓度较高的样品，是测定丝状真菌生长量的一种常用方法。
6、测定细胞总氮量或总碳量氮、碳是细胞的主要成分，含量较稳定，测定氮、碳的含量可以推知细胞的质量。
此法适于细胞浓度较高的样品。
7、颜色改变单位法（colour change unit,简称CCU）这种方法通常用于很小，用一般的比浊法无法计数的微生物，比如支原体等，因为支原体的液体培养物是完全透明的，呈现为清亮透明红色，因此无法用比浊法来计数，由于支原体固体培养很困难，用cfu法也不容易计数，因此需要用特殊的计数方法，即CCU法。
它是以微生物在培养基中的代谢活力为指标，来计数微生物的相对含量的，下面以解脲脲原体为例，简单介绍其操作：（1）.取12只无菌试管，每一管装1.8ml解脲脲原体培养基。
（2）.在第一管加入0.2ml待测解脲脲原体菌液，充分混匀，从中吸取0.2ml加入第二管，依次类推，10倍梯度稀释，一直到最末一管（3）.于37度培养，以培养基颜色改变的最末一管作为待测菌液的CCU，也就是支原体的最大代谢活力，比如第六管出现颜色改变，他的相对浓度就是10的6次方CCU/ml.一般来说，比浊法和菌落计数法就可以满足绝大多数细菌的计数，但是对支原体这样比较特殊的微生物，用CCU法比较合适。
测定微生物生长的方法很多，各种方法均有其优缺点，也不是在任何情况下都适用。
在微生物学工作中一般常用的是平皿菌落计数法、计数器法和比浊法。
至于哪种方法比较适合你，得根据你的具体条件而定。
采用滤膜法进行微生物检测是一种国际公认的微生物标准检验方法，其得到AOAC、美国、欧洲和日本等国家的药典、FDA和EPA等组织的承认，广泛应用于环境监测、食品及饮料工业、化妆品、制药工业品质控制和电子工业等领域。
而在我国每一新版药典中无菌检查法（微生物限度检查）在都有不同程度的改进和提高，特别是2000年版药典较95版药典有了较大提高，大幅度增加了样品的取样量，提高了阳性检出率。
2005年版药典更加完善，既增加了样品的取样量，又延长了培养时间，降低了漏检率，提高了安全性，和各国药典接近，与国际接轨，提高了我国的药典标准。
2005版《中国药典》规定只要供试品性状允许，应采用薄膜过滤法。
赛多利斯公司的滤膜法微生物检测产品成功地应用于滤膜法已有20多年的历史，实用而且方便实用，它简化了微生物检测程序。
滤膜法微生物检测：将适当孔径的滤膜放入滤器，过滤样品，由于滤膜的作用而将微生物保留在膜的表面上。
样品中微生物生长抑制剂可在过滤后用无菌水冲洗滤器而除去。
然后，将滤膜放在培养基上培养，营养物和代谢物通过滤膜的微孔进行交换，在滤膜表面上培养出的菌落可以计数，并和样品量相关。
滤膜法的优点：- 与直接法比较，可以检测大量的样品- 浓缩效应使微生物检测的准确度提高- 带有菌落的滤膜，可作为检测的永久记录存档- 可见的菌落和样品量直接对应，得出定量结果细菌计数counting of bacteria指测计酵母、细菌等的细胞数。
有总菌计数和活菌计数两种计数法。
后者是测计试样中的活细菌数。
二者都是先把试样稀释成适于测计的浓度，再用种种方法进行细胞数的测计。
一般认为用细胞计数器测计更为精确。
有的方法是把细胞用血球容量计进行离心沉淀，从其刻度的容积进行换算；还有一种方法是比浊法。
在测计固氮细菌时，可用凯氏定氮法测定有机氮（或是蛋白态氮），然后换算成细菌数。
进行活菌计数时，先把样品稀释，然后将一定量稀释样品混入依菌性质制成的溶融状态的琼脂培养基中进行平面培养，再根据菌落数进行统计。
对已鉴别过的菌种或具有某种特定性质的细菌来说，活菌计数比较简单，但对土壤微生物区系量的分析就比较复杂了。
在微生物学研究中,经常需要测定培养溶液中细菌数量,比色法和比浊法是常用的方法,细菌培养液中含有活的和死的细菌、未利用完的培养基以及细菌生长过程中的代谢产物等,因此,培养液的吸光度值并不完全是细菌(活细菌、死细菌)数量的真实体现。
作者比较了2 种方法(细菌培养原液、培养液离心后沉淀+ 无菌水) 测定培养液中细菌数的差异和对细菌生长曲线测定结果的影响,以期为液体培养条件下细菌数的快速测定提供参考。
1 材料与方法1. 1 试验用菌株由患烂爪病的中华鳖血液中分离所得,并经检验为气单胞菌属嗜水产气单胞菌种。
1. 2 细菌培养①选用不同pH 值的营养肉汤培养基。
在预先标号的试管中分别加入不同pH 值(pH 值设定为4. 5 、5. 0 、5. 5 、6. 0 、6. 5 、7. 0 、7. 5 、8. 0 、8. 5 、9. 0 、9. 5 、10. 0 、10. 5 、11. 0 共13 组) 的培养基5mL ,121. 5 ℃灭菌30 min ,然后在每支试管中加入经24 h 复壮培养的均匀菌悬液100μL ,30 ℃、140 r/ min 振荡培养24 h ,待测; ②连续培养,定期采样。
使用500 mL 锥形瓶,普通肉汤培养基,培养方法同①,培养过程中间隔1 h 连续采样。
1. 3 细菌浓度与吸光值的相关性计算活细菌数测定采用稀释平板法,细菌总数测定采用血球计数板在显微镜下直接计数。
对细菌悬液吸光值的测定采取3 种方法进行: ①以原培养基作对照,在420 nm 处直接测定细菌悬液吸光值(记ODa) ; ②将培养后的细菌悬液离心(3 000r/ min、30 min) ,取沉淀加入与上清液等量的无菌生理盐水,混匀后,以无菌盐水作对照,测定溶液吸光值(记ODb) ; ③以原培养基作对照,测定离心后上清液的吸光值(记ODc) 。
参照Lambert2Beer 定律logI0/ I = k·C(其中logI0/ I 为吸光度、C为细菌浓度) ,计算活菌数和细菌总数与对应溶液吸光值的关系,并求出常数k 。
2 结果与分析2. 1 不同pH值条件下细菌悬液的吸光值测定不同pH 条件下的细菌培养悬液吸光度与离心沉淀+ 无菌盐水的吸光度值是两条不同的曲线,离心上清液的吸光值也不是1 条与横坐标重叠或平行的直线。
说明在培养基中除细菌影响吸光值大小外,不同培养条件下的培养基质对吸光值的影响也不尽相同。
2. 2 连续培养过程中细菌悬液吸光值的变化细菌在连续培养21 h 过程中,间隔1 h 连续测得细菌培养原液、培养液离心上清液及培养液沉淀+ 等量无菌水在420 nm 处的吸光值。
2 种菌悬液(培养液,离心沉淀+ 无菌盐水) 的吸光值变化趋势一致,但在数量上存在一定差异。
在细菌培养过程中不断有培养液组份消耗和细菌代谢产物增加,同时死亡细菌的消融产物也会对离心上清液的吸光值产生影响。
因此,显示出上清液随时间延长吸光值不断增加。
试验中也发现,上清液颜色随培养时间延长变化明显,由棕黄色逐步变为浅黄色。
2. 3 细菌浓度与吸光值的关系连续培养细菌5 h 后,在420 nm 处测定2 种菌悬液(培养原液,培养液离心后经无菌盐水定容) 的吸光值分别为0. 519 和0. 368 。
经1/ 10 梯度稀释后采用平板法计数,培养液中活细菌数为5. 082 ×1023个/ mL ,根据Lambert2Beer 定律,2 种方法测得的活细菌数与吸光度的关系分别为logI0/ I = 1. 021 ×10 - 24 ·C , logI0/ I = 7. 241 ×10 - 25·C。
显微计数培养液中细菌总数为5. 285×1024 ,是其中活菌数的10. 4 倍,证明在细菌培养液中存在大量已经死亡的细菌。
3 讨论在比浊法测定细菌浓度时,有的方法采用未接种的液体培养基作为空白对照[1 ,3 ] ,但是,在细菌的生长过程中培养基质与原培养基并不完全一致。
本实验结果证实:不同细菌浓度培养物经离心沉淀后,上清液的吸光度并不完全相等,即使使用原培养基作为空白对照,也不能完全消除不同培养时期或不同培养条件下培养基对吸光度的影响。
死细菌对液体环境中细菌浓度的测定也有一定影响,试验对原培养液进行稀释培养和显微计数的结果差异明显,说明培养液离心沉淀物中存在大量死的细菌。
活的和死的细菌之间的比例与培养条件、细菌接种量及培养时间等密切相关,如何消除这些影响,作者认为在研究细菌生长特性时应区分活细菌和细菌总数与吸光度的关系。
希望我的回答可以为你提供一些帮助~O(∩_∩)O~我个人认为，在实验并不需要浓度有多么精确的前提下，可以利用分光光度法测定活菌浓度。