细菌数量的测定方法

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细菌总数测定操作规程

细菌总数检测操作规程1 原理试样经过处理，稀释至适当浓度，在一定条件（如使用特定的培养基，在温度30℃±1℃培养72h±3h等）下培养后，所得1g（mL）试样中所含细菌总数。

2 试剂与仪器2.1 所用器具三角烧瓶、玻璃珠、具塞试管、培养皿、1000μL枪头、5mL枪头、称量勺、接种环、接种针、移液器2.2 仪器：分析天平、恒温培养箱、微型振荡器、超净工作台、高压灭菌锅2.3 所用试剂和培养基营养琼脂取营养琼脂32.0g，加入蒸馏水1L，搅拌加热至完全溶解，分装三角瓶，121℃高压灭菌15min，备用。

3、操作步骤3.1配制0.85%生理盐水。

称取氯化钠8.5g溶于1000mL蒸馏水中。

3.2三角烧瓶加入生理盐水90mL和玻璃珠，试管中加入生理盐水9mL，121℃灭菌30min。

（三角烧瓶个数与样品数量一致，试管数量与稀释次数相关）3.3将1000μL枪头、培养皿、5mL枪头、称量勺，121℃灭菌30min。

（注意计算数量）3.4将枪头、培养皿置于烘箱103℃烘干。

（1-3步需提前一天完成）3.5对称量房间进行紫外灭菌30分钟，关灯静置60 min。

以无菌操作取样品10g于含90mL 生理盐水三角烧瓶中，于振荡器上振荡30min，制成1:10的均匀稀释液。

3.6用1000μL枪头吸取1:10稀释液1mL，沿管壁慢慢注入含有灭菌生理盐水9mL的试管中，于振荡器上混合均匀，制成1:100的均匀稀释液。

3.7另去一只1mL灭菌吸管，按照上述操作方法，作10倍递增稀释，如此每递增稀释一次，即更换一支灭菌吸头。

3.8选择2个~3个适宜稀释度，分别在作10倍递增稀释的同时，即以吸取该稀释的吸管移1mL稀释液于灭菌平皿内，每个稀释度作两个培养皿。

3.9稀释液移入培养皿后，及时将凉至46℃±1℃的培养基（可放置46℃±1℃水浴锅内保温）注入培养皿约15mL，小心转动培养皿使试样与培养基充分混匀（从稀释试样到倾注培.养时间不能超过30min）。

食品中细菌总数的测定

若所有稀释度平均菌落数均大于300，则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。
若所有稀释度的平均菌落数均小于30，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。
若所有稀释度均无菌落生长，则以小于1乘以最低稀释倍数报告之。
若所有稀释度的平均菌落数均不在30～300之间，其中一部分大于300或小于30时，则以最接近30或300的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。 ③菌落数的报告
之。检查，以防遗漏。在记下各平板的菌落数后，求出同稀释
若大于2则报告其中较小的数字。
度的各平板平均菌落总数。平皿内如有链状菌落生长时（菌落之间无明显界线），若仅有一条链，可视为一个菌落数；
在记下各平板的菌落数后，求出同稀释度的各平板平均菌落总数。
（2）菌落计数的报告若所有稀释度的平均菌落数均不在30～300之间，其中一部分大于300或小于30时，则以最接近30或300的平均菌落数乘以稀释倍数报告
若所有稀释度的平均菌落数均小于30，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。
状菌落生长时（菌落之间无明显界线），若仅有一条链，（3）另取1ml的灭菌吸管，按上项操作顺序作10倍递增稀释液，如此每递增稀释一次，即换用1支1ml灭菌吸管。
若有两上稀释度，其生长的菌落数均在30～300之间，则视两者之比如何来决定。
（4）根据食品卫生标准要求或对检样污染情况的估计，选择2~3个适宜稀释度，分别在作10倍递增稀释的同时，即以吸取该稀释度的吸管移1ml稀释液于灭菌平皿内，每个稀释度作两个平皿。
（5）稀释液移入平皿后，应及时将凉至460C营养琼脂培养基[可放置在（（46±1）0C）水浴锅内保温]注入平皿 15ml~20mL，并转动平皿使混合均匀，同时将营养琼脂培养基倾入加有1ml稀释液（不含样品）的灭菌平皿内作空白对照。

介绍几种新的水中细菌总数检测方法

介绍几种新的水中细菌总数检测方法
1.流式细胞术：利用流式细胞仪将水样中的细菌进行分析和计数。

这种方法可以快速、高效地获取大量细菌数据，并且还可以进行不同种类细菌的分类和分析。

2. 基于荧光的检测方法：这种方法利用细菌表面的荧光素来进
行检测。

通过添加特定的荧光素探针，可以在短时间内快速、准确地测量水中细菌总数。

3. 基于DNA技术的检测方法：这种方法通过提取水样中的DNA，利用聚合酶链式反应(PCR)等技术来进行检测。

这种方法可以检测到
非常微小的细菌数量，而且还可以进行不同种类细菌的分子生物学鉴定。

4. 浸润法：这种方法是将一定量的水样浸润在适宜生长条件下
的培养基上，然后通过培养基上产生的菌落来计算水中细菌总数。

这种方法具有简单、易操作等特点，但是需要较长时间的培养过程。

5. QPCR技术：这种方法是一种快速、灵敏的检测细菌数量的方法，它利用荧光探针来放大和检测DNA序列。

这种方法可以在数小时内完成检测，而且可以检测不同种类的细菌。

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细菌总数测定实验报告

细菌总数测定实验报告细菌总数测定实验报告引言：细菌是一类微小的生物体，广泛存在于自然界的各个角落。

细菌的数量对于环境卫生和食品安全至关重要。

本实验旨在通过测定细菌总数的方法，了解样品中细菌的数量，并探讨不同环境条件对细菌总数的影响。

实验方法：1. 样品采集：我们选择了不同环境中的样品，包括自来水、空气、餐具表面和人体皮肤表面。

通过无菌棉签或无菌采样器，分别采集样品，并放入无菌试管中。

2. 稀释液的制备：我们准备了一种稀释液，以免细菌过多导致结果不准确。

稀释液的配方为：1克氯化钠和1克蛋白胨溶解在100毫升蒸馏水中。

3. 稀释样品：将采集到的样品取出一定量，加入稀释液中，进行逐级稀释。

我们选择了1:10、1:100和1:1000三个不同的稀释倍数。

4. 培养：将稀释后的样品分别接种在琼脂平板上，利用无菌棉签均匀涂抹样品。

然后将琼脂平板倒置放置于恒温培养箱中，温度设定为37摄氏度。

培养时间为24小时。

5. 细菌总数计算：在培养箱中，我们观察到琼脂平板上的菌落。

根据菌落的数量和稀释倍数，可以计算出原始样品中的细菌总数。

实验结果：我们进行了多次实验，得到了不同样品中的细菌总数。

结果显示，自来水中的细菌总数最低，空气中次之，餐具表面和人体皮肤表面的细菌总数较多。

此外，我们还发现，稀释倍数越高，细菌总数越低。

讨论：细菌总数的测定对于环境卫生和食品安全具有重要意义。

通过本实验，我们了解到不同环境中细菌总数的差异，为进一步研究提供了基础数据。

自来水中的细菌总数较低，这可能是由于自来水经过了严格的处理和消毒。

空气中的细菌总数稍高，这是因为空气中存在着大量的微生物，例如细菌和真菌。

餐具表面和人体皮肤表面的细菌总数较多，这与人们日常接触物体和环境有关。

稀释倍数的选择对于测定细菌总数至关重要。

过高的稀释倍数会导致菌落过少，难以准确计数；而过低的稀释倍数则会导致菌落过多，影响结果的准确性。

因此，在实际应用中，我们需要根据实际情况选择适当的稀释倍数。

生活饮用水中细菌总数的测定法平皿计数法-V1

生活饮用水中细菌总数的测定法平皿计数法-
V1
生活饮用水中细菌总数的测定法平皿计数法
测定生活饮用水中细菌总数的一种方法是平皿计数法，本文将对这种方法进行详细介绍。

一、实验原理
平皿计数法是利用细菌在液体培养基表面生长成菌落的原理，通过计算菌落个数来确定水中的细菌总数。

二、实验步骤
1. 准备培养基，将培养基倒入无菌平皿中；
2. 取样，将水样取自自来水管道或自然水源中；
3. 稀释，将取样液进行10倍、100倍、1000倍稀释，分别将每份稀释液分别均匀分散在培养基表面，避免液滴残留；
4. 写标签，标注菌落计数的相关信息，例如样品名称、稀释倍数、菌落计数的日期等；
5. 培养，将培养皿放置在恒温培养箱中，设定温度为37℃，并在3-5天内进行观察和计数。

三、实验注意事项
1. 取样应避免超过24小时，以免菌群失去代表性；
2. 取用的平皿应事先灭菌处理，以避免外来细菌的污染；
3. 实验室应有专门的抽风设备、消毒液等清洁工具，以维持实验室的高度卫生。

通过以上三个步骤，我们就可以精确地测定出生活饮用水中细菌总数。

同时，这种方法也可以应用在其他领域，例如食品安全、环境监测等
方面。

但需要注意的是，实验过程中必须遵守实验室操作规程，以保
证实验结果的可靠性。

细菌总数的测定方法

细菌总数的测定方法
测定细菌总数的方法通常包括以下几种：
1. 显微镜计数法：将待测样品制成适当浓度的悬浮液，然后使用显微镜观察计数。

这种方法常用于观察对显微镜可见的大型细菌。

2. 平板计数法：将待测样品制成适当稀释度的悬浮液，然后在固体培养基上均匀涂布。

经过适当时间后，可数出单个菌落的数量，并根据稀释倍数计算出细菌总数。

3. 涂布计数法：将待测样品制成适当稀释度的悬浮液，通过草屑涂布或涂布棒均匀涂布在固体培养基上。

经过适当时间后，可数出涂布上细菌的总数。

4. 易液化琼脂凝胶计数法：将待测样品制成适当稀释度的悬浮液，与液化琼脂凝胶混合，然后倒入琼脂凝胶平板上固化。

经过适当时间后，可数出液化琼脂凝胶上细菌的总数。

5. 流式细胞仪计数法：将待测样品进行适当稀释后，通过流式细胞仪对样品中的细菌进行单个细胞的计数和分析。

这种方法快速、准确，适用于大批量的细菌计数。

需要注意的是，不同的方法适用于不同类型的细菌和样品，选择合适的方法对准
确测定细菌总数十分重要。

此外，测定细菌总数时需要注意消毒、防止交叉感染等实验操作安全。

细菌总数的测定法

细菌总数的测定法一、细菌数测定的基本概念药品细菌数测定是微生物的定量检查，是用来判断药品被细菌污染程度和卫生质量评价的重要指标，也是检测药品质量的重要指标之一。

细菌计数是指在一定条件下（如需氧情况、营养条件、pH 位、培养温度和时间等）每1g、lml、l0cm2供试品液经培养后所生长的菌落数。

所谓一定条件是按我国药典规定，在需氧条件下，30～35℃，一般培养48h,在营养琼脂培养基平板上生长的细菌菌落数。

细菌数的测定方法有多种：平板法、薄膜过滤法、涂抹法。

药品细菌数测定是活菌计数，最常用的平板法是以平板菌落计数为依据，即每个菌落代表个菌细胞，但有的菌落也可能是多个菌细胞形成，如双球菌、四联球菌、八叠球菌、葡萄球菌等，很可能是多个菌细胞在一起。

故准确地说，细菌数测定值实际上是菌落形成单位数( CFU)。

平板法菌落计数法，是受一定条件的限制：如供试液是否均质，供试液中的细菌是否充分分散；培养基的质量、培养温度及培养时间的影响；有繁殖能力的菌细胞才能形成菌落，死菌及某此受损伤的细菌或营养要求苛刻的细菌在规定的培养基上不能生长，因而不被计数。

在试验操作中应考虑到这此问题。

二、设施、设备、仪器及器皿1、设施细菌数测定全过程应严格遵守无菌操作，在环境洁净净度l0000级和局部洁净度100 级单向流空气区域内进行，以防止再污染。

2、设备、仪器恒温培养箱（30～35℃）、微波炉、匀浆仪（4000～10000r / min ）、康氏振荡器、恒温水浴、电热干燥箱（250～300℃）、电冰箱、空调、高压蒸汽灭菌器（使用时要进行灭菌效果验证并应定期请有关部门检定）菌落计数器、显微镜（1500X）、电子天平（感量0.1g）、pH 值系列比色计、全封闭可拆卸或开放式的薄膜过滤器。

3、器皿锥形瓶（250～300ml ）、培养皿（∮9cm）、量筒（100ml）、试管（18×18mm）、刻度吸管（l ml , 10ml）、载玻片、玻璃或搪瓷、不锈钢消毒缸（带盖）。

细菌总数的测定

细菌总数的测定（平皿计数法）1.概述本法适用于生活用水、循环冷却水及其它水中细菌总数的测定。

也适用于反渗透脱盐水中细菌总数的测定。

敞开式循环冷却水系统细菌总数的要求：≤1×105个/mL。

2.方法介绍本法采用25号浮游生物网收集循环冷却水中的黏泥，所得的黏泥用石英砂充分研磨使细胞分散，再利用平皿计数技术在（29±1）℃培养72h来测定黏泥中的细菌总数。

3.试剂和材料3.1 牛肉膏，生化试剂。

3.2 蛋白胨，生化试剂。

3.3 NaCl.3.4琼脂，生物试剂。

3.5 NaOH溶液，40g/L。

3.6 HCl，1＋11溶液。

3.7 乙醇溶液，75％。

3.8 牛皮纸。

3.9 医用脱脂棉。

3.10 医用脱脂纱布。

3.11 石英砂，210～150μm 。

4.仪器和设备4.1 25号浮游生物网。

4.2 量筒，25mL和500mL。

4.3 转子流量计。

4.4 瓷研钵。

4.5 无菌箱（室）或超净工作台。

4.6 蒸汽压力灭菌器。

4.7 生化培养箱。

4.8 电热干燥箱，温度可控制在[（60～280）±2]℃.4.9 刻度吸管，1mL和5mL。

4.10 磨口三角瓶，100mL。

4.11容量瓶，1000mL。

4.12 培养皿，d90mm 。

4.13 三角瓶，500mL。

4.14 搪瓷量杯，1000mL。

5.试验前的准备5.1 培养基的制备称取下列试剂：牛肉膏 3.0g，蛋白胨10.0g，NaCl5.0g,琼脂15.0g。

将上述试剂加水约950mL，在电炉上加热溶解后，趁热用四层医用脱脂纱布过滤于搪瓷量杯中，并用热水补充至1000mL。

用NaOH 溶液或HCl溶液调节pH值至7.2±2，并分装在500mL三角瓶中，每瓶分装量不超过其总容量的2/3。

塞上棉塞，用牛皮纸把瓶口包好，用蒸汽压力灭菌器在（121±1）℃下灭菌15min,此为灭过菌的培养基。

5.2 无菌稀释水的制备5.2.1 生理盐水的配制。

细菌计数方法

细菌计数1.计数器测定法：即用血细胞计数器进行计数。

取一定体积的样品细胞悬液置于血细胞计数器的计数室内，用显微镜观察计数。

由于计数室的容积是一定的，因而根据计数器刻度内的细菌数，可计算样品中的含菌数。

本法简便易行，可立即得出结果。

本法不仅适于细菌计数，也适用于酵母菌及霉菌孢子计数。

2、电子计数器计数法:电子计数器的工作原理是测定小孔中液体的电阻变化，小孔仅能通过一个细胞，当一个细胞通过这个小孔时，电阻明显增加，形成一个脉冲，自动记录在电子记录装置上。

该法测定结果较准确，但它只识别颗粒大小，而不能区分是否为细菌。

因此，要求菌悬液中不含任何碎片。

3、活细胞计数法常用的有平板菌落计数法，是根据每个活的细菌能长出一个菌落的原理设计的。

取一定容量的菌悬液，作一系列的倍比稀释，然后将定量的稀释液进行平板培养，根据培养出的菌落数，可算出培养物中的活菌数。

此法灵敏度高，是一种检测污染活菌数的方法，也是目前国际上许多国家所采用的方法。

使用该法应注意：①一般选取菌落数在30～300之间的平板进行计数，过多或过少均不准确；②为了防止菌落蔓延，影响计数，可在培养基中加入O．001％2，3，5一氯化三苯基四氮唑(TTC)；③本法限用于形成菌落的微生物。

广泛应用于水、牛奶、食物、药品等各种材料的细菌检验，是最常用的活菌计数法。

4、比浊法比浊法是根据菌悬液的透光量间接地测定细菌的数量。

细菌悬浮液的浓度在一定范围内与透光度成反比，与光密度成正比，所以，可用光电比色计测定菌液，用光密度(OD值)表示样品菌液浓度。

此法简便快捷，但只能检测含有大量细菌的悬浮液，得出相对的细菌数目，对颜色太深的样品，不能用此法测定。

5、测定细胞重量法此法分为湿重法和干重法。

湿重法系单位体积培养物经离心后将湿菌体进行称重；干重法系单位体积培养物经离心后，以清水洗净放人干燥器加热烘干，使之失去水分然后称重。

此法适于菌体浓度较高的样品，是测定丝状真菌生长量的一种常用方法。

细菌计数方法

细菌计数1、计数器测定法:即用血细胞计数器进行计数。

取一定体积的样品细胞悬液置于血细胞计数器的计数室内,用显微镜观察计数。

由于计数室的容积就是一定的(O、1mm3),因而根据计数器刻度内的细菌数,可计算样品中的含菌数。

本法简便易行,可立即得出结果。

本法不仅适于细菌计数,也适用于酵母菌及霉菌孢子计数。

2、电子计数器计数法:电子计数器的工作原理就是测定小孔中液体的电阻变化,小孔仅能通过一个细胞,当一个细胞通过这个小孔时,电阻明显增加,形成一个脉冲,自动记录在电子记录装置上。

该法测定结果较准确,但它只识别颗粒大小,而不能区分就是否为细菌。

因此,要求菌悬液中不含任何碎片。

3、活细胞计数法常用的有平板菌落计数法,就是根据每个活的细菌能长出一个菌落的原理设计的。

取一定容量的菌悬液,作一系列的倍比稀释,然后将定量的稀释液进行平板培养,根据培养出的菌落数,可算出培养物中的活菌数。

此法灵敏度高,就是一种检测污染活菌数的方法,也就是目前国际上许多国家所采用的方法。

使用该法应注意:①一般选取菌落数在30～300之间的平板进行计数,过多或过少均不准确;②为了防止菌落蔓延,影响计数,可在培养基中加入O.001％2,3,5一氯化三苯基四氮唑(TTC);③本法限用于形成菌落的微生物。

广泛应用于水、牛奶、食物、药品等各种材料的细菌检验,就是最常用的活菌计数法。

4、比浊法比浊法就是根据菌悬液的透光量间接地测定细菌的数量。

细菌悬浮液的浓度在一定范围内与透光度成反比,与光密度成正比,所以,可用光电比色计测定菌液,用光密度(OD值)表示样品菌液浓度。

此法简便快捷,但只能检测含有大量细菌的悬浮液,得出相对的细菌数目,对颜色太深的样品,不能用此法测定。

5、测定细胞重量法此法分为湿重法与干重法。

湿重法系单位体积培养物经离心后将湿菌体进行称重;干重法系单位体积培养物经离心后,以清水洗净放人干燥器加热烘干,使之失去水分然后称重。

此法适于菌体浓度较高的样品,就是测定丝状真菌生长量的一种常用方法。

土壤中细菌总数的测定

土壤中细菌总数的测定摘要在生态学、农业科学、环境科学和微生物学等领域中，土壤细菌数量的测定是非常重要的研究内容。

本文介绍了两种主要的土壤细菌数量测定方法：菌落计数法和直接计数法，讨论了各自的优缺点以及操作步骤。

菌落计数法菌落计数法是一种通过在培养基上培养细菌，再进行菌落计数的方式来测定土壤中细菌总数的方法。

其操作步骤如下：1.取一定量的土壤样本，将其加入到含有特定培养基的培养皿中，如TSA、PCA或NA培养基等；2.将培养皿置于适宜的温度下(通常为30℃)，培养一定时间(一般为24~72小时)；3.统计培养皿上出现的菌落数；4.根据不同培养基的菌落特点来进行分类鉴定。

如直径、颜色、质地、形态等；5.计算细菌数量。

此方法的优点是可以准确地测定土壤中特定细菌种群的数目，并且操作简便。

但缺点是需要培养时间长、部分细菌难于培养、还有会产生空心菌落、部分共生细菌会在菌落中互相竞争等。

直接计数法直接计数法是通过使用显微镜对土壤样本中的细菌数量进行计数的方式来测定土壤中细菌总数的方法。

其操作步骤如下：1.取一定量的土壤样本，将其在缓冲盐水中适当稀释；2.取一部分稀释后的样本，在显微镜下观察，并开始计数；3.根据计数结果，计算细菌在原土壤样品中的数量。

此方法的优点是测定速度快，一般只需要数分钟就可以得出结果，并且操作简单，适合于快速测量。

但缺点是对于不同形态的细菌很难区分，不能确定某些细菌是否存活，容易发生误差。

无论使用什么方法，测定土壤中细菌的数量都是非常重要的。

在实验中，根据具体研究需要选择合适的方法，保证实验可重复性。

以上，就是土壤中细菌总数的测定方法的简单介绍。

室内空气中细菌总数的测定方法

室内空气中细菌总数的测定方法G.1 原理采用撞击式空气微生物采样器，使空气通过狭缝或小孔产生高速气流，将悬浮在空气中的微生物采集到营养琼脂平板上，经36℃±1℃、48 h培养后得到细菌菌落数的测定方法。

G.2 营养琼脂培养基G.2.1 成分蛋白胨10 g，牛肉浸膏3 g，氯化钠5 g，琼脂20 g，蒸馏水1000 mL。

G.2.2 制法将蛋白胨、肉膏、氯化钠溶于蒸馏水中，校正pH为7.2～7.6，加入琼脂，121℃，20 min高压灭菌。

待冷却到45℃时，制成平板备用。

G.3 仪器和设备本方法中使用的仪器和设备如下：——六级筛孔撞击式微生物采样器；——高压蒸汽灭菌器；——恒温培养箱；——制备培养基用一般设备：量筒，锥形瓶，pH计或精密pH试纸等。

G.4 样品采集和保存G.4.1 点位布设见A.2。

G.4.2 以无菌操作，将营养琼脂平板逐级装入六级筛孔撞击式微生物采样器，以28.3L/min流量采集 10 min。

采样器使用按照说明书要求进行。

G.4.3 将采集后的营养琼脂平板储存于4℃，并尽快返回实验室进行培养。

G.5 分析步骤将采集后的营养琼脂平板倒置于36℃±1℃培养48 h，菌落计数。

G.6 结果计算与表示G.6.1 结果计算室内空气中细菌总数浓度按式（G.1）计算。

················································································(G.1)c =ΣN×1000v×t式中：c——细菌总数浓度，单位为菌落形成单位每立方米（CFU/m3）；ΣN——六级平板菌落合计数，单位为菌落形成单位（CFU）；v——采样流量，单位为升每分钟（L/min）；t——采样时间，单位为分钟（min）。

统计活菌数目的方法

统计活菌数目的方法统计活菌数目是微生物学实验中的重要步骤，它可以帮助我们评估样品中微生物的数量，从而为后续的实验和研究提供重要数据支持。

在实验室中，有多种方法可以用来统计活菌数目，下面将介绍几种常用的方法。

首先，最常见的方法是平板计数法。

平板计数法是通过在琼脂平板上培养微生物，并根据菌落的数量来统计活菌数目。

具体操作步骤如下，首先，将样品经过适当稀释后均匀涂布在琼脂平板上，然后将琼脂平板在适当的温度下培养一段时间，最后根据菌落的数量进行统计。

这种方法简单易行，而且可以直接得到微生物的数量，因此在实验室中被广泛应用。

其次，滤膜计数法也是一种常用的方法。

滤膜计数法是通过将样品过滤到膜上，然后将膜放置在适当的培养基上培养，最后根据膜上的菌落数量来统计活菌数目。

这种方法适用于一些含有大量杂质的样品，因为过滤可以去除杂质，从而更准确地统计微生物的数量。

另外，涂布法也是一种常用的统计活菌数目的方法。

涂布法是将样品均匀涂布在琼脂平板上，然后进行培养，最后根据菌落的数量来统计微生物的数量。

这种方法操作简单，适用于一些微生物数量较少的样品。

除了上述方法外，还有一些新兴的方法，比如荧光显微镜法、流式细胞术等，这些方法在统计活菌数目方面也有着广泛的应用前景。

总的来说，统计活菌数目的方法有很多种，每种方法都有其适用的场景和特点。

在实际操作中，我们应根据实验的需要和样品的特点来选择合适的方法，从而获得准确的统计结果。

希望本文介绍的方法能够为大家在微生物学实验中的活菌数目统计提供一些帮助。

实验10-细菌计数

实验10 细菌计数返回目录一、显微镜直接计数法【原理】显微镜直接计数法是将小量待测样品的悬浮液置于一种特别的具有确定面积和容积的载玻片上(又称计菌板)，于显微镜下直接计数细菌的一种简便、快速、直观的方法。

该法适用于各种单细胞菌体的纯培养悬浮液，目前国内外常用的计菌板有：血细胞计数板、Peteroff-Hauser计菌板以及Hawksley计菌板等，血球计数板适用于菌体较大的酵母菌或霉菌孢子的计数，后两种计菌板适用于一般细菌的计数。

这几种计数板的原理和部件相同，只是细菌计数板较薄，盖玻片和载玻片之间的距离只有0.02mm，可以使用油镜观察。

而血球计数板较厚，不能使用油镜。

这里介绍血球计数板方法计数酵母菌数量。

血球计数板是一块特制的厚型载玻片，载玻片上有4条槽所构成的3个平台。

中间的平台较宽，其中间又被一短横槽分隔成两半，每个半边上面各有一个计数区，计数区的刻度有两种：一种是一个大方格分为16个中方格(四角的四个大方格)，每个中方格又分25个小方格；另一种是一个大方格分成25个中方格(中央的一个大方格)，而每个中方格又分成16个小方格，即计数区都由400个小方格组成(图1-3-12)。

图1-3-12 血细胞计数板构造计数区（一个大方格）边长为1mm，则计数区的面积为l mm2，每个小方格的面积为1/400mm2。

盖上盖玻片后，计数区的高度为0.1mm，所以计数区的体积为0.1mm3，每个小方格的体积为l/4000mm3。

使用血球计数板计数时，先要测定每个小方格中微生物的数量，再换算成每mL菌液(或每g样品)中微生物细胞的数量。

已知：1ml体积＝10mm×10mm×10mm＝1000mm3所以：1ml体积应含有小方格数为1000mm3／(1／4000mm3)＝4×106个小方格。

因此：每ml菌悬液中含有细胞数＝4×106×每个小格中细胞平均数×菌液稀释倍数。

公共场所空气微生物检验方法细菌总数测定

公共场所空气微生物检验方法细菌总数测定随着人们对公共场所环境质量要求的提高，对公共场所空气中微生物的检测也越来越重视。

其中，细菌总数是衡量空气中微生物含量的一项主要指标。

下面将详细介绍公共场所空气微生物检验方法中的细菌总数测定步骤。

1.样品采集首先，确定采样位置。

根据公共场所的具体情况，如是否有空调、通风设备等信息，选择具有代表性的采样点位。

一般来说，可选择通风良好、人员流动频繁的位置进行采样。

然后，采用采样器具进行空气采样。

空气采样器具常用的有空气生物分析仪、洒雾器等。

根据采样器具的具体操作手册，按照规定的操作步骤进行采样，同时注意采样时间和采样量的控制。

2.样品处理采样完成后，将采样器具中的采样物转移到适当的载体（如培养基、液体培养基）中。

根据具体情况，选择合适的载体。

对于空气样品，一般选择液体培养基，如生理盐水。

将采样管中的液体转移到含有生理盐水的试管中。

3.稀释操作将采样物进行稀释，以便于接种和计数。

稀释液的选择可依据之前的实验经验，一般选用营养琼脂或平板培养基。

将采样物中的适量细菌悬浮液取出，用移液管分别转移到不同稀释管中，依次进行系列二次稀释。

每次稀释后，需充分摇匀。

根据之前的实验经验，每一次稀释可选用10倍、100倍、1000倍等稀释倍数。

4.接种和培养将稀释液分别接种到含有固体培养基的平板上，均匀涂布。

然后将接种后的平板培养基放置于恒温培养箱中，选择适宜的培养温度和时间。

一般来说，菌落计数应在培养48小时后进行。

5.计数和结果分析计数时，将培养出的菌落进行清点，并将数量记录下来。

根据菌落的大小、颜色和形态等特征，可初步判断不同菌种的存在情况。

最后，将不同菌种的菌落数量进行统计和分析，并将细菌总数计算出来。

需要注意的是，在细菌总数测定过程中，应严格控制实验条件，如温度、湿度等，以确保结果的准确性。

另外，细菌总数的测定结果应与相关标准进行比较，以评估空气中微生物的含量是否符合要求。

总结：公共场所空气微生物检验方法中的细菌总数测定步骤包括样品采集、样品处理、稀释操作、接种和培养、计数和结果分析等。

微生物的计数方法

1.血细胞计数法将稀释的菌液样品滴在血细胞计数板上，在显微镜下计算4~5个中格的细菌数，并求出每个小格所含细菌的平均数，再以此为依据，估算总菌数。

①此法的缺点是不能区分死菌和活菌。

②对压在小方格界线上的细菌，应当取平均值计数。

③此法可用于测定培养液中酵母菌种群数量的变化2.稀释涂布平板法原理：每个活细菌在适宜的培养基和良好的生长条件下可以通过生长形成菌落。

培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。

①这一方法常用来统计样品中活菌的数目②统计的菌落数往往比活菌的实际数目低，原因是当两个活多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。

因此统计结果一般用菌落数而不是用活菌数来表示。

③土壤、水、牛奶、食品和其他材料中所含细菌、酵母、芽孢与孢子等的数量均可用此法测定。

但不适于测定样品中丝状体微生物，例如放线菌或丝状真菌或丝状蓝细菌等的营养体等。

④此法若不培养成菌落，可通过将一定量的菌液均匀地涂布在玻片上的一定面积上，经固定染色后在显微镜下计数，这样又称涂片计数法。

染色可用台盼蓝，台盼蓝能使死细胞染成蓝色，可分别计数死细胞和活细胞。

3.滤膜法滤膜法是当样品中菌数很低时，可将一定体积的湖水、海水或饮用水灯样品通过膜过滤器。

然后将滤膜干燥、染色，并经处理使膜透明，再在显微镜下计算膜上（或一定面积上）的细菌数。

此法也可以通过培养观察形成的菌落数来推算样品中的菌数。

例如测定饮用水中大肠杆菌的数目：将已知体积的水过滤后，将滤膜放在伊红美蓝培养基上培养。

在该培养基上大肠杆菌的菌落呈现黑色，可根据培养基上黑色菌落的数目，计算出水样中大肠杆菌的数目。

此法也是统计样品中活菌的数目。

4.比浊法原理是在一定范围内，菌是悬液中细胞浓度与混浊度成正比，即与光密度成正比，菌越多，光密度越大。

因此可借助与分光光度计，在一定波长下，测定菌悬液的光密度，以光密度表示菌量。

实验测量时一定要控制在菌浓度与光密度成正比的线性范围内，否则不准确。

细菌个数的测定

对返排液杀菌效果的测试方法实验原理：推测返排液主要的细菌为硫酸盐还原菌、铁细菌和腐生菌。

通过加入不同杀菌剂，测量加入前后细菌含量，得出不同杀菌剂的杀菌率，优选效果最好的杀菌剂。

实验仪器：1)硫酸盐还原菌（SRB）测试瓶；2)铁细菌（IB）测试瓶；3)腐生菌（TGB）测试瓶；4)注射器：1ml；5)恒温培养箱；6)电热消毒器。

实验步骤：1)将测试瓶排成两组，并编号；这是二次重复法，三次重复法方法类似，不过要把测试瓶分为三组。

2)用120℃消毒20min的无菌注射器取1.0ml水样注入第一组1号瓶内，充分震荡；3)用另一只无菌注射器从第一组1号瓶中取1.0ml水样注入第一组2号瓶；4)再更换无菌注射器从第一组2号瓶取1.0ml水样注入第一组3号瓶；5)以此类推一只稀释到最后一瓶为止。

根据细菌含量决定稀释瓶数，一般稀释到7号瓶；6)将杀菌剂加入到所测试的水样，用无菌注射器去1.0ml杀菌后的水样注入到第二组1号瓶内；7)用另外一只无菌注射器从第二组1号瓶去1.0ml水样注入第二组2号瓶；8)以此类推。

根据细菌含量决定稀释瓶数，一般稀释到7号瓶；9)将上述测试瓶放入放入恒温培养箱中培养，温度控制在37℃，7d后读数；10)用下列公式计算杀菌率：×100%Y=B1−B2B1Y——杀菌剂的杀菌率，%；B1——加杀菌剂前水样中细菌含量，个/ml;B2——加杀菌剂后水样中细菌含量，个/ml。

备注：一、注意事项1)SRB测试瓶变黑或者有黑色沉淀，表示有硫酸盐还原菌；TGB测试瓶由红变为黄或浑浊，表示有腐生菌；IB测试瓶出现棕红色沉淀，表示有铁细菌。

2)杀菌剂的加量为50mg/L;3)在室温下向水样注入杀菌剂，杀菌时间为4h；4)腐生菌的培养时间是5d~7d；铁细菌的培养时间是7d~14d，硫酸盐还原菌的培养时间是14d~21d。

5)测试瓶大概为3元/瓶。

二、读数方法：1.生长指标的确定原则：1)全部呈阳性反应的最后一列平行样应为生长指标的第一位数。

细菌数量的测定方法

细菌数量的测定方法1.直接计数法直接计数法是一种最直接的方法，用于测定细菌个体的数量。

最简单的直接计数方法是利用计数室和显微镜来观察细菌样本进行计数。

这种方法需要非常小心和准确的技术操作，可以根据实际需要选择显微镜的不同倍数来测定不同浓度的细菌样本。

然而，这种方法在样本浓度较低时可能会有误差，而且也无法区分活菌和死菌。

2.增殖法增殖法是基于细菌在适宜生长条件下指数增殖的特性。

一种常用的增殖法是在培养基中培养细菌，在一定时间后观察和记录菌落的数量。

这种方法可以得到一个相对准确的菌落计数，但需要一定的培养时间。

同时，增殖法也无法区分细菌在不同生长阶段的数量。

3.毛细管浊度法毛细管浊度法也是一种常见的细菌数量测定方法。

此方法利用细菌悬浮液的光学特性来测定细菌的数量。

首先，将细菌悬浮液经过一定稀释后，通过光密度测定仪或色度计测定悬浊液的浓度。

然后，根据测定结果和稀释倍数计算出细菌的数量。

这种方法操作简单快捷，适用于大量样本的数量测定。

然而，毛细管浊度法也无法区分活菌和死菌。

4.膜过滤法膜过滤法是一种通过将细菌悬浮液过滤到预先称重的膜上，然后称量膜上的细菌质量来测定细菌数量的方法。

这种方法适用于高浓度的细菌悬浮液，可以通过称量膜上的质量来得到相对准确的细菌数量。

此外，膜过滤法还可以用于分离不同种类的细菌，并进行进一步的分析。

5.光学计数法光学计数法是利用光学仪器来测量细菌数量的方法，如流式细胞仪和显微镜计数器。

这种方法通过细菌在流速中的单个通过来测量其数量，可以实现对不同细菌类型的分类计数。

流式细胞仪还可以对细菌进行其他物理和化学性质的测定，如大小、形状和表面分子的表达。

总之，选择合适的方法来测定细菌数量取决于样本的特性、需要的准确度和实验条件。

综上所述的几种方法可以在不同情况下提供有效的细菌数量测定手段，为细菌学研究提供重要的数据支持。