菠萝蛋白酶的提取实验报告

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菠萝蛋白酶的含量测定

菠萝蛋白酶的来源与应用菠萝蛋白酶主要来自于菠萝的茎叶皮儿。菠萝蛋白酶的应用：一、菠萝蛋白酶在食品加工业的应用 1、焙烤食品：将菠萝蛋白酶加入生面团中，可使面筋降解，生面团被软化后易于加工。并能提高饼干与面包的口感与品质。
2、干酪：用于干酪素的凝结。
3、肉类的嫩化：菠萝蛋白酶将肉类蛋白质的大分子蛋白质水解为易吸收的小分子氨基酸和蛋白质。可广泛地应用于肉制品的精加工。 4、菠萝蛋白酶在其它食品加工业中的应用，有人已经用菠萝蛋白酶来增加豆饼和豆粉的PDI值和NSI值，从而生产出可溶性蛋白制品及含豆粉的早餐、谷类食物和饮料。其它还有生产脱水豆类、婴儿食品和人造黄油；澄清苹果汁；制造软糖；为病人提供可消化的食品；给
四、菠萝蛋白酶制剂在饲料中的应用
将菠萝蛋白酶加入饲料配方或直接混合在饲料中，可以大大提高蛋白质的利用率和转化率，并能开发更广的蛋白源，从而降低饲料成本。
提取工艺
压榨菠萝下脚料
去杂质
加稳定剂稳定液
加单宁单宁沉淀物溶液弃去
汁液残渣（弃去）干燥酶制品
澄清液
沉淀物（弃去）
洗脱滤液
沉淀弃去
含量的测定 0.1M的牛血清蛋白
浓度mg/ml
标准蛋白（ml）磷酸缓冲液（ml）考马斯亮蓝（ml）测A595
0 0.002 0.004 0.008 0.012 0.016 0.02

菠萝蛋白酶的提取纯化及化学修饰对其活性的影响

菠萝蛋白酶的提取纯化及化学修饰对其活性的影响一．实验目的与要求

（1）掌握菠萝蛋白酶的制备与纯化的基本原理和方法

（2）掌握菠萝蛋白酶活力测定方法

（3）菠萝蛋白酶的稳定性研究

（4）菠萝蛋白酶的修饰

（5）比较修饰酶与未修饰酶的活力

二．实验原理

菠萝蛋白酶是典型的巯基蛋白质,广泛存在于菠萝果实、芽、叶、茎中,分子量为33000,能分解蛋白质、肽、脂和酰胺等。它的水解活性较木瓜酶高10倍以上。因此有广泛的用途。它作为一种食品添加剂可用于肉质嫩化、啤酒澄清。还用于胶、水解蛋白的生产,在医药上它可在生物体内溶解纤维蛋白及血凝块。因此可以治疗水肿及多种炎症,它能迅速溶痂。对正常组织无害,不影响植皮,适用于中小面积深度烧伤的治疗。

在稀盐溶液中，蛋白质的溶解度随盐浓度的增大而增大，这种现象称为盐溶。当盐浓度增加到一定量时，其溶解度又逐渐减小，直至在溶液中沉降出来，即为盐析。加入中性盐后，由于中性盐对水分子的亲和力大于蛋白质，于是蛋白质分子周围的水化膜层减弱乃至消失。同时，中性盐加入蛋白质溶液后，由于离子强度发生改变，蛋白质表面电荷大量被中和，更加导致蛋白溶解度降低，使蛋白质分子之间相互聚焦而沉淀。

凝胶层析是广泛应用于蛋白质、酶、和核酸等生物高分子分离分析的有效方法之一，它是以被分离物质的分子量差异为基础的一种层析方法。分子量大于允许进入凝胶“网眼”的范围的物质完全被凝胶排阻，随洗脱液先流出层析液，分子量小的物质较晚地流出柱。本实验采用葡聚糖凝胶Sephadex G-75作为固相载体，它适用于1500-30000之间的多肽与蛋白质的分离。

菠萝蛋白酶的提纯

预习报告: 设计性实验——菠萝蛋白酶提取

一、实验目的：

（1）系统地学习和掌握蛋白质分离纯化技术的原理及实验技术。

（2）熟练掌握测定蛋白质含量、蛋白酶活性检测等实验技术。

二、实验原理：

菠萝蛋白酶是一种具有消炎，抗水肿作用的疏基酶，能分解蛋白质、酯和酞胺。菠萝蛋白酶一般从菠萝汁或菠萝废皮中提取，为浅黄色无定形粉末，分子量33000，微有异臭，微溶于水，不溶于乙醇、丙酮、氯仿，乙醚，等电点9.55 。

（1）测蛋白质含量：（考马斯亮兰法）【1】

考马斯亮兰是一种染料，在酸性溶液中，它能与蛋白质结合形成蛋白质一染料的兰色复合物，在595nm波长下有最大吸收值，其吸光度值与蛋白质浓度成正比。并且在低浓度时，与蛋白质浓度的关系服从比尔定律，但标准曲线有轻微的非线性，因而不能用Beer定律进行计算，而只能用标准曲线来测定未知蛋白质的浓度。

（2）测菠萝蛋白酶活性【2】

酪蛋白是一种蛋白质，它被菠萝蛋白酶降解生成的酪氨酸在紫外光区275nm 处有吸收峰，根据测定275nm 处的吸收值，可以判定菠萝蛋白酶的酶活力。吸收值的大小与酪氨酸含量的多少有关，吸收值大说明酪氨酸含量高，也就是说菠萝蛋白酶分解的酪蛋白多，酶活力高。

（3）提纯菠萝蛋白酶（超滤浓缩法）【3】

菠萝汁超滤浓缩后，在进行干燥得到酶制品。利用分子截留原理，把大于和小于蛋白酶分子的大部分物质过滤除去，以达到浓缩酶液的目的。此法反应条件温和，降低了酶活损失。

三、实验器材

（1）实验材料：新鲜菠萝(0.735kg)、0.1mg/ml牛血清蛋白

（2）实验试剂：柠檬酸钠、单宁、维生素c、0.1%EDTA溶液、1.5%氯化钠溶液、1%酪蛋白溶液、1mol/L氢氧化钠溶液、0.05mol/L磷酸缓冲液（溶解磷酸二氢钾，加氢氧化钾调PH 至7.0）、激活剂（PH7.0，0.05mol/L磷酸缓冲液，内含15mmol/L硫代硫酸钠和6mmol/LEDTA-2Na,现配现用）

菠萝蛋白酶的提取与活力测定

工艺流程：菠萝下脚料→压榨→汁液→去杂质→澄清液→超滤浓缩→浓缩液→降温→加有机溶
剂沉淀（ 95%乙醇）→湿酶→减压干燥→酶制品
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谢谢观赏
•
温度范围： 50～60℃
•
作用PH值: 6.0～9.0
6Fra Baidu bibliotek
三、实验材料和试剂 1、实验材料
新鲜菠萝(下脚料）、0.1mg/ml牛血清蛋白 2、实验试剂柠檬酸钠维生素C 单宁 0.1%EDTA溶液 1.5%氯化钠溶液 1%酪蛋白溶液 1mol/L氢氧化钠溶液 0.05mol/L磷酸缓冲液（溶解磷酸二氢钾，加氢氧化钾调PH至7.0）激活剂（PH7.0，0.05mol/L磷酸缓冲液，内含15mmol/L硫代硫酸钠和6mmol/LEDTA2Na,现配现用）
（一）从菠萝中提取菠萝蛋白酶操作步骤：
超滤浓缩
加Vc,0.2%单宁溶液搅拌15min,静置40min 4200r/min,5min离心
将下脚料切碎
加柠檬酸钠，榨汁菠萝汁
冻存备用
纱布过滤澄清液
2000r/min，7min离心
酶复合物沉淀（蛋白糊酶）
离液加心，适
量
1.5% 4000r/min,7min
12
计算酶的比活性 • 酶的比活性 • （F.I.P.-U/mg)=E275/(Ew×0.116×10） • E275——275nm处得吸光度 • Ew——每2.5ml所用酶液中含酶的重量，mg • 0.116——275nm处酪氨酸溶液（1umol酪氨酸/10ml）的吸光度 • 10——反应时间，min

从菠萝中提取菠萝蛋白酶的实训

任务一从菠萝汁中提取菠萝蛋白酶

【提取工艺】

1、选取70%-80%成熟度菠萝的果皮，榨汁，用四层纱布过滤得鲜果皮汁。

2、称取1kg制备好的鲜菠萝果皮汁，加5%苯甲酸钠溶液10ml，搅拌均匀。

3、4000r/min离心7min，取上清液倒入干净的烧杯中。

4、在上清液中缓缓加入0.2%的单宁溶液，边加边搅拌约15min，可见沉淀析出。静置40min。

5、除去上清废液，把酶复合沉淀物倒入离心杯中，以4000r/min离心5min，倒掉上清废液，得到酶糊复合物。

6、把提取的蛋白酶糊倒入烧杯中，加0.1%EDTA溶液100ml搅匀，再把1.5%氯化钠溶液200ml倒入烧杯中搅匀，以4000r/min离心7min，倒掉上清废液，得到洗涤剂I酶复合沉淀物。

7、将洗涤剂I酶复合沉淀物倒入烧杯中，加0.5%乙酸锌溶液20ml，搅拌均匀，静置5min；加0.06%抗坏血酸溶液30ml，搅拌均匀，静置5min；加1.5%氯化钠溶液20ml，搅拌均匀，静置5min；最后加0.5%EDTA溶液20ml，静置5min后，以4000r/min 离心7min，把上清液倒掉，得到洗涤剂II酶复合沉淀物。

8、把洗涤剂II酶复合沉淀物倒入烧杯中，加0.5%硫代硫酸钠溶液20马力，搅拌均匀，静置5min；加1%L-半胱氨酸溶液10ml，搅拌均匀，以4000r/min离心7min，倒掉上清废液，最后得到蛋白酶糊。

9、把酶糊放入冰室（-12℃），低温冷冻15-20h。取出解冻，离心得酶膏。

10、把酶膏倒入装有氯化钙或五氧化二磷的干燥器中干燥6～10h，得到的是菠萝酶。研成粉状，低温保存。

菠萝蛋白酶提取

一、实验目的：

1、了解菠萝蛋白酶的提取和纯化工艺

2、优化和加深熟悉菠萝蛋白酶提取技术

二、实验原理：

菠萝蛋白酶(Bromelain，简称菠萝酶，亦称为凤梨酶或凤梨酵素)是从菠萝果茎、叶、皮提取出来，经精制、提纯、浓缩、酶固定化、冷冻干燥而得到的一种纯天然植物蛋白酶。其外观为浅灰色粉末状，分子量为33000 ，等电点为9.55 。品质最佳的菠萝蛋白酶是利用菠萝的中茎加工,采用超滤方

法进行过滤浓缩,低温冷冻干燥而得的。产品已被广泛应用于食品、医药等行业。结果表明。提取菠萝中菠萝蛋白酶最佳提取工艺条件是添加单宁溶液的浓度为0．2％，提取时最适pH值为6．5～8．5左右，而最适提取温度为60℃。菠萝蛋白酶作为一种食品添加剂可用于肉质嫩化，啤酒澄清，还用于干酪、明胶及水解蛋白的生产。在医药上它可以治疗水肿及多种炎症；它能迅速溶痂，对正常组织无害，不影响植皮，适用于中小面积深度烧伤的治疗。

三、实验步骤

操作要点：菠萝蛋白酶的提取称取1 kg制备好的鲜果皮汁，加5％苯甲酸钠溶液10 ml搅匀，以4 000 r／min离心7 min，取上清液倒人干净烧杯中。上清液分装在6个小烧杯中，每个装100 ml菠萝汁，分别缓缓加入空白、0．1％、0．2％、0．3％、0．4％、0．6％单宁溶液10 ml，边加边拌约1 5min，沉淀物析出，静止40 min。虹吸除去上清废液，把酶复合沉淀物倒入离心杯中，以4 000 r／min。离心5 min，倒掉上清废液，得到酶糊复合物。分离、洗涤和保护把提取的蛋白酶糊倒人烧杯中，加0．1％EDTA溶液100 ml搅匀，再将1．5％氯化钠溶液200 ml倒人烧杯中搅匀，以4 000 r／min离心7 min，倒掉上清废液，得到洗涤剂I酶复合沉淀物。把洗涤剂I酶复合沉淀物倒入烧杯中，加0．5％乙酸锌溶液20 min，搅拌均匀，静止5 min，加0．06％抗坏血酸溶液30 ml，搅匀，静止5 rain，加1．5％氯化钠溶液20 ml，

[菠萝蛋白酶提取]果菠萝蛋白酶的提取失败原因

[菠萝蛋白酶提取]果菠萝蛋白酶的提取失败原因菠萝蛋白酶提取

一、实验目的：

1、了解菠萝蛋白酶的提取和纯化工艺

2、优化和加深熟悉菠萝蛋白酶提取

二、实验原理：

菠萝蛋白酶(Bromelain，简称菠萝酶，亦称为凤梨酶或凤梨酵素)是从菠萝果茎、叶、皮提取出来，经精制、提纯、浓缩、酶固定化、冷冻干燥而得到的一种纯天然植物蛋白酶。其外观为浅灰色粉末状，分子量为 33000 ，等电点为 9.55 。品质最佳的菠萝蛋白酶是利用菠萝的中茎加工,采用超滤方法进行过滤浓缩,低温冷冻干燥而得的。产品已被广泛应用于食品、医药等行业。结果表明。提取菠萝中菠萝蛋白酶最佳提取工艺条件是添加单宁溶液的浓度为0．2％，提取时最适pH值为6．5～8．5左右，而最适提取温度为60℃。菠萝蛋白酶作为一种食品添加剂可用于肉质嫩化，啤酒澄清，还用于干酪、明胶及水解蛋白的生产。在医药上它可以治疗水肿及多种炎症；它能

迅速溶痂，对正常组织无害，不影响植皮，适用于中小面积深度烧伤的治疗。

三、实验步骤

菠萝蛋白酶提取

摘要：，运用盐析法从菠萝皮中提取菠萝蛋白酶，对菠萝蛋白酶的提取工艺及其影响因素进行了研究，并对提取后得到的菠萝蛋白酶进行测定。

关键词：菠萝皮，菠萝蛋白酶，白陶土吸附，盐析法

一目的要求：

学习盐析法提取菠萝蛋白酶的方法

二实验原理

菠萝蛋白酶(bromelain)是从菠萝植株中提取的一类蛋白水解酶的总称, 主要存在于菠萝茎和果实中,根据提取部位的不同, 分为茎菠萝蛋白酶和果菠萝蛋白酶。

物理性质：白色至浅棕黄色无定形粉末。溶于水，水溶液无色至淡黄色，有时有乳白光，不溶于乙醇、氯仿和乙醚。是一种糖蛋白, 一般提取用的酶源是凤梨，但是价格较贵。而用菠萝皮，不但可以减少资源的浪费，降低费用，又能减少环境的污染。

蛋白质在水溶液中的溶解度由蛋白质周围。。。。集聚而沉淀（实验书第3页）盐析法提取菠萝蛋白酶，菠萝蛋白酶是典型的巯基蛋白酶，是一种分子量为33000u的蛋白质，硫酸铵是强电解质，有强烈的水化作用，可破坏蛋白质颗粒表面的水化膜，并能中和蛋白质颗粒所带的电荷，使蛋白质在溶液中凝聚而析出但只有达到蛋白质等电点时，其才易于沉淀

对于菠萝蛋白酶来说，使用盐析法提取是比较理想的一种方法，也使用得最广泛。

其基本原理是：因不同的蛋白质在高浓度的盐溶液中溶解度不同而能分离。此法简便、安全白色至浅棕黄色无定形粉末。溶于水，水溶液无色至淡黄色，有时有乳白光，不溶于乙醇、氯仿和乙醚。属糖蛋白。

三实验材料

1试剂

70%-80%成熟度的无刺卡因品种菠萝皮

20g 高岭土化学纯品(用于作为吸附剂)、

95%乙醇

无水乙醇

菠萝蛋白酶的提取实验报告

菠萝蛋白酶的提取、初步分离纯化及活性测定

12食安2班陈志廉

摘要

本文阐述了通过运用高速离心法提取粗酶，盐析分离提纯，透析除杂等方法提取出了菠萝蛋白酶并将其初步分离纯化且测定了各个步骤的酶活性的过程。关键词

菠萝蛋白酶纯化酶活性

前言

菠萝蛋白酶（Bromelain，EC3.4.22.3）简称菠萝酶，是从凤梨属植物菠萝中提取的一组复合的半胱氨酸巯基蛋白水解酶，1891年Mercaro于菠萝的汁中首先发现。

在食品工业中菠萝蛋白酶作为一种食品添加剂，能分解蛋白质、肽、酯和酰胺等，可用于肉质嫩化、水解蛋白、啤酒澄清、干酪生产等。菠萝蛋白酶来可以用来增加豆饼和豆粉的PDI值和NSI值，从而生产出可溶性蛋白制品及含豆粉的早餐、谷类食物和饮料。其它还有生产脱水豆类、婴儿食品和人造黄油；澄清苹果汁；制造软糖；为病人提供可消化的食品；给日常食品添味等。

在医药上它可以治疗水肿及多种炎症，并有助消化，健胃消食等功能。

菠萝蛋白酶属于糖蛋白，是由巯基蛋白酶和非蛋白酶组分构成的复杂复合物，因含有一个不稳定的游离巯基，所以菠萝蛋白酶极易被氧化而使其酶活下降。本文主要验证了从新鲜菠萝皮中提取菠萝蛋白酶并将之纯化的方法，以求改进工艺等。

1实验材料与仪器

1.1实验材料与试剂

新鲜菠萝、0.1mo1/L pH7.8磷酸缓冲液（PBS）、0.01mo1/L pH7.8磷酸缓冲液（PBS）、1％酪蛋白、激活剂、10％三氯乙酸(TCA)、牛血清白蛋白、考马斯亮蓝G250

1.2实验仪器

722型可见光分光光度计：上海舜宇恒平科学仪器有限公司；

菠萝蛋白酶的制备及其活力的测定

菠萝蛋白酶的提取方法
1.1 高岭土吸附法 1.2 单宁沉淀法 1.3 超滤法
1.1 高岭土吸附法
高岭土吸附法提取菠萝蛋白酶的主要工艺操作包括：① 压榨。将菠萝下脚料洗净，用压榨机压出汁液，加0.05 ％苯甲酸钠防腐，迅速过滤除杂质。②吸附。将汁液移入吸附槽中搅拌，同时加入4 ％的高岭土，搅拌约20 min，在10 ℃吸附30~60 min，用虹吸排掉上清液收集高岭土吸附物。③洗脱。用16 ％的NaOH 溶液调节吸附物的pH 值至7.0 左右，再加入吸ຫໍສະໝຸດ Baidu质量为7~9 ％的食盐，搅拌30 min，进行洗脱，然后迅速压滤，收集滤液。④盐析。将压滤液收集在盐析槽中，用1：3的盐酸调节pH 值至5.0 左右，搅拌加入压滤液质量25 ％的硫酸铵，待完全溶解后，4 ℃下存放过夜；然后离心，收集沉淀盐析物，即粗酶。⑤溶解。将粗酶放入溶解罐中，加入10 倍水，用NaOH 溶液调pH 值至7.0~7.5，搅拌使其溶解，过滤除杂，收集滤液。⑥沉淀、干燥。在搅拌下用1:3 的盐酸调节上述滤液的pH 值至4.0，静置1h 使酶析出，用离心机分离出沉淀物，冷冻真空干燥或减压干燥即得菠萝蛋白酶精品。工艺流程如图1 所示。高岭土吸附法生产工艺和操作都比较复杂，原材料消耗多，所需设备多，酶活总回收率低，但产品质量较好，纯度较高，产品酶活可达4.0×106 u/g 上。
单宁沉淀法单宁沉淀法提取菠萝蛋白酶的主要工艺操作包括：①压榨。将菠萝下脚料洗净，用压榨机压出汁液，加入0.05 ％苯甲酸钠防腐，迅速过滤除杂质。②加稳定剂。将澄清液移入生产罐中，在搅拌条件下，加入澄清液体积0.05 ％的EDTA、 0.06％的二氧化硫以及0.02 ％的维生素C。③ 加单宁。立刻加入0.1 ％的单宁，在4 ℃下静置 1 h，离心弃去上清液，收沉淀物。④洗脱、干燥。将沉淀物放入溶解罐中，加入2~3 倍pH 值为4.5 的抗坏血酸溶液（或者采用1:3 的盐酸，调节pH 值到3），搅拌洗脱40 min，然后过滤，收集滤液，减压干燥或冷冻真空干燥即得菠萝蛋白酶精品。工艺流程如图2 所示。

从菠萝中提取菠萝蛋白酶

菠萝蛋白酶是一种常见的蛋白酶，它可以在菠萝中找到。菠萝蛋白酶可以分解蛋白质，因此在食品、医药和日化等行业中有广泛的应用。

提取菠萝蛋白酶的方法有很多种，其中最常用的是浸提法和萃取法。浸提法是将菠萝切碎，放入含有酸性物质的溶液中浸泡，使菠萝蛋白酶释放出来。萃取法则是利用有机溶剂将菠萝中的菠萝蛋白酶提取出来。

提取菠萝蛋白酶后，可以通过一系列的分离纯化步骤来获得高纯度的菠萝蛋白酶。这些步骤包括超滤、离子交换层析和凝胶过滤等。

除了用于医药和食品工业中，菠萝蛋白酶还可以用于日常生活中，例如在洗涤剂中添加菠萝蛋白酶可以去除衣物表面的蛋白质污渍，同时不会损伤衣物。因此，提取菠萝蛋白酶对于提高生活质量和促进工业发展来说都具有重要意义。

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从菠萝中提取菠萝蛋白酶

菠萝蛋白酶是一种酶类蛋白质，可分解蛋白质成分。菠萝是其主要来源之一，因此，从菠萝中提取菠萝蛋白酶成为一种常见的方法。

提取菠萝蛋白酶的方法可以通过多种方式实现，其中包括机械压榨、超声波处理、低温浸泡、固相萃取和酵素技术等。不同的方法会对提取效果产生不同的影响。

机械压榨是最简单的提取方法之一，通过将菠萝果肉或茎汁挤压后，分离出含有菠萝蛋白酶的液体。超声波处理则是一种快速、高效的提取方法，它利用超声波能量刺激菠萝细胞释放菠萝蛋白酶。低温浸泡是一种保留菠萝蛋白酶活性的提取方法，通过在低温下将菠萝浸泡一段时间，可提高菠萝蛋白酶的纯度和活性。

固相萃取是一种常用的精细化提取方法，它将菠萝蛋白酶从其他成分中分离出来，通过针对菠萝蛋白酶特异性的化学反应，可将菠萝蛋白酶浓缩，从而得到纯度高的菠萝蛋白酶。酵素技术则是利用大肠杆菌等细菌表达人造菠萝蛋白酶，通过纯化酶产物得到菠萝蛋白酶。

总之，从菠萝中提取菠萝蛋白酶是一种常见的方法，通过不同的提取技术可以得到不同品质的菠萝蛋白酶。

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实验方案(蛋白酶)

传统吸附法提取菠萝蛋白酶

1.仪器：离心机、烧杯

2.试剂：5%氯化钠溶液、1.5%氯化钠溶液0.2%单宁、0.1%EDTA、0.5%EDTA溶液、

0.5%氯化锌、0.06%抗坏血酸

3.实验步骤

3.1取一定量的菠萝肉，压榨得菠萝汁，加入5%NaCl溶液搅匀，4000r/min离心7min，取上清液导入干净的烧杯中。

3.2在上清液中缓缓加入0.2%的单宁溶液，边加边搅拌约15min，静止，用离心机进行二次离心，倒去上清液，把酶复合沉淀物倒入离心杯中，以4000r/min离心10min，倒掉上清废液，得到酶糊复合物，

3.3把提取的蛋白酶糊倒入烧杯中，加0.1%EDTA溶液，搅匀，再把0.15%氯化钠溶液，搅匀，以4000r/min离心7min,倒掉上清废液，得到酶复合沉淀物，

3.4倒入烧杯中，加溶注，静止5min,加0.06%抗坏血酸，静止10min,加1.5%氯化钠溶液，搅匀静止5min;

3.5最后加0.5%EDTA溶液，静止2h后，以4000r/min离心7min,倒掉上清液，得到酶液，以4000r/min离心7min,倒掉上清废液，最后得到蛋白酶糊，

3.6把酶糊倒入装有氯化钙的干燥器中干燥6~~10h，得到菠萝酶。

凯氏定氮法对蛋白质含量的测定

1.原理：蛋白质是含氮的有机化合物。食品与硫酸和催化剂一同加热消化，使蛋白质

分解，分解的氨与硫酸结合生成硫酸铵。然后碱化蒸馏使氨游离，用硼酸吸收后再以硫酸或盐酸标准溶液滴定，根据酸的消耗量乘以换算系数，即为蛋白质含量。

2.试剂：（所有试剂均用不含氨的蒸馏水配制）

菠萝蛋白酶的提取和活力测定

试管号吸光度A 1 0.643 2 0.733 3 0.868 4 1.019 5 1.232
由于吸光度在0.2~0.8之间较准确，故上述数据中可以选择第三组数据进行处理计算
（四）数据的处理 1、由线性关系y=6.2357x，可以计算酶制品中蛋白酶的总质量m=0.140/6.2357x5=0.1123mg 2、菠萝蛋白酶活力=0.868/10=0.0868U 3、比活力=0.0868U/0.1123mg=0.7729U/mg 4、提取率=0.1123mg/0.735kg=0.00001528% （五）结果讨论从上述结果可知菠萝蛋白酶的比活力较低，可能的原因有： 1、所加入的有机酸单宁的量对菠萝蛋白酶沉淀有的影响； 2、在实验中是否把单宁溶液弄混而导致菠萝蛋白酶很少沉淀析出； 3、菠萝蛋白酶对热不稳定，试验中温度的控制是否合理； 4、在活力测定的步骤中所加入的酪蛋白的量不足，导致结果偏低；
酶复合物
（二）考马斯亮蓝法测定酶制品中蛋白酶含量
1、标准曲线的制作按下表操作
试管号标准蛋白（0.1mg/ml) 待测酶蛋白 (ml) 磷酸缓冲液 (ml) 考马斯亮蓝 (ml) 吸光度A 0 0.115 0.148 0.245 0.395 0.525 0.582 1 0 0 1.0 4 2 0.1 0 0.9 4 3 0.2 0 0.8 4 4 0.4 0 0.6 4 5 0.6 0 0.4 4 6 0.8 0 0.2 4 7 1.0 0 0 4 8 0 1.0 0 4 0.140 （稀释5倍）

菠萝蛋白酶提取方法的研究

一、本文概述

Overview of this article

菠萝蛋白酶是一种从菠萝茎部提取的巯基蛋白酶，具有广泛的生物活性，包括抗炎、抗水肿、抗凝血、抗肿瘤等作用。由于其独特的生物活性，菠萝蛋白酶在医药、食品、饲料、纺织、制革、造纸和化妆品等行业中具有广泛的应用前景。因此，研究菠萝蛋白酶的提取方法对于其工业化生产和应用具有重要意义。

Pineapple protease is a thiol protease extracted from the stem of pineapple, which has a wide range of biological activities, including anti-inflammatory, anti edema, anticoagulant, and anti-tumor effects. Due to its unique biological activity, bromelain has broad application prospects in industries such as medicine, food, feed, textiles, leather making, papermaking, and cosmetics. Therefore, studying the extraction method of bromelain is of great significance for its industrial production and application.

菠萝蛋白酶的提取、初步分离纯化及活性测定

14食安（1）班杨泽杰

摘要：本文结合考马斯亮蓝G250染色法，研究了不同纯化方法，包括硫酸铵沉淀法、透析法，对菠萝蛋白酶活性的影响。实验结果表明，两种纯化方法都能有效纯化菠萝蛋白酶，但是会对菠萝蛋白酶的活性造成一定的损失。关键词：菠萝蛋白酶沉淀法透析法纯化酶活性

前言

菠萝蛋白酶（Bromelain，EC 3.4.22.3）简称菠萝酶，是从凤梨属植物菠萝中提取的一组复合的半胱氨酸巯基蛋白水解酶，它广泛存在于菠萝的果实、芽、叶、茎。

菠萝蛋白酶属于糖蛋白，是由巯基蛋白酶和非蛋白酶组分构成的复杂复合物，因含有一个不稳定的游离巯基，所以菠萝蛋白酶极易被氧化而使其酶活下降。菠萝蛋白酶的相对分子质量大约为33 000，等电点 9.55，最适pH 在7.1左右，在偏酸环境下酶活下降较快，碱性环境能延缓失活。菠萝蛋白酶的温度的最稳定范围是55℃~65℃。金属盐离子中NaCl、KCl对酶活的影响不是很大，维生素C、半胱氨酸、硫代硫酸钠、2-巯基乙醇是菠萝蛋白酶的稳定剂，EDTA能通过螯合对酶活有影响的金属离子而保护菠萝蛋白酶，有机溶剂中甲醇、乙醇、乙二醇对酶活损失较大。

在食品工业中菠萝蛋白酶作为一种食品添加剂，能分解蛋白质、肽、酯和酰胺等，可用于肉质嫩化、水解蛋白、啤酒澄清、干酪生产等。

在医药上它可以治疗水肿及多种炎症，它能帮助迅速结痂，对正常组织无害，不影响植皮，适用于中小面积深度烧伤的治疗。

1 实验材料与仪器

1.1实验材料与试剂

1.1.1 实验材料

新鲜菠萝（3个），透析袋