人母乳中分泌型免疫球蛋白A的抗体特异性分析
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fed on the ir mo thersc m ilk, prov ide exper imenta l proof fo r prevention of infectious diseases in newbo rns and infants, and in-
v estig ate the specificity o f sIgA antibody in w om en m ilk. M ethod The spec ific sIgA ag ainst RV, Cox V, Echo V, Aden V, RSV, H. py lor i, C J, EPEC and SalO in 81 pa irs o f co lostrum and m ature m ilk w ere de tected by EL ISA. The specific sIgA antibod ies against EPEC in 9 co lostrum s were iden tified by W ester-b lo t. Resu lt T he specific sIgA antibodies aga inst the 9 pathog en ic m icroorganism s m entioned above w ere identified from a ll of 81 co lostrum s. T heir po sitive rates we re in turn
=关键词 > 母乳; sIgA; 病原微生物; 新生儿; 婴儿; 抗感染
=中图分类号 >R 392
=文献标识来自百度文库 >A
A nalysis of an tibody specificity of sIgA in hum an m ilk
CH EN Pu1, 3, X I E Jian-yu2, YANG Zh-i bang1, L IU Ju- lian2, CHEN F eng-x ian2
( 1. D epartmen t of Pathob iology, C ollege of B asic M ed icine, Chongq ing University of M edical Sciences, Chongq ing 400016,
China; 2. A naly sis D epartm ent, M aternal and Ch ild H ealth H o sp ital of Chongqing, Chongqing 400013, China; 3. A naly sis D e-
人类乳汁中主要含有 3种抗病原微生物感染的 物质, 即分泌型抗体, 脂肪酸、乳铁蛋白等多功能成分
=收稿日期 >2008-10-09 =基金项目 >重庆市卫生局医学科研基金资助项目 ( 2004-2-091) =作者简介 >陈瀑 ( 1967-) 女, 副主任检验 师, 硕士研 究生, 从事 抗感染
免疫方 面的 研究, Em ai:l a68590776@ onl ine. cq. cn; 谢建 渝, 通讯作者, 主任检验师, Em a i:l xjy1958@ 163. com; 杨致 邦, 通讯作者, 教 授, 博士 生导师, Em ai;l D ryangfm365@ s-i na. com.
that in m a ture m ilk (P < 0. 05, P < 0. 01). 3 kinds of spec ific sIgA ag ainst EPEC were identified from 9 co lostrum s by W ester-blot. Con clusion The spec ific sIgA antibod ies against var ious v iruses and bacter ia w ere found in hum an m ilk and their pos itive rates we re less than 30% . The positive ra tes o f sIgA aga inst RV, A denV and R SV in colostrum w ere sign if-i cantly h igher than that in m ature m ilk. It is m ean ing ful to childrencs hea lthcare to explore how to elevate the leve l of the
< 0. 05, P < 0. 01)。W ester-b lo t鉴定 9份 初乳中含有 3种对 肠致病性大肠埃希 菌的特异性 sIgA。结论 在母 乳中
含有抗多种病毒和细菌的特异性 sIgA, 其阳性率低于 30% 。初乳 中特异 性 sIgA 水平 高于成 熟乳。如何 提高乳 汁
中的特异性 sIgA 水平, 增强新生儿及婴儿的抗感染力, 是儿童保健值得探讨的问题。
spec ific sIgA in hum an m ilk and enhance the res istance o f the new bo rns and infants aga inst the infection. =K ey w ords> W om en m ilk; sIgA; P athogen; N ewbo rns; In fants; A nt-i infection
中仅检出 抗轮状病毒、腺病毒、呼吸道合胞病毒、空肠弯曲菌、肠致病性大肠埃希菌和沙门菌 O 的 sIgA, 其阳性率 分
别为 19. 8% 、7. 4% 、6. 2% 、2. 5% 、2. 5% 和 3. 7% 。未 检出抗柯 萨奇 病毒、埃可 病毒 和幽门 螺杆 菌的 特异性 sIgA。
初乳中抗 轮状病毒 sIgA 阳性率高于成熟乳 (P < 0. 05), 抗腺 病毒和 呼吸道 合胞病毒 sIgA 的阳性 率高于 成熟乳 (P
明人乳汁中的 sIgA 可针对以微生物为主的 20余种 环境抗原起反应, 包括轮状病毒、大肠埃希菌、霍乱弧 菌和沙门菌等肠 道病原 [ 2] , 而国内此 方面的工作报
23 6
Chinese Journa l of M icroecology, M ar12009, Vo l121 N o13
道甚少。本研究收集产妇乳汁, 检测其针对新生儿和 婴儿肠道及呼吸道感染常见的多种病原微生物的特 异性 sIgA, 以了解母体所哺乳的新生儿和婴儿对病原 微生物的免疫力, 从而针对性地采取相应措施, 积极 预防新生儿和婴儿肠道及呼吸道感染。 1 对象与方法 1. 1 材料 1. 1. 1 乳汁 于 2005年至 2006年随机采集重庆市 妇幼保健院和重庆医科大学附属第一医院妇产科产 妇分娩后 1 d~ 1月内乳汁共 162份, 以分娩后 7 d内 的乳汁判为初乳, 7 d后的乳汁判为成熟乳。采集的 乳汁中初乳 81份, 成熟乳 81份, 均为自身配对资料。 产妇妊娠期为 37~ 41周, 均为初产妇。年龄 22 ~ 38 岁。分娩前无感染、妊娠高血压综合征、严重贫血、胎 儿宫内发育迟缓及妊娠合并症等疾病。采集乳汁时, 先将乳头局部清洁后, 再将乳汁直接挤入消毒灭菌试 管中, 每份 7~ 8 m 。l 然后以 10 000 r /m in、4 e 低温 离心 1 h, 弃上层脂质和低层沉淀物, 吸取中层乳清, - 20 e 保存备用。同时随机采集 10份产妇静脉血, 每份 2 m ,l 分离血清以作阴性对照。 1. 1. 2 菌 ( 毒 ) 种和细 胞株 轮状 病毒 ( ro tav irus, RV ) SA 11株, 肠致病大肠埃希菌 ( enteropathogen ic E. coli, EPEC) , 猴肾传代细胞 MA 104, 均源于重庆市儿 童医院。 1. 1. 3 抗原 柯萨奇病毒 B 组 1 ~ 6 型混合抗 原 ( coxsack iev irus, C oxVB )、埃 可 病 毒 ( ECKO v irus, EchoV ) 1 ~ 9 型 混合 抗 原、腺 病毒 ( adenov irus, AdenV ) 1 ~ 7 型混合抗原、呼吸道合胞病毒 ( respiratory syncyt ia l v irus, RSV )纯化膜蛋白、幽门螺杆菌 (H. pylori )纯化蛋白、空肠弯曲菌 ( Campy lobacter jejuni, CJ) 脂多糖抗原购自深圳赛尔生物技术公司和赢润生物 公司; 沙 门菌 O ( Sa lO ) 抗 原 购自 成 都 生物 制 品 研 究所。 1. 1. 4 其他 96 孔聚 苯 乙稀 板, 牛 血 清白 蛋 白 ( BSA )购自武汉博士德生物公司; 鼠抗人 SC 单克隆 抗体 ( SCM cAb) 购自美国 ADL 公司, 由上海科华生物 技术公司标记辣根过氧化物酶 ( HRP) ; M EM 培养基, LB培养基, 小牛血清等均购自恒利安生物科技公司。 1. 2 方法 1. 2. 1 轮状病毒抗原的制备 参照 V ILLEGA S等 [ 3] 的方法, 从液氮中取出冻存传代的 MA104细胞株, 立 即投人 37~ 40 e 水浴中摇动, 迅速解冻, 2000 r/m in 离心 10 m in弃上清, 用 MEM 培养液轻洗细胞, 沉淀 后加入含 10% 小牛血清的 MEM 培养液, 37 e 、5% CO2 培 养, 待 细 胞 长 成 单 层后 备 用。将 轮 状 病 毒 SA 11液与 30 Lg /m l胰蛋白酶按 1B1混合, 37 e 孵育 1 h。先将生长成单层的 MA104细胞用不含小 牛血
中国微生态学杂志 2009年 3月第 21卷第 3期
2 35
文章编号: 1005-376X ( 2009) 03-0235-04
=论 著 >
人母乳中分泌型免疫球蛋白 A的抗体特异性分析
陈瀑 1, 3, 谢建渝 2, 杨致邦 1, 刘菊莲 2, 陈凤娴 2 ( 1. 重庆 医科大 学 基础 医学院 病原生 物学教 研室, 重庆 400016; 2. 重 庆市 妇幼保 健院 检 验科, 重 庆 400013; 3. 重庆医科大学附属第一医院 检验科, 重庆 400022)
和宿主抵抗因子, 其中分泌型免疫球蛋白 A ( secreto ry imm unog lobulin A, sIgA ) 在保护新生儿和婴儿抵抗肠 道和呼吸 道 病原 微 生物 感 染 中起 着 重要 作 用 [1]。
sIgA在初乳中含量最高, 它包含有针对多种肠道和呼 吸道病原的特异性抗体。近年来国外学者的研究表
p ar tm ent, the F irst Affiliated H osp ital, Chongq ing University of M edical Sciences, Chongq ing 400022, China ) =Ab stract> O bjective T o get the m essage o f the resistance to pa thogen ic m icroorg an ism s in new bo rns and in fants
34. 5% , 23. 5% , 18. 5% , 6. 2% , 3. 7% , 8. 6% , 9. 8% , 11. 1% and 14. 8% respectively. On ly the specific sIgA antibod ies of RV, A den, R SV, C J, EPEC and Sa lO w ere identified in m ature m ilk and the ir po sitive rates w ere 19. 8% , 7. 4% , 6. 2% , 2. 5% , 2. 5% and 3. 7% respectively. T he positive rates o f sIgA aga inst RV in co lo strum w as sign ificantly h ighe r than tha t in m ature m ilk ( P < 0. 05). T he positive rates o f sIgA aga inst A denV and RSV in co lostrum w ere sign ificantly h ighe r than
病毒、幽门螺杆菌、空肠弯曲菌、肠致病性大肠埃希 菌和沙门菌 / O0 9 种病原 微生物 的特异性 sIgA。W ester-blot鉴
定 9份初乳中抗肠 致病性大肠埃希菌的特异性 sIgA。结果 81份初乳中 均检出抗上 述 9种病原 微生物 的特异 性
sIgA, 其阳性率按秩序分别为 34. 5% 、6. 2% 、3. 7% 、18. 5% 、23. 5% 、8. 6% 、9. 8% 、11. 1% 和 14. 8% 。81 份成熟 乳
=摘要 > 目的 探讨人母乳中分泌型免 疫球蛋白 A ( sIgA )的抗体特异性, 了解母体所 哺育的新 生儿及婴儿 对
病原微生物的抵抗力, 为预防新生儿及婴儿感染性 疾病提 供实验 依据。方法 制备 轮状病 毒、肠 致病性 大肠埃 希
菌。采用间接 EL ISA 法检测 81份配对初乳和成熟乳中针对轮状病毒、柯萨奇病毒、埃 可病毒、腺病毒、呼吸道合 胞
v estig ate the specificity o f sIgA antibody in w om en m ilk. M ethod The spec ific sIgA ag ainst RV, Cox V, Echo V, Aden V, RSV, H. py lor i, C J, EPEC and SalO in 81 pa irs o f co lostrum and m ature m ilk w ere de tected by EL ISA. The specific sIgA antibod ies against EPEC in 9 co lostrum s were iden tified by W ester-b lo t. Resu lt T he specific sIgA antibodies aga inst the 9 pathog en ic m icroorganism s m entioned above w ere identified from a ll of 81 co lostrum s. T heir po sitive rates we re in turn
=关键词 > 母乳; sIgA; 病原微生物; 新生儿; 婴儿; 抗感染
=中图分类号 >R 392
=文献标识来自百度文库 >A
A nalysis of an tibody specificity of sIgA in hum an m ilk
CH EN Pu1, 3, X I E Jian-yu2, YANG Zh-i bang1, L IU Ju- lian2, CHEN F eng-x ian2
( 1. D epartmen t of Pathob iology, C ollege of B asic M ed icine, Chongq ing University of M edical Sciences, Chongq ing 400016,
China; 2. A naly sis D epartm ent, M aternal and Ch ild H ealth H o sp ital of Chongqing, Chongqing 400013, China; 3. A naly sis D e-
人类乳汁中主要含有 3种抗病原微生物感染的 物质, 即分泌型抗体, 脂肪酸、乳铁蛋白等多功能成分
=收稿日期 >2008-10-09 =基金项目 >重庆市卫生局医学科研基金资助项目 ( 2004-2-091) =作者简介 >陈瀑 ( 1967-) 女, 副主任检验 师, 硕士研 究生, 从事 抗感染
免疫方 面的 研究, Em ai:l a68590776@ onl ine. cq. cn; 谢建 渝, 通讯作者, 主任检验师, Em a i:l xjy1958@ 163. com; 杨致 邦, 通讯作者, 教 授, 博士 生导师, Em ai;l D ryangfm365@ s-i na. com.
that in m a ture m ilk (P < 0. 05, P < 0. 01). 3 kinds of spec ific sIgA ag ainst EPEC were identified from 9 co lostrum s by W ester-blot. Con clusion The spec ific sIgA antibod ies against var ious v iruses and bacter ia w ere found in hum an m ilk and their pos itive rates we re less than 30% . The positive ra tes o f sIgA aga inst RV, A denV and R SV in colostrum w ere sign if-i cantly h igher than that in m ature m ilk. It is m ean ing ful to childrencs hea lthcare to explore how to elevate the leve l of the
< 0. 05, P < 0. 01)。W ester-b lo t鉴定 9份 初乳中含有 3种对 肠致病性大肠埃希 菌的特异性 sIgA。结论 在母 乳中
含有抗多种病毒和细菌的特异性 sIgA, 其阳性率低于 30% 。初乳 中特异 性 sIgA 水平 高于成 熟乳。如何 提高乳 汁
中的特异性 sIgA 水平, 增强新生儿及婴儿的抗感染力, 是儿童保健值得探讨的问题。
spec ific sIgA in hum an m ilk and enhance the res istance o f the new bo rns and infants aga inst the infection. =K ey w ords> W om en m ilk; sIgA; P athogen; N ewbo rns; In fants; A nt-i infection
中仅检出 抗轮状病毒、腺病毒、呼吸道合胞病毒、空肠弯曲菌、肠致病性大肠埃希菌和沙门菌 O 的 sIgA, 其阳性率 分
别为 19. 8% 、7. 4% 、6. 2% 、2. 5% 、2. 5% 和 3. 7% 。未 检出抗柯 萨奇 病毒、埃可 病毒 和幽门 螺杆 菌的 特异性 sIgA。
初乳中抗 轮状病毒 sIgA 阳性率高于成熟乳 (P < 0. 05), 抗腺 病毒和 呼吸道 合胞病毒 sIgA 的阳性 率高于 成熟乳 (P
明人乳汁中的 sIgA 可针对以微生物为主的 20余种 环境抗原起反应, 包括轮状病毒、大肠埃希菌、霍乱弧 菌和沙门菌等肠 道病原 [ 2] , 而国内此 方面的工作报
23 6
Chinese Journa l of M icroecology, M ar12009, Vo l121 N o13
道甚少。本研究收集产妇乳汁, 检测其针对新生儿和 婴儿肠道及呼吸道感染常见的多种病原微生物的特 异性 sIgA, 以了解母体所哺乳的新生儿和婴儿对病原 微生物的免疫力, 从而针对性地采取相应措施, 积极 预防新生儿和婴儿肠道及呼吸道感染。 1 对象与方法 1. 1 材料 1. 1. 1 乳汁 于 2005年至 2006年随机采集重庆市 妇幼保健院和重庆医科大学附属第一医院妇产科产 妇分娩后 1 d~ 1月内乳汁共 162份, 以分娩后 7 d内 的乳汁判为初乳, 7 d后的乳汁判为成熟乳。采集的 乳汁中初乳 81份, 成熟乳 81份, 均为自身配对资料。 产妇妊娠期为 37~ 41周, 均为初产妇。年龄 22 ~ 38 岁。分娩前无感染、妊娠高血压综合征、严重贫血、胎 儿宫内发育迟缓及妊娠合并症等疾病。采集乳汁时, 先将乳头局部清洁后, 再将乳汁直接挤入消毒灭菌试 管中, 每份 7~ 8 m 。l 然后以 10 000 r /m in、4 e 低温 离心 1 h, 弃上层脂质和低层沉淀物, 吸取中层乳清, - 20 e 保存备用。同时随机采集 10份产妇静脉血, 每份 2 m ,l 分离血清以作阴性对照。 1. 1. 2 菌 ( 毒 ) 种和细 胞株 轮状 病毒 ( ro tav irus, RV ) SA 11株, 肠致病大肠埃希菌 ( enteropathogen ic E. coli, EPEC) , 猴肾传代细胞 MA 104, 均源于重庆市儿 童医院。 1. 1. 3 抗原 柯萨奇病毒 B 组 1 ~ 6 型混合抗 原 ( coxsack iev irus, C oxVB )、埃 可 病 毒 ( ECKO v irus, EchoV ) 1 ~ 9 型 混合 抗 原、腺 病毒 ( adenov irus, AdenV ) 1 ~ 7 型混合抗原、呼吸道合胞病毒 ( respiratory syncyt ia l v irus, RSV )纯化膜蛋白、幽门螺杆菌 (H. pylori )纯化蛋白、空肠弯曲菌 ( Campy lobacter jejuni, CJ) 脂多糖抗原购自深圳赛尔生物技术公司和赢润生物 公司; 沙 门菌 O ( Sa lO ) 抗 原 购自 成 都 生物 制 品 研 究所。 1. 1. 4 其他 96 孔聚 苯 乙稀 板, 牛 血 清白 蛋 白 ( BSA )购自武汉博士德生物公司; 鼠抗人 SC 单克隆 抗体 ( SCM cAb) 购自美国 ADL 公司, 由上海科华生物 技术公司标记辣根过氧化物酶 ( HRP) ; M EM 培养基, LB培养基, 小牛血清等均购自恒利安生物科技公司。 1. 2 方法 1. 2. 1 轮状病毒抗原的制备 参照 V ILLEGA S等 [ 3] 的方法, 从液氮中取出冻存传代的 MA104细胞株, 立 即投人 37~ 40 e 水浴中摇动, 迅速解冻, 2000 r/m in 离心 10 m in弃上清, 用 MEM 培养液轻洗细胞, 沉淀 后加入含 10% 小牛血清的 MEM 培养液, 37 e 、5% CO2 培 养, 待 细 胞 长 成 单 层后 备 用。将 轮 状 病 毒 SA 11液与 30 Lg /m l胰蛋白酶按 1B1混合, 37 e 孵育 1 h。先将生长成单层的 MA104细胞用不含小 牛血
中国微生态学杂志 2009年 3月第 21卷第 3期
2 35
文章编号: 1005-376X ( 2009) 03-0235-04
=论 著 >
人母乳中分泌型免疫球蛋白 A的抗体特异性分析
陈瀑 1, 3, 谢建渝 2, 杨致邦 1, 刘菊莲 2, 陈凤娴 2 ( 1. 重庆 医科大 学 基础 医学院 病原生 物学教 研室, 重庆 400016; 2. 重 庆市 妇幼保 健院 检 验科, 重 庆 400013; 3. 重庆医科大学附属第一医院 检验科, 重庆 400022)
和宿主抵抗因子, 其中分泌型免疫球蛋白 A ( secreto ry imm unog lobulin A, sIgA ) 在保护新生儿和婴儿抵抗肠 道和呼吸 道 病原 微 生物 感 染 中起 着 重要 作 用 [1]。
sIgA在初乳中含量最高, 它包含有针对多种肠道和呼 吸道病原的特异性抗体。近年来国外学者的研究表
p ar tm ent, the F irst Affiliated H osp ital, Chongq ing University of M edical Sciences, Chongq ing 400022, China ) =Ab stract> O bjective T o get the m essage o f the resistance to pa thogen ic m icroorg an ism s in new bo rns and in fants
34. 5% , 23. 5% , 18. 5% , 6. 2% , 3. 7% , 8. 6% , 9. 8% , 11. 1% and 14. 8% respectively. On ly the specific sIgA antibod ies of RV, A den, R SV, C J, EPEC and Sa lO w ere identified in m ature m ilk and the ir po sitive rates w ere 19. 8% , 7. 4% , 6. 2% , 2. 5% , 2. 5% and 3. 7% respectively. T he positive rates o f sIgA aga inst RV in co lo strum w as sign ificantly h ighe r than tha t in m ature m ilk ( P < 0. 05). T he positive rates o f sIgA aga inst A denV and RSV in co lostrum w ere sign ificantly h ighe r than
病毒、幽门螺杆菌、空肠弯曲菌、肠致病性大肠埃希 菌和沙门菌 / O0 9 种病原 微生物 的特异性 sIgA。W ester-blot鉴
定 9份初乳中抗肠 致病性大肠埃希菌的特异性 sIgA。结果 81份初乳中 均检出抗上 述 9种病原 微生物 的特异 性
sIgA, 其阳性率按秩序分别为 34. 5% 、6. 2% 、3. 7% 、18. 5% 、23. 5% 、8. 6% 、9. 8% 、11. 1% 和 14. 8% 。81 份成熟 乳
=摘要 > 目的 探讨人母乳中分泌型免 疫球蛋白 A ( sIgA )的抗体特异性, 了解母体所 哺育的新 生儿及婴儿 对
病原微生物的抵抗力, 为预防新生儿及婴儿感染性 疾病提 供实验 依据。方法 制备 轮状病 毒、肠 致病性 大肠埃 希
菌。采用间接 EL ISA 法检测 81份配对初乳和成熟乳中针对轮状病毒、柯萨奇病毒、埃 可病毒、腺病毒、呼吸道合 胞