海洋放线菌Streptomyces sp. 124092中的细胞毒活性成分
海洋放线菌及其生物活性的研究
海洋放线菌及其生物活性的研究唐婧媛薛永常唐婧媛，大连工业大学生物工程学院，116034，大连市甘井子区轻工苑1号。
薛永常(通讯作者)，单位及通讯地址同第一作者。
收稿日期：2010-08-17放线菌（actinomycetes ）是一类具有分枝状菌丝体的高（G+C ）%/mol 的革兰氏阳性菌，因早期发现其类群的菌落呈放射状而得名。
放线菌广泛存在于不同的自然生态环境中，种类繁多、代谢功能各异，其特有形态和生物学特性是研究生物形态发育和分化的良好材料；许多放线菌能产生生物活性物质，是一类具有广泛实际用途和巨大经济价值的微生物资源[1]。
目前分离得到的放线菌绝大多数来源于土壤，陆生放线菌产生的抗生素占天然来源抗生素的70%以上。
但陆生放线菌中能分离出的先导化合物数量毕竟有限，近20年来人们把目光投向了海洋[2]。
海洋占地表面积的71%，海洋生物物种比陆地生物丰富和复杂，生活环境比陆地生物迥异，因此，具有一些特殊的结构和功能，以维持其生命活动。
海洋放线菌因其生活的高盐、高压、低温与低营养等特殊环境而产生其独特的代谢方式，这既确保了在极端环境中生存，也提供了产生抗生素的潜力。
海洋放线菌是新药开发和天然活性产物的重要来源,海洋放线菌的生物多样性是代谢产物功能多样性的基础,因此，研究可培养放线菌的生物多样性具有重要的意义。
1海洋放线菌的多样性海洋环境特殊多样，赋予海洋中的放线菌种类繁多，常见的包括诺卡菌属(Nocardia)、链霉菌属(Streptomycetes)、小单孢菌属(Micromonospora)、放线菌属(Actinoplanetes)等[3]。
据报道可分离到的海洋放线菌近乎分布于海洋各个角落，包括海水、海泥、海底沉积物、海洋动植物等。
Han 等（2003）从东海Amursky海湾的海水中分离得到3株海洋放线菌，其中一株经鉴定属于新分离的一个属，Salinibacterium 属，具有耐盐的作用[4]。
海洋链霉菌抗补体活性菌株筛选及活性产物研究
海洋链霉菌抗补体活性菌株筛选及活性产物研究补体系统是人体非常重要的免疫防御系统之一,其在消除微生物入侵和维持机体的平衡等生理过程中起着重要作用。
但是,补体系统如果过度激活会引起类风湿性关节炎、老年性痴呆及急性呼吸窘迫综合征等多种疾病。
天然产物来源的抗补体活性成分具有可持续生产,且能在体内被直接消化吸收等优点因此引起了国内外学者广泛的关注。
由于微生物易于培养、易于基因工程改良,且微生物来源的产品质量容易控制,所以微生物来源的抗补体活性物质具有良好的应用前景。
然而,目前对微生物来源抗补体活性物质的研究还非常有限。
海洋放线菌次级代谢产物复杂多样,且具有众多生物活性,如抗细菌、抗真菌、抗病毒、细胞毒性和抗肿瘤活性,因此海洋放线菌已成为新药研究与开发的新来源,但目前对海洋放线菌的抗补体活性物质的研究还处于起步阶段。
本课题首先筛选了具有抗补体活性的海洋来源链霉菌,并对两株产抗补体活性物质的菌株星海链霉菌Streptomyces xinghaiensis NRRL B24674T(简称 S187)和海洋链霉菌Streptomyces sp.DUT11(简称DUT11)进行了深入研究,得到以下主要结果:(1)对分离自大连星海湾和小平岛海平面以下约10m处的海泥样品中的42株海洋放线菌进行了抗补体活性物质生产菌筛选,发现7株海洋放线菌的发酵液具有良好的抗补体活性。
对这7株放线菌进行了 16S rRNA基因序列分析,发现这些海洋放线菌分别属于不同的种,提示可产生抗补体活性物质的海洋放线菌菌株有丰富的生物多样性。
(2)进一步研究了具有良好抗补体活性的菌株星海链霉菌S187抗补体活性物质的生产,对其抗补体活性次级代谢产物的发酵培养基进行优化,并对抗补体活性物质进行了分离纯化和结构解析。
首先,选取7种不同培养基对菌株S187进行了发酵条件优化,确定M12培养基为最佳培养基,并对其发酵条件进行优化,确定最佳发酵条件为:初始pH为7.0,温度为28 ℃,培养时间为6天。
细胞毒活性海洋放线菌的筛选与两株目标菌株次级代谢产物的分析
细胞毒活性海洋放线菌的筛选及两株目标菌株次级代谢产物的研究３筛选样品的准备将冰箱保藏的菌株接于原斜面培养基上，于２８＂Ｃ培养箱中活化培养５至８天后，分别接种到５ｍＬ试管液体培养基中，于２８＂Ｃ试管摇床中２４０ｒｐｍ振荡培养７天。
取全部发酵物，超声破碎菌体细胞，按体积比加入２倍量的甲醇，静置过夜，离心取上清液，浓缩至干，所得固形物为活性测试样品。
４活性筛选结果４．１海虾生物致死法：在用海虾生物致死法测试的２６２株放线菌发酵样品中，１００Ｊｆ，ｇ／ｍＬ的有活性菌株共有７８株。
４．２抑菌活性筛选：２６２株放线菌发酵样品经抑菌活性筛选之后，有３２株对至少一种致病菌有活性。
４．３肿瘤细胞筛选：在海虾生物致死法初筛有活性的７８株放线菌样品中，经肿瘤细胞二级复筛，共有１７株在终浓度１００ｕｇ／ｍＬ时对Ｋ５６２细胞显示了不同程度的细胞毒活性。
其中，１３株菌株在终浓度１０＃ｇ／ｍＬ仍显示较强的活性。
部分活性结果参见Ｆ睡１．２．１。
细胞毒活性海洋放线菌的筛选及两株目标菌株次级代谢产物的研究第三节小结本章采用改良的９６孔板海虾生物致死法和抑菌试验作为初筛模型，成本低廉，测试样品用量少，可筛样本数大，可以扩大筛选面、加快筛选速度，故可通过大规模筛选，快速排除绝大多数无活性的菌株，具有十分显著的优越性。
复筛采用流式细胞技术，结合镜检观察细胞形态学变化，选择有限的初筛有效菌株，专门检测具有细胞周期抑制、细胞凋亡及坏死性细胞毒等活性的菌株，具有灵敏、微量、快速的优点。
结合这两种模型进行分级组合筛选，充分发挥两种模型各自的长处，形成了细胞周期抑制、细胞凋亡诱导以及细胞毒等抗癌活性微生物菌株的简便快速且经济可行的组合筛选模式，大大缩小了复筛样本数目、减少了流式细胞术筛选的工作量、大幅度降低了成本，适用于大量菌株抗肿瘤活性的体外筛选。
本章从采自威海、福建、广东的１０个海泥样品中共分离得到放线菌２６２株，并利用组合筛选模式对这２６２株放线菌进行了活性筛选。
海洋放线菌_药物开发的新兴资源_蔡超靖
海洋放线菌—药物开发的新兴资源蔡超靖， 丁彦博， 单越琦， 穆云龙（华北制药集团新药研究开发有限责任公司 微生物药物国家工程研究中心河北省工业微生物代谢工程技术研究中心, 石家庄 050015）摘 要：近些年，海洋放线菌成为新药研发的重要来源，引起人们的关注，本文综述了海洋放线菌在分离方面取得的成绩，并介绍了通过传统筛选方法分离得到的生物活性代谢物，以及在与新化合物相关的基因挖掘和生物合成基因簇的异源表达方面取得的进展。
关键词：海洋放线菌； 活性代谢产物； 基因组学； 异源表达中图分类号：R978.1 文献标识码：A 文章编号：1001-8751(2012)01-0022-08Marine Actinomycetes －an Emerging Resource for the Drug DiscoveryCai Chao-Jing ， Ding Yan-Bo ， Shan Yue-Qi ， Mu Yun-Long（New Drug Research & Development Center of North China Pharmaceutical Group Corporation, National Microbial Medicine Engineering & Research Center, Hebei Industrial Microbial Metabolic Engineering Research Center, Shijiazhuang 050015）Abstract: As an important resource of the new drugs, more and more attentions were paid on marine actinomycetes recently. This review highlights achievements in the isolation of marine actinomycetes, some examples of bioactive metabolites identi fied by traditional screening, and presents new progress in the field of genome mining leading to the discovery of novel compounds and heterologous expression of biosynthetic gene clusters.Key words ：marine actinomycetes ； bioactive secondary metabolites ； genomics ；heterologous expression收稿日期：2011-11-15作者简介：蔡超靖，工程师， 研究方向：微生物来源的新药筛选。
海洋放线菌多样性及其代谢产物研究进展
・综述・海洋放线菌多样性及其代谢产物研究进展△王海雁,刘健,赵淑江3(温州医学院环境与公共卫生学院,浙江温州325035)摘 要:海洋放线菌由于能够产生结构新颖、功能多样的活性物质,成为天然活性产物和新药开发的重要来源,日益受到人们的关注。
本文综述可培养海洋放线菌的多样性及近几年海洋放线菌活性代谢产物的研究进展,重点描述了一些活性代谢产物的结构及其相关生物活性。
关键词:海洋放线菌;多样性;活性代谢产物;生物活性中图分类号:R915.1 文献标识码:A 文章编号:100223461(2010)0120067208 放线菌具有复杂的形态分化过程和合成种类丰富的次级代谢产物的能力,人们对陆生放线菌的多样性及其代谢产物进行了广泛深入的研究,取得了一系列成果。
但现在从陆生放线菌中发现新的活性物质变得日益困难,迫使人们将目光转向海洋环境中的放线菌等微生物。
海洋微生物资源丰富。
20世纪30年代, ZoBell等发现了海水的杀菌作用[1]。
随后,各国对海洋微生物资源开发力度逐渐加强,海洋微生物来源的各种活性物质的开发研究进展迅速。
研究发现,大约有27%种属的海洋微生物具有抗菌活性[2],其中来源于放线菌的活性代谢产物约占微生物来源的活性化合物的45%,结构新颖的海洋放线菌代谢化合物的发现为抗生素的研究开创了新的途径[3]。
科学工作者对海洋放线菌进行了多方面的研究,包括微囊化技术、噬菌体定向筛选等许多培养、分离等方面的新技术得到应用,海洋放线菌研究得到很大进展[4]。
据不完全统计,在21世纪从海洋放线菌中分离到的结构新颖化合物的数量是上个世纪的两倍之多。
这些新化合物具有独特结构、特殊生理活性,例如抗肿瘤[5]、抗真菌[6]、抗疟[7]以及杀虫功能[8,9]。
海洋放线菌活性代谢物潜在的应用价值,使该庞大的海洋微生物类群有可能成为抗生素类药物的重要来源。
1 海洋放线菌的多样性海洋放线菌具有丰富的多样性,按其生活环境可大体分为共生海洋放线菌、极端环境海洋放线菌、海洋固有放线菌,主要包括链霉菌属、小单孢菌属以及诺卡氏菌、红球菌、游动放线菌等稀有属种。
海洋微生物毒素研究进展Advance in research of marine microbial toxins
海洋科学/2006年/第30卷/第7期76海洋微生物毒素研究进展Advance in research of marine microbial toxins王 新，郑天凌，胡 忠，苏建强（厦门大学 生命科学学院 应用与环境微生物研究所，福建 厦门 361005）中图分类号：Q938.8 文献标识码：A 文章编号：1000-3096（2006）07-0076-06浩瀚的海洋世界具有高盐、高压、低温、寡营养等诸多特点。
海洋中生存着丰富多样的海洋微生物，它们产生了多种多样的生物活性物质，如生物信息物质、药用活性物质、海洋生物毒素和生物功能材料等[1]。
其中海洋生物毒素是当前研究中的一个热点，它具有化学结构多样、分子量小、生物活性高及作用机理独特等诸多特点。
几乎所有的海洋生物种类都有产毒的个体，近年来的研究表明，作为一个庞大的类群，海洋微生物产毒种类繁多，如细菌、真菌、放线菌以及微藻等[2]。
与此同时人们还发现海洋微生物与其它的一些生物毒素之间存在着复杂的关系，研究较多的河豚毒素源于微生物的的观点已逐渐为人们所接受[3,4]。
和其它的毒素一样，微生物毒素既有对人类有害的一面，也有造福人类的一面，而微生物毒素在进一步研究利用中的优势地位也使人们对其投注了更多的目光。
作者拟就海洋微生物毒素的产毒种类、毒素特点、检测方法以及资源化利用等方面作一简要综述。
1 海洋微生物毒素的产毒种类产毒素的海洋微生物有细菌、真菌、放线菌以及微藻等，它们产生的毒素按其化学结构来分主要有肽类、胍胺类、聚醚类和生物碱等。
细菌是了解相对较多的一个类群，目前巳报道的能够产生毒素的细菌主要分布在以下10个属：假单胞菌属（Pseudomonas ）、弧菌属（Vibrio ）、发光杆菌属（Photobacterium ）、气单胞菌属（Aeromonas ）、邻单胞菌属（Plesiomonas ）、交替单胞菌属（Alteromonas ）、不动杆菌属（Acinetobacter ）、芽孢杆菌属（Bacillus ）、棒杆菌属（Corynebacterium ）和莫拉氏菌属（Moraxella ）。
红树植物内生放线菌的分离鉴定和2株海洋链霉菌活性代谢产物的分离鉴定
红树植物内生放线菌的分离鉴定和2株海洋链霉菌活性代谢产物的分离鉴定本研究以红树林植物为研究材料,分离红树植物内生放线菌,并在菌株鉴定基础上,对其细胞毒活性、抗菌活性进行评价,为红树植物内生放线菌资源的开发和利用提供依据。
通过乙醇、氯化汞对样品进行表面消毒,选用1/10ATCC172培养基,结合放线菌酮、制霉菌素、甲氧苄氨嘧啶、新生霉素等抗生素作为选择培养方法,对内生放线菌进行选择性分离。
从来自海南清澜港红树林保护区的18种红树植物3种半红树植物样品中,分离到139株内生放线菌。
内生放线菌在不同红树植物中的分布存在差异。
对分离到的139株菌通过菌落形态、培养特征、细胞壁氨基酸、全糖分析和16S rDNA序列分析,分类鉴定到属。
本研究分离到的139株内生放线菌共分为2个属,分别是小单孢菌（Micromonospora）和链霉菌属（Streptomyces）。
本研究所选择的分离方法获得的内生放线菌,小单孢菌占绝对优势。
采用MTT法和美蓝酶标仪法对所分离到的内生放线菌进行体外细胞毒活性和抗菌活性检测,共有45株菌显示对肝癌SMMC-7721细胞有细胞毒活性,占总菌株数的32.3%。
共分离到抗MRSA活性菌株31株,占总菌株数的22.3 %。
所有测试菌株均未检测到抗白色念珠菌活性。
我们研究证实红树植物内生放线菌,作为一种新颖的微生物资源,有着很大的研究开发潜力。
通过对菌株0616208和124092的细胞毒活性的遗传稳定性分析,其中菌株124092的ID<sub>50</sub>保持在5120,菌株0616208的ID<sub>50</sub>也在480左右,发现它们都具有较好的遗传稳定性。
对2株具有细胞毒活性的放线菌的来源性进行分析,结果表明: 2株菌株均在纯海水配制的YE平板上比在纯蒸馏水配制的YE平板上生长较好,并且都有一定的耐盐性,菌株0616208对NaCl的最高耐受性在13～15%,菌株124092对NaCl 的最高耐受性在10～13%,所以它们很可能是来源于海洋的微生物。
海洋抗菌活性物质
四、海洋微藻级生产者,种类多,繁 殖快 ,在海洋生态系统的物质循环和能量流动中起着极其 重要的作用。海洋微藻是海洋生态系统中的最主要初级生 产者，也是海洋生物资源的重要组成部分。
目前，国外对微藻生物活性物质的研究集中在蓝藻(又称 蓝细菌)和甲藻，从中发现了许多具有潜在药用价值的活 性次级代谢产物，表现为抗肿瘤、抗病毒和免疫抑制活性。
刘晨临等从青岛侧花海葵和绿海葵体分离到23 株真菌，并对其 产生的抑菌活性物质进行了初步测试。从23 株真菌中筛选出3株有较 好抗植物病原真菌活性的菌株，其中青11-1的代谢产物对立枯丝核菌 Rhizoctonia solani有较强的抑制作用。 李淑彬等从南海海泥中分离出一株编号为M182的霉菌，初步鉴定 为青霉Penicilliwn sp.该菌所产生的广谱抗生素M-182A，对细菌、 酵母真菌及丝状真菌均有抑制作用。
Cueto M等从巴哈马褐藻中分离到一株Pestalotia sp（盘多毛孢属） 菌,当它处于周围有抗性细菌存在的培养条件下,它能产生一种抗性物质。 这种抑菌物质对MRSA菌（耐甲氧西林金黄色葡萄球菌）最小抑菌浓度 37ng/ml,对VREF菌（耐万古霉素粪肠道球菌）最小抑菌浓度78ng/ml。微 生物之间的相互拮抗作用,对于从真菌中发现新颖的抗生素也许是非常有 用的。 Keissleriella sp YS4108是从中国黄海沉积物中分离到的一株真菌 ,发酵液分离提纯得到几种抗真菌次级代谢产物,其中一种聚酮类物质,拥 有全新的碳骨架,且显示出了对C.albicans（人白色念珠菌） ,Tricophyton rubrum（红色毛癣菌）和Aspergillus niger（黑曲霉）三 种菌的最小抑菌浓度分别为40,20和80μg/ml。 Proksch研究组从海绵Niphates olemda组织中分离出真菌Curvularia lunata（新月弯孢菌）,液体培养液中分离出一系列化合物,其中lunatin 和cytoskyrin两个蒽醌类衍生物。Lunatin在琼脂平板试验中对金黄色葡 萄球菌、大肠杆菌和枯草杆菌都有抑菌活性,5μg/mL时对三种菌的抑菌圈 直径达到8～9mm。
一株海洋放线菌次生代谢产物的分离鉴定及抑菌活性研究
一株海洋放线菌次生代谢产物的分离鉴定及抑菌活性研究放线菌,尤其是链霉菌,作为抗生素的重要来源,一直以来都是天然产物研究的热点之一。
本文以德国北海海水中分离到的一株海洋放线菌为研究对象,通过对其16S r DNA测序鉴定其与链霉菌Streptomyces sp.strainnenu<sub>D</sub>S<sub>2</sub>1有99%的同源性。
本实验将该菌编号为AC1。
通过初期大米培养基发酵,发现其代谢产物种类丰富,且乙酸乙酯及正丁醇萃取部分对水稻纹枯病菌、梨黑斑病菌表现出良好的抑菌活性。
对该菌采用大米发酵以及高氏一号液体培养基发酵,之后用硅胶柱、凝胶柱、C18反相柱以及高效液相色谱柱等色谱分离纯化方法结合薄层色谱分析对其发酵产物进行分离纯化,对分离得到的代谢产物成分采用质谱（MS）以及1D和2D 核磁（1H-NMR、13C-NMR、HMBC、HSQC）等波谱技术进行结构鉴定,并进行抑菌活性的研究,最终结果如下:（1）从AC1的大米发酵代谢产物中分离出了编号为I-VIII共8个单体化合物。
其中I号化合物为2,3-dihydroxybenzamide,II号化合物为pyramidamycin B,VIII号化合物为flufuran,V、VI、VII号化合物为首次从自然界中分到的酰胺类天然产物,III、IV为新的化合物。
I,II,III,IV,VII号化合物为苯甲酰胺类化合物,V,VI,VIII号化合物为呋喃类化合物。
从高氏一号液体发酵代谢产物当中分到了IX和X两个单体化合物.其中IX号为苯甲酰胺类化合物3-[（3’-amino-3’-oxoprop-1’-en-2’-yl）oxy]benzamide。
X号化合物为新的链型酰胺类化合物。
在分离鉴定的10个化合物当中,VIII 化合物为该菌产生的主要成分。
（2）将分离得到的10个化合物采用滤纸片扩散法对番茄灰霉病菌、苹果斑点落叶病菌、梨黑斑病菌、水稻纹枯病菌、玉米大斑病菌5种植物病原真菌以及金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌三种病原细菌作体外抗菌实验,筛选其中具有抗菌活性的成分,其中VIII化合物对番茄灰霉病菌、水稻纹枯病菌、苹果斑点落叶病菌都具有一定的抑菌活性,V,VI化合物则表现出对枯草芽孢杆菌的抑制活性。
海洋生物药理活性化合物分离纯化研究实例描述
1、中国南海细薄星芒海绵抗肿瘤活性成分研究 ---张红军等. 药学服务与研究, 2004, 4(2):104-106
细薄星芒海绵(Stelletta tenui Lindgren)
Stelletta grubii Schmidt
星芒海绵素 A 抗肿瘤活性异马拉巴烷型三萜
样品1O～20 m潜水采集。
样品标本保存于第二军医大学长征医院海洋药物 实验室，编号为HNll2O一1，种属由中科院海洋 研究所李锦和研究员鉴定
寻常海绵纲的海绵易于采集，而且往往含有很多 结构罕见的具有抗癌或抗病毒活性的次生代谢产 物，因此一直是海洋天然产物化学家首选的海洋 生物研究对象
新鲜样品50kg
石油醚萃取 淡水洗涤（除盐） 90％甲醇水相萃余物 石油醚萃取物1.5kg
活性检测 采用纸片扩散法，将稻瘟病菌的孢子悬液均匀涂 布于土豆汁固体培养基上，取直径为6 mm无菌 滤纸片轻贴于检测平板上，滴加10mL待测样品/ 纸片，28℃下培养24 h后，测量抑菌圈直径。每 个样重复3次取平均值。
发酵液
上清液
HPLC分析 HPLC半制备 活性追踪
分析条件为： 流动相为甲醇-水，甲醇由30％在20 min内 线性升到60％，然后再20 min线性升到100 ％，流速1 ml/min，检测波长220 nm。
活性物质
(结构待定)
根据分析条件确定Waters Delta Prep4000半制备液相色谱 仪对各组分进行制备的流动相条件为： waters Nova．Pak C18 (25 mmx200 mm,6 mm)； 流动相为甲醇-水，甲醇由35％保持15 min后，15 min内线 性升到90％，然后再保持10 min，流速15ml/min，检测波长 220nm，室温。
海洋链霉菌Streptomyces sp.S598中抗菌活性产物的研究
文章编号：1001-8689(2020)06-0560-07海洋链霉菌Streptomyces sp. S598中抗菌活性产物的研究李慧玲1, 2 赵玉瑛3 姚敏娜2 张迪2 冯智军2 张娟利2,* 张晓梅3 文爱东2(1 中国药科大学基础医学与临床药学学院，南京 211198；2 空军军医大学第一附属医院药剂科，西安 710032；3 云南中医药大学基础医学院，昆明 650500)摘要：目的 对海洋链霉菌Streptomyces sp. S598固体发酵提取物的抗菌成分进行研究。
方法 采用葡聚糖凝胶Sephadex LH-20、反相柱色谱、硅胶柱层析及半制备HPLC 等方法分离纯化该菌株的活性次级代谢产物，并通过ESI-MS 、NMR 等波谱技术结合文献对比鉴定其结构。
结果 从10L 固体发酵提取物中分离得到5个单体化合物，分别鉴定为缬氨霉素(1)、二活菌素(2)、亚油酸(3)、亚油酸甲酯(4)和油酸(5)。
结论 海洋链霉菌Streptomyces sp. S598能代谢产生具有多种生物活性的化合物。
化合物1对MRSA 28300和白念珠菌(ATCC10231)的MIC 为1μg/mL ，化合物2具有较强的广谱抗细菌活性，对肺炎链球菌、流感嗜血菌的MIC 为0.125μg/mL ，尤其具有显著的抗MRSA 的活性，对MRSA 28300的MIC<0.125μg/mL 。
化合物1和2均为首次从该种放线菌中分离得到，且本文首次报道其对MRSA 均具有抑制活性。
关键词：海洋链霉菌；分离纯化；结构鉴定；生物活性；耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌中图分类号：R978 文献标志码：A Study of antibiotic bioactive metabolites from marine Streptomyces sp. S598Li Hui-ling 1, 2, Zhao Yu-ying 3, Yao Min-na 2, Zhang Di 2, Feng Zhi-jun 2, Zhang Juan-li 2, Zhang Xiao-mei 3 and Wen Ai-dong 2(1 School of Basic Medicine and Clinical Pharmacy, China Pharmaceutical University, Nanjing 211198; 2 Department of Pharmacy,the First Affiliated Hospital of Air Force Medical University, Xi'an 710032; 3 College of Basic Medicine,Yunnan University of Chinese Medicine, Kunming 650500)Abstract Objective To investigate the antimicrobial constituents from the solid fermentation extracts of Streptomyces sp.S598. Methods The active secondary metabolites were isolated and purified by sephadex LH-20, reversed phase column chromatography, silica gel column chromatography and semi-preparative HPLC steps. Their chemical structures were identified by ESI-MS and NMR spectral analysis and compared with the data of literature. Results Five compounds were isolated from 10L solid fermentation extracts and identified as valinomycin (1), dinactin (2), linoleic acid (3), methyl linoleate (4) and oleic acid (5), respectively. Conclusion The marine actinomycete Streptomyces sp. S598 can produce the compounds with many biological activities. The MIC of compound 1 against MRSA 28300 and Candida albicans ATCC10231 was 1μg/mL. Compound 2 showed strong broad-spectrum antibacterial activity, and the MIC for Haemophilus influenza and Streptococcus pneumoniae was 0.125μg/mL . Especially it showed remarkable anti-MRSA activity with MIC<0.125μg/mL against MRSA 28300. Compounds 1~2 were isolated from the strain of marine actinomycete for the first time and they were reported firstly for the inhibitory activities against MRSA .Key words Marine Streptomyces ; Isolatation and purification; Structural elucidation; Bioactivity ; Methicillin-resistant Staphylococcus aureus收稿日期：2019-07-08基金项目：国家自然科学基金(No. 81602979)，国家自然科学基金(No. 21662048)，云南省科技计划项目(No. 2017FF116(-002))作者简介：李慧玲，女，生于1992年，在读硕士研究生，研究方向微生物药物的研究，E-mail:*****************通讯作者，E-mail:***********************微生物药物筛选DOI:10.13461/ki.cja.0069081959年，甲氧西林问世，有效解决了当时青霉素耐药问题。
海洋放线菌#A34和真菌#1942活性成分研究彭虹王立,林永成
海洋放线菌#A34和真菌#1942活性成分研究彭虹1王立，林永成2*中山大学化学与化学工程学院，广州510275摘要海洋环境十分独特，极端的生态环境必然赋予生存于其中的海洋微生物不同于陆生微生物的独特的遗传背景和生理性能，并使其发展出独特的代谢方式，因而为寻找海洋新型生物活性物质提供了潜在的丰富的源泉。
本文阐述了海洋放线菌和海洋真菌代谢产物研究的意义和研究进展。
实验部分对放线菌#A34和真菌#1942的代谢产物进行分离鉴定，得到7个化合物，其中包括从南海真菌#1942发现，价格昂贵，有细胞毒性的sterigmatocystin，其含量高达约1g/100L ,有可能开发成为资源菌。
关键词代谢产物海洋放线菌海洋真菌一引言海洋，占地表总面积71%，是独特生态系统工程的微生物的生存繁衍地。
由于海洋环境的特殊性和微生物独特的遗传背景，海洋微生物已发展出不同于陆地微生物的独特代谢方式，因而为寻找海洋新型生物活性物质提供了潜在的丰富的源泉。
研究海洋微生物代谢产物不仅能够从中寻找新的抗生素和抗病毒等活性物质，在维护人类健康方面有着重要意义；而且用工业发酵生产可减少污染、节约能源、降低成本、提高产量，从而实现可持续发展。
二海洋放线菌和真菌的研究情况2.1 海洋放线菌的研究情况放线菌（Actinomycetes）是一大类具有分枝状菌丝体的革兰氏阳性菌，最早由Cohn（1875）由人泪腺感染病灶中分离到一株丝状病原菌——链丝菌（streptothrix）而发现的。
由于Waksman （1943）和其他研究者的创造性工作，陆续放线菌的一些种中分离到氯霉素、四环素、新霉素和红霉素等。
从此，放线菌作为抗生素和其他生物活性次生代谢产物的重要微生物资源而越来越受到人们的关注。
目前世界药物市场上的67%的抗生素产品来自微生物，其中2/3又是放线菌所产生（Newman and Laird,1997）。
海洋放线菌代谢产物类型丰富，有内酯类、吡喃酮类、醌类、生物碱类、肽类、酰胺类等化合物。
海洋放线菌代谢产物
马杜拉放 线菌属
拟无枝 酸菌属
短状杆 菌属
棒杆 菌属
微球 菌属
链霉 菌属
微杆 菌属
北里孢 菌属
小单孢 菌属
诺卡氏 菌属
海洋放线菌是新型生物活性物质来源
活性类型 抗细菌活性
抗真菌活性
抗癌症活性 抗肿瘤活性
抗炎活性 抗寄生活性 抗疟疾活性 抗病毒活性 抗氧化活性
(Olano et al. 2009; Koehn, Carter, 2005; Baltz, 2006; Peláez, 2006)
放线菌，作为多种抗生素的生产者及药业的重要提供者，可产生多种次 级代谢产物。属于放线菌科的放线菌因其具备产生次级代谢产物的能力而被 广为知晓，其大多数产物有抵抗病原微生物的活性。
（Baltz, 2005）
海洋放线菌是新型生物活性物质来源
海洋放线菌是最经济、生物技术最廉价的原核生物。有海洋放线菌产 生的次级代谢产物具有广泛的生物活性。来自海洋放线菌的次级代谢产物 可能会成为新型治疗药物合成的基础，可能会有效抑制一系列抗性微生物。
(Oldfield et al.1998; Mann 2001; Berdy 2005; Manivasagan et al. 2013)
Abyssomicin C与其相似物都可作为抗药性病原体的抗菌剂，具有潜在开发
价值。
(Riedlinger et al. 2004；Rath et al. 2005)
Bonactin是一种新的化学成分，分离自一种链霉菌属 BD21-2 的液体培养， 在夏威夷瓦胡岛的凯路亚海滩浅水沉积物样品中收集获得。Bonactin不仅对 革兰氏阳性细菌和革兰氏阴性细菌有拮抗活性，对真菌也有抑制作用。
海洋放线菌 Streptomyces novaecaesareae 次生代谢产物
中山大学学报 （自然科学版） ＡＣＴＡ ＳＣＩＥＮＴＩＡＲＵＭ ＮＡＴＵＲＡＬＩＵＭ ＵＮＩＶＥＲＳＩＴＡＴＩＳ ＳＵＮＹＡＴＳＥＮＩ１０１３４７１／ｊｃｎｋｉａｃｔａｓｎｕｓ２０１９０３００８
海洋放线菌 Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｎｏｖａｅｃａｅｓａｒｅａｅ次生代谢产物
于鑫１，韦霞１，冯婵１，范倩１，王思玉１，章卫民２，张翠仙１
（１．广州中医药大学中药学院，广东 广州 ５１０００６； ２．华南应用微生物国家重点实验室∥广东省菌种保藏与应用重点实验室∥ 广东省微生物应用新技术公共实验室∥广东省微生物研究所，广东 广州 ５１００７０）
摘 要：对南海来源链霉菌 Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｎｏｖａｅｃａｅｓａｒｅａｅ的次级代谢产物进行研究，经多种柱色谱技术分离得到
ＹＵＸｉｎ１，ＷＥＩＸｉａ１，ＦＥＮＧＣｈａｎ１，ＦＡＮＱｉａｎ１，ＷＡＮＧＳｉｙｕ１，ＺＨＡＮＧＷｅｉｍｉｎ２，ＺＨＡＮＧＣｕｉｘｉａｎ１ （１．ＳｃｈｏｏｌｏｆＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅ，ＧｕａｎｇｚｈｏｕＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅ， Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ５１０００６，Ｃｈｉｎａ；
收稿日期：２０１８－１１－０６ 基金项目：国家自然基金 （８１７４１１６０）；广东省科技计划项目 （２０１５Ａ０２０２１６０１７，２０１７Ａ０２０２１７００８）；广州中医药大 学 “薪火 计 划” 项 目 （ＸＨ２０１７０１１０）；海 南 大 学 “南 海 海 洋 资 源 利 用 国 家 重 点 实 验 室” 开 放 课 题 （２０１６００３）；广东省自然科学基金 （２０１４Ａ０３０３１３４１１）；广东省自然科学基金 （２０１６Ａ０３０３１２０１４） 作者简介：于鑫 （１９９０年生），男；研究方向：海洋生物活性次生代谢产物；Ｅｍａｉｌ：１２２７８２５３３６＠ｑｑｃｏｍ 通信作者：张翠仙 （１９７５年生），女；研究方向：天然药物化学；Ｅｍａｉｌ：ｚｈａｎｇｃｕｉｘｉａｎ＠ａｌｉｙｕｎｃｏｍ
海洋放线菌研究的新进展
海洋放线菌研究的新进展3刘妍 李志勇33(上海交通大学生命科学技术学院海洋生物技术实验室,上海 200240)摘 要: 海洋放线菌由于其独特的代谢途径和合成新颖抗生素的能力,已经广泛引起人们的关注。
本文就海洋放线菌在海洋环境中的分布、医药领域的应用及其相关研究方法进行了综述。
关键词: 海洋放线菌 分布 抗生素 研究方法N ew R esearch Progress of Marine Actinomycetes3Liu Yan Li Zhiyong 33(M arine B iotechnology L aboratory ,S chool of L i f e S cience and B iotechnolog y ,S hanghai J iao Tong Universit y ,S hanghai 200240)Abstract : Great attentions have been paid to marine actinomycetes for their particular metabolic pathway and the ability to synthesize new antibiotics.This review summarized new development on the distribution ,pharmaceuti 2cal application and research approach of marine actinomycetes.K ey words : Marine actinomycetes Distribution Antibiotics Research approach 放线菌(acti nom ycetes )是一类高(G +C )%的革兰氏阳性细菌。
自1875年Cohn 从人泪腺感染病灶中分离到一株链丝菌(st reptot hri x )以来,放线菌由于其拥有独特的合成多种结构复杂的次生代谢产物的能力引起了人们的广泛关注。
海洋丝状真菌生物活性物质的研究概述
海洋丝状真菌生物活性物质的研究概述张志华1康应田2（1忻州职业技术学院，山西忻州034000；2定襄人民医院，山西定襄035400）摘要：海洋微生物资源丰富，蕴含丰富的结构新颖的活性物质，主要来源于海洋放线菌和海洋真菌。
特别是海洋真菌因其代谢途径复杂、代谢产物种类多样性丰富而日益受到研究者的重视。
海洋真菌正在成为海洋药源微生物研究的新热点。
海洋真菌及其活性物质较多来自子囊菌属。
关键词：海洋真菌；活性物质；海洋药物；研究中图分类号S963.21+1文献标识码A文章编号1007－7731（2010）11－73－04Research Review on Bioactive Substances of Marine FungiZhang zhihua1et al.（1Xinzhou vocational technical college，Xinzhou034000，2Dingxiang people’s hospital，Dingxiang035400）Abstract：Rich marine microorganisms，contains a wealth of new structure of active substances，mainly derived from marine actinomycetes and marine fungi.In particular，Marine fungi are attention by researchers，because of its complex metabolic pathways and diverse types of metabolic products，Ocean marine fungus medicine is becoming a new hot spot source of Mi-crobiology.And to sum up the more biologically active substances of marine fungi from the Ascomycota.Key words：Marine fungi；Active substances；Marine drug；Research1引言海洋占地球表面积的70%，占生物圈体积的95%，地理环境和生物环境极具多样性。
海洋放线菌研究进展_田新朋
MiniReview
微生物学报 Acta Microbiologica Sinica 51 （ 2 ） ：161 － 169 ； 4 February 2011 ISSN 0001 － 6209 ； CN 11 － 1995 / Q http ： / / journals. im. ac. cn / actamicrocn
［ 7］ 菌 。 而 Grossart 从海雪 中 分 离 到 50 个 菌 株 中， 有
5 个为放线菌， 占 10% 。 另外， 在海洋最深处的马里 亚纳 海 沟 （ the Mariana Trench ） 10 898 米 的 沉 积 环 利用常温 、 常压 等 分 离 条 件， 仍旧发现了 6 个属 境， （ Dermacoccus ， Kocuria ， Micromonospora ， Streptomyces ， Tsukamurella 和 Willianmsia ） ［8 ］的 38 株放线菌 。 虽然海洋沉积环境中放线菌占纯培养微生物的
小型综述
海洋放线菌研究进展
田新朋
1
1， 2
1* 2* ， 张偲 ， 李文均
中国科学院海洋生物资源可持续利用重点实验室， 中国科学院海洋微生物研究中心， 广东省海洋药物重点实验室， 中国科学 510301 650091
院南海海洋研究所， 广州
2
云南大学省微生物研究所， 教育部微生物多样性可持续利用重点实验室， 昆明
“973 项目 ” （ 2010CB833801 ） ； 国 家 自 然 科 学 基 金 项 目 （ 40906075 ， 40906076 ） ； 中 国 科 学 院 创 新 项 目 （ KSCX2 -YW-G073 ， 基金项目：国家 KSCX2 -YW-G065 和 KSCX2 -YW-Z1018 ） ；中国科学院南海海洋研究所青年人才领域前沿项目 （ SQ200901 ）
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甲酸（ ） 其中化合物 １ ２为两个含氮化合物 ， ５． 和 均为新化合物． 对上述化合物进行细胞毒活性测试的
结 果表 明 ，化合 物 １～ ４对肝 癌细胞 （ＭＭＣ７２ ） Ｓ － １ 具有 不 同程 度 的生长抑 制活性 ． ７
１ 实验 部 分
１ １ 仪器 与试剂 ．
北京 泰克仪器 有 限公 司 ｘ５型显 微熔 点 仪 ；Ｈ ｉｏｐ ａｏｏａ ０ ＿ ｅ ｌｈＬｂｒｔ－ Ｌ和 Ｈｅ ｏ ｈＬｂｒａ４０ ｄ ２ ｉ ｌ ａｏｏ －００旋 转 ｄｐ ｔ 蒸发仪 ；Ｐｒｉ ｌｅ－ ３型 自动旋 光 仪 ；Ｖ ｕｏｐｃ３０ ｅｋｎＥｍ ｒ ４ ３ Ｇ Ａ ｔｓｅ－００型 质 谱 仪 ； ｒｋｒＡ ０ 核磁 共 振 波谱 Ｂｕｅ Ｖ４ ０ 仪 ， ＭＳ为 内标 ．薄层 层析 硅胶 和柱层 析 硅 胶均 为 青 岛海 洋 化 工厂 产 品 ；Ｓｐａｅ Ｈ－０为 Ｍｅｃ Ｔ ｅｈｄｘＬ ２ ｒ ｋ公 司产 品 ；Ｄ －０ Ａ２ １为上 海亚东 核级树 脂有 限公 司产 品 ； Ｊ１０ Ｅ 发 酵罐 （ 海 联 环公 司） Ｇ一 Ｂ ０ 上 ；四 甲基 偶 氮
资助．
联系人 简介 ：戴好富，男 ， 研究员 ，主要从 事天然产物化学研究．Ｅ ｍ ｉ ｆａ ０ １ ａｏ． ｏ ．ｎ － ａｌ ｄｉ ０ ＠ｙｈｏ ｃｒ ｃ ：ｈ ２ ｎ 洪 葵 ， ，教授 ， 女 主要从 事微生物学研究．Ｅｍ ｉ： １２ ＠１ ３ ｎｔ —ａｌ ｋ ｏ２ ６ ． ｅ
放线 菌 １４ ９ 离 自海南省 文 昌市清 澜 港红 树林 保 护 站 红树 植 物银 叶树 的根 际土壤 ，由本研 究 ２０２分
收稿 日期 ： ０ ８０ －３ ２０ －３０ ．
基金项 目： 国家“ 九七三” 计划前期研究专项 （ 批准号 ： ０ ７ Ｂ １３６ 和科研院所社会公益研究专项基金（ ２ ０ Ｃ １６ ０ ） 批准号 ： ０ ４ Ｉ３７２ ２０ ＤＢ Ｊ ） ０
‘ Ｈ－Ｈ Ｓ ， ＣＯ Ｙ
ＨＳ Ｃ和 Ｈ Ｃ等数据 鉴定 ， Ｑ ＭＢ 其结构分别 为 ３氨基一 － 丙酸对 甲苯酯 （ ） ６Ａ ｎ －一４ｈｄｏｙ １ 、 －ｍｉ ３（ －ｙｒｘ－ ｏ
ｂｎｙ）１４ｄａｏａｅ２ ５ｄ ｎ （ ） 正丁基一－ － ｅｚ１一 ，・ｉｚｎｎ 一，－ｉ ｅ２ 、 ｏ Ｄ 吡喃甘露糖苷 （ ） ３ 、大豆苷元 （ ） １ 一一 ４ 和 Ｈ ３吲哚 甲酸 （ ） ５ ．其 中化合物 １和 ２为新化 合物 ， 细胞毒活性测试结果表明 ， 化合物 １～ ４对人肝癌细胞 （ Ｍ － ２ ） 有不 同 Ｓ ＭＣ７ １ 具 ７
Ｖ０ ． ９ １２ ２０ ０ ８年 １ １月
高 等 学 校 化 学 学 报
ＣＨＥＭＩ ＡＬＪ Ｃ ＯＵＲＮＡＬ ＯＦ ＣＨＩ ＮＥＳ ＵＮＩ Ｅ ＶＥＲＳＴ ＥＳ ＩＩ
Ｎｏ １ ．１
２ ８ ～２ ８ １３ １６
海 洋 放 线 茵 Ｓｒｐｏ ｙｅ ｐ ２０ ２中的 ｔ ｔｍ ｃｓｓ．１４９ ｅ 细胞 毒 活 性成 分
唑盐（ ｑ＂、 Ｅ Ｍ ｑ）Ｍ Ｍ和平衡盐溶液 Ｐ Ｓ 北京欣经科公司） 丝裂霉素 ｃ Ｋ ｏ ａＨ ｋｏＫ ｇｏＣ ．Ｌ ． ； Ｂ（ ； （ ｙｗ ａｋ ｏｙ ｏ ｔ ） ｄ 肝癌 Ｓ Ｍ － ２ 细胞购 自 Ｍ Ｃ７ １ ７ 武汉大学培养物保藏中心； 其它试剂均为分析纯．
１ ２ 菌 ． 株
解修 超 梅 文莉 ，曾艳波 林海鹏 庄 令 戴好 富 ， 一， ， ， ， 洪
（ ．中国热带农业科学 院热带生物技术研究所 ，海 口 ５ １０ ； １ ７ １１
葵
２ ．陕西理工学 院陕西省资源生物重点实验室 ， 中 ７３ ０ ） 汉 ２ ０ １
摘要 对海洋放线 菌 Ｓｒ ｔ ｙｅ ｓ． 酵液 的提 取 物进 行 柱层 析 分离 ，得到 ５个 化 合物 ．经 Ｍ ，Ｎ ｔｐｏ ｃ ｐ 发 ｅ ｍ ｓ Ｓ ＭＲ，
程 度 的生 长 抑 制 活 性 ．
关键词
海洋放线菌 ； ｔｐｏ ｙｅ ｓ． 细胞毒活性 ； Ｓｒ ｔ ｃｓ ｐ ； ｅ ｍ 分离 和纯化 ０２ ６９ 文献标 识码 Ａ 文章编 号 ０５ － ９ （０ ８ １ －１３０ ２ １ ７ ０ ２０ ） １ ８ －４ ０ ２
中图分类号
从海 洋微 生物 中发现有 药用 开发 前景 的活性 天然产 物 已成为 天然 产物 化学研 究 的热 点之 一 Ｊ １ ．红 树 林生态 系统 处于海 洋与 陆地 之间 的潮 间带 ， 洋微 生物 的多样性 非 常丰 富 ， １ 海 近 ０年来 的研 究结果 表 明， 红树 林环境 的微 生物 富含新 的具 有生理 活性 的天 然产物 Ｊ ．本研 究组 在 对 红树林 土 壤及 红树 植 物 共 附生微生 物 的培养 物进行 抗 肿 瘤 活性 筛 选 的过程 中 ，发 现 分 离 自海 南 文 昌清 澜 港 红树 植 物 银 叶 树 （ ｅｔｒ ｔｒｌ） 际 土壤 的菌株 Ｓｒ ｔ ｙｅ ｓ． １４９ ） Ｈ ｒｉａｌｔ ａｉ 根 ｉｅ ｉｏ ｓ ｔｐｏ ｃｓ ｐ （２０２ 的发酵 液对 肝癌 细胞 （ ＭＭ －７ １ 显示 出 ｅ ｍ Ｓ Ｃ７２ ） 生长 抑制活 性．在 活性筛 选指 导下 ， 从该 发酵液 的提取物 中分 离得 到 ５ 化 合物 ， ＭＳ Ｎ Ｈ 个 经 ， ＭＲ， 一 Ｈ ＣＳ Ｏ Ｙ，Ｈ Ｑ Ｓ Ｃ和 Ｈ Ｃ等波 谱 技 术 鉴 定 ，其 结 构 分 别 为 ： ． 基一 酸 对 甲苯 酯 （ ） －ｍｎ．．４ ＭＢ ３氨 丙 １ ，６Ａ ｉｏ３（ ．