生物制药工艺学第五章
第五章 生物制品制造工艺2
◎针对不同的产物表达形式采取不同的策略
采用分泌型战略表达重组蛋白，通常体积大、浓度 低，因此应在纯化之前采用沉淀或超滤等方法先进行 浓缩处理； 采用包涵体型战略表达重组蛋白，应先离心回收包 涵体；
采用融合型战略表达重组蛋白，一般是胞内可溶性 的，拟首先选用亲和层析进行纯化 表达在细胞膜和细胞壁之间的间隙中的蛋白质，应 用低浓度的溶菌酶处理，然后再用渗透压休克法释放 重组蛋白。
凝胶过滤层析是根据蛋白的分子量和体积差异进行分离的；
径向层析是近年来发展起来的集层析分离和膜分离于一体的 一种复合技术，在流量、负荷量等参数方面显示出极大的优越 性。
§3 DNA重组药物
◎多种分离纯化技术的联合运用 在进行重组蛋白的纯化时，通常需要综合使用多种 技术，一般来说，在选择分离纯化方法时应遵循下列 原则： ＃ 应选择不同分离纯化机理的方法联合使用
• 基因工程药物是指应用基因工程或蛋白质工程
技术制造的重组活性多肽、蛋白质及其修饰物。
• （1）重组细胞因子类：如IFN、IL、TNF； • （2）重组生长因子类：如EGF、NGF以及促进造 血系统的生长因子（EPO、CSF）； • （3）重组多肽与蛋白质类激素：如重组人胰岛 素、重组人生长激素（rhGH）等； • （4）心血管病治疗剂及酶制剂：如水蛭素、tPA （组织纤溶酶原激活物）、天冬酰胺酶、SOD等。 • （5）重组疫苗及单抗制品：如重组乙肝表面抗 原疫苗（酵母）、肿瘤疫苗等。
＃ 应首先选择能除去含量最多杂质的方法
＃ 应尽量选择高效的分离方法
＃ 应将最费时、成本最高的分离纯化方法安排在最 后阶段
◎合适分离纯化介质的选择
常用的蛋白质分离纯化介质有Sephadex和Sepharose。 理想的分离纯化介质应具有下列性质：
生物制药工艺学5章生物制药工艺学
优先选择技术成熟、性能稳定、操作简便、维护方便的设备，同时要考虑设备的 可扩展性和升级潜力。
车间布局规划原则和实例展示
车间布局规划原则
遵循工艺流程顺畅、物料搬运便捷、空间利用高效、安全卫 生等原则进行车间布局规划。
实例展示
以某生物制药企业的生产车间为例，展示如何根据生产工艺 流程、设备尺寸和产能等因素，合理规划车间布局，包括设 备摆放、物料存放、人员流动等方面的设计。
前景展望
随着科技的进步和生物医药需求的增长，生物制药产业将继续保持快速发展的势头。未来 ，生物制药将在疾病治疗、预防保健、农业、环保等领域发挥更大的作用，为人类健康和 生活质量的提高做出更大的贡献。
02 原料选择与预处理
原料来源及选择原则
动物源原料
选择健康、无疾病、品种明确的动物，确保 原料的安全性和有效性。
资源管理
合理配置人力、物力、财力等资源， 确保质量管理体系的顺利运行。
质量管理体系实施过程监控和持续改进方法论述
过程监控
建立过程监控机制，对关键过程进行实时监控，确保过程稳定和 受控。
数据分析
运用统计技术对数据进行分析，识别过程中的问题和改进机会。
持续改进
采用PDCA循环等方法，对过程进行持续改进，提高过程效率和 质量。
设备维护和保养制度建立
设备维护和保养的重要性
设备是生物制药生产的核心，良好的维护和保养制度能够确保设备稳定运行，延长设备使用寿命，减少故障停机 时间，提高生产效率。
设备维护和保养制度建立
制定详细的设备维护和保养计划，明确维护周期、保养内容和责任人；建立设备维护档案，记录设备维护历史和 故障处理情况；定期对设备进行预防性维护和保养，确保设备处于良好状态。
生物制药工艺学习题(含答案
2）重组生长因子类：如表皮生长因子（
EGF）、神经生长因子（ NGF），以及促进造血系统的
生长因子：如促红细胞生成素（ EPO）、集落刺激因子等（ CSF）； 3）重组多肽与蛋白质类激
素：如重组人胰岛素（ rhInsulin ）、重组人生长激素等（ rhGH）； 4）心血管病治疗剂及酶
制剂：如水蛭素、 tPA （组织纤溶酶原激活物） 、天冬酰胺酶、超氧化物歧化酶（
白介素、
CSF（ ColonyStimulatingFactor
）集落刺激因子、 EPO（ Erythropoietin
）促红细胞生成
素、 EGF（ EpidermalGrowthFactor
）表皮生长因子、 NGF（NerveGrowthFactor
）神经
生长因子、 rhGH（ RecombinantHumanGrowthHormone）重组人生长激素、 Ins （ Insulin
13、 PCR由 3 个基本反应组成，即 高温变性、低温退火、适温延伸
。
..........
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.
14、基因工程中原核表达常用的宿主有 大肠杆菌、枯草杆菌等；常用的真核表达系统有
酵母、
动物（植物）细胞 等。
15、大肠杆菌表达系统的缺点是不能进行
翻译后加工（糖基化） ，因而像 EPO 等基因的表达
.
.
.
B. 将 A21 位替换成甘氨酸， B 链末端增加两个精氨酸，使之在 C. 将 B29 位赖氨酸用长链脂肪酸修饰，改变其皮下扩散和吸收速度 D. 将人胰岛素 B28 位与 B29 位氨基酸互换，使之不易形成六聚体
pH4 溶液中可溶
三、
第五章盐析生物制药工艺学
10
(二）溶质（蛋白质等）种类的影响
log S
0.50 0
-0.50 -1.00
0
拟球蛋白
血清白 蛋白
碳氧肌 红蛋白
血纤维 蛋白原
碳氧血 红蛋白
2
4
6
8
10
μ
第五章
第一节 第二节 第三节 第四节
11
盐析分布曲线
第五章
第一节 第二节 第三节 第四节
12
（三）蛋白质浓度的影响
• 蛋白质浓度 提高，盐用 量减少。
第五章 固相析出分离法
固相析出分离法
通过改变溶液条件，使溶质以固体形式从溶 液中分出的操作技术。
• 盐析法 • 有机溶剂沉淀法 • 等电点沉淀法 • 结晶法
第五章
第一节 第二节 第三节 第四节
2
第一节 盐析法 (salt precipitation)
第五章
第一节 第二节 第三节 第四节
定义： 盐析法是利用各种生物分子 在浓盐溶液中溶解度的差异， 通过向溶液中引入一定数量 的中性盐，使目的物或杂蛋 白以沉淀析出，达到纯化目 的的方法。
- dS dP
10
9
8
7
6
5
4
3
2
1
0 40
50
第五章
第一节 第二节 第三节 第四节
30g/L 3g/L
60
70
P
80 13
（四）温度的影响
• 温度的变化会影响β值。 2
pH6.6
log S
• 在无盐或稀盐溶液中， 1
0℃
大多数蛋白质溶解度是
随温度升高而增大的，
但在高盐溶液中常相反。 0
(完整版)吴梧桐主编《生物制药工艺学》学习笔记
第一章生物药物概论1、生物药物的分类：（1）基因重组多肽、蛋白类治疗剂（2）基因药物（3）天然生物药物（4）合成与部分合成的药物。
DNA重组药物和基因药物的区别：DNA重组药物即应用重组DNA技术（包括基因工程技术和蛋白质工程技术）制造的重组多肽、蛋白质类药物和疫苗、单克隆抗体与细胞因子等；基因药物即以基因物质（DNA或RNA）为基础，研究而成的基因治疗剂、基因疫苗、反义药物和核酶等。
2、生物药物的作用特点：药理学特性：（1）药理活性高（2）治疗的针对性强，治疗的生理、生化机制合理，疗效可靠。
（3）毒副作用较少，营养价值高。
（4）生理副作用常用发生。
理化特性：（1）生物材料中的有效物质含量低，杂质种类多且含量相对较高。
（2）生物活性物质组成结构复杂、稳定性差。
（3）生物材料易染菌，腐败。
（4）生物药物制剂的特殊要求。
3．DNA重组药物有：（1）细胞因子干扰素类：α-干扰素、β-干扰素、γ-干扰素（2）细胞因子白介素类和肿瘤坏死因子：白介素-2（IL-2）和突变型白介素-2（Ser125-IL-2）肿瘤坏死因子类主要有TNF-α和TNF-α受体。
（3）造血系统生长因子类：粒细胞集落刺激因子（G-CSF）、巨噬细胞集落刺激因子（M-CSF）、巨噬细胞粒细胞集落刺激因子（GM-CSF）、促红细胞生成素（EPO）、促血小板生成素（TPO）干细胞生长因子（SCF）（4）生长因子类：胰岛素样生长因子（IGF）、表皮生长因子（EGF）、血小板衍生生长因子（PDFD）、转化生长因子（TGF-α和TGF- β）、神经生长因子及各种神经营养因子。
（5）重组多肽与蛋白质类激素：重组人胰岛素（rhInsulin）、重组人生长激素（rhGH）、促卵胞激素（FSH）、促黄体生成素（LH）和绒毛膜促性腺激素（HCG）、重组人白蛋白和重组人血红蛋白（6）心血管病治疗剂与酶制剂：Ⅷ因子、水蛭素、tpA、rtpA、尿激酶、链激酶、葡激酶、天冬酰胺酶、超氧化歧化酶、葡萄糖脑苷酶及DNsae等（7）重组疫苗与单抗制品：重组乙肝表面抗原疫苗、乙肝基因疫苗、AIDS疫苗、流感疫苗、痢疾疫苗和肿瘤疫苗。
第五章 生物制品制造工艺1
致病性细菌所产生的特异性毒性物质――细 菌毒素，经甲醛处理及加温处理以除去毒性 而保留免疫原性，称为类毒素
吸附精制白喉类毒素的制造
1. 菌种及培养基 2. 培养：温度、pH 糖量、通气量、补料和生长因 子、培养时间 3. 脱毒：温度、pH 甲醛含量
五、生物制品的质量检定
（一）理化性质检定
1.物理性状的检查
减毒活疫苗
牛痘苗 流感活疫苗 麻疹活疫苗 腮腺炎活疫苗 水痘活疫苗 风疹活疫苗 斑疹伤寒疫苗 脊椎灰质炎疫苗
灭活疫苗
乙型脑膜炎疫苗 流感疫苗 Q热疫苗 脊髓灰质炎疫苗 乙型肝炎疫苗
亚单位疫苗
流感亚单位疫苗 腺病毒亚单位疫苗
基因工程疫苗
乙肝疫苗
二、分类
1、疫苗(Vaccine)
一切通过注射或黏膜途径接种，可以诱 导机体产生针对特定致病原的特异性抗体 或细胞免疫，从而使机体获得保护或消灭 该致病原的生物制品统称为疫苗，包括蛋 白质、多糖、核酸活载体，感染因子等。
（二）病毒的培养和繁殖 ( Culture and Replication of Viruses)
1、动物培养(Animals) 2、鸡胚培养(Embryonated eggs） 3、组织培养(Organ and tissue culture） Organ culture Embryo culture 4、细胞培养 Cell culture:原代细胞(primary culture cell ) 传代细胞 二倍体细胞
指利用微生物载体，将保护性抗原基因重组 到微生物中，使用这种能表达保护性抗原基因 的重组微生物制成的疫苗（多为活疫苗）
3）核酸疫苗（DNA疫苗，基因疫苗）
指使用能够表达抗原的基因本身即核酸制 成的疫苗。
01396生物制药工艺学.doc
01396生物制药工艺学.doc湖北省高自考考试大纲课程名称：生物制药工艺学课程代码：01396（理论）第一部分课程性质与目标一、课程性质与特点该课程是，是一门涉及生物学、医学、药学、生物技术、化学和工程学等学科基本原理的综合性应用技术科学。
使学生了解生物药物的来源及其原料药物生产的重要途径和工艺过程，掌握生物药物的一般提取、分离纯化原理与方法，了解各类生物药物的结构、性质、用途和生产方法、生产工艺原理与过程。
通过本课程的各个教学环节的学习，学生应具备生物药物研究、生产、开发的基本知识、基本理论与基本技能，并且具有应用现代生物技术研究、开发生物药物的初步能力。
二、考核知识点与考核目标（一）细胞破碎的方法及原理（重点）识记：常用细胞破碎的方法理解：细胞破碎的方法和各自特点、适用范围应用：举例说明不同生物材料的细胞破碎方法（二）生物材料的预处理（次重点）识记：凝聚作用和絮凝作用的概念理解：细胞培养液的预处理方法和相关原理，去除杂蛋白和金属离子的方法和原理应用：影响絮凝效果的主要因素（三）了解液固分离的方法和设备（一般）识记：过滤和离心分离的概念理解：影响液固分离的因素有哪些应用：错流过滤的使用特点；碟片式离心机的类型和特点第四章萃取分离法一、学习目的与要求掌握溶剂萃取的基本原理，萃取方式，破乳化方法；熟悉萃取设备和溶媒回收方法掌握超临界萃取的原理，影响因素；了解超临界萃取方式及流程掌握双水相萃取原理和影响因素了解反胶束萃取原理及其在生化药物分离纯化中的应用二、考核知识点与考核目标（一）萃取法的基本原理（重点）识记：溶剂萃取法、双水相萃取、反胶束萃取、超临界流体萃取的概念理解：各种萃取方法的特点应用：举例说明不同萃取法的应用（二）溶剂萃取法的操作方式（次重点）识记：乳化和破乳化的概念理解：影响溶剂萃取的因素应用：破坏乳状液的方法（三）超临界流体萃取在生物制药领域的应用（一般）识记：超临界萃取概念理解：超临界萃取的原理和影响因素应用：超临界萃取方式及流程和超临界流体萃取在药品生产中应用第五章固相析出分离法一、学习目的与要求掌握盐析法、有机溶剂沉淀法、等电点沉淀法等固相析出分离方法的原理和特点，以及影响因素。
5_生化制药工艺基础 2
糖提取---肝素提取工艺
1.盐 解 － 离 子 交 换 生 产 工 艺 猪 肠 粘 膜
【提取 】 PH9.0,50~55℃ ,2h 【洗涤 】
提 取 液
【吸附 】 714树脂 【洗脱 】 3mol/LNaCl
树 脂 吸 附 物 洗 脱 液
1.4mol/LNaCl
树 脂 吸 附 物
【溶解 】
【沉淀 】 乙醇
高分子聚合物沉淀
水溶性非离子型高分子聚合物，如不同分子 量的聚乙二醇（PEG）、葡聚糖、右旋糖苷硫 酸酯等，能使蛋白质水合作用减弱而发生沉 淀。
表面活性剂
十六烷基三甲基季胺溴化物（CTAB） 十六烷基氯化吡啶（CPC）
}
酸性 多糖
结晶(Crystallization)
定义：溶液中的溶质在一定条件下因分子有规则 的排列而结合成晶体。 通过结晶，溶液中的大部分杂质会留在母液中， 经过滤、洗涤可得到纯度高的晶体。
高密度培养 产品分离
生物制药工程总体路线
生物医药蛋白提取工艺流程：
生物药物生产中常用的分离纯化方法 方 法 目 的
离心/过滤 阴离子交换层析 40nm微孔滤膜过滤 阳离子交换层析 超 滤
去除细胞、细胞碎片、颗粒性杂质 去除杂志蛋白、脂质、DNA、病毒 进一步去除病毒 去除牛血清蛋白或转铁蛋白等 去除沉淀物及病毒 去除残余的杂蛋白 与多聚体分离 除 菌
盐析法 (Salt precipitation)
定义：盐析法是利用各种生物分子在浓 盐溶液中溶解度的差异，通过向溶液 中引入一定数量的中性盐，使目的物 或杂蛋白以沉淀析出，达到纯化目的 的方法。 优点：简单、经济、较少变性 缺点：分辨率不高，要除盐
有机溶剂沉淀
第五章 氯霉素生产工艺
工艺
反应条件
2）酸浓度对水的影响
O CH2NH2 HCl + H2O O2N O 2 O2N O2 CH2NH2 -H2O N O2N N N O2N N NO2 NO2 O2N O CH2NH2 + HCl + H2O
硝基-α-乙酰氨基 羟基苯丙酮 硝基 乙酰氨基-β-羟基苯丙酮 乙酰氨基
工艺
3、对硝基-α-乙酰胺基苯乙酮的制备 对硝基原理
对硝基-α-氨基苯乙酮盐酸盐
对硝基-α-乙酰胺基苯乙酮
硝基-α-乙酰氨基 羟基苯丙酮 硝基 乙酰氨基-β-羟基苯丙酮 乙酰氨基
工艺
工 艺
1）加入母液，冷至0℃~3℃，加入对硝基-α氨基苯乙酮盐酸盐 ，加入乙酸酐，先慢后快 地加入38%~40%的乙酸钠溶液。在18℃~22℃反 应1h测定反应终点。 2）反应液冷至10℃~13℃析出结晶，过滤，先 以1%~1.5%碳酸氢钠溶液洗结晶至pH 7。
硝基-α-乙酰氨基 羟基苯丙酮 硝基 乙酰氨基-β-羟基苯丙酮 乙酰氨基
工艺
1、对硝基-α-溴代苯乙酮的制备 对硝基原理
对硝基苯乙酮
对硝基-α-溴代苯乙酮
硝基-α-乙酰氨基 羟基苯丙酮 硝基 乙酰氨基-β-羟基苯丙酮 乙酰氨基
工艺
反应历程
烯醇化
硝基-α-乙酰氨基 羟基苯丙酮 硝基 乙酰氨基-β-羟基苯丙酮 乙酰氨基
硝基-α-乙酰氨基 羟基苯丙酮 硝基 乙酰氨基-β-羟基苯丙酮 乙酰氨基
工艺
5.3 对硝基-α-乙酰氨基-β-羟基苯丙酮的生 对硝基乙酰氨基产工艺原理及其过程
• • • •
1、对硝基-α-溴代苯乙酮的制备 、对硝基 溴代苯乙酮的制备 2、对硝基 氨基苯乙酮盐酸盐的制备 、对硝基-α-氨基苯乙酮盐酸盐的制备 3、对硝基 乙酰胺基苯乙酮的制备 、对硝基-α-乙酰胺基苯乙酮的制备 4、对硝基 乙酰氨基 羟基苯丙酮的 乙酰氨基-β-羟基苯丙酮的 、对硝基-α-乙酰氨基 制备
生物制药工艺教案
湖北生物科技职业学院课时教案
湖北生物科技职业学院课时教案
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湖北生物科技职业学院课时教案。
生物制药工艺学5章生物制药工艺学
• 严防空气带菌：
提高空气进口的洁净度 除尽压缩空气中的油和水 空气过滤器灭菌时防止被冲翻 保证空气过滤器介质的填装质量
• 杜绝设备污染：
• 良好的设计（无死角） • 规范的安装 • 彻底的清洗 • 严密的维修 • 有效的灭菌。
染菌罐的处理
• 种子罐染菌 灭菌后放下水道 并对种子罐、管道进行检查和灭菌 启用备用罐或倒种
• 1．定义： 将配制好的培养基输入发酵罐中，用蒸汽 加热，使培养基和设备同时灭菌的一种灭 菌方式。
2．操作过程：
空罐准备：清洗、检修和检测。 升温：把培养基加热到灭菌所需的温度。 保温维持：在灭菌温度下保持灭菌所需时间。 冷却保压：把培养基的温度降低到接种的温度。
温度随灭菌时间的变化
分批灭菌设备示意图
N0 ：细菌及芽孢数之和 N：10 -3
二.温度和时间对培养基灭菌的影响 1.培养基灭菌温度的选择
选择即能达到灭菌要求， 又保证营养成分不被破坏的温度
• 1.培养基营养成分破坏动力学方程
-dC/dt = K’ C -dC/dt :营养物降解速度 mol / L h C: 营养物浓度 mol / L K’ : 营养物降解反应速度常数 1 / s t ：时间( S )
2．流程： 1)由热交换器组成的灭菌系统
2)蒸汽直接喷射型的连续灭菌系统
3）由连消塔、维持罐和喷淋冷却组成的灭菌系统
由热交换器组成的灭菌系统工艺流程图
温度随时间的变化
蒸汽直接喷射型的连续灭菌系统
温度随灭菌时间的变化
由连消塔、维持罐和喷淋冷却组成的灭菌系统
三）连续灭菌与分批灭菌的比较与选择
• 这些微生物大小不一，一般附着在空气中的灰 尘上或雾滴上，空气中微生物的含量一般为 103~104个／米3。
《生物制药工艺学 》课程教学大纲
《生物制药工艺学》课程教学大纲
一、课程基本情况
课程编号：133X04E 学分： 2 周学时：2 总学时： 34 开课学期： 3.2
开课学院：海洋学院
英文名称：Microbial Pharmaceutical Technology
适用专业：生物技术专业
课程类别：专业方向模块课
课程修读条件：生物化学
网络课程地址:
所属基层学术组织：生物与海洋科学系
二、课程简介
本课程概述生物制药的研究内容、工艺技术基础、然后分章论述氨基酸药物、多肽与蛋白质类药物、酶类药物、核酸类药物、糖类药物、脂类药物和抗生素等，分别对各类有代表性产品的原料来源、结构、性质、用途、生产工艺及质量控制进行介绍，并介绍生物制品和手性药物。
三、教学目标
总目标：掌握氨基酸、多肽、蛋白、酶、核酸、糖类、脂类、生物制品及手性药物等的生产工艺流程
知识目标：掌握制药工艺中常用的各项技术手段
能力目标：培养利用网络资源自学的能力
素质目标：提高分析问题的能力
四、教学内容及学时分配
五、考核及成绩评定方式
六、教材及参考书目：
撰写人：金海晓。
吴梧桐主编《生物制药工艺学》学习笔记
第一章生物药物概论1、生物药物的分类：（1）基因重组多肽、蛋白类治疗剂（2）基因药物（3）天然生物药物（4）合成与部分合成的药物。
DNA重组药物和基因药物的区别：DNA重组药物即应用重组DNA技术（包括基因工程技术和蛋白质工程技术）制造的重组多肽、蛋白质类药物和疫苗、单克隆抗体与细胞因子等；基因药物即以基因物质（DNA或RNA）为基础，研究而成的基因治疗剂、基因疫苗、反义药物和核酶等。
2、生物药物的作用特点：药理学特性：（1）药理活性高（2）治疗的针对性强，治疗的生理、生化机制合理，疗效可靠。
（3）毒副作用较少，营养价值高。
（4）生理副作用常用发生。
理化特性：（1）生物材料中的有效物质含量低，杂质种类多且含量相对较高。
（2）生物活性物质组成结构复杂、稳定性差。
（3）生物材料易染菌，腐败。
（4）生物药物制剂的特殊要求。
3．DNA重组药物有：（1）细胞因子干扰素类：α-干扰素、β-干扰素、γ-干扰素（2）细胞因子白介素类和肿瘤坏死因子：白介素-2（IL-2）和突变型白介素-2（Ser125-IL-2）肿瘤坏死因子类主要有TNF-α和TNF-α受体。
（3）造血系统生长因子类：粒细胞集落刺激因子（G-CSF）、巨噬细胞集落刺激因子（M-CSF）、巨噬细胞粒细胞集落刺激因子（GM-CSF）、促红细胞生成素（EPO）、促血小板生成素（TPO）干细胞生长因子（SCF）（4）生长因子类：胰岛素样生长因子（IGF）、表皮生长因子（EGF）、血小板衍生生长因子（PDFD）、转化生长因子（TGF-α和TGF-β）、神经生长因子及各种神经营养因子。
（5）重组多肽与蛋白质类激素：重组人胰岛素（rhInsulin）、重组人生长激素（rhGH）、促卵胞激素（FSH）、促黄体生成素（LH）和绒毛膜促性腺激素（HCG）、重组人白蛋白和重组人血红蛋白（6）心血管病治疗剂与酶制剂：Ⅷ因子、水蛭素、tpA、rtpA、尿激酶、链激酶、葡激酶、天冬酰胺酶、超氧化歧化酶、葡萄糖脑苷酶及DNsae 等（7）重组疫苗与单抗制品：重组乙肝表面抗原疫苗、乙肝基因疫苗、AIDS疫苗、流感疫苗、痢疾疫苗和肿瘤疫苗。
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第五章固相析出分离法特点
1、什么是盐析沉淀，盐析的基本原理？
答：盐析法是利用各种生物分子在浓盐溶液中溶解度的差异，通过向溶液中引入一定量的中性盐，使目的物或杂蛋白以沉淀形式析出，从而达到纯化目的的方法。
基本原理：低浓度下——盐溶，蛋白质溶液溶解度增大；
高浓度下——盐析，蛋白质溶解度下降。
2、影响盐析效果的因素有哪些？
答：（1）无机盐的种类（2）溶质（蛋白质等）种类的影响（3）蛋白质浓度的影响（4）温度的影响（5）PH的影响
3、影响有机溶剂沉淀的因素有哪些？
答：（1）有机溶剂的种类及用量（2）PH的影响（3）温度（4）无机盐的含量（5）某些金属离子的助沉淀作用（6）样品浓度
4、有哪些方法可以形成饱和溶液?
答：（1）蒸发溶剂（2）温度诱导法（3）盐析结晶法（4）透析结晶法（5）有机溶剂结晶法（6）等电点法（7）微量扩散法（8）化学反应结晶法（9）共沸蒸馏结晶
5、蛋白质结晶有哪些特点，有哪些因素可影响晶体的大小？
答：特点：（1）离子和分子在空间晶格的结合点上呈有规则的排列
（2）结晶过程有很好的选择性
（3）经过滤洗涤后可得到纯度高的晶体
影响因素：（1）过饱和度（2）温度（3）搅拌速度（4）晶种
6、PI沉淀有哪些特点，如何应用？
答：特点：操作简便、试剂消耗少、给体系引入的杂质少，适用于水化程度不大，在等电点是溶解度很低的物质。
应用：常与盐析法、有机溶剂沉淀法一起使用。
常作去杂手段。
7、蛋白质结晶需要哪些条件，有几种具体操作方法？
答：条件：形成过饱和溶液
操作方法：（1）蒸发法（2）温度诱导法（3）盐析结晶法（4）透析结晶法（5）有机溶剂结晶法（6）等电点法（7）微量扩散法（8）化学反应结晶法（9）共沸蒸馏结晶
8、术语
体格尔经验公式：lgS=β-Ksμ(S：蛋白质溶解度，g/L；μ：盐离子强度，μ=1/2∑c i Z i2；
c i：i离子浓度，mol/L；Z i：i离子化合价；β：常数；Ks：盐析常数)
Ks盐析：在一定的PH和温度改变下改变离子强度(盐浓度)进行盐析。
β盐析：在一定离子强度下仅改变PH和温度进行盐析。
Jackoby抽提结晶法：
透析结晶法：。