常规考马斯亮蓝染色液使用说明

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考马斯亮蓝快染

考马斯亮蓝快染
用该方案可以在加入染色液后5-10min内得到染色的蛋白质条带。

该方案背景低，但没有基本方案1敏感。

材料：异丙醇固定液，考马斯亮蓝快染液，10%（v/v）乙酸。

步骤：
1)将聚丙烯酰胺凝胶放在塑料或玻璃容器并以3-5倍体积的异丙醇
固定液覆盖，室温下缓慢摇动10-15min（0.7mm厚的胶）或30-60min（1.5mm厚胶）；
2)倾去固定液，以考马斯亮蓝快染液覆盖凝胶，室温下快速摇动直
至得到想要的亮度（2h至过夜）；
3)倾去染色液，以10%乙酸覆盖凝胶，室温下缓慢摇动≥2h，直
至得到干净的背景。

如需要，换新的10%乙酸；
4)保存；拍照或干燥凝胶。

异丙醇固定液：25%异丙醇，10%乙酸，65%水，室温长期保存；
快速考马斯亮蓝染色液：10%（v/v）乙酸，0.006%（m/V）考马斯亮
蓝G-250，90%水，室温长期保存；
考马斯亮蓝染色液：用固定液配制0.05%（v/v）考马斯亮蓝R-250染
色液。

但是，在加乙酸和水（一般不必过滤）之前
应将考马斯亮蓝R-250溶于甲醇。

室温下溶液可保
存6个月。

如果随保存时间延长出现沉淀，可过滤
去除沉淀获得均一的溶液。

脱色液：5%（v/v）甲醇，7￥（v/v）乙酸，88%水，室温下可保存1
个月。

考马斯亮蓝染色套装使用说明

考马斯亮蓝染色套装使用说明货号：P1305保存：室温保存，至少一年有效。

规格：100ml+500ml产品简介：本考马斯亮蓝染色套装(Commassie Blue Staining Kit)采用了最经典的考马斯亮蓝染色和脱色方法，以考马斯亮蓝G-250为染料，可用于SDS-PAGE或非变性PAGE等蛋白电泳凝胶的常规染色和脱色，或Western 转膜后PAGE胶上残余蛋白的检测。

产品内容：考马斯亮蓝染色液100ml考马斯亮蓝脱色液500ml说明书1份使用方法：1、电泳结束后，取凝胶放入适量考马斯亮蓝染色液中(至少5倍胶体积)，确保染色液可以充分覆盖凝胶。

2、将凝胶置于摇床上缓慢摇动，室温染色至少2小时，低丰度蛋白染色需4小时以上。

3、染色结束后移除染色液，染色液通常可重复利用2-3次，但染色效果会略有影响。

4、将凝胶浸泡于和染色液等量体积的脱色液中，摇床上脱色4-8小时，期间更换3-5次脱色液。

注意事项：1.染色时间4小时以上效果最佳。

2.脱色可根据目的蛋白丰度和脱色效果随时终止，或延长脱色时间。

3.脱色越彻底，检测的蛋白量越低，脱色24小时一般可以检测出0.1ug蛋白量。

4.脱色后，将凝胶保存在水中，拍照或扫描保存图像。

或制成干胶保存。

相关试剂：P1300-500考马斯亮蓝蛋白胶快速染色液PC0020BCA蛋白浓度测定试剂盒PR1400低分子量蛋白MARKERPR1700预染次高分子量蛋白MARKERI1020IPTG溶液(50mg/ml)A101030%丙烯酰胺(29:1)T10705×Tris-甘氨酸电泳缓冲液P1300SDS-PAGE凝胶制备试剂盒。

考马斯亮蓝蛋白胶快速染色液使用说明

考马斯亮蓝蛋白胶快速染色液使用说明货号：P1300规格：500ml组成：溶液A10ml、溶液B500ml保存：2-8℃保存，1年有效。

产品简介：考马斯亮蓝蛋白胶快速染色液是一种即用型快速灵敏而且安全的染液，以考马斯亮蓝G-250为染料，可用于SDS-PAGE或者非变性电泳蛋白凝胶的快速染色，染色时间短，半小时内即可检测到蛋白电泳条带。

使用方法：工作液的配制，取100ml溶液B，加入2ml溶液A，混匀，此为工作液。

此工作液配好后请在一周内使用完，过期效果会有一定的影响。

1.将电泳后的PAGE胶（以8cm×10cm大小为例）取下放入容器中，加入50ml双蒸水或去离子水，加热至沸腾后停止，（可选：继续在脱色摇床上摇动5分钟），弃去水溶液。

2.加入25ml快速染色工作液，加热至沸腾后保持沸腾状态30-60秒，停止加热后继续在脱色摇床上摇动5-10分钟，弃去染色液（此时蛋白条带应已可见）。

3.加入约50ml水，加热至沸腾后保持沸腾状态30-60秒，停止加热后继续在脱色摇床上摇动5-10分钟，换水即可完成脱色，观察结果。

注意事项：1.染色前的清洗步骤（第一步）中，水的质量非常重要，质量越好灵敏度越高，研究证明若用自来水加热清洗，染色效果与灵敏度仅与常规甲醇考马斯亮蓝染色（分子克隆第二版）相同。

2.脱色时可用自来水清洗。

3.若要得到无背景的染色胶，可重复脱色步骤或将胶放在水中过夜。

4.经本产品染色的PAGE胶，胶的缩涨度小于5%，染色后的胶可在水中放置数月而无明显脱色。

5.每次加热后，继续在脱色摇床上摇动5分钟，可增强染色效果。

6.本染色液有轻微腐蚀性，请带手套操作。

相关试剂：P10154×蛋白上样缓冲液（含DTT）P1305考马斯亮蓝染色套装（染色液+脱色液）A101030%丙烯酰胺(29:1)T10705×Tris-甘氨酸电泳缓冲液SP1060SDS-PAGE凝胶制备试剂盒P001210×丽春红染色液。

P0017C 考马斯亮蓝染色脱色液_常规法_

使用说明：
1. 常规染色脱色方法： a. 电泳结束后，取凝胶放入适量考马斯亮蓝染色液中，确保染色液可以充分覆盖凝胶。 b. 置于水平摇床或侧摆摇床上缓慢摇动，室温染色1小时或更长时间。
注：具体的染色时间取决于凝胶的厚度和染色时的温度。凝胶较厚，温度较低，则染色时间宜适当延长。凝胶较薄，温度较高，则染色时间可以适当缩短。通常染色至凝胶的颜色和染色液的颜色非常接近，在染色液中几乎看不清凝胶时，可以认为已染色充分。染色2-4个小时或更长时间不会对最终的染色效果产生负面影响。 c. 倒出染色液。染色液可以回收重复使用至少2-3次。 d. 加入适量考马斯亮蓝染色脱色液，确保脱色液可以充分覆盖凝胶。 e. 置于水平摇床或侧摆摇床上缓慢摇动，室温脱色4-24小时。期间更换脱色液2-4次，直至蓝色背景基本上全部被脱去，并且蛋白条带染色效果达到预期。通常蛋白条带在脱色1-2小时后即可出现。注：脱色期间可以在脱色液中加入一片吸水纸，可以使部分染料吸附在吸水纸上，加快脱色。脱色时间过长也会导致蛋白条带的颜色变浅。 f．完成脱色后，可以把凝胶保存在水中，用于后续的拍照等。保存在水中的凝胶会发生溶涨。如需避免溶涨，可以把胶保存在含20%甘油的水中。长期保存可以制备干胶。 2. 快速染色脱色方法： a. 电泳结束后，取胶放入适量考马斯亮蓝染色液中，微波炉加热至接近沸腾或刚刚沸腾，立即停止加热。通常对于胶浓度大于10％的胶比较坚韧，在发生煮沸时不易破损；对于胶浓度小于10%的胶，宜尽量避免煮沸，以免出现胶碎裂的情况。 b. 随后在染色液温度较高的情况下，摇床上摇动5-10分钟。 c. 倒出染色液。染色液可以回收重复使用至少2-3次。 d. 加入适量考马斯亮蓝染色脱色液，确保染色液可以充分覆盖凝胶。 e. 微波炉加热至接近沸腾或刚刚沸腾，立即停止加热。 f. 随后在脱色液温度较高的情况下，在摇床上摇动5-10分钟。此时通常可以观鲜的脱色液，重复步骤e和步骤f，直至蓝色背景基本上全部被脱去，蛋白条带染色效果达到预期。 h. 完成脱色后，可以把凝胶保存在水中，用于后续的拍照等。保存在水中的凝胶会发生溶涨。如需避免溶涨，可以把胶保

考马斯亮蓝染色及丽春红染色操作规程

考马斯亮蓝染色及丽春红染色操作规程附录7:考马斯亮蓝染色及丽春红染色操作规程
1. 考马斯亮蓝染色
1.1 染色液配制
醋酸脱色液。

5%(V/V)甲醇，7%(V/V)醋酸，88%HO。

2
固定液。

50%(V/V)甲醇，10%(V/V)冰醋酸，40%HO。

2
考马斯亮蓝染液。

50%(V/V)甲醇，0.05%(V/V)考马斯亮蓝，10%(V/V)冰醋酸，40%HO。

2
1.2.实验步骤
将胶条置于固定液中，摇床固定1 h;? 倒掉固定液，加考马斯亮蓝染液染色2 h;?去离子水漂洗1-2次，脱色液漂洗1次;? 脱色液中脱色1 h，最后置于去离子水中。

2. 丽春红染色
2.1. 染色液配制
10×丽春红染液
丽春红S 2g
三氯乙酸 30g
磺基水杨酸 30g
加蒸馏水至 100ml。

使用时将其稀释10倍，即为应用液。

2.2. 实验步骤转膜完成后，取出膜在甲醇里泡1分钟;?将膜于双蒸水中漂洗数次后，浸入丽春红染液着色;? 室温下，于摇床上轻摇5-30 min;? 将染好的膜置于双蒸水中漂洗数次，不要洗的太久，只需把表面的丽春红洗掉即可，此时可看到红色的蛋白条带。

考马斯亮蓝快速染色液

考马斯亮蓝快速染色液
采用以下方法制备：
1)称取0.05-0.2g的考马斯亮蓝G-250，加入30-50ml的无水乙醇搅拌至溶解完全；
2)加入1.5-5g无水硫酸铜或三氯化铬，加入500-800ml超纯水，利用磁力搅拌器以200-600rpm/min的速度搅拌0.5-2小时；
3)加入10-50ml的冰乙酸搅拌至均匀，然后加入10-50ml浓盐酸(也可采用85％磷酸，效果相同)搅拌均匀；
4)加入超纯水定容至1L，采用10000rpm高速离心5min(也可使用普通定性滤纸负抽滤的方式，对最终结果无影响)去除沉淀后即可获得考马斯亮杀菌防腐剂蓝快速染色液。

染色脱色方法如下：1.清洗：聚丙烯酰胺凝胶电泳结束后取出胶板，切割舍弃浓缩胶瓦克，加入超纯水清洗凝胶一次，再次加入超纯水微波炉中高火加热至沸腾后取出凝胶；2.染色：凝胶尽量滤干水分，放入有盖耐热容器加入快速低刺激考马斯亮蓝染色液，染液需要保证完全覆盖凝胶表面，使用微波炉中高火加热煮沸2-3min；3.初步脱色：取出凝胶用超纯水冲洗凝胶表面残留染液(此时在目的蛋白量较大情况下即可初步看到染色条带)，然后加入超纯水使用微波炉中高火加热3-5min即完成初步脱色(此时可以清晰观察到染色蛋白条带，但凝胶背景色并未完全脱净)；4.彻底脱色：取出凝胶后加入150mMNaCl水溶液，溶液量以完全浸没凝胶且脱色过程中脱色液不坏洒出为度，水平摇床室温50rpm脱色1h即可彻底脱净背景色。

考马斯亮蓝法完整版

天津医科大学药学院《体内药物分析》第三章——
考马斯亮蓝法（Bradford法）
徐亮
xuliang@
Tianjin Medical University
一、基本原理
酸性溶液两者结合，使染料溶液的最大吸收峰的位置，由465nm变为595nm，溶液的颜色也由棕黑色变为兰色。
四、Bradford法的优缺点
1、优点
（1）灵敏度高：蛋白质－染料复合物具有很高的消光系数，因此蛋白质测定的灵敏度较高，最低检出量为 1ug蛋白质。
（2）测定快速、简便：染料与蛋白质的结合，大约只需2分钟，结合物的颜色在1小时内是稳定的。
（3）干扰物质少。
四、Bradford法的优缺点
2、缺点
用于层析柱流出液的检测；核酸的吸收可以校正
耗费时间长；操作要严格计时；颜色深浅随不同蛋白质变化
考马斯亮蓝法 (Bradford法)
灵敏度最高 1～5g
快速 5～15分钟
考马斯亮蓝染料
与蛋白质结合时，其 max 由 465nm 变为595nm
强碱性缓冲液； TritonX-100; SDS
考马斯亮蓝试剂（ml） 5 5 5 5 5 5 5
摇匀，1h内以0号管为空白对照,在595nm处比色
A595nm
以A595nm为纵坐标，标准蛋白含量为横坐标（六个点为10ug、20 ug、30 ug、40 ug、50 ug、60 ug），在坐标轴上绘制标准曲线。
2、样品中蛋白质含量的测定
另取两支干净的试管（做一重复），加入合适浓度的待测样品，使其测定值在标准曲线的范围内，测定方法同上，由样品液的吸光度查标准曲线即可求出含量。
ug/ml蛋白溶液。
2. 器材：（1）可见光分光光度计（2）旋涡混合器

考马斯亮蓝快速染色液使用说明

考马斯亮蓝快速染色液产品编号产品名称包装P0017 考马斯亮蓝快速染色液 250ml产品简介：考马斯亮蓝快速染色液(Commassie Blue Fast Staining Solution)是以考马斯亮蓝G250为染料，可用于SDS-PAGE或非变性PAGE等蛋白电泳胶的快速、高灵敏染色，或Western转膜后PAGE胶上残余蛋白的检测。

本考马斯亮蓝快速染色液是一种无毒，无刺激性气味的高度环保型染色液。

普通的常规方法需使用剧毒的甲醇及强刺激性的乙酸，而碧云天生产的考马斯亮蓝快速染色液则采取全新配方，实现了无毒和无刺激性气味。

本考马斯亮蓝快速染色液只需一小时或更短时间就可以检测到低达100ng的蛋白电泳条带，而常规方法需3小时以上。

本试剂盒可以进行高灵敏染色，最低可以清楚检测到10ng的蛋白电泳条带，参考图1。

蛋白上样量： 10μg 5μg 2μg 1μg 500ng 200ng 100ng 50ng 20ng 10ng 5ng 2ng 1ng图1. 使用碧云天的考马斯亮蓝快速染色液对不同上样量的BSA蛋白样品用10% SDS-PAGE胶电泳后的两次染色结果。

无需对蛋白和凝胶进行固定，可以不进行脱色，操作更加简单。

本染色液和质谱分析兼容，即经过本染色液染色的蛋白条带或蛋白点可以用于后续的质谱分析。

包装清单：产品编号产品名称包装P0017 考马斯亮蓝快速染色液250ml—说明书1份保存条件：4℃保存，一年有效。

注意事项：本染色液呈酸性，有轻微腐蚀性，使用时请作必要防护。

如果使用微波炉加热，请特别注意避免沸腾。

以免因暴沸而导致凝胶碎裂。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明：1. 电泳结束后，取胶放入约50-100ml蒸馏水中，在摇床上摇动5分钟，倒弃液体，再重复两次，共洗涤三次。

注：本步骤的目的是为了洗去凝胶中的SDS等干扰物质。

如果不能充分去除SDS会导致背景较高，如果胶非常厚，每次的洗涤时间需适当延长并且洗涤次数也需适当增加。

PH0357 考马斯亮蓝快速染色液实验手册

PH0357|考马斯亮蓝快速染色液（Commassie Blue Fast Staining Solution）Catalog No：PH0357Size：☐500mL Store at4℃◆简介考马斯亮蓝蛋白胶快速染色液是一种即用型快速灵敏而且安全的染液，以考马斯亮蓝G-250为染料，可用于SDS-PAGE 或者非变性电泳蛋白凝胶的快速染色，染色时间短，半小时内即可检测到蛋白电泳条带。

◆保存4℃保存，有效期12个月◆使用参考工作液的配制，取100ml溶液B，加入2ml溶液A，混匀，此为工作液。

此工作液配好后请在一周内使用完，过期效果会有一定的影响。

2.加入25ml快速染色工作液，加热至沸腾后保持沸腾状态30-60秒，停止加热后继续在脱色摇床上摇动5-10分钟，弃去染色液（此时蛋白条带应已可见）。

3.加入约50ml水，加热至沸腾后保持沸腾状态30-60秒，停止加热后继续在脱色摇床上摇动5-10分钟，换水即可完成脱色，观察结果。

◆注意事项1.染色前的清洗步骤（第一步）中，水的质量非常重要，质量越好灵敏度越高，研究证明若用自来水加热清洗，染色效果与灵敏度仅与常规甲醇考马斯亮蓝染色（分子克隆第二版）相同。

2.脱色时可用自来水清洗。

3.若要得到无背景的染色胶，可重复脱色步骤或将胶放在水中过夜。

4.经本染色液染色的PAGE胶，胶的缩涨度小于5%，染色后的胶可在水中放置数月而无明显脱色。

5.每次加热后，继续在脱色摇床上摇动5分钟，可增强染色效果。

6.本染色液有轻微腐蚀性，请带手套操作。

考马斯亮蓝染色液(常规法)

考马斯亮蓝染色液(常规法)产品简介：本考马斯亮蓝染色液(Commassie Blue Staining Solution)是以考马斯亮蓝R250为染料，可用于SDS-PAGE或非变性PAGE 等蛋白电泳胶的常规染色，或Western转膜后PAGE胶上残余蛋白的检测。

本染色液可以和碧云天的考马斯亮蓝染色脱色液(P0017C)配套使用。

使用本染色液进行染色，采用常规染色方法需至少1小时可以完成染色；采用快速染色方法数分钟即可完成染色。

本染色液经过改良，不含有毒的甲醇，但含有刺激性气味的乙酸。

保存条件：室温保存，至少一年有效。

注意事项：需自备脱色液。

脱色液可以选购碧云天的考马斯亮蓝染色脱色液(P0017C)。

可以使用枪头盒或适当大小的培养皿作为染色和脱色的容器。

本染色液呈酸性，有轻微腐蚀性，使用时请作必要防护。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明：1. 常规染色脱色方法：a. 电泳结束后，取凝胶放入适量考马斯亮蓝染色液中，确保染色液可以充分覆盖凝胶。

b. 置于水平摇床或侧摆摇床上缓慢摇动，室温染色1小时或更长时间。

注：具体的染色时间取决于凝胶的厚度和染色时的温度。

凝胶较厚，温度较低，则染色时间宜适当延长。

凝胶较薄，温度较高，则染色时间可以适当缩短。

通常染色至凝胶的颜色和染色液的颜色非常接近，在染色液中几乎看不清凝胶时，可以认为已染色充分。

染色2-4个小时或更长时间不会对最终的染色效果产生负面影响。

c.倒出染色液。

染色液可以回收重复使用至少2-3次。

d.加入适量脱色液，确保脱色液可以充分覆盖凝胶。

注：脱色液可以选购碧云天的考马斯亮蓝染色脱色液(P0017C)；如果希望自行配制，推荐的脱色液配方为：40%乙醇，10%乙酸，50％蒸馏水。

也可以使用其它适当的脱色液。

e.置于水平摇床或侧摆摇床上缓慢摇动，室温脱色4-24小时。

期间更换脱色液2-4次，直至蓝色背景基本上全部被脱去，并且蛋白条带染色效果达到预期。

考马斯亮蓝法

考马斯亮蓝测定蛋白质含量一、实验原理考马斯亮兰G-250在酸性溶液时呈棕红色，当与蛋白质结合后变为蓝色，且在蛋白质一定浓度范围内符合比尔定律，可在595nm处比色测定。

在3～5分钟即成大量吸收，至少稳定1小时。

在10～1000μg/mL范围内，吸光值与蛋白质浓度成正比。

是目前常用方法之一。

二、实验材料、器材与试剂1.材料结晶牛血清白蛋白。

2.器材（1）723分光光度计；（2）试管及试管架；（3）各型号吸量管；（4）坐标纸；（5）记号笔。

3.试剂（1）考马斯亮兰G-250染色液：取考马斯亮兰G-250 100mg溶于50mL95%乙醇中，加100mL85%磷酸，加水稀释至1升。

（2）标准蛋白溶液：用牛血清白蛋白，预先经微量凯氏定蛋法测定蛋白质含量，根据其纯度，配制成1000μg/mL的蛋白质标准溶液。

标准原液的配制：在分析天平上精确称取0.1g结晶牛血清白蛋白,于小烧杯内，加入少量蒸馏水溶解后转入100mL容量瓶中，烧杯内的残液用少量蒸馏水冲洗数次，冲洗液一并倒入容量瓶中，最后用蒸馏水定容至刻度。

配制成标准原液，其中牛血清白蛋白浓度为1000μg/mL。

(3)样品液：准确称取小麦叶片（或绿豆芽下胚轴）约200mg,放入研钵中，加入蒸馏水在冰浴中研成匀浆，转移到离心管中，于4000r/min离心10min,将上清液倒入10mL容量瓶中，再向残渣中加入2.0mL蒸馏水悬浮后以4000r/min再离心10min,合并上清液，定容至刻度。

三、实验方法1. 分别取8支试管，编号，按下表加入试剂，混匀，室温放置5～30分钟。

标准蛋白溶液（1000μg/mL）未知样品1未知样品2管号 1 2 3 4 5 6 7 8 样品/mL0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.0 1.0 水/mL 1.0 0.8 0.6 0.4 0.2 0 0 0 蛋白质含量/μg0 200 400 600 800 1000 待测待测染色液(mL)5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.02.绘制标准曲线：用723分光光度计在595nm处比色。

考马斯亮蓝快速染色液使用说明

考马斯亮蓝快速染色液使用说明考马斯亮蓝快速染色液是一种用于染色的化学药剂，适用于各种纺织品和织物，特别是棉和亚麻。

它能够以快速、均匀和持久的方式将颜色渗透到纤维中，使其具有鲜艳且持久的效果。

下面是考马斯亮蓝快速染色液的使用说明：1.准备工作首先，确保工作区域干净整洁，以防止灰尘和污垢附着在待染物品上。

同时，确保待染物品洗净并完全干燥，以免影响染色效果。

2.预备染料溶液在染色前，您需要制作考马斯亮蓝快速染色液的溶液。

按照包装上的指示，将适量的染料粉末加入到一定量的水中，并搅拌直至完全溶解。

请务必遵循正确的浓度和比例，以获得理想的染色效果。

3.浸泡待染物品将待染物品放入染色溶液中，确保其完全浸泡。

您可以使用盆子、桶或染缸来容纳溶液和物品，根据需求选择合适的容器尺寸。

确保物品可以自由活动，以确保染料均匀渗透到整个纤维中。

4.时间控制染色时间是控制染色深浅和颜色饱和度的关键。

根据您想要的颜色强度和深浅程度，选择适当的染色时间。

通常，较长的染色时间会产生更深的颜色，而较短的染色时间则会产生较浅的颜色。

在染色过程中，建议轻轻搅拌物品，以确保染料均匀分布。

5.清洗和固定颜色在染色时间结束后，将物品从染色溶液中取出，并用清水彻底冲洗。

这有助于清除多余的染料和杂质，以确保染料牢固地附着在纤维上，并防止晕染。

您可以使用温水进行冲洗，但请注意避免温度过高，以避免纤维收缩或变形。

6.晾干和修整彻底冲洗后，将物品晾干。

您可以将物品挂起或平放在通风良好的区域，直至完全干燥。

确保物品变得干燥后，您可以对其进行修整，如剪裁、熨烫等，以便达到所需的最终效果。

需要注意的是，染色液和染料是化学药剂，使用时必须遵循以下安全措施：-避免直接接触染料和染色液，尽量佩戴手套和护目镜等个人防护装备。

-在使用过程中，务必将染料和染色液存放在儿童无法触及的地方。

-在染色过程中，确保使用在通风良好的区域，并避免吸入染料和染色液的气味。

-如果发生意外，如染料或染色液溅入眼睛或皮肤上，应立即用清水冲洗，并寻求医生的帮助。

常规考马斯亮蓝染色液使用说明

常规考马斯亮蓝染色液使用说明考马斯亮蓝染色液是一种用于织物染色的常规染色剂。

它可以为织物提供均匀的染色效果，并能提高织物的色牢度。

本文将详细介绍考马斯亮蓝染色液的使用方法和注意事项。

一、准备工作1.准备染色液：按照需要染色的织物数量，准备足够的考马斯亮蓝染色液。

2.准备清洁剂：在染色前，务必将织物彻底清洗干净，去除污渍和油渍。

3.准备染色器具：选择适合染色的容器，如不锈钢盆子或塑料桶。

确保容器干净无杂质。

4.配置染色溶液：按照染色液的配方，将考马斯亮蓝染色液与适量的水混合，搅拌均匀。

二、染色过程1.将清洗过的织物放入染色容器中。

2.将配好的染色溶液倒入染色容器，确保织物完全浸泡在溶液中。

3.搅拌染色溶液，使其均匀分布在织物上。

4.将染色容器放置在适当的染色环境中。

根据织物的需要，可以选择冷染、温染或热染。

在染色过程中，保持温度恒定。

5.根据染色效果要求，定时检查染色结果。

如果需要更深的颜色，请延长染色时间；如果需要较浅的颜色，请减少染色时间。

6.染色时间到达后，取出织物，用清水冲洗干净，直到水中不再有着色剂残留。

7.将染过的织物晾干。

三、注意事项1.染色前建议进行测试。

在染色的一小块织物上进行测试，以确定染色效果和颜色的深浅程度。

2.染色过程中，不要叠放织物，以免染色不均匀。

3.手套和保护眼睛。

由于染色液可能对人体皮肤和眼睛有刺激性，染色时请注意保护措施。

4.染色结束后记得及时清洗染色工具，以免留下染色剂残留。

四、存储注意事项1.考马斯亮蓝染色液应存放在避光、干燥、凉爽的地方，远离火源和热源。

2.染色液应储存在密封的容器中，以防止挥发和泄露。

3.存放时请注意染色液的有效期。

过期的染色液不宜使用，以免影响染色效果。

总之，使用考马斯亮蓝染色液进行织物染色需要仔细遵循使用说明和注意事项，以确保染色效果和使用安全。

希望以上信息能对您有所帮助。

考马斯亮蓝快速染色液使用说明

色，可以重复2-3次。注：染色时如果把凝胶和染色液一起放置在微波炉中适当加热，可以大大加快染色速度。但加热时宜尽量避免沸腾，以免出现因暴沸而导致的凝胶碎裂。 4. 染色至看到清晰的目标蛋白条带后即可停止染色。弃染色液，加入适量的蒸馏水，停止染色反应。然后即可拍照记录。注：通常使用本染色液染色后背景非常低，如果希望获得更加清晰的蛋白条带，可以加入适量的室温蒸馏水进行洗涤。通过蒸馏水洗涤可以进一步降低背景。在4℃蒸馏水中浸泡过夜可以获得背景更低，条带更清晰的条带。在次日对4℃蒸馏水浸泡过夜的已经进行了染色的凝胶再同前一天一样进行染色和洗涤可以进一步改善染色效果，获得更好的考染蛋白条带。
蛋白上样量： 10μg 5μg 2μg 1μg 500ng 200ng 100ng 50ng 20ng 10ng 5ng 2ng 1ng
图1. 使用碧云天的考马斯亮蓝快速染色液对不同上样量的BSA蛋白样品用10% SDS-PAGE胶电泳后的两次染色结果。
无需对蛋白和凝胶进行固定，可以不进行脱色，操作更加简单。本染色液和质谱分析兼容，即经过本染色液染色的蛋白条带或蛋白点可以用于后续的质谱分析。
常见问题：
1. 无染色条带：可能上样量太少，建议电泳时加适当量的BSA等作为阳性对照。 2. 背景太高：可能杂质没有除尽，建议延长最初的蒸馏水洗涤时间或增加洗涤次数。也可以在完成染色后，把凝胶放置在
蒸馏水中在室温或4℃进行洗涤。在4℃蒸馏水中浸泡过夜，通常可以取得较好的脱色效果。 3. 染色条带的灵敏度不够理想：可以使用考马斯亮蓝快速染色液进行重复染色，重复染色可以改善染色效果。在加热情况
本考马斯亮蓝快速染色液是一种无毒，无刺激性气味的高度环保型染色液。普通的常规方法需使用剧毒的甲醇及强刺激性的乙酸，而碧云天生产的考马斯亮蓝快速染色液则采取全新配方，实现了无毒和无刺激性气味。

常规考马斯亮蓝染色液使用说明

常规考马斯亮蓝染色液使用说明货号：P1310规格：100mL/500mL保存：室温保存，有效期12个月。

产品说明：考马斯亮蓝染色液(Commassie Blue Staining Solution)是以考马斯亮蓝R250为染料可用于SDS-PAGE或非变性PAGE等蛋白电泳胶的常规染色或Western转膜后PAGE胶上残余蛋白的检测。

采用常规染色方法需至少1h，采用快速染色方法一般数分钟即可。

本染色液经过改良，不含有毒的甲醇，但含有刺激性气味的乙酸。

自备材料：水平摇床或侧摆摇床、蒸馏水、20%甘油水溶液、(可选)加热装置操作步骤(仅供参考)：(一)常规染色脱色方法1、PAGE电泳结束后取凝胶放入适量考马斯亮蓝染色液中，确保染色液可以充分覆盖凝胶。

2、置于水平摇床或侧摆摇床上缓慢摇动，室温染色1小时或更长时间。

具体的染色时间取决于凝胶的厚度和染色时的温度。

凝胶较厚，温度较低，则染色时间宜适当延长。

凝胶较薄，温度较高，则染色时间可以适当缩短。

通常染色至凝胶的颜色和染色液的颜色非常接近，在染色液中几乎看不清凝胶时，可以认为已染色充分。

染色2～4个小时或更长时间不会对最终的染色效果产生负面影响。

3、倒出染色液。

染色液可以回收重复使用2～3次。

4、加入适量脱色液，确保脱色液可以充分覆盖凝胶。

推荐脱色液的配方是：40%乙醇，10%乙酸，50％蒸馏水。

5、置于水平摇床或侧摆摇床上缓慢摇动，室温脱色4～24h。

期间更换脱色液2～4次，直至蓝色背景基本上全部被脱去，并且蛋白条带染色效果达到预期。

通常蛋白条带在脱色1～2h后即可出现。

6、完成脱色后把凝胶保存在水中，用于后续的拍照等。

保存在水中的凝胶会发生溶涨。

如需避免溶涨，可以把胶保存在含20%甘油水溶液中，长期保存可以制备干胶。

(二)快速染色脱色方法1、PAGE电泳结束后取胶放入适量考马斯亮蓝染色液中，微波炉加热至接近沸腾或刚刚沸腾，立即停止加热。

通常对于胶浓度大于10％的胶比较坚韧，在发生煮沸时不易破损；对于胶浓度小于10%的胶，宜尽量避免煮沸，以免出现胶碎裂的情况。

考马斯亮蓝法——完整版

Tianjin Medical University
一、基本原理
酸性溶液两者结合，使染料溶液的最大吸收峰的位置，由465nm变为595nm，溶液的颜色也由棕黑色变为兰色。
二、试剂与器材
1. 试剂：
（1）考马斯亮蓝试剂：考马斯亮蓝G—250 100mg溶于50ml 95%乙醇，加入100ml
（1）由于各种蛋白质中的精氨酸和芳香族氨基酸的含量不同，因此Bradford法用于不同蛋白质测定时有较大的偏差，在制作标准曲线时最好选用 γ—球蛋白为标准蛋白质，以减少这方面的偏差。
（2）仍有一些物质干扰此法的测定，主要的干扰物质有：去污剂、 Triton X-100、十二烷基硫酸钠（SDS）和0.1M 的NaOH
三、操作方法
1、标准曲线的制作
试管编号
0123456
100ug/ml标准蛋白（ml） 0.0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6
0.15mol/L NaCl （ml） 1 0.9 0.8 0.7 0.6 0.5 0.4
考马斯亮蓝试剂（ml） 5 5 5 5 5 5 5
摇匀，1h内以0号管为空白对照,在595nm处比色
最好的方法；干扰物质少；颜色稳定；颜色深浅随不同
双缩脲反应；磷钼酸－磷钨酸试剂被 Tyr 和 Phe 还原
非蛋白氮（可用三氯乙酸沉淀蛋白质而分离）
硫酸铵； Tris缓冲液；某些氨基酸
各种嘌吟和嘧啶；各种核苷酸
硫酸铵； Tris缓冲液；甘氨酸；各种硫醇
用于标准蛋白质含量的准确测定；干扰少；费时太长
用于快速测定，但不太灵敏；不同蛋白质显色相似
用于层析柱流出液的检测；核酸的吸收可以校正

考马斯亮蓝试剂使用的具体操作

蛋白质含量测定具体操作——考马斯亮蓝法（南京建成，货号：A045-2）一、实验目的：样品蛋白质的含量测定（本实验为小鼠肝组织10%的组织匀浆上清液样本）二、测定的原理：蛋白质中有-NH3+基团，当棕红色的考马斯亮蓝显色剂加入蛋白质样品中，会发生络合反应，使溶液变成蓝色，通过吸光度的测定来计算蛋白质的含量。

三、实验材料a)仪器：紫外分光光度计、涡旋混匀器、比色皿、2mlEP管、5mlEP管、标记笔、b)试剂：考马斯亮蓝试剂盒、待测样品、双蒸水四、实验步骤a)将考马斯亮蓝试剂一贮备液：双蒸水=1:4进行配置，本实验需要75ml,即取出贮备液15ml和60ml的双蒸水进行试剂一应用液的配制，备用；b)蛋白质标准品从20℃冰箱中取出，融冻，暂时放在4℃冰箱保存；c)标记好25个2ml的EP管、5mlEP管，按顺序放好；准备好200ul和1000ul的移液器枪头d)将各10%的肝组织匀浆上清液从冰箱中取出，融冻，备用；e)将10%的肝组织匀浆上清配制成1%的肝组织匀浆上清，即使用移液器移取0.1ml放于对应的2mlEP管中，分别加入0.9ml的生理盐水，使用涡旋混匀器适当混匀各个组织匀浆；f)将处理后的样品按照下面的操作表，将200ul量程的移液器调至50ul,1000ul量程的调至1000ulg)待样品和标准品加完以后，使用涡旋混匀器混匀，静置10minh)准备好比色皿，和纸i)将紫外分光光度计的波长调至595nm，双蒸水调零，测定各管的吸光度。

j)根据公式：待测样品蛋白=测定管OD值−空白管OD值标准管OD值−空白管OD值∗标准品蛋白浓度五、注意事项a)此法灵敏度高，反应后的显色液可以在2个小时之内是稳定的；b)样本的蛋白浓度必须使用生理盐水稀释至1.3g/l以下，在该范围内呈线性关系；c)考马斯亮蓝法测定组织蛋白的组织匀浆的浓度一般在0.5%-2%；d)不可用石英比色皿，可用玻璃或塑料比色皿，测完成后立即用 95%乙醇冲洗使用完比色皿，使用95乙醇立马清洗比色皿，洗去显色剂；。

考马斯亮蓝染色法

考马斯亮蓝染色法考马斯亮蓝染色法——标准方法1．电泳后，将凝胶转入一洁净的玻璃或塑料容器中。

加入5倍于凝胶体积的0．25％考马斯亮蓝R—250(溶解于50％甲醇和10％乙酸中)。

2．室温下振摇温育4h至过夜。

3．去除染色液，收集保存可重复使用20～40次。

4．依次在25％甲醇、7．5％乙酸中室温振摇下脱色。

灵敏度为0．1～0．5ttg蛋白／每条带。

注：①使用加热的染液或脱色液可以缩短染色或脱色的时间。

将染液或脱色液在微波炉或水浴中加热(大约50-6013)。

染色时间可缩短至20min，脱色时间约1—2h。

②加入泡沫橡胶(海绵)、羊毛状物或其他物品吸收染料，可以加快脱色时间，特别是在室温下脱色时。

考马斯亮蓝染色法——快速方法1．将凝胶放入一洁净的玻璃或塑料培养皿中加入5倍于凝胶体积的0．25％考马斯亮蓝R-250(溶解于50％三氯乙酸中)。

2．室温下振摇温育20min。

3．去除染色液，收集保存可重复使用多次，用水洗去未与凝胶结合的染料。

4．加入数倍体积的脱色液(25％甲醇、7％乙酸)。

必要时更换脱色液，将凝胶加温或在脱色液中放入海绵、滤纸片等吸收残余的染料，有助于加快脱色。

灵敏度为1．0ug蛋白／每条带。

考马斯亮蓝染色法——最高灵敏度1．染色前，考马斯亮蓝G-250(系考马斯亮蓝R-250的二甲基化衍生物)必须纯化。

因为商品制剂中的杂质可增强染色背景。

在250m17．5％乙酸中溶解4g染料，加热到70℃；加入44g硫酸铵，溶解后，冷却过滤或置室温离心(3000g，10min)，去除上清液，让染料干燥。

2．配制染色液：在500m1 2％磷酸中溶解30g硫酸铵，待其完全溶解后，加入溶于10m1水中的0．5g 纯化的考马斯亮蓝G—250。

室温保存。

3．电泳后，将凝胶放入一洁净的玻璃或塑料容器中加入5倍于凝胶体积的12．5％三氯乙酸。

4．室温下振摇温育1h或更长时间。

5．排干液体。

摇动考马斯亮蓝G—250染液，使大颗粒胶体分散，加至凝胶内。

考马斯亮蓝染色法测定蛋白质含量

考马斯亮蓝染色法测定蛋白质含量一、实验目的掌握考马斯亮蓝法测定蛋白质含量的原理和方法。

学习分光光度计的原理及使用方法。

二、实验原理三、实验步骤试剂试管编号0 1 2 3 4 5 6 7标准蛋白质溶液/ml 0.00 0.02 0.04 0.06 0.08 0.1 样品0.1 样品0.1相当于蛋白质含量/微克0.00 20 40 60 80 100 未知未知蒸馏水/ml 0.1 0.08 0.06 0.04 0.02 0 0 0 考马斯亮蓝染液/ml 3 3 3 3 3 3 3 31、打开分光光度计，预热30min。

2、取8支洁净的干燥试管，按上表进行编号，0~5号用于标准曲线的绘制，6号、7号用于样品溶液的测定。

3、取微量注射器，用蒸馏水清洗3次，再用标准蛋白质溶液润洗2次。

按上表在0~5号试管中加入标准蛋白质溶液，然后用蒸馏水洗3次，再按上表在0~5号试管中加入相应含量的蒸馏水。

4、微量注射器用样品润洗2次，抽取100微克的样品加入到6号试管，再抽取100微克加到7号试管。

用蒸馏水清洗微量注射器。

5、取5ml的移液管，用蒸馏水清洗3次，用考马斯亮蓝染液润洗2次。

在0~7号试管中各加入3.0ml的考马斯亮蓝染液。

振荡试管，混合均匀。

6、待其充分反应（约2分钟）后，用分光光度计分别测它的吸光值。

7、用0~5号的数据。

以蛋白质浓度为横坐标，光吸收值为纵坐标，绘制标准曲线。

8、由样品液的吸光值查标准曲线求出蛋白质含量。

四、实验结果与分析试管编号0 1 2 3 4 5 6 7A595 0 0.383 0.603 0.871 1.093 1.189 0.876 0.836样品溶液吸光值=（0.876+0.836）/2=0.856查标准曲线得样品液的蛋白质含量为66.0微克分析：考马斯亮蓝G-250能与蛋白质结合，染液与蛋白质结合后引起染料最大吸收峰的改变，从464nm变为595nm，光吸收值增加。

同时蛋白质——染料复合物具有高的消光系数，大大提高了蛋白质测定的灵敏度，最低检出量为1微克蛋白质。