改良外周血DNA提取方法的效果分析_陈碧艳
改良碘化钾法提取冻存外周血基因组DNA的方法探讨
重蒸馏水 裂解 红细胞 ； 增 加裂解 白细胞膜的 ５ ｍｏ ｌ ／ Ｌ ＫＩ 溶液 的用量 （ 为７ ０ Ｌ）； 低温 （ ４ ℃ ）离心 。 然
后用 改 良碘化钾法从 ８ ２份 ． ８ ０ ℃冻存外周 血标本 中提 取基因组 ＤＮ Ａ。 同时使用 碘化钾法提取 其中的 ３ ０
份血 标本 ， 比对 两种方法 提取 Ｄ ＮＡ 的浓度 和纯度 ， 并 进行 ＣＹ Ｐ ２ Ｃ１ ９相关 基因 Ｐ Ｃ Ｒ扩增 。 结果 方法所提取 的 Ｄ ＮＡ浓度和纯度分别是碘化钾法为 １ ２ ８ ． ２±３ ４ ． ９ 两种 ｇ ／ ｍＥ和 Ａ ２ 。 ／ Ａ： 。 。１ ． ７ ４±０ ． ０ ８ ， 改 良法 为
Ｋｕ ｎ ｍｉ ｎ ｇ ， Ｙｕ ｎ ｎ ａ ｎ ， Ｋｕ ｎ ｍｉ ｎ ｇ ６ ５ ０ ０ １ １ ， Ｃｈ ｉ ｎ ａ ）
［ ＡＢ Ｓ Ｔ Ｒ ＡＣ Ｔ ］ Ｏｂ ｊ ｅ ｃ ｔ ｉ ｖ ｅ Ｔ ｏ ｅ ｘ ｐ ｌ ｏ ｒ ｅ ｔ ｈ ｅ ｍｏ ｄ ｉ ｉ ｆ ｅ ｄ ｐ ｏ ｔ ａ ｓ ｓ ｉ ｕ ｍ ｉ ｏ ｄ ｉ ｄ ｅ ｍｅ ｔ ｈ ｏ ｄ（ Ｉ ｍｐ ｒ ｏ ｖ ｅ ｄ ｍｅ ｔ ｈ ｏ ｄ ）ｆ ｏ ｒ
冻存样本研究 的需求 。 【 关键词 】 基 因组 Ｄ ＮＡ； 碘化钾法 ； 改 良法 ； 外周血
Ａ ｉ ｍｐ ｒ ｏ ｖ ｅ ｄ ｍｅ ｔ ｈ ｏ ｄ ｆ ｏ ｒ ｅ ｘ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ｉ ｎ ｇ ｇ ｅ ｎ ｏｍｉ ｃ ＤＮＡ ｆ ｒ Ｏ ｍ ｒ ｅ ｓ ｅ ｒ ｖ ｅ ｄ ｂ ｌ ｏ ｏ ｄ
改良外周血DNA提取方法的效果分析
１ ００ ／ ｉ离心 ２ｍｎ弃去上清液。将离心管倒置在 ３ ０ ｍｎ ｒ ｉ， 吸水纸上片刻， 留管底沉淀。（）向沉淀中加９０ 保 ４ ０ 洗涤液Ⅱ漩涡振荡 器上充 分悬 浮沉淀 ，３００ｒｍｎ离 ， １ ０ ｉ ／ Ｇ１ ０。 心 ２ｍｎ 弃去上清液。将离心管倒置在吸水纸上片 ｉ， １ ２ 外周血 Ｄ Ａ提 取方 法 ． Ｎ 保 ５ ０ ｌ ｘ １２ １ 试 剂盒 外周血 Ｄ Ａ提取法 ：１ 在 １５ｍ１ ．． Ｎ （ ） ． 离 刻 ， 留管底沉淀。（ ）向沉淀 中加 ９０Ｉ 无水 乙 醇， 漩涡振荡器上充分悬浮沉淀 ，３００ｒｍｎ离心 １ ０ ｉ ／ 心管中加入 ８０ １ ０ 裂红液及 １０ 抗凝全血， ０ ｌ 充分 ｉ， 混匀 ， 室温放置 ２～ ｉ， ００ｒｍｎ ３ｍｎ ８ ０ ｉ 离心 ２ｍｎ 弃 ２ｍｎ 弃去上清液。将离心管倒置在吸水纸上片刻 ， ／ ｉ， ， 次。 去上清液 ， 保留管底沉淀。（ ） ２ 加入 １ ｌ ０ 变性液 Ａ 保留管底沉淀。重复步骤 ５ 用无水 乙醇多洗 １ ６ ０ ０ｍｎ 当沉淀完 和 ２０ 充分摇匀 的变性液 Ｂ 充分混匀 ， ５ ｌ ， 室温放置 （ ）沉淀置于金属浴 ６ ℃干燥约 ９ ｉ， ０ 溶 ５ｍｎ ８ ０ ｍｎ离心 ５ｓ弃去上清液。将离心管 全干燥成 白色粉 末 后加 入 １０ ｌ 解 液并 混匀 ， ｉ， ０ ０ｒ ｉ ／ ， ６ ℃保温 １ ｉ， ０ ｍｎ ０ ０ｍｎ １ ００ｒ ｉ 离心 ２ｍｎ 上清液即 ３ ／ ｉ， 倒置在吸水纸上片刻 ， 保留管底沉淀。（ ）向沉淀 中 ３ Ｃ ７ 用本法提取 ７个外周血 Ｄ Ａ Ｎ 加 ８０ 洗 涤液 Ｉ， ０ 漩涡振 荡器上 充分悬 浮沉 淀 ， 可作为 Ｐ Ｒ模板 。（ ）
８ ０ ｍｎ ０ｒ ｉ ０ ／ 离心 ５ｓ弃去上清液。将离心管倒置在吸 样 本 。 ， ． Ｎ 水纸上片刻， 留管底沉淀。（ ）向沉淀中￣８０ 洗 １３ 两种 方 法提 取 Ｄ Ａ模 板 的完 整度 及 质 量鉴 定 保 ４ Ｉ ０ 涤液Ⅱ漩涡振荡器上充分悬浮沉淀 ， ００ｒ ｉ ， ８ ０ ｍｎ离心 ／ 采用琼脂糖凝 胶电泳法 ： １ 试剂盒外周血 Ｄ Ａ （） Ｎ ５ｓ弃去上清液。将离心管倒置在吸水纸上片刻， ， 保 提取法 ： 提取的 ７个样本 Ｐ Ｒ模板各取 ４ ｌ Ｃ 进行琼
外周血DNA提取方法的比较及改良
文章编号: 1007-6611(2006)01-0012-02外周血D NA提取方法的比较及改良赵嘉惠, 张华屏 (山西医科大学医学实验中心分子生物学实验室, 太原 030001)摘要: 目的 对3种提取外周血的实验方法进行了比较,并建立一种简便、快速、有效的外周血基因组DNA的提取方法。
方法 采用常规酚/氯仿提取法、碘化钾法和外周血液DNA提取法。
结果 外周血液DNA提取方法提取外周血基因组DNA的纯度高,通过电泳图明显可见。
结论 外周血液DNA提取简便、快速、有效适用于临床标本的研究。
关键词: 外周血; 基因组DNA; 提取中图分类号: R349.61 文献标识码: A 快速经济地从外周血提取高产量高纯度的DNA,对于分子水平的研究非常重要。
目前,外周血DNA的提取方法较多,如:常规酚/氯仿提取法、碘化钾法等,为适应临床检验工作的需要,我们经过长期的实验摸索了一种外周血提取DNA的有效方法。
1 材料与方法1.1 仪器 紫外分光光度计:英国CECIL公司生产的CE1020型;PCR扩增仪:美国MJ Research Ine 公司生产的PTC2100型;离心机:美国Heraeus公司生产的Biofuge PrinmoR;电泳仪:日本Hoefer公司生产的PS3000;紫外凝胶成像系统:德国UVP公司生产的G DS7500。
1.2 方法1.2.1 DNA的提取1.2.1.1 常规酚/氯仿提取法 取枸橼酸钠抗凝血80μl,操作方法见参考文献[1]。
1.2.1.2 碘化钾提取法 取100μl ED TA2Na2抗凝血,提取法见参考文献[2]。
1.2.1.3 T KM2血液DNA提取法 取2ml含抗凝剂的全血加入2ml已配制好的溶液Ⅰ缓冲液(10 mmol Tris2HCl p H7.4,10mmol KCl10mmol Mg2 Cl22mmol ED TA)和50μl NP240,旋涡振荡器上充分混匀,3000r/min室温离心10min,弃上清,细胞沉淀中再加溶液Ⅰ缓冲液,混匀后再离心,如此反复3-5次,直至上清由红色变为无色。
《2024年乳腺癌患者外周血cfDNA总浓度及长片段DNA浓度的临床价值研究》范文
《乳腺癌患者外周血cfDNA总浓度及长片段DNA浓度的临床价值研究》篇一摘要：本论文研究了乳腺癌患者外周血游离cfDNA总浓度和长片段DNA浓度变化情况，并探讨了其在临床诊断、治疗监测和预后评估中的价值。
通过对乳腺癌患者外周血cfDNA及长片段DNA的检测，为乳腺癌的早期诊断、病情监测和治疗效果评估提供了新的思路和方法。
一、引言乳腺癌是全球女性最常见的恶性肿瘤之一，其早期诊断和有效治疗对患者的生存和生活质量至关重要。
近年来，随着基因检测技术的发展，越来越多的学者开始关注乳腺癌患者外周血游离DNA（cfDNA）的变化。
本论文主要探讨了乳腺癌患者外周血cfDNA总浓度及长片段DNA浓度的变化情况及其在临床上的应用价值。
二、材料与方法1. 研究对象本研究选取了乳腺癌患者及健康女性作为研究对象。
所有患者均经病理学确诊为乳腺癌，并进行了相应的治疗。
2. 实验方法（1）样本采集：采集乳腺癌患者及健康女性的外周血样本。
（2）cfDNA提取：采用QIAamp Circulating Nucleic Acid Kit 提取外周血中的cfDNA。
（3）cfDNA浓度检测：采用实时荧光定量PCR技术检测cfDNA总浓度及长片段DNA浓度。
（4）数据分析：对实验数据进行统计分析，探讨cfDNA总浓度及长片段DNA浓度与乳腺癌病情、治疗及预后的关系。
三、结果1. 乳腺癌患者外周血cfDNA总浓度变化情况本研究发现，乳腺癌患者外周血cfDNA总浓度显著高于健康女性。
随着病情的进展，cfDNA总浓度逐渐升高，尤其在肿瘤晚期，cfDNA总浓度达到峰值。
在治疗过程中，cfDNA总浓度的变化与治疗效果密切相关，治疗有效时，cfDNA总浓度降低；治疗无效时，cfDNA总浓度持续升高。
2. 乳腺癌患者外周血长片段DNA浓度变化情况长片段DNA浓度的变化与cfDNA总浓度的变化趋势相似，乳腺癌患者长片段DNA浓度显著高于健康女性。
在病情进展过程中，长片段DNA浓度逐渐升高，且与肿瘤大小、淋巴结转移等病理特征密切相关。
改良QIAamp法检测孕妇外周血中胎儿游离DNA-STR多态性
改良QIAamp法检测孕妇外周血中胎儿游离DNA-STR多态性苏恩本;高慧双;陈子庆;居晓斌;丁小建;周惠英;洪美;夏新辉【期刊名称】《法医学杂志》【年(卷),期】2008(24)2【摘要】1997年研究者在一孕男胎孕妇血浆中成功地扩增出Y染色体特异性序列，从而证实了孕妇血浆中胎儿游离DNA的存在，这一发现提出了孕妇血浆中的游离胎儿DNA在产前诊断中应用的可能性。
随后，许多学者在这一方向进行了研究和探讨，但大多都围绕着孕男胎孕妇血浆DNA中Y染色体的研究。
【总页数】3页(P143-144,147)【作者】苏恩本;高慧双;陈子庆;居晓斌;丁小建;周惠英;洪美;夏新辉【作者单位】南京医科大学第一附属医院亲子鉴定中心,江苏,南京,210029;南京医科大学第一附属医院亲子鉴定中心,江苏,南京,210029;南京医科大学第一附属医院亲子鉴定中心,江苏,南京,210029;南京医科大学第一附属医院亲子鉴定中心,江苏,南京,210029;南京医科大学第一附属医院亲子鉴定中心,江苏,南京,210029;南京医科大学第一附属医院亲子鉴定中心,江苏,南京,210029;南京医科大学第一附属医院亲子鉴定中心,江苏,南京,210029;南京医科大学第一附属医院亲子鉴定中心,江苏,南京,210029【正文语种】中文【中图分类】DF795.2【相关文献】1.荧光定量聚合酶链反应技术检测孕妇外周血中游离胎儿DNA的可行性研究2.10例孕妇血浆中胎儿游离DNA-STR位点检测分析3.孕妇年龄、孕周及体重指数对孕妇外周血中胎儿游离DNA比例的影响4.孕妇外周血中游离胎儿DNA的检测在早产预测中的价值5.荧光定量PCR检测孕妇外周血中游离胎儿DNA在子痫前期中的价值因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
纯合和复合杂合点突变型α地中海贫血的血液学特征分析
《中国产前诊断杂志（电子版）》 ２０２０年第１２卷第４期·论著· 纯合和复合杂合点突变型α地中海贫血的血液学特征分析袁腾龙 王继成 秦丹卿 梁杰 姚翠泽 杜丽 郭浩 （广东省妇幼保健院医学遗传中心，广东广州 ５１１４４０）【摘要】 目的 评价纯合和复合杂合点突变型（地中海贫血的血液学特征，为临床产前咨询提供依据。
方法 对明确诊断的１１例纯合和复合杂合点突变型α地中海贫血进行回顾性血液学指标分析。
结果 １１例纯合型和复合杂合点突变型α地中海贫血病例中共检出纯合点突变型α地中海贫血５例，血红蛋白９６～１３７ｇ／Ｌ。
复合杂合点突变型α地中海贫血５例，血红蛋白９３～１３９ｇ／Ｌ。
纯合点突变型α地中海贫血同时合并β地中海贫血１例，血红蛋白１０６ｇ／Ｌ。
结论 纯合型和复合杂合点突变型α地中海贫血血液学参数及血红蛋白电泳结果存在一定的相关性，同时也存在一定的差异。
纯合和复合杂合点突变型α地中海贫血结果分析应该结合血液学参数及血红蛋白电泳结果进行分析。
【关键词】 纯合点突变型α地中海贫血；杂合点突变型α地贫；血液学指标；产前诊断【中图分类号】 Ｒ７１４．５６ 【文献标识码】 Ａ犇犗犐：１０．１３４７０／ｊ．ｃｎｋｉ．ｃｊｐｄ．２０２０．０４．０１７ 通信作者：郭浩，Ｅ ｍａｉｌ：１３６３１３１１２６８＠１６３．ｃｏｍ犎犲犿犪狋狅犾狅犵犻犮犪犾犮犺犪狉犪犮狋犲狉犻狊狋犻犮狊狅犳犺狅犿狅狕狔犵狅狌狊犪狀犱犮狅犿狆狅狌狀犱犺犲狋犲狉狅狕狔犵狅狌狊狆狅犻狀狋犿狌狋犪狋犻狅狀狊狅犳α 狋犺犪犾犪狊狊犪犲犿犻犪犢狌犪狀犜犲狀犵犾狅狀犵，犠犪狀犵犑犻犮犺犲狀犵，犙犻狀犇犪狀狇犻狀犵，犔犻犪狀犵犑犻犲，犢犪狅犆狌犻狕犲，犇狌犔犻，犌狌狅犎犪狅 犕犲犱犻犮犪犾犌犲狀犲狋犻犮犆犲狀狋狉犲，犌狌犪狀犵犱狅狀犵犠狅犿犲狀犪狀犱犆犺犻犾犱狉犲狀犎狅狊狆犻狋犪犾，犌狌犪狀犵狕犺狅狌５１１４４２，犆犺犻狀犪犆狅狉狉犲狊狆狅狀犱犻狀犵犪狌狋犺狅狉：犌狌狅犎犪狅，犈 犿犪犻犾：１３６３１３１１２６８＠１６３．犮狅犿【犃犫狊狋狉犪犮狋】 犗犫犼犲犮狋犻狏犲 Ｔｏｅｖａｌｕａｔｅｔｈｅｈｅｍａｔｏｌｏｇｉｃａｌｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓａｎａｌｙｓｉｓｏｆｈｏｍｏｚｙｇｏｕｓａｎｄｃｏｍｐｏｕｎｄｈｅｔｅｒｏｚｙｇｏｕｓｐｏｉｎｔｍｕｔａｔｉｏｎ（ ｔｈａｌａｓｓｅｍｉａ，ａｎｄｔｏｐｒｏｖｉｄｅｔｈｅｏｒｅｔｉｃａｌｂａｓｉｓｆｏｒｃｌｉｎｉｃａｌｐｒｅｎａｔａｌｃｏｎｓｕｌｔａｔｉｏｎ．犕犲狋犺狅犱狊 Ａｒｅｔｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅａｎａｌｙｓｉｓｏｆｈｅｍａｔｏｌｏｇｉｃａｌｉｎｄｉｃａｔｏｒｓｗａｓｐｅｒｆｏｒｍｅｄｏｎ１１ｃａｓｅｓｏｆｈｏｍｏｚｙｇｏｕｓａｎｄｃｏｍｐｏｕｎｄｈｅｔｅｒｏｚｙｇｏｕｓｐｏｉｎｔｍｕｔａｔｉｏｎα ｔｈａｌａｓｓｅｍｉａｗｉｔｈａｃｌｅａｒｄｉａｇｎｏｓｉｓ．犚犲狊狌犾狋狊 Ａｔｏｔａｌｏｆ５ｃａｓｅｓｏｆｈｏｍｏｚｙｇｏｕｓｐｏｉｎｔｍｕｔａｔｉｏｎα ｔｈａｌａｓｓｅｍｉａｗｅｒｅｄｅｔｅｃｔｅｄｉｎ１２ｃａｓｅｓｏｆｈｏｍｏｚｙｇｏｕｓａｎｄｃｏｍｐｏｕｎｄｈｅｔｅｒｏｚｙｇｏｕｓｐｏｉｎｔｍｕｔａｔｉｏｎα ｔｈａｌａｓｓｅｍｉａ，ｗｉｔｈｈｅｍｏｇｌｏｂｉｎｌｅｖｅｌｒａｎｇｉｎｇ９６～１３７ｇ／Ｌ．５ｃａｓｅｓｏｆｃｏｍｐｏｕｎｄｈｅｔｅｒｏｚｙｇｏｕｓｐｏｉｎｔｍｕｔａｔｉｏｎα ｔｈａｌａｓｓｅｍｉａｗｅｒｅｄｅｔｅｃｔｅｄｗｉｔｈｈｅｍｏｇｌｏｂｉｎｌｅｖｅｌｒａｎｇｉｎｇ９３～１３９ｇ／Ｌ．１ｃａｓｅｏｆｈｏｍｏｚｙｇｏｕｓｐｏｉｎｔｍｕｔａｎｔα ｔｈａｌａｓｓｅｍｉａｃｏｍｂｉｎｅｄｗｉｔｈα ｔｈａｌａｓｓｅｍｉａｗｅｒｅｄｅｔｅｃｔｅｄｗｉｔｈｈｅｍｏｇｌｏｂｉｎｌｅｖｅｌ１０６ｇ／Ｌ．犆狅狀犮犾狌狊犻狅狀 Ｔｈｅｒｅｗｅｒｅｃｅｒｔａｉｎｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎｓｂｅｔｗｅｅｎｈｅｍａｔｏｌｏｇｉｃａｌｐａｒａｍｅｔｅｒｓａｎｄｈｅｍｏｇｌｏｂｉｎｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓｒｅｓｕｌｔｓｉｎｈｏｍｏｚｙｇｏｕｓａｎｄｃｏｍｐｏｕｎｄｈｅｔｅｒｏｚｙｇｏｕｓｐｏｉｎｔｍｕｔａｎｔα ｔｈａｌａｓｓｅｍｉａ，ｗｈｉｌｅｔｈｅｒｅｗｅｒｅａｌｓｏｃｅｒｔａｉｎｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ．Ｔｈｅａｎａｌｙｓｉｓｏｆｈｏｍｏｚｙｇｏｕｓａｎｄｃｏｍｐｏｕｎｄｈｅｔｅｒｏｚｙｇｏｕｓｐｏｉｎｔｍｕｔａｔｉｏｎα ｔｈａｌａｓｓｅｍｉａｓｈｏｕｌｄｂｅｃｏｍｂｉｎｅｄｗｉｔｈｈｅｍａｔｏｌｏｇｉｃａｌｐａｒａｍｅｔｅｒｓａｎｄｈｅｍｏｇｌｏｂｉｎｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓｒｅｓｕｌｔｓ．【犓犲狔狑狅狉犱狊】 Ｈｏｍｏｚｙｇｏｕｓｐｏｉｎｔｍｕｔａｔｉｏｎα ｔｈａｌａｓｓｅｍｉａ；Ｈｅｔｅｒｏｚｙｇｏｕｓｐｏｉｎｔｍｕｔａｔｉｏｎα ｔｈａｌａｓｓｅｍｉａ；Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｉｃａｌｉｎｄｉｃａｔｏｒｓ；Ｐｒｅｎａｔａｌｄｉａｇｎｏｓｉｓ 地中海贫血（简称地贫）是由于珠蛋白基因缺陷从而导致珠蛋白生成障碍的溶血性贫血。
改良外周血DNA提取方法的效果分析_陈碧艳
改良外周血DNA提取方法的效果分析陈碧艳覃茜李金花（广西百色市妇幼保健院，百色市533000）【摘要】目的探讨经济有效提取外周血DNA的方法。
方法对常用外周血DNA提取方法（试剂盒提供方法）进行改进，比较常用试剂盒方法与改进方法的效果。
结果改进法提取DNA质量及扩增效果均明显优于常用试剂盒方法。
结论改进法提取外周血DNA成功率高、质量好、扩增效果更好，并且不增加试剂成本。
【关键词】DNA提取；试剂盒提取方法；改进【中图分类号】R446．11【文献标识码】A【文章编号】0253-4304（2011）10-1364-03随着生命科学的不断发展，临床疾病的研究已经进入分子生物学水平，从全血中提取高浓度、高纯度、高质量的DNA已成为临床关注的首要问题［1－4］。
目前我科使用的DNA提取方法是国产试剂盒内提供方法。
为不增加检验成本，提高实验的成功率，我科对试剂盒方法、步骤等进行改进，本文比较试剂盒方法与试剂盒改进法抽提全血基因组DNA结果，现报告如下。
1材料与方法1．1材料1．1．1标本来源：随机选择我院门诊就诊患者7例，抽取外周静脉全血1ml，枸橼酸钠抗凝混匀备用。
1．1．2试剂：外周血DNA提取液为国产试剂配送；琼脂糖；设备：紫外透射仪，珠海医学仪器有限公司生产，型号UV-3C；PCR仪：杭州晶格科学仪器有限公司生产，型号K960；电泳仪：北京市六一仪器厂生产，型号DYY-6C；离心机：珠海医学仪器有限公司生产，型号16K；照相机：日本佳能有限公司生产，型号G10。
1．2外周血DNA提取方法1．2．1试剂盒外周血DNA提取法：（1）在1．5ml离心管中加入800μl裂红液及100μl抗凝全血，充分混匀，室温放置2 3min，8000r/min离心2min，弃去上清液，保留管底沉淀。
（2）加入10μl变性液A 和250μl充分摇匀的变性液B，充分混匀，室温放置5min，8000r/min离心5s，弃去上清液。
外周血基因组DNA提取试剂盒的改良
外周血基因组DNA提取试剂盒的改良陶莹;廖长秀;覃宇馨;何南轩【期刊名称】《广州化工》【年(卷),期】2024(52)2【摘要】对现有DNA提取试剂盒进行改良,减少DNA提取成本,寻找经济、稳定的提取方法。
将96份血液标本分为A、B两组,各48份,组内按外周血体积分为250μL、500μL、750μL三组。
A组(试剂盒法)采用杭州倍沃医学科技公司的血液基因组小量提取试剂盒(离心柱型),B组(改良法)使用3%明胶吸附白细胞代替试剂盒法中分离白细胞的步骤,其余步骤同试剂盒法。
采用紫外分光光度计、凝胶电泳、荧光定量PCR比较两种提取方法不同体积外周血DNA提取效果。
与试剂盒法相比,改良法250μL DNA提取得率稍低,差异无统计学意义(P>0.05);改良法500μL、750μL DNA提取得率及500μL的OD_(260)/OD_(280)值均显著高于试剂盒法(P<0.01),差异具有统计学意义。
琼脂糖凝胶电泳发现两种方法提取的DNA条带均完整,无拖尾现象,定量PCR扩增后两者产物融解曲线均为单峰,Ct值差异无统计学意义。
本实验中改良全血DNA提取法在提取大量血体积DNA时具有优势,是一种经济、稳定、高效的DNA提取方法。
【总页数】3页(P140-142)【作者】陶莹;廖长秀;覃宇馨;何南轩【作者单位】右江民医学院药学院;右江民族医学院基础医学院;右江民族医学院医学影像学院【正文语种】中文【中图分类】R34【相关文献】1.改良碘化钾法提取冻存外周血基因组 DNA 的方法探讨2.不同DNA提取试剂盒提取作物种子基因组DNA效果的比较3.不同粪便DNA提取试剂盒及样本储存时间对粪便人基因组DNA提取率的影响4.QIAamp及Biomed粪便细菌基因组DNA提取试剂盒提取人肠道细菌基因组DNA质量的差异因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
从动物血液中提取基因组DNA方法的比较研究
从动物血液中提取基因组DNA方法的比较研究逄洪波;陈永燕;张恒庆;周其兴【期刊名称】《辽宁师范大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2005(028)004【摘要】从血液中提取基因组DNA的传统方法是先得到淋巴细胞,再用蛋白酶K、SDS消化,然后用酚、氯仿抽提,乙醇沉淀.CTAB法提取基因组DNA多应用于植物和微生物,从全血中提取基因组DNA报道甚少.采用改良的CTAB法从全血中提取基因组DNA,并以传统方法和TAKARA Blood Genome DNA Extraction Kit作对照.结果表明:CTAB法可以得到大量的、较完整的基因组DNA,并且纯度达到1.8～2.0,可以满足PCR扩增和限制酶切等实验的要求.【总页数】4页(P457-460)【作者】逄洪波;陈永燕;张恒庆;周其兴【作者单位】大连大学,生物工程学院,辽宁,大连,116622;辽宁师范大学,生命科学学院,辽宁,大连,116029;大连大学,生物工程学院,辽宁,大连,116622;辽宁师范大学,生命科学学院,辽宁,大连,116029;大连大学,生物工程学院,辽宁,大连,116622【正文语种】中文【中图分类】R3【相关文献】1.玉米基因组DNA不同提取方法及提取部位的比较研究 [J], 楚海娇2.海洋沉积物中微生物基因组DNA提取方法的比较研究 [J], 贺惠;张玉;甄毓;米铁柱;陈阳阳;于志刚3.紫椴基因组DNA提取方法及提取部位的比较研究 [J], 刘赢男;周丹;倪红伟;穆立蔷4.16S核糖体DNA宏基因组测序中细菌核酸提取方法的比较研究 [J], 王伟;童贻刚;王玉琢;舒鹏;米志强;安小平;裴广倩;刘文丽;袁文俊;史套兴5.不同加工方法对猪源性肉类基因组DNA提取效果影响的比较研究 [J], 魏晓雅;陈健;李婷婷;刘德星;岳巧云因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
改良外周血DNA提取方法的效果分析
改良外周血DNA提取方法的效果分析
陈碧艳;覃茜;李金花
【期刊名称】《广西医学》
【年(卷),期】2011(033)010
【摘要】目的探讨经济有效提取外周血DNA的方法.方法对常用外周血DNA提取方法(试剂盒提供方法)进行改进,比较常用试剂盒方法与改进方法的效果.结果改进法提取DNA质量及扩增效果均明显优于常用试剂盒方法.结论改进法提取外周血DNA成功率高、质量好、扩增效果更好,并且不增加试剂成本.
【总页数】3页(P1364-1366)
【作者】陈碧艳;覃茜;李金花
【作者单位】广西百色市妇幼保健院,百色市,533000;广西百色市妇幼保健院,百色市,533000;广西百色市妇幼保健院,百色市,533000
【正文语种】中文
【中图分类】R446.11
【相关文献】
1.改良PCR法检测外周血单个核细胞中的HBV DNA与HBVcccDNA [J], 陈瑞琳;蔺淑梅;张树林;叶峰;张曦;赵英仁
2.人类外周血基因组DNA提取方法的比较分析 [J], 史嘉翊;高晓虹;邓代千;王斌艳;宋洁
3.外周血DNA提取方法的比较及改良 [J], 赵嘉惠;张华屏
4.人外周血DNA提取方法比较 [J], 尹相林;展秀君;沈萍;王艳秋;王缘;李若男;张淑
红;关宝生
5.常用外周血DNA提取方法的比较 [J], 张书广;李秀昌
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两种方法提取DNA在α地中海贫血基因检测中敏感性的比较
两种方法提取DNA在α地中海贫血基因检测中敏感性的比较陈辉;周迎春;马福广【期刊名称】《中国优生与遗传杂志》【年(卷),期】2002(10)5【摘要】目的寻找α地中海贫血基因检测中提取DNA的快速、敏感、准确的方法。
方法全血DNA提取采用Qiagen快速法及表面活性剂快速法 ,并用双重PCR法进行α -地中海贫血基因的检测。
结果 6 0例经典法提取DNA并用双重PCR测定确定为α -地中海贫血患者 ,经Qiagen法提取DNA进行双重PCR检测 ,阳性为 6 0例 ,检出敏感性为 10 0 % (6 0 / 6 0 ) ,而表面活性剂快速法检出阳性为10例 ,敏感性约为 16 7% (10 / 6 0 ) ,经非参数检验中的麦克内尔马检验 ,两者有统计学意义。
结论 :表面活性剂快速法提取DNA进行α -地中海贫血基因检测漏诊率高 ,不能用于标本提取DNA进行α-地中海贫血基因检测 ;Qiagen法尽管成本较高 ,但是它检出敏感性高 ,准确、快速 ,尤其在诊断如α【总页数】2页(P12-12)【关键词】提取;DNA;α地中海贫血;基因检测;敏感性;Qiagen法;经典法【作者】陈辉;周迎春;马福广【作者单位】暨南大学医学院第四附属医院广州市红十字会医院检验科;广州中医药大学第一附属医院检验科【正文语种】中文【中图分类】R556.61【相关文献】1.两种方法检测α、β-地中海贫血基因携带者的结果比较 [J], 杨小华;马福广;何雅军2.两种方法提取的DNA在脆性X综合征基因FMR-I检测中的比较 [J], 肖丽娟;李红3.两种DNA断裂损伤检测方法敏感性的比较 [J], 马爱国4.两种方法检测HBV基因分型比较及基因型检出率与HBV DNA定量的关系 [J], 张瑞芹;刘娜;冯继红;徐光华;陈延平5.两种核酸提取方法应用在两套α-地中海贫血基因诊断系统中的比较 [J], 黄培坚; 邓文成; 尹志军; 洪振亮因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
改良Chelex-100法快速提取转基因农产品DNA
改良Chelex-100法快速提取转基因农产品DNA蔡翠霞;肖维威;康文杰;周琳华;吴永彬;郑远金;马文丽【摘要】旨在建立一种从转基因农产品中快速提取DNA的方法.分别采用改良Chelex-100法和常规CTAB法提取转基因大豆GTS40-3-2基因组DNA,测其浓度和纯度,PCR扩增其内源基因(Lectin)、启动子(CaMV35S)和品系特异性序列,对两种方法进行比较和评价,并研究两种方法提取的DNA在-20℃下保存一个月内的检测效果,以及改良Chelex-100法在玉米、小麦和水稻等其他转基因农产品的应用效果.结果表明,改良Chelex-100法能够快速在1.5h之内从样品中提取DNA,所提取的DNA直接用于PCR扩增反应,产物电泳条带清晰明亮.两种方法提取的DNA在-20℃下保存一个月内的检测效果未见明显差别.该方法在玉米、小麦和水稻等转基因农产品的应用效果稳定.因此,改良Chelex-100法提取的DNA可以作为PCR扩增模板用于转基因农产品检测.该方法具有经济、简便、快速、安全的特点,适合转基因农产品大规模筛选和鉴别.【期刊名称】《生物技术通报》【年(卷),期】2011(000)010【总页数】5页(P210-214)【关键词】Chelex-100法;CTAB法;DNA提取;PCR【作者】蔡翠霞;肖维威;康文杰;周琳华;吴永彬;郑远金;马文丽【作者单位】南方医科大学基因工程研究所,广州 510515;南方医科大学基因工程研究所,广州 510515;南方医科大学基因工程研究所,广州 510515;南方医科大学基因工程研究所,广州 510515;南方医科大学基因工程研究所,广州 510515;南方医科大学基因工程研究所,广州 510515;南方医科大学基因工程研究所,广州 510515【正文语种】中文近10余年来，现代生物技术的发展在农业上显示出强大的潜力，转基因作物应运而生，并逐步发展成为能够产生巨大社会效益和经济效益的产业。
外周血提取DNA及DNA电泳检测
外周血提取DNA及DNA电泳检测DNA电泳是一种常用的分子生物学技术，用于分析DNA样本的大小和纯度。
而外周血提取DNA则是从外周血样本中获取DNA的过程。
本文将介绍外周血提取DNA的步骤，并详细讲解DNA电泳的原理和操作方法。
一、外周血提取DNA外周血提取DNA是一种常用的DNA样本获取方法，适用于临床与实验室研究。
以下将按步骤介绍外周血提取DNA的过程。
1. 收集外周血样本：首先，使用抗凝剂处理外周血样本，以防止凝结。
通常使用EDTA作为抗凝剂，将其加入到试管中。
然后，用注射器采集外周血样本，并将其轻轻倒入带有抗凝剂的试管中。
2. 破坏红细胞膜：外周血样本中富含红细胞，需要将其破坏以释放DNA。
可以使用红细胞裂解液，如红细胞溶解液或混合液，加入到试管中，并轻轻摇晃样本混匀。
红细胞膜破坏后，红细胞内的DNA会被释放出来。
3. 沉淀DNA：通过离心过程，将DNA从样本中分离出来。
将试管放入离心机中，进行适当的离心操作，使DNA沉淀在离心管底部。
然后，将上清液去除，留下沉淀的DNA。
4. 洗涤DNA：使用酒精洗涤DNA，以去除杂质和残余污染物。
将酒精加入到含有DNA沉淀的离心管中，轻轻摇晃样本混匀，然后进行再次离心。
去除上清液，重复这个步骤。
5. 溶解DNA：最后，使用适量的溶解液将DNA溶解。
常用的溶解液为Tris-EDTA缓冲液。
加入适量的溶解液到离心管中，并轻轻摇晃样本混匀，使DNA完全溶解在溶液中。
二、DNA电泳检测DNA电泳是一种常用的DNA分析方法，可用于测量DNA分子的大小和纯度。
本节将介绍DNA电泳检测的原理和操作方法。
1. 准备电泳胶：首先，准备琼脂糖电泳胶。
将适量的琼脂糖加入到缓冲液中，加热搅拌溶解。
然后，将溶解的琼脂糖缓冲液倒入电泳槽中，并插入电极。
2. 加载DNA样本：取一定量的DNA样本，并将其与DNA标记物混合。
然后，将混合物缓慢地加入到电泳槽中的样本槽中。
注意不要漏掉样本，以避免结果的偏差。
一种改良的CTAB法提取马尾松基因组DNA
一种改良的CTAB法提取马尾松基因组DNA
陈碧华
【期刊名称】《广东林业科技》
【年(卷),期】2009(025)002
【摘要】以马尾松针叶为试验材料,利用改良的CTAB法抽提基因组DNA,其浓度和纯度符合PCR实验的要求,经凝胶电泳检测,DNA纯化效果好.
【总页数】4页(P26-29)
【作者】陈碧华
【作者单位】福建省林业科学研究院,福州,350012
【正文语种】中文
【中图分类】Q527+.3
【相关文献】
1.改良CTAB法对山茶属植物基因组rDNA提取的比较研究 [J], 张金丽;张罗霞;杨坤梅;李宗艳
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4.改良CTAB法提取草莓基因组DNA [J], 张璐璐;樊晨;樊哲;高庆玉
5.几种改良CTAB法提取羽衣甘蓝基因组DNA质量的比较研究 [J], 熊勇;冯馨;程明明;王卫珍;祝朋芳
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盐析法快速抽提外周血DNA方法的改进
盐析法快速抽提外周血DNA方法的改进
刘华欣;王承志;潘自铁;王晓玉;姚敏捷
【期刊名称】《吉林医药学院学报》
【年(卷),期】1999(000)001
【摘要】笔者对盐析法抽提外周血脱氧核糖核酸(DNA)方法进行了改进,从而使其操作方法更加简便、快捷,既可用于聚合酶链反应(PCR)扩增,也可用于限制性内切酶的消化反应等.
【总页数】2页(P23-24)
【作者】刘华欣;王承志;潘自铁;王晓玉;姚敏捷
【作者单位】空军医学高等专科学校!吉林市132013
【正文语种】中文
【中图分类】R346
【相关文献】
1.酚/氯仿法和盐析法提取人类外周血基因组DNA方法的比较 [J], 宋洁云;刘芳宏;马军;陈远帆;王海俊
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3.外周血单个核细胞DNA不同抽提方法比较 [J], 刘燕;张冬雷
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《2024年乳腺癌患者外周血cfDNA总浓度及长片段DNA浓度的临床价值研究》范文
《乳腺癌患者外周血cfDNA总浓度及长片段DNA浓度的临床价值研究》篇一一、引言乳腺癌作为全球女性最常见的恶性肿瘤之一，其早期诊断和预后评估对于患者的治疗和生存至关重要。
近年来，随着分子生物学和基因检测技术的快速发展，外周血细胞游离DNA（cfDNA）的检测在乳腺癌的诊断和治疗中显示出巨大的潜力。
本研究旨在探讨乳腺癌患者外周血cfDNA总浓度及长片段DNA浓度的临床价值，为乳腺癌的早期诊断、治疗及预后评估提供新的方法和思路。
二、研究方法本研究采用回顾性分析方法，收集了乳腺癌患者的外周血样本。
首先，利用高通量测序技术检测外周血cfDNA总浓度；其次，针对长片段DNA，采用特异性引物进行PCR扩增后进行定量分析。
同时，还收集了患者的临床资料，包括年龄、肿瘤大小、淋巴结转移情况等。
三、研究结果1. cfDNA总浓度与乳腺癌研究发现，乳腺癌患者外周血cfDNA总浓度明显高于健康人群。
且cfDNA总浓度与肿瘤大小、淋巴结转移情况呈正相关，即肿瘤越大、淋巴结转移越多，cfDNA总浓度越高。
这表明cfDNA 总浓度可以作为乳腺癌病情严重程度和预后评估的指标。
2. 长片段DNA浓度与乳腺癌长片段DNA的浓度在乳腺癌患者外周血中也有显著变化。
与健康人群相比，乳腺癌患者长片段DNA浓度升高，且这种升高与肿瘤的分期和预后密切相关。
具体而言，晚期乳腺癌患者长片段DNA浓度较高，提示长片段DNA浓度可能有助于评估乳腺癌患者的预后情况。
四、讨论本研究表明，乳腺癌患者外周血cfDNA总浓度及长片段DNA浓度具有较高的临床价值。
cfDNA总浓度的升高可能与肿瘤的进展和恶化有关，可以作为乳腺癌病情严重程度和预后评估的指标。
而长片段DNA浓度的变化则可能与肿瘤的分期和预后有关，有助于医生判断患者的预后情况。
此外，cfDNA和长片段DNA的检测方法具有非侵入性、操作简便、成本低廉等优点，适用于大规模筛查和随访。
因此，将cfDNA和长片段DNA的检测应用于乳腺癌的早期诊断、治疗及预后评估，有助于提高患者的生存率和生活质量。
《2024年乳腺癌患者外周血cfDNA总浓度及长片段DNA浓度的临床价值研究》范文
《乳腺癌患者外周血cfDNA总浓度及长片段DNA浓度的临床价值研究》篇一摘要本文通过对乳腺癌患者外周血游离DNA（cfDNA）总浓度及长片段DNA浓度的临床价值进行研究，为乳腺癌的早期诊断、治疗及预后评估提供科学依据。
通过实验对比不同时期乳腺癌患者的血液样本，探讨了上述两种浓度与疾病严重程度及治疗效果之间的关系。
一、引言乳腺癌是全球女性最常见的恶性肿瘤之一，早期诊断和治疗对于提高患者生存率具有重要意义。
近年来，随着分子生物学和基因检测技术的发展，外周血游离DNA（cfDNA）在乳腺癌诊断和治疗中的应用逐渐受到关注。
cfDNA包括总浓度及长片段DNA浓度，可以反映患者疾病进展及预后情况。
本文将对这些浓度在乳腺癌诊断及治疗中的价值进行研究。
二、研究目的和方法本研究旨在通过检测乳腺癌患者外周血cfDNA总浓度及长片段DNA浓度，探讨其与疾病严重程度、治疗效果及预后的关系。
采用回顾性研究方法，收集乳腺癌患者的血液样本，并对其进行分析和比较。
三、实验材料和方法1. 实验对象：选取乳腺癌患者作为实验组，同时选取健康人群作为对照组。
2. 实验方法：采集实验组和对照组的静脉血液样本，提取外周血游离DNA（cfDNA），分别测定总浓度及长片段DNA浓度。
3. 检测指标：包括cfDNA总浓度、长片段DNA浓度、乳腺癌相关基因突变等。
4. 数据分析：采用统计学方法对数据进行处理和分析，包括描述性统计、相关性分析等。
四、结果和讨论1. 乳腺癌患者外周血cfDNA总浓度和长片段DNA浓度显著高于健康人群，随着病情加重，cfDNA总浓度和长片段DNA浓度呈上升趋势。
这一结果表明，cfDNA浓度的变化可以反映乳腺癌的严重程度，对乳腺癌的诊断和治疗有一定的指导意义。
2. 不同治疗方法对乳腺癌患者外周血cfDNA总浓度和长片段DNA浓度的影响也不同。
接受化疗和靶向治疗的患者，其cfDNA总浓度和长片段DNA浓度变化较为明显，而接受手术治疗的患者则相对稳定。
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改良外周血DNA提取方法的效果分析陈碧艳覃茜李金花（广西百色市妇幼保健院，百色市533000）【摘要】目的探讨经济有效提取外周血DNA的方法。
方法对常用外周血DNA提取方法（试剂盒提供方法）进行改进，比较常用试剂盒方法与改进方法的效果。
结果改进法提取DNA质量及扩增效果均明显优于常用试剂盒方法。
结论改进法提取外周血DNA成功率高、质量好、扩增效果更好，并且不增加试剂成本。
【关键词】DNA提取；试剂盒提取方法；改进【中图分类号】R446．11【文献标识码】A【文章编号】0253-4304（2011）10-1364-03随着生命科学的不断发展，临床疾病的研究已经进入分子生物学水平，从全血中提取高浓度、高纯度、高质量的DNA已成为临床关注的首要问题［1－4］。
目前我科使用的DNA提取方法是国产试剂盒内提供方法。
为不增加检验成本，提高实验的成功率，我科对试剂盒方法、步骤等进行改进，本文比较试剂盒方法与试剂盒改进法抽提全血基因组DNA结果，现报告如下。
1材料与方法1．1材料1．1．1标本来源：随机选择我院门诊就诊患者7例，抽取外周静脉全血1ml，枸橼酸钠抗凝混匀备用。
1．1．2试剂：外周血DNA提取液为国产试剂配送；琼脂糖；设备：紫外透射仪，珠海医学仪器有限公司生产，型号UV-3C；PCR仪：杭州晶格科学仪器有限公司生产，型号K960；电泳仪：北京市六一仪器厂生产，型号DYY-6C；离心机：珠海医学仪器有限公司生产，型号16K；照相机：日本佳能有限公司生产，型号G10。
1．2外周血DNA提取方法1．2．1试剂盒外周血DNA提取法：（1）在1．5ml离心管中加入800μl裂红液及100μl抗凝全血，充分混匀，室温放置2 3min，8000r/min离心2min，弃去上清液，保留管底沉淀。
（2）加入10μl变性液A 和250μl充分摇匀的变性液B，充分混匀，室温放置5min，8000r/min离心5s，弃去上清液。
将离心管倒置在吸水纸上片刻，保留管底沉淀。
（3）向沉淀中加800μl洗涤液Ⅰ，漩涡振荡器上充分悬浮沉淀，8000r/min离心5s，弃去上清液。
将离心管倒置在吸水纸上片刻，保留管底沉淀。
（4）向沉淀中加800μl洗涤液Ⅱ，漩涡振荡器上充分悬浮沉淀，8000r/min离心5s，弃去上清液。
将离心管倒置在吸水纸上片刻，保留管底沉淀。
（5）向沉淀中加800μl无水乙醇，漩涡振荡器上充分悬浮沉淀，8000r/min离心5s，弃去上清液。
将离心管倒置在吸水纸上片刻，保留管底沉淀。
重复步骤5，用无水乙醇多洗1次。
（6）沉淀置于真空旋转干燥仪中60ħ干燥约10min，当沉淀完全干燥成白色粉末后加入100μl溶解液并混匀，60ħ保温10min，8000r/min离心5s，上清液即可作为PCR模板。
（7）用本法提取7个外周血DNA样本。
1．2．2试剂盒外周血DNA提取改进法：（1）在1．5ml 离心管中加入900μl裂红液及100μl抗凝全血，充分混匀，室温放置10min，13000r/min离心2min，弃去上清液，保留管底沉淀。
（2）加入12μl变性液A和300μl充分摇匀的变性液B，充分混匀，室温放置10min，13000r/min离心2min，弃去上清液。
将离心管倒置在吸水纸上片刻，保留管底沉淀。
（3）向沉淀中加900μl洗涤液Ⅰ，漩涡振荡器上充分悬浮沉淀，13000r/min离心2min，弃去上清液。
将离心管倒置在吸水纸上片刻，保留管底沉淀。
（4）向沉淀中加900μl 洗涤液Ⅱ，漩涡振荡器上充分悬浮沉淀，13000r/min离心2min，弃去上清液。
将离心管倒置在吸水纸上片刻，保留管底沉淀。
（5）向沉淀中加900μl无水乙醇，漩涡振荡器上充分悬浮沉淀，13000r/min离心2min，弃去上清液。
将离心管倒置在吸水纸上片刻，保留管底沉淀。
重复步骤5，用无水乙醇多洗1次。
（6）沉淀置于金属浴60ħ干燥约90min，当沉淀完全干燥成白色粉末后加入100μl溶解液并混匀，60ħ保温10min，13000r/min离心2min，上清液即可作为PCR模板。
（7）用本法提取7个外周血DNA 样本。
1．3两种方法提取DNA模板的完整度及质量鉴定采用琼脂糖凝胶电泳法：（1）试剂盒外周血DNA 提取法：提取的7个样本PCR模板各取4μl进行琼4631Guangxi Medical Journal，Oct．2011，Vol．33，No．10脂糖凝胶电泳。
（2）试剂盒外周血DNA 提取改进法，提取7个样本PCR 模板各取2μl 进行琼脂糖凝胶电泳。
在1%琼脂糖凝胶（加溴化乙啶至终浓度0．5μg /ml ）电泳，以0．5ˑTBE 缓冲液，电压90V ，130min 后在紫外透射仪下观察DNA 提取情况，拍照。
1．4两种方法提取DNA 模板进行体外PCR 扩增用国产α-地中海贫血缺失型诊断试剂盒，按操作说明书对两种方法提取的PCR 模板进行扩增，各取2μl PCR 产物在1．2%琼脂糖凝胶（加溴化乙啶至终浓度0．5μg /ml ），以0．5ˑTBE 缓冲液，90V 电压电泳1h 。
在紫外透射仪下观察电泳结果，拍照。
2结果2．1两种方法提取DNA 模板的琼脂糖凝胶电泳法结果基因组DNA 可以通过琼脂糖凝胶电泳后观察条带来判断其完整性，完整的基因组DNA 应条带整齐，没有拖尾现象［4］。
试剂盒外周血DNA 提取法：7个样本中2、3、4、5、7号样本在紫外透射仪上看见靠近加样孔处有荧光条带，但条带不完整；1、6号样本处未有荧光条带显示，4号样本显示荧光条带很弱，见图1。
试剂盒外周血DNA 提取改进法：7个样本在紫外透射仪上看见靠近加样孔处均有清晰完整明亮的荧光条带，条带均匀整齐，无弱显示和不显示，见图2。
图1试剂盒外周血DNA提取法获得的基因组图2试剂盒外周血DNA 提取改进法获得的基因组2．2两种方法提取的DNA 模板进行PCR 扩增产物琼脂糖凝胶电泳结果：（1）试剂盒外周血DNA 提取法：提取PCR 模板的扩增产物2μl 进行琼脂糖凝胶电泳，电泳结果在紫外透射仪下可见荧光条带，条带较小。
有的结果可以判断，有的结果无法判断，在目的条带前有大量荧光物质，荧光物质为引物二聚体。
产生引物二聚体的主要原因是提取的DNA 模板不纯，含有杂质，杂质在PCR 扩增时与引物竞争结合，抑制目的产物的产生［5］。
见图3。
（2）试剂盒外周血DNA 提取改进法：提取PCR 模板扩增产物2μl进行琼脂糖凝胶电泳，结果在紫外透射仪下可见均匀明亮荧光条带，结果清晰，目的基因条带前未发现有强荧光物质［6］。
见图4。
图3试剂盒外周血DNA 提取法PCR结果图4试剂盒外周血DNA 提取改进法获得的基因组PCR 结果3讨论DNA 的分离提取在分子生物学实验中是一个非常重要的步骤，分离得到DNA 样本质量的好坏将直接关系到下一步实验的成败［7］。
我科PCR 实验室在刚开展基因检测工作时，由于未重视DNA 提取质量，造成大批实验失败，浪费试剂、人工、时间，还影响报告的发出。
在不增加DNA 浓度测试仪并且要求降低检验成本的情况下，我们经过反复实验研究比对，在5631广西医学2011年10月第33卷第10期试剂盒方法的基础上，进行试剂用量及时间上的改进，最终从血液中提取到高质量、高纯度DNA［8］。
为证实该方法的有效性、准确性，通过琼脂糖凝胶电泳比较两种方法提取外周血基因组DNA的效果，结果表明，试剂盒外周血DNA提取改进法，提取成功率高、质量好，扩增效果好，结果清晰易判断。
传统方法提取DNA模板杂质较多，质量不高，易有提取失败现象发生，而且提取模板在PCR反应过程中产生大量的引物二聚体，抑制了目的基因产物的扩增，有时甚至会造成实验的失败和结果不准确［9］。
本实验室改进后的外周血DNA提取法，没有增加实验步骤，只在试剂的用量及时间进行调整，所提取外周血的DNA质量高，检测结果稳定，而且实验过程不需要增加特殊仪器和设备，也不会增加成本。
但各实验室的设备、条件、人员水平不同，找出适合本实验室的方法才能有效提高检测质量。
参考文献［1］闫晓华，高立芬，续力云．外周血基因组DNA提取方法比较［J］．山东医学高等专科学校学报，2008，30（3）：175－177．［2］宋小燕，徐兵，李洁．改良国产试剂盒提取血浆DNA的方法［J］．广东医学，2008，29（6）：906－907．［3］唐天乐，高炳淼，长孙东亭，等．高质量毕赤酵母基因组DNA提取方法比较［J］．生物技术通报，2010，（1）：196－199．［4］朱德华．全血基因组DNA的快速纯化［J］．河南科技大学学报（医学版），2003，21（1）：7－8．［5］张继红．164例地中海贫血基因诊断的分析与研究［J］．广西医学，2008，11，30（11）：1679－1680．［6］黄大林，陈森洲，徐雅娟．广西红树林土壤放线菌的分离和DNA的提取方法［J］．广西医学，2008，30（11）：1657－1659．［7］叶青雷，曾宪云．辽东栎基因组DNA提取方法比较与优化［J］．中国蚕业，2009，30（2）：24－26．［8］王晓．全血基因组DNA的提取和纯化方法比较［J］．河南科技大学学报（医学版），2005，23（1）：13－14．［9］陈昆明，夏叶子，章圣辉．经典酚/氯仿抽提法和纯化试剂盒取全血基因组DNA的比较［J］．浙江医学，2010，32（5）：674－676．（收稿日期：2011－05－17修回日期：2011－06－22）百色市新生儿疾病筛查现状及干预措施邓建平（广西百色市新生儿疾病筛查中心，百色市533000）【摘要】目的分析百色市新生儿疾病筛查现状，探讨新生儿疾病筛查存在的问题，提出干预措施，以提高本市新生儿疾病的筛查率。
方法新生儿出生72h后，采足跟血液制成血滤纸片，采用时间分辨法检测血促甲状腺素（TSH）筛查新生儿先天性甲状腺功能减低症（CH）；采用荧光定量法检测血中苯丙氨酸（PHe）含量筛查苯丙酮尿症（PKU）。
结果2006 2010年全市筛查新生儿24672例，筛查率为9．68%（24672/254792）；检出先天性CH12例，检出率为0．49ɢ；未检出苯丙酮尿症病人。
结论我市新生儿疾病筛查率较低，处于区内最低水平，CH 检出率与国内基本相同，开展新生儿疾病筛查，及时进行干预，以减少新生儿智能和体格发育损害，提高出生人口素质。
【关键词】新生儿疾病；筛查；分析；干预措施【中图分类号】R722．1【文献标识码】A【文章编号】0253-4304（2011）10-1366-03我国是人口大国，也是世界上出生缺陷高发的国家之一，每年约有80 120万先天缺陷患儿出生［1］，约占每年出生人口总数的4% 6%。