基于固定化抗体克伦特罗直接竞争ELISA检测体系的建立

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克伦特罗单克隆抗体的制备及其初步鉴定

克伦特罗单克隆抗体的制备及其初步鉴定杨正涛;张乃生;史利军【期刊名称】《动物毒物学》【年(卷),期】2003(018)001【摘要】目的：制备克伦特罗单克隆抗体(McAb)建立克伦特罗ELISA检测方法，为研制检测试剂盒奠定基础。

方法：用偶氮化法将克伦特罗与钥孔血蓝蛋白(KLH)牛血清白蛋白(BSA)及卵清白蛋白(OVA)偶联．制备完全抗原，免疫Ballb／c小鼠，建立杂交瘤细胞株以备单抗，并对单抗特异性、交叉反应性及抗原识别位点等特性进行初步鉴定。

用HRP标记CL，建立ELISA方法。

结果：获得了1H5、1H7、1D6、2F10四株杂交瘤。

其中1H5、1H7培养上清效价都在1：2000以上．腹水效价在1：100000以上。

对沙丁胺醇交叉反应测定，最小的是1D6，只有2．32％的交叉反应性。

最后建立了检测CL的固相抗体竞争ELISA方法。

【总页数】5页(P38-42)【作者】杨正涛;张乃生;史利军【作者单位】军需大学军事兽医系临床兽医学教研室，吉林·长春，130062【正文语种】中文【中图分类】S859.84【相关文献】1.抗盐酸克伦特罗单克隆抗体的制备与鉴定 [J], 左伟勇;洪伟鸣;吴双;王安平;朱善元2.消减免疫法制备克伦特罗单克隆抗体 [J], 李晓丽;李晓芳;宁保安;吴大成;王红勇;陈翔;马新华;欧国荣;高志贤3.克伦特罗单克隆抗体的研制及初步鉴定 [J], 王帅兵;朱善元;袁宗辉4.盐酸克伦特罗单克隆抗体的制备和鉴定 [J], 张玲玲;战翔;彭喆;时建立;吴晓燕;徐胜男;郑书轩;徐绍建;黄保华5.盐酸克伦特罗单克隆抗体的制备及检测方法的初步建立 [J], 邵炜慧;贾红;刘文博;吴艳涛;刘秀梵;因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

农产品质量安全知识竞赛五

农产品质量安全知识竞赛五1、问答题通过认定的浙江省无公害农产品基地应设立保护性标志，标志上须标明哪些内容？正确答案：通过认定的浙江省无公害农产品基地应设立保护性标志，标志上须标明基地范围（江南博哥）、规定、认定单位、建设单位、负责人、所执行的标准、质量承诺等内容，实行社会监督。

2、单选致病性细菌、病菌以及某些毒素等造成的污染属于（）A．生物性污染B．物理性污染C．化学性污染D．认为污染正确答案：A3、问答题举例说明三种以上使用物理机械方法防治病虫害在无公害柑桔生产的应用。

正确答案：（1）应用灯光防治害虫。

如用黑光灯引诱或驱避吸果夜蛾、金龟子、卷叶蛾等；（2）应用趋化性防治害虫。

如利用大实蝇、拟小黄卷叶蛾等害虫对糖、酒、醋液的趋向性，在糖、酒、醋液中加入农药诱杀；（3）应用色彩防治害虫。

如用黄板诱集蚜虫；（4）人工捕捉害虫、集中种植害虫中间寄主诱杀害虫。

如人工捕捉天牛、蚱蝉、金龟子等害虫；在嘴壶夜蛾发生严重的地区人工种植木防已，引诱成虫产卵，再用药剂杀灭幼虫。

4、问答题地克珠利预混剂、马杜霉素铵预混剂、盐霉素钠预混剂、土霉素钙四种药物饲料添加剂能不能在蛋鸡饲料中长期添加使用，为什么？正确答案：不能。

农业部168号公告规定，地克珠利产蛋期禁用；马杜霉素休药期5天；盐霉素钠产蛋期禁用，休药期5天；土霉素钙产蛋期禁用，连续用药不超过5天。

5、问答题抗生素滤渣含有较丰富的蛋白质，喂猪有明显的促生长作用，请问是否可以作为饲料饲喂动物？为什么？正确答案：不可以。

因为农业部、卫生部、国家药品监督管理局发布的《禁止在饲料和动物饮水中使用的药物品种目录》公告中明确规定，抗生素滤渣是抗生素生产过程中产生的工业“三废”，尽管因含有微量抗生素成分，在饲料和饲养过程中使用对动物有一定的促生长作用，但由于其容易引起耐药性，并且未做安全试验，存在各种安全隐患，对养殖业的危害很大。

砗，抗生素滤渣不可以作为饲料饲喂动物。

6、多选（）应当建立农产品生产记录，按照规定如实记载农业投入品使用情况、动植物疫病和农作物病虫草害发生及防治情况以及收获、屠宰或者捕捞的日期。

克伦特罗的CLIA 分析试剂盒的研制

克伦特罗的CLIA 分析试剂盒的研制沈浩龙;张长弓;陈巧钦;江良振;庄晓勇;黄江山;郭书林;黄印尧【摘要】A highly active antibody was produced by making manmade antigen of Clenbuterol . We established a direct competition method to detect Clenbuterol that used HRP as markers and luminol as chemiluminescent substrates ,with which many parameters were optimized ,including coating buffer ,coating condition ,blocking condition ,incubating time , and enzyme consumption . Based on this method we developed a chemiluminescent detecting kit ,whose linear range was 0.1-8.1 ng · mL -1 ,the linear correlation coefficient wasr=0.996 ,the IC50 was 0.607 ng mL -1 ,the detection limit was under 0.1 ng · mL -1 ,the within-run assay coefficient of variation was 6.76% -8.31% ,the between-run assay coefficient of variation was 7.4% ,the coefficient of recovery was between (90 ± 15)% ,and there was no cross reaction with other β-agonists .%通过制备克伦特罗（Clenbuterol ，CL）人工抗原获得高活性抗体，用辣根过氧化物酶（HRP）标记CL抗原，以鲁米诺（luminol）为发光底物，建立直接竞争法检测分析盐酸克伦特罗，并对包被液、包被条件、封闭蛋白、孵育时间、酶用量等参数进行优化，成功研制出化学发光法检测 CL 试剂盒。

实验一克伦特罗直接竞争ELISA检测实验指导

实验一克伦特罗(瘦肉精)直接竞争ELISA检测克伦特罗（clenbuterol），化学名为4-氨基-α-[ (叔丁胺基)甲基]-3,5-二氯苯甲醇盐酸盐，属于β-兴奋剂（β-Agonist）的一种。

由于克伦特罗能显著降低胴体脂肪含量，提高瘦肉率和增加瘦肉产量（由此得名“瘦肉精”），曾在畜牧业上作为生长促进剂被广泛使用。

克伦特罗有较大的毒性，当人们食用高残留克伦特罗的动物性食品时，会出现心悸、头疼、目眩、恶心、呕吐、发烧、颤栗、神经过敏、血管扩张、心率加快、肌肉震颤等中毒症状。

因此，欧美等国早已禁止克伦特罗在畜牧生产上的应用，我国农业部于1997年3月发布[农牧发(1997)]3号文件，禁止克伦特罗在动物生产中的应用。

1999年再次发布文件，禁止其使用，并规定了在动物组织中的最高限量。

然而，由于经济利益的驱使，克伦特罗违法滥用的现象仍然较为普遍，中毒现象屡屡发生。

图1 克伦特罗分子结构式检测克伦特罗的方法主要有高效液相色谱法（HPLC），气相色谱－质谱法（GC-MS），毛细管区带电泳法（CE）和免疫分析技术（IA）等等。

HPLC法与GC-MS 法是克伦特罗残留检测的确证方法，其优点是检测精确度高，但因其仪器化程度高、检测时间长、过程繁琐、检测费用昂贵等而阻碍其推广应用，而酶联免疫分析（ELISA）快速检测技术因成本低、操作简单、速度快、一次检测样本量大、仪器化程度低，现已成为常用的筛选方法。

1 实验原理在微孔条上预包被偶联抗原；加入样品或标准品，样品或标准品中的克伦特罗与微孔条上预包被的偶联抗原竞争结合酶标记的克伦特罗单克隆抗体，游离的酶标记抗体通过洗涤被除去；再加入显色液，结合的酶标记抗体使无色的显色液转化为蓝色，加入反应终止液后再转变为黄色，在450nm处测量，样品吸光值与样品中克伦特罗含量成负相关，通过标准曲线即可计算出样品中克伦特罗含量。

检测原理示意图如下所示：①未包被酶标板②将包被抗原包被在酶标板上③首先将标准品或待检样品加入到包被好的酶标板微空内④然后加入辣根过氧化物酶标记的抗体，孵育期间包被抗原与样品中的被检药物将同时竞争酶标抗体，如果样品中的被检药物含量多则与包被抗原结合的酶标抗体就少，反之就多⑤通过洗涤将反应液中未与包被抗原结合的酶标抗体去除⑥加入底物缓冲液与底物液的混合液，酶标抗体上辣根过氧化物酶将催化底物进行显色反应（由无色变为蓝色）⑦达到显色时间后，加入硫酸溶液终止酶促反应，同时反应溶液由蓝色变为金黄色，此反应液可通过酶标仪在450nm波长下测定吸光度值，从而通过软件计算得到待检药物的浓度2 实验材料（1）克伦特罗ELISA试剂盒：百睿或其他同类产品。

克伦特罗(Clenbuterol)ELISA检测试剂盒说明书

克伦特罗(Clenbuterol)ELISA检测试剂盒说明书一、概要克伦特罗（Clenbuterol）属于β-兴奋剂，因为该药可以提高瘦肉率，减少脂肪沉积和促进动物生长，被一些畜牧养殖企业作为养殖促进剂非法使用。

人食用了饲喂克伦特罗作为添加剂的动物所产生的畜产品后，残留的克伦特罗可导致人体肌肉震颤、心悸、神经过敏、头痛、目眩、恶心、呕吐、发烧、战栗等症状，对消费者的健康造成极大危害。

因此世界许多国家现已被明令禁止在饲料中添加克伦特罗来增加动物的瘦肉率。

HPLC或GC-MS一直用作检测β兴奋剂的方法，但是其前处理步骤费用昂贵；而使用酶联免疫检测试剂盒方法则可以经济、快速地检测尿，肌肉，肝脏及饲料中的CLE。

本试剂盒是应用ELISA技术研发而成的检测产品，操作时间短于45min，能最大限度地减少操作误差和工作强度。

二、试验原理本试剂盒采用间接竞争ELISA方法，在酶标板微孔条上预包被克伦特罗抗原，样本残留的克伦特罗和微孔条上预包被的抗原竞争抗克伦特罗抗体，加入酶标二抗后，用TMB底物显色，样本吸光值与其残留物克伦特罗负相关，与标准曲线比较再乘以其对应的稀释倍数，即可得出样品中克伦特罗的含量。

三、适用范围可定性、定量检测动物组织、饲料、尿液等样本中克伦特罗的残留量。

四、交叉反应率克伦特罗………………………………………………100%特普他林……………………………………………小于1%非诺特罗……………………………………………小于1%马布特罗……………………………………………小于1% 西马特罗…………………………………………小于1%溴布特罗……………………………………………小于1% 塞曼特罗……………………………………………小于1% 五、使用单位需自备的设备及试剂设备：┅┅微孔板酶标仪450nm/630nm┅┅振荡器┅┅涡旋仪┅┅离心机┅┅天平：感量0.01g┅┅刻度移液管：10ml┅┅聚苯乙烯离心管：10ml、50ml┅┅微量移液器：单道20μl～200μl、200μl～1000μl多道250μl试剂：┅┅甲醇(分析纯) ┅┅氢氧化钠(分析纯)┅┅浓盐酸----去离子水六、提供的材料与试剂1、96孔酶标板×1块2、标准品×6瓶：(1ml/瓶）0ppb, 0.05ppb, 0.15ppb,0.45ppb, 1.35ppb,4.05ppb3、高浓度标准品：100ppb （1ml/瓶）4、克伦特罗酶标物…………………………………………7ml5、克伦特罗抗试剂…………………………………………9ml6、底物液A液………………………………………7ml7、底物液B液………………………………………7ml8、终止液…………………………………………7ml9、浓缩洗涤液(10×) ……………………………………40ml10、克伦特罗浓缩样品稀释液(2×)…………………………40ml七、溶液的配制配液1: 样品稀释液用去离子水将克伦特罗浓缩样品稀释液(2×)按1:1体积比进行稀释，即：1份克伦特罗浓缩样品稀释液(2×)+1份去离子水；用于提取样本的稀释，样品稀释液在4℃环境可保存一个月。

克伦特罗单克隆抗体的纯化及其生物学特性的研究

克伦特罗单克隆抗体的纯化及其生物学特性的研究李晓丽;宁保安;刘楠;马新华;欧国荣;高志贤【摘要】目的:将自制克伦特罗(CL)单克隆抗体纯化并研究其生物学特性,进行性质鉴定并建立检测标准曲线.方法:用ELISA法测定克伦特罗单克隆抗体的亲和常数和抗体活性,ELISA测定单克隆抗体与BSA的交叉反应及与几种结构和功能类似物的交叉反应,然后采用间接竞争ELISA方法建立检测标准曲线.将制备的含克伦特罗单克隆抗体的小鼠腹水用盐析法和免疫亲和柱层析法进行抗体纯化.结果:经ELISA法测定,单克隆抗体亲和常数为2.90×1010 mol/L,抗体效价最高达106.单克隆抗体对BSA无反应,对几种结构和功能类似物的交叉反应率均小于0.005％.建立的标准曲线R2=0.9812,最低检测限为1.0 ng/ml.结论:建立了间接竞争ELISA检测CL的标准曲线.自制的克伦特罗单克隆抗体亲和力好,特异性高.为以后实际样品的检测及制备CL免疫检测试纸条和试剂盒奠定了基础.【期刊名称】《中国应用生理学杂志》【年(卷),期】2014(030)005【总页数】4页(P413-416)【关键词】克伦特罗;单克隆抗体;性质;鉴定;酶联免疫吸附分析法【作者】李晓丽;宁保安;刘楠;马新华;欧国荣;高志贤【作者单位】军事医学科学院卫生学环境医学研究所,天津市环境与食品安全风险监控技术重点实验室,天津300050;军事医学科学院卫生学环境医学研究所,天津市环境与食品安全风险监控技术重点实验室,天津300050;军事医学科学院卫生学环境医学研究所,天津市环境与食品安全风险监控技术重点实验室,天津300050;军事医学科学院卫生学环境医学研究所,天津市环境与食品安全风险监控技术重点实验室,天津300050;军事医学科学院卫生学环境医学研究所,天津市环境与食品安全风险监控技术重点实验室,天津300050;军事医学科学院卫生学环境医学研究所,天津市环境与食品安全风险监控技术重点实验室,天津300050【正文语种】中文【中图分类】R363克伦特罗（clenbuterol，CL）是一种β2-肾上腺素受体激动剂，可用于治疗呼吸系统疾病。

克伦特罗(瘦肉精)直接竞争ELISA检测及百睿TM盐酸克伦特罗快速检测卡检测

克伦特罗(瘦肉精)直接竞争ELISA检测及百睿TM盐酸克伦特罗快速检测卡检测摘要：为熟悉盐酸克伦特罗(瘦肉精)的不同检测方法，本实验采用了克伦特罗(瘦肉精)直接竞争ELISA检测和盐酸克伦特罗快速检测卡检测两种方法对盐酸克伦特罗阳性样品和阴性样品进行了检测，求出了阳性样品和阴性样品中的盐酸克伦特罗含量。

并对两种盐酸克伦特罗的检测方法进行了简单比较。

结果表明，ELISA检测法具有具有特异性强、便于大规模检查及适合现场和基层使用等优点。

而快速检测卡则具有敏感、特异、快速、简便,且无需任何仪器设备等优点。

关键词：盐酸克伦特罗(瘦肉精)、ELISA检测、快速检测卡1前言：盐酸克伦特罗(瘦肉精)又名克喘素、氨哮素、双氯醇胺，化学名为α -［(叔丁氨基）甲基］4 - 氨基- 3 , 5 二氯苯甲醇盐酸盐。

它是一种β肾上腺受体激动剂，是一种白色或类似白色的结晶体粉末，无臭，微苦，化学性质稳定，加热到170℃才能分解。

因此，一般的烹调加热方法不能将猪肉和脏器中残留的“瘦肉精”毒性破坏。

长期摄入盐酸克伦特罗超标的猪肉，会造成人体胃肠道菌群失衡、发生过敏反应和变态反应并产生“三致”作用[1]。

因此必需建立有效的检测方法，完善对畜牧业的监管，以保障食品的质量，让消费者吃得放心。

2材料与方法2.1实验材料与试剂2.1.1克伦特罗(瘦肉精)直接竞争ELISA检测克伦特罗ELISA试剂盒：百睿或其他同类产品。

试剂盒包含如下试剂：酶标记物（绿盖）1瓶3,3’5,5’-四甲基联苯胺（TMB）底物液（黑盖）1瓶底物缓冲液（白盖）1瓶终止液（黄盖）1瓶浓缩洗液（透明白盖）1瓶0μg/L克伦特罗标准溶液（红盖）1瓶0.1μg/L克伦特罗标准溶液（红盖）1瓶0.3μg/L克伦特罗标准溶液（红盖）1瓶0.9μg/L克伦特罗标准溶液（红盖）1瓶2.7μg/L克伦特罗标准溶液（红盖）1瓶8.1μg/L克伦特罗标准溶液（红盖）1瓶包被偶联抗原的96孔酶标板（12条8孔可拆酶标条）1块塑料封口袋1个内装干燥剂1袋盐酸克伦特罗阳性样品盐酸克伦特罗阴性样品2.1.2百睿TM盐酸克伦特罗快速检测卡检测盐酸克伦特罗阳性样品2.2实验仪器2.2.1克伦特罗(瘦肉精)直接竞争ELISA检测微量移液器：100 或 200 μL水浴锅或烘箱：保温，可选。

动物源性食品中兽药残留快速检测技术研究进展

动物源性食品中兽药残留快速检测技术研究进展动物源性食品中兽药残留快速检测技术研究进展随着畜牧业规模化和产业化，为了防止群体染病事件的发生，同时为了追求利益的最大化，养殖过程中兽药的使用量和使用范围逐渐被扩大化，国家对于兽药的安全使用有很多规定，但因为养殖者对法律法规及相关标准的不了解或受到利益的驱动，滥用、误用兽药，极易造成兽药残留超标。

食品安全监控体系不断发展完善，但兽药残留依然是动物源性食品中安全监管的重点和热点。

我国国家标准中兽药残留的检测方法有气相色谱法、液相色谱法、薄层色谱法、气相色谱-质谱联用法、液相色谱-质谱联用法等[1]，但是这些方法存在预处理复杂、需要配备昂贵的大型仪器、操作繁琐、对人员素质要求高、试验成本高等缺点，不利于进行食品安全监管的现场快速检测；而一些快检技术（如免疫技术、生物传感器技术、拉曼光谱检测技术）具有快捷、简便、成本低等特点，被广泛运用。

对近几年动物源性食品中兽药残留快速检测技术进行综述，重点介绍了酶联免疫技术、生物芯片技术、生物传感器技术、拉曼光谱检测技术等快速检测技术，并对快速检测技术在食品分析领域中，尤其是动物源性食品中兽药残留的应用前景进行了展望。

1 免疫技术1.1 酶联免疫技术酶联免疫技术是由免疫技术与现代测试手段相结合而建立的一种超微量测定技术[2]，对于兽药残留的检测一般采用3种竞争分析模式，即抗体包被直接竞争、抗原包被直接竞争和间接竞争[3]。

Wang L 等人[4]进行胶体金吸附和酶联免疫吸附交叉试验，这2种方法获得良好的相关性，可以快速测试动物源食品中14种磺胺残留。

王忠斌等人[5]建立了氨基糖苷类抗生素多残留的直接竞争ELISA分析方法，快速检测新霉素、卡那霉素、庆大霉素、链霉素等兽药中常用的氨基糖苷类抗生素。

王自良等人[6]研制的苯巴比妥ELISA试剂盒，线性检测范围广，达1.0～81.0 ng/mL，灵敏度高，检测限低。

王选年等人[7]研制的盐酸克伦特罗ELISA试剂盒，线性检测范围为0.5～128.0 ng/mL，与肾上腺素、去甲肾上腺素、莱克多巴胺及多种抗生素均无交叉反应性。

动物源性食品中齐帕特罗一步法ELISA试剂盒的研制

动物源性食品中齐帕特罗一步法ELISA试剂盒的研制董李学;葛怀礼;郑百芹;李爱军;张建民;蒙君丽;苗建民;李亮【摘要】This study established a competitive enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) method for detecting zilpaterol in animal derived food. Zilpaterol polyclonal antibody was obtained by immunizing New Zealand rabbit with zilpaterol-KLH conjugates. Checkerboard titration method was used to determine the optimum concentration of antibody and enzyme-labelled antigen. Coating condition, reaction time and the color developing time of substrate were also detected. The results showed that an ELISA kit with a linear sensitivity ranged from 0. 15～10 ng/mL was successfully established. Half inhibitory concentration (IC50) ranged between 0. 43～0. 79 ng/mL. The recovery rates for spiked zilpaterol in urine, feed, milk powder, milk and tissue were 70%～110% with less than 15% coefficient variations (CV). The cross-reaction for other similar medicines was less than 0. 1%. The ELISA kit established in current studyfor detecting zilpaterol in animal derived fodd and showed the good reproducibility, stability and specificity, hence it could be used to detectthe zilpaterol residues in animal derived food.%本研究依据直接竞争ELISA原理建立了齐帕特罗一步法ELISA试剂盒.以齐帕特罗与载体蛋白偶联物作为免疫原免疫新西兰大白兔制得齐帕特罗多克隆抗体,棋盘包被法确定其最佳抗体包被浓度、酶标抗原工作浓度、包被条件、反应时间、底物显色时间等,并对试剂盒的各项技术指标进行确认.结果表明,成功组装了齐帕特罗一步法ELISA试剂盒,并建立了尿液、饲料、奶粉和奶汁,以及组织等样品的前处理方法,检测限均远低于1 μg/kg.该试剂盒线性检测范围为0.15～10 ng/mL,IC50浮动范围0.43～0.79 ng/mL,样品板内、批内、批间的变异系数均小于15％,平均回收率在70％～110％之间,与其同类药物的交叉反应率均小于0.1％.提示,本试验研制的试剂盒重复性、特异性、稳定性等各项指标均符合技术要求,可用于动物源性食品中齐帕特罗药物残留的检测.【期刊名称】《中国畜牧兽医》【年(卷),期】2013(040)003【总页数】6页(P242-247)【关键词】动物源性食品;ELISA;齐帕特罗【作者】董李学;葛怀礼;郑百芹;李爱军;张建民;蒙君丽;苗建民;李亮【作者单位】杭州迪恩科技有限公司,浙江杭州 310023【正文语种】中文【中图分类】S859.84齐帕特罗（zilpaterol）属于β2－肾上腺素受体激动剂，是一种与克伦特罗（俗称瘦肉精）、莱克多巴胺、沙丁胺醇等具有同样生理效应的生长促进剂，属于违禁药物。

盐酸克伦特罗单克隆抗体的制备及检测方法的初步建立

盐酸克伦特罗单克隆抗体的制备及检测方法的初步建立邵炜慧;贾红;刘文博;吴艳涛;刘秀梵【期刊名称】《中国预防兽医学报》【年(卷),期】2006(28)4【摘要】选择一种新型载体阳离子化牛血清白蛋白(cBSA)与半抗原盐酸克伦特罗(CL)进行偶联,鉴定后作为免疫原免疫Balb/c小鼠,同时以卵清白蛋白(OVA)与CL 偶联制备筛选抗原.应用杂交瘤细胞融合技术筛选后获得了1株稳定分泌抗CL单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为2H5.抗体的亚类为IgM,腹水及细胞上清间接ELISA效价分别为1:20 480和1:320,通过竞争阻断实验证明其具有良好的特异性及敏感性,将半抗原经酶标后应用竞争ELISA方法初步建立了CL的检测方法,检测限可达1 ng/mL,为进一步制备CL残留检测试剂盒打下了基础.【总页数】4页(P450-453)【作者】邵炜慧;贾红;刘文博;吴艳涛;刘秀梵【作者单位】扬州大学,农业部畜禽传染病学重点开放实验室,江苏,扬州,225009;扬州大学,农业部畜禽传染病学重点开放实验室,江苏,扬州,225009;扬州大学,农业部畜禽传染病学重点开放实验室,江苏,扬州,225009;扬州大学,农业部畜禽传染病学重点开放实验室,江苏,扬州,225009;扬州大学,农业部畜禽传染病学重点开放实验室,江苏,扬州,225009【正文语种】中文【中图分类】Q78;S852.65+1【相关文献】1.抗盐酸克伦特罗单克隆抗体的制备与鉴定 [J], 左伟勇;洪伟鸣;吴双;王安平;朱善元2.盐酸克伦特罗单克隆抗体的制备及其特性 [J], 王选年;杨艳艳;李青梅;邢广旭;李学伍;肖治军;邓瑞广;柴书军;杨继飞;赵东;康晓迪;张改平3.高亲和力克伦特罗单克隆抗体的研制及免疫试纸检测方法的建立 [J], 张海棠;王自良;刘玺;钟华;范国英4.盐酸克伦特罗单克隆抗体的制备和鉴定 [J], 张玲玲;战翔;彭喆;时建立;吴晓燕;徐胜男;郑书轩;徐绍建;黄保华5.盐酸克伦特罗单克隆抗体的制备及检测方法的初步建立 [J], 邵炜慧;贾红;刘文博;吴艳涛;刘秀梵;因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

高亲和力克伦特罗单克隆抗体的研制及免疫试纸检测方法的建立

高亲和力克伦特罗单克隆抗体的研制及免疫试纸检测方法的建立张海棠;王自良;刘玺;钟华;范国英【期刊名称】《生物技术通报》【年(卷),期】2008(000)005【摘要】重氮化法将克伦特罗(CL)偶联于BSA合成免疫抗原BSA-CL,戊二醛法(GA)合成包被抗原OVA-CL,用BSA-CL免疫BMb/C小鼠.细胞融合技术建立高亲和力CL单克隆抗体(CL mAb)杂交瘤细胞株,体内诱生腹水法制备CL mAb,并测定其亲和性.依据胶体金免疫层析试验(GICA)原理,应用CL mAb研制CL残留快速检测免疫试纸(CL-Strip),并测定其性能.结果表明,筛选出16株杂交瘤细胞,其中亲和力最高的为3C12-6H6,亲和常数(Ka)为1.76×1010L/mol.CL-Strip的标准曲线呈典型的S型,符合4参数logit曲线拟合,目测检测限为0.5μg/L;其敏感性与竞争ELlSA试剂盒和GC/MS相当,符合率为100%.CL-Strip具有具有敏感、特异、快速、简便的特点,可推广应用于CL残留的快速检测.【总页数】5页(P149-153)【作者】张海棠;王自良;刘玺;钟华;范国英【作者单位】河南科技学院动物科学学院,新乡,453003;河南科技学院动物科学学院,新乡,453003;河南科技学院食品学院,新乡,453003;河南科技学院动物科学学院,新乡,453003;河南科技学院动物科学学院,新乡,453003【正文语种】中文【中图分类】R3【相关文献】1.大菱鲆疾病早期快速检测方法——胶体金免疫层析试纸的研制与建立 [J], 王蔚芳;柴书军;刘庆堂;雷霁霖;丁福红;洪磊;刘新富;苏柯2.磺胺甲噁唑单克隆抗体的研制及免疫金标试纸检测方法的建立 [J], 刘宣兵;张改平;刘庆堂;彩鸿翔;杨继飞;滕蔓;邓瑞广;侯玉泽;王自良3.克伦特罗和莱克多巴胺多残留胶体金免疫层析试纸条的研制 [J], 姜金庆;杨雪峰;王自良;邓瑞广;王选年;张改平4.克伦特罗残留GC-MS检测方法的建立及对自制试纸条性能的确证 [J], 邓瑞广;张海棠;王自良;钟华;张改平5.盐酸克伦特罗的酶联免疫分析试剂盒的研制——Ⅱ克伦特罗酶联免疫检测方法的研究 [J], 宓晓黎;李利东;丁贵平;成恒嵩;潘荣生;李平因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

盐酸克伦特罗的酶联免疫分析试剂盒的研制Ⅰ克伦特罗人工抗原及抗体的制备（pdfX页）

１２４虫旦里尘焦壁垒查！坚生！旦蔓！！堂筮ｌ塑坠血！！型垡丛堂坐！生！！盟！型坠！些！ｇ吐ＺＱ鲤．旦尘世！盟．１１：＿生】【检测技术】［文章编号］１００４－８６８５（２００４）０１．１２４－０３盐酸克伦特罗的酶联免疫分析试剂盒的研制一Ｉ克伦特罗人工抗原及抗体的制备李利东１，宓晓黎１，袁建兴１，潘荣生２（１江苏省微生物研究所，无锡２１４０６３；２．镇江出入境检验榆疫局，江苏２１２００８）摘要［目的］酶联免疫分析试剂盒中的关键试剂是制备ＣＢＬ人工抗原和抗体。

［方法］通过重氮偶联法制备克伦特罗人工抗原．不删摩尔比的克伦特罗一牛血清白蛋白结合物免疫家兔。

［结果］经ＳｅｐｈａｄｅｘＧ一７５柱纯化，用薄层层析和紫外光谱确证．获克伦特罗一牛血清白蛋白结合物，间接酶联免疫分析法测试其效价Ｎ／Ｐ＞ｌ：４０９６００。

［结论］重氮偶联法成功制备ＣＢＬ—ＢＳＡ．并获得高效价的抗血清。

关键词觅伦特罗；人工抗原；抗体；制备Ｓｔｕｄｙ∞¨ｍ２瑚一Ｉｉａｋｅｄｉｍｍｔｍｏｓｏｒｂｅｎｔａｓｓａｙｋｉｔｆｏｒｄｅｎｂｕｔｅｒｏｌｈｙｄｒｃｌｄｏｒｋｌｅ一一Ｉｐｒｅｌｍｒａｔｉｏｎｏｆｃｌｅｎｂｕｔｅｒｏｌｉ’ｍｍｌｍｏ—ｇｅｎａｎｄａｎｔｉｂｏｄｙ“胁昭１，Ｍ１Ｘｉａｏｌｉ。

．Ｈ洲Ｍ锄‘，ｐＡＮＲｏｎｇｓｈｅｎｆ．１．Ｊｉａｎｇｓｕ埘Ⅱｍ矿Ｍｉｅｒｏｂｉｏｌｏｃｙ，Ｗｔｔｘｉ２１４【）６３；２纨啦昭Ｅｎｔｒｙ—ｅｘｉｔＩｎｓｐｅｃｔｉｏｎａ＇Ｑｆａｕａ，ｔｔｉｎｅＢｕｒｅａｕｏｆＰ．Ｒ．Ｃ，Ｊｌｄ７ｗｘｕ２１０００８ＣｈｉｎａＡｋｓｌｒａｅｔＣｌｅｎｂｕ／ｅｒｅｌｉｍｍｕｎｏｇｅｎａｎｄａｎｔｉｂｏｄｙ”ｅｒｅｋｅｙｒｅａｇｅｎｔｓｉｎＥＬＩＳＡｋｉｔＩｎ＇ｔｔｎｔｍｏｇｅｎｗｅｒｅｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｄｂ、ａｃｌｅｎｂｕｔｅｒａｌｄｉ—ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｃｏｕｐｌｅｄｔｏｂｏｖｉｎｅ￥ｅｎｌｌｎａｌｂｕｍｉｎａｎｄａｎｔｉｓｅｒｕｍｓｒａｉｓｅｄｉｎｒａｂｂｉｔｓｂｙｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎａ鲥ｒ日ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｌｒｍｌａｒｒａｔｉｏＣＢＬ—ｄｉａｚｏ—ＢＳＡＣＢＩ－一ＢＳＡｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄｂｙｔｈｉｎ—ｌａｙｅｒｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙａｎｄＵＶｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ．ＴｈｅｉｒｍｎｕｎｉｚｉｎｇｐｏｔｅｎｃｙＷａＳＮ／Ｐ＞１：４０９６００ｗｈｉｃｈｔｒｓｓａｙｈｙＥＬｋ．Ｈｉｇｈｉｍｍｕｎｉｚｉｎｇｐｏｔｅｎｃｙａｎｔｉｓｅｒｕｍａｃｌｆｉｅｖｅｄｂｖｔｈｉｓｍｅｆｌｌｏｄ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓｃｌｅｎｂｕｔｅｒｏｌ；ｉｍｍｕｎｏｇｅｎ；ａｎｔｉｂｏｄｙ；ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ［中图分类号］Ｒ４４６６１［文献标识码］Ａ盐酸克伦特罗（ＣＢＬ）是人上合成的肾上腺素０受体选择性激动剂．是·种支气管扩张剂．崩丁治疗动物和人的阻塞性支气管哮喘。

抗盐酸克伦特罗单克隆抗体的固定及活性测定

抗盐酸克伦特罗单克隆抗体的固定及活性测定陈曦;曹慧;徐斐;于劲松【期刊名称】《生物加工过程》【年(卷),期】2012(10)2【摘要】The immobilization conditions of the monoclonal antibody anti-clenbuterol were optimized by response surface methodology. The results showed that the immobilized temperature was 4 ℃ , the immobilized way was used for oscillation, the stationary phase was pH 9. 6 carbonate buffer, antibody dilution ratio was 1∶532 500, the ratio of solid to liquid was 0. 948 mL per stars, and the fixed time was 11. 372 h. Under such conditions, the TMB substrate termination reaction OD against enzyme labeled antibody could reach 1. 497 8. The obtained value of optimized immobilization was in good agreement with the predicted value of 1. 501 3.%采用响应面法对抗盐酸克伦特罗抗体的固定化条件进行研究.结果表明:当固定温度4℃,固定方式振荡,抗体稀释倍数5.325×105,料液比0.948 mL/颗,固定时间11.372 h时,固定化抗体活力最高,即HRP酶标IgG底物显色反应的OD可达1.497 8.优化后的实验值与模型预测值(1.5013)基本相符.【总页数】5页(P45-49)【作者】陈曦;曹慧;徐斐;于劲松【作者单位】上海理工大学医疗器械与食品学院,上海200093;上海理工大学医疗器械与食品学院,上海200093;上海理工大学医疗器械与食品学院,上海200093;上海理工大学医疗器械与食品学院,上海200093【正文语种】中文【中图分类】TS207.3【相关文献】1.抗盐酸克伦特罗单克隆抗体的制备与鉴定 [J], 左伟勇;洪伟鸣;吴双;王安平;朱善元2.HPLC法测定盐酸克伦特罗膜中盐酸克伦特罗的含量 [J], 朱晶;陈庆先;刘鹏飞3.盐酸克伦特罗单克隆抗体的制备和鉴定 [J], 张玲玲;战翔;彭喆;时建立;吴晓燕;徐胜男;郑书轩;徐绍建;黄保华4.盐酸克伦特罗单克隆抗体的制备及检测方法的初步建立 [J], 邵炜慧;贾红;刘文博;吴艳涛;刘秀梵;5.盐酸克伦特罗单克隆抗体的制备及检测方法的初步建立 [J], 邵炜慧;贾红;刘文博;吴艳涛;刘秀梵因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

盐酸克伦特罗残留酶联免疫吸附(ELISA)检测方法的研究

盐酸克伦特罗残留酶联免疫吸附(ELISA)检测方法的研究
陈存社;吕会田
【期刊名称】《食品与发酵工业》
【年(卷),期】2006(032)007
【摘要】建立了间接ELISA检测盐酸克伦特罗的方法,并对其参数进行了分析计算.在该检测方法中,抗盐酸克伦特罗(CL)抗体最适稀释度为1∶1 000,羊抗兔酶联抗体(HRP-IgG)的最适稀释度为1∶1 500.该检测方法的检测灵敏度可达0.104 6 μg/L,生物检测限为1.452 μg/L,线性检测范围为7.26～90.75 μg/L.
【总页数】4页(P91-94)
【作者】陈存社;吕会田
【作者单位】北京工商大学化学与环境工程学院,北京,100037;北京工商大学化学与环境工程学院,北京,100037
【正文语种】中文
【中图分类】TS2
【相关文献】
1.动物性食品中盐酸克伦特罗(瘦肉精)残留危害及其检测方法研究进展 [J], 张清安;范学辉
2.马杜霉素在鸡组织中残留检测方法的研究 I.酶联免疫吸附测定(ELISA) [J], 沈建忠;钱传范;杨汉春;江海洋
3.马杜霉素在鸡组织中残留检测方法的研究Ⅱ.免疫亲合色谱--酶联免疫吸附法（IAC-ELISA） [J], 沈建忠;钱传范;江海洋;杨汉春
4.应用酶联免疫吸附法(ELISA)结合胶体金试纸法快速筛选猪尿中的盐酸克伦特罗残留 [J], 刘子芝;尹望中;杜永平;阳积文
5.盐酸克伦特罗残留检测方法研究进展 [J], 李庆华;陈肖;彭道和;肖幼荣
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