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食品的测定 实验：急性毒性实验
一,目的与要求
1,学习急性毒性试验的方法,掌握LD50的测定方法. 2,观察马钱子的毒性反应.
二,实验原理
急性毒性试验是指受试动物在一次大剂量给药后所产生的 毒性反应和死亡情况.药物毒性的大小,常用动物的致死 量来表示,因为动物生与死的生理指标较其他指标明显, 客观,容易掌握.致死量的测定也较准确.在测定致死量 的同时,还应仔细观察动物是否出现耸毛,倦卧,耳壳苍 白或充血,突眼,步履蹒跚,肌肉瘫痪,呼吸困难,昏迷, 惊厥,大小便失禁等不良反应.
分组完毕和各组剂量算出后,分组灌服或注射不同剂量的 受试药物.为能得到理想的结果,实验最好从中间剂量开 始,以便从最初几个剂量组动物接受药物后的反应来判断 两端剂量是否合适,便于调整剂量和组数.为了提高实验 的精确度和节省药物,受试药物可按"低比稀释法"配置. 即使每只动物的用药体积相等(0.2ml/10g),而溶质不 等.给药后逐日观察并记录中毒反应,死亡率和死亡情况.
致死量的测定常以半数致死量为标准.半数致死量是指能 够引起试验动物一半死亡的剂量,妈药物致死量对数值, 用符号LD50表示.由于LD50的测定较简便,可靠,而且 稳定,现已成为标志动物急性中毒程度的重要常数. LD50测定的方法有多种,如Bliss法,改进寇氏法,简化 机率单位法,累积插值法,机率单位-加权直线加归法等 等.以上方法虽各有特点,但都有共同的要求: (1)动物:均选用体重17～22克健康小鼠(同次试验体 重相差不得超过4克),或选用体重120～150克(同次试 验体重相差不得超过10克)健康大鼠作实验动物.性别相 同或雌雄各半.
(4)正式试验前,均须先用少量动物进行预试试验,大 致测出受试药物引起0%和100%死亡率的致死量范围,然 后安排正式试验.正式试验组数不得少于三个剂量组,一 般选用4～5个剂量组,每组动物数为10～20只. (5)报告LD50时需注明实验动物的种属及品系,性别, 体重范围,给药途径及每个剂量组动物数等,还需注明受 试药物的配制方法,给药剂量,各组剂量间的比值(一般 以0.65～0.85为宜),给药容积,观察时间及计算方法. 还须标出LD50的95%可信限.
急性毒性及其评价方法PPT课件
灌胃器具制作
取l2号普通注射针头，首先将针头尖部去 掉，然后用细锉刀把去掉部分锉平、锉光， 再用沙纸磨光滑，有条件时可在针尖处点 焊成球型。加工成有20度弧度的灌胃针， 连接1ml或5ml的注射器，即成为大小鼠的 灌胃器。
2. 经呼吸道接触
在常温、常压下为气态，或在生产过程 中 和生活过程中以蒸气、气溶胶、烟、粉 尘 状态污染生产与生活环境空气，此时就 有 可能经呼吸道吸入。
吸入接触分为两种方式 ：
静式吸入 动式吸入
3. 经皮肤染毒
➢ 研究外源化学物经皮肤吸收应当尽 量选择皮肤解剖、生理与人类较近似的动 物为对象，目前多选用家兔和豚鼠
1 LgLD0
•••
2 LgLD0+i
随机性：每只动物分散到各组去的机会是均 等的，以避免成见或系统误差
实验动物的预处理
适应性饲养一周，选择生理健康的动物 凡经口染毒时，要求试验前要对动物禁食，
以保证胃内无食物，减少食物对化学物毒性 的干扰
大鼠、小鼠——隔夜进食；染毒后禁食4h 大动物——每日上午喂食前染毒 染毒后继续禁食2~4h，但在禁食时要保障饮水
2. 通过观察动物中毒作用表现、毒作用 强 度和死亡情况，初步评价毒物对机体的 毒效应特征、靶器官、剂量－反应关系和对 人体产生损害的危险性
3. 为亚慢性及慢性毒性试验研究以及 其他 毒理试验提供接触剂量和观察指标选 择的依据
4. 为毒作用机理研究提供线索，了解中 毒 效应的特征（包括症状，生理、生化与 组织病理损伤）
(二) 受试物及处理
受试物的接受、分样、保管、称重、配制 以及在此过程中严格的质量保证影响急性 毒性试验
第二十章 全身用药的毒性研究
4、判定方法 5、结果评价
家兔耳缘静脉血管
（二）体外溶血试验
1、目的 静脉注射剂对红细胞状态的影响 2、动物 家兔1只 家兔 只 3、方法 （1）2%红细胞悬液的制备 ） 红细胞悬液的制备 （2）受试物的制备 临床使用浓度 ）受试物的制备-临床使用浓度 （3）试验方法 ）
体外溶血试验加样表 试管号 1 2 3 4 5 6 7 2%红细胞 2%红细胞 2.5 2.5 2.5 2.5 2.5 2.5 2.5 生理盐水 2.0 2.1 2.2 2.3 2.4 2.5 蒸馏水 2.5 受试物 0.5 0.4 0.3 0.2 0.1 4、判定方法 溶血、无溶血、 溶血、无溶血、红细胞凝聚 5、结果评价 小时内无溶血， 3小时内无溶血，可以注射使用
第三节
制剂的全身毒性试验
一、静脉注射制剂的全身毒性试验
血管刺激性试验 体外溶血试验 过敏性试验 热原试验
全身毒性试验
（一）血管刺激性试验 1、目的
观察静脉注射剂多次给予后对血管 的刺激性情况。 的刺激性情况。
2、动物
家兔（每组至少 只动物 只动物） 家兔（每组至少3只动物）
3、方法
分成两组（阴性对照组、给药组） 分成两组（阴性对照组、给药组） 分别对家兔耳缘静脉注射给药，连续5次， 分别对家兔耳缘静脉注射给药，连续 次 末次注射后24小时处死部分动物 小时处死部分动物， 末次注射后 小时处死部分动物， 肉眼观察并对组织进行病理学检查； 肉眼观察并对组织进行病理学检查； 余下的动物14天后进行同样检查 天后进行同样检查。 余下的动物 天后进行同样检查。
二、局部用药的全身毒性试验
主要讨论皮肤用药、眼科用药、滴鼻剂、 主要讨论皮肤用药、眼科用药、滴鼻剂、吸入 剂及直肠、阴道制剂等引起的全身毒性试验。 剂及直肠、阴道制剂等引起的全身毒性试验。 见第十九章。 见第十九章。
急性毒性试验的研究进展_王庆利
[作者简介] 王庆利,男,药理学博士,副主任药师,主要从事药品有效性与安全性评价工作。
联系电话:(010)68585566,E-m ai:l wangq l @cde .org .cn 。
#新药申报与审评技术#急性毒性试验的研究进展王庆利,王海学,马 磊(国家食品药品监督管理局药品审评中心,北京100038)[摘要] I C H 及其指导原则M 3中对急性毒性试验的科学意义、在药物研发进程中的时间安排、注册要求等进行了大量讨论。
近几年,随着制药企业间药物非临床研究资料的共享,以及动物试验3R 原则的不断推进,急性毒性试验在药物研发及注册中的作用正发生着深刻的变化。
文中结合我国新药研发和指导原则的实际情况,对该试验的研究进展及科学背景进行讨论,为我国的研究和管理要求提供一些参考。
[关键词] 急性毒性试验;单次给药毒性试验;半数致死量(LD 50)[中图分类号]R965.3 [文献标志码]A [文章编号]1003-3734(2009)2024-04Advance in stud i es of acute drug toxicityWANG Q ing -l,i WANG H a-i xue ,MA Le i(C enter for D rug Evaluation,S tate F oo d and Drug Adm inistration,B eiji n g 100038,China )[Abstract] Trad itionally ,si n g l e dose tox icity studies i n an i m a ls ,progra mm ed in earl y phase of ne w dr ugdevelop m en,t are usua lly requ ired for any phar m aceuticals i n tended for hum an use .I n ter national conference on har m on ization of techn ical require m ents for reg istration o f phar m aceu tica ls for hum an use (I C H )and the gu i d eli n e M 3discussed the scientific background o f t h e study ,and reco mm ended the deve lopm ent strateg ies and requ ire m ents for reg istration .In recent years ,w ith the share of nonc li n i c al safety studies conducted bet w een co m pan ies and the consi d eration o f the 3Rs pri n c i p les ,suggestions in refi n i n g the sing le dose tox icity st u dy w ere presented .[K ey w ords] acute tox ic ity ;si n g le dose tox ic ity ;LD 50从历史上看,所有拟用于人体的药物通常需要进行急性毒性试验(acute tox icity st u dy ,sing le dose tox icity study ,SDT),且处于毒理研究的早期阶段,所获得的信息具有重要意义。
急性毒性实验研究
“急性毒性实验研究”资料合集目录一、柑橘类多甲氧基黄酮对小鼠的急性毒性实验研究二、黄芩苷类注射剂安全性与急性毒性实验研究三、三聚氰胺对花鲈的急性毒性实验研究四、土贝母急性毒性实验研究五、柑橘类多甲氧基黄酮对小鼠的急性毒性实验研究柑橘类多甲氧基黄酮对小鼠的急性毒性实验研究一、引言柑橘类多甲氧基黄酮（PMFs）是柑橘类水果中的一种重要成分，具有多种生物活性，包括抗氧化、抗炎和抗癌等作用。
然而，关于柑橘类多甲氧基黄酮的急性毒性研究仍然有限。
因此，本研究旨在探讨PMFs 对小鼠的急性毒性影响，为进一步了解其生物活性提供依据。
二、材料与方法1、实验材料实验动物：健康小鼠，体重20-30g。
实验试剂：柑橘类多甲氧基黄酮。
2、实验方法将小鼠随机分为对照组和实验组，每组10只。
实验组小鼠给予不同剂量的PMFs（500、1000和2000mg/kg），对照组给予等量生理盐水。
观察小鼠的行为、体征及死亡情况，记录数据。
三、结果与分析1、急性毒性反应实验组小鼠在给予PMFs后，表现出不同程度的毒性反应，如蜷缩、呼吸困难、震颤和死亡等。
其中，高剂量组（2000mg/kg）的毒性反应最为明显，死亡率为50%。
中、低剂量组毒性反应相对较轻，未见死亡病例。
2、生化指标分析与对照组相比，实验组小鼠的肝肾功能指标均有不同程度的异常变化。
其中，高剂量组的变化最为显著，表明PMFs对肝肾功能有一定的影响。
四、结论本研究表明，柑橘类多甲氧基黄酮对小鼠具有一定的急性毒性作用。
高剂量PMFs可导致小鼠死亡，且对肝肾功能有一定影响。
因此，在日常生活中应合理摄入柑橘类水果，避免过量摄入导致不良后果。
为了进一步探讨PMFs的生物活性及作用机制，未来可进行长期毒性研究、致畸致突变研究等方面的研究。
针对PMFs对肝肾功能的影响，可深入研究其作用机制及潜在的治疗应用。
总之，本实验为柑橘类多甲氧基黄酮的安全性评估提供了依据，为相关研究提供了重要的参考价值。
999感冒灵颗粒及组分对小鼠急性毒性和饥饿状态下肝毒性影响的研究
999感冒灵颗粒及组分对小鼠急性毒性和饥饿状态下肝毒性影响的研究比较999感冒灵全方及不同组分对小鼠急性毒性的影响，比较在饥饿和正常饮食状态下，感冒灵对小鼠肝毒性的影响。
为临床安全性再评价及合理的安全使用提供实验依据。
小鼠分别单次给予全方，化学药组分及中药组分，连续观察14 d，测定全方组与化学药组的LD50和中药组最大耐受量；小鼠分为饥饿和饮食组，单次给予全方，观察14 d，计算LD50；小鼠分为饥饿和饮食组，单次给感冒灵后6 h检测血清生化指标和肝脏指数，计算TD50，观察肝脏组织形态。
全方组LD50为442 g·kg-1 ，化学药组LD50为064 g·kg-1。
中药组最大耐受量接近2424 g·kg-1。
全方组与化学药组小鼠的毒性表现基本相似，体重、摄食量有一定程度的下降，部分存活动物有肝、心组织病变；全方组表现程度较轻，恢复较快；饥饿组小鼠LD50为256 g·kg-1，饮食组LD50为693 g·kg-1；饥饿组小鼠肝TD50为129 g·kg-1，饮食组小鼠肝TD50为630 g·kg-1。
999感冒灵全方毒性较小，可能与中西药组分配伍后有一定的减毒作用有关。
正常饮食状态和饥饿状态相比，小鼠LD50及肝TD50数值明显变大，毒性减小。
从安全性角度提示在不饥饿状态或餐后服用感冒灵更为安全，上述试验为全方的临床安全使用提供了实验依据。
标签：感冒灵颗粒；组分；急性毒性；肝毒性；饥饿；饮食[Abstract]This paper was aimed to compare the acute toxicity of 999 Ganmaoling grain and its different ingredients，and investigate the influence of routine diet on the hepatic toxicity induced by Ganmaoling in mice，so as to provide experimental basis for the clinical safety evaluation Mice were given a single dose of Ganmaoling grain or its different ingredients respectively by gavage，and then observed for 14 days LD50 values of Ganmaoling grain or its chemical ingredient and the maximal tolerated dose of its herb ingredient were determined Mice were divided into starvation and diet group，a single dose of Ganmaoling grain was administered by gavage LD50 values were estimated after 14 day observation Mice were divided into starvation and diet group At the same time，control group was set up for each A single dose of Ganmaoling grain was given Serum biochemical indexes were detected，liver weight index was calculated and liver tissue morphological change was observed after 6 h LD50 values were 442，064 g·kg-1 for Ganmaoling grain group and chemical ingredient group，respectively The maximal tolerated dose of the herb ingredient group was close to 2424 g·kg-1. The toxic symptom was basically similar in the Ganmaoling grain and the chemical ingredient group The body weight and food intake were decreased to a certain extent in both groups There were pathological changes of liver and heart tissue in some of the surviving animals The animals in the Ganmaoling grain group exhibited a lighter toxicity and recovered faster than that in the chemical ingredient group LD50 values of Ganmaoling grain were 256，693 g·kg-1 for starvation and diet group respectively TD50 values were129，631 g·kg-1 for starvation and diet group respectively The toxicity of 999 Ganmaoling was less，which may be related to the reduction of toxicity after the combination of herb and chemical ingredients Compared with starvation group，the values of LD50 and TD50 of diet group was significantly increased，and toxicity was decreased From the point of view of safety，it is safer to use Ganmaoling in the absence of hunger or after meal The above tests provide experimental basis for the clinical safety use of Ganmaoling[Key words]Ganmaoling grain；ingredient；acute toxicity；liver toxicity；starvation；dietdoi：10.4268/cjcmm20160806999感冒灵颗粒是用于感冒引起的头痛、发热、鼻塞、流涕、咽痛等症状的中西复方制剂，由化学药咖啡因、扑尔敏、对乙酰氨基酚（acetaminophen，APAP）及中药三丫苦、金盏银盘、岗梅等组成。
急性毒性试验PPT课件
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(二)安全性评价
(1)根据急性毒性试验结果判断供试药物毒性的强弱、类型。国内尚无统—规 定。
(2)急性毒性试验结果对临床研究有指导意义，可以为临床研究时探索安全有 效剂量避免出现急性不良反应提供依据。
但是，鉴于人体与各种动物对各类化合物的吸收、分布、代谢、排泄以及各 类型毒性反应的差异，尚无规律可循，现有化学药品统计数据表明，在进行临 床研究时，仍应根据实验结果参考文献资料报道进行由低到高的安全治疗剂量 的探索。
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三、近似致死量试验
国外近年来有采用少量动物进行近似致死量测定的方法。其中有的类似 LD50的预试验或霍恩氏法。每组用3—4只动物，设多组，详细观察并汜 录动物毒性反应井进行血液学，血液生化以及病理组织学观察。有的采用 剂量递增法即—只动物一个剂量以几何级数递增，根据前个剂量的反应， 决定下—个剂量。或采用剂量累积法，同一批动物间隔一定时间、剂量由 小到大给药，观察毒性反应，同时结合血药浓度的测定，确定动物的急性 毒性反应、靶器官、中毒或致死剂量、毒性反应时的血药浓度。剂量递增 法类似于LD50测定的阶梯法(或称序贯法、上下法)，适用小动物而且毒性 反应出现快的试验，10—20只动物即可测定。剂量累积法则适用大动物， 利用大约6只合格动物即可进行急性毒性试验的全面观察。另外，国外还 有采用固定剂量给药观察近似致死剂量，以决定药物毒性大小者。
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四、急毒试验结果评价 (一)可靠性评价
为保证急毒结果，实验条件应符合GLP的要求，供试品质量稳定， 动物合格，实验方案，实验原始记录，标准操作规程，总结报告应 符合要求。总结报告中应包括摘要、供试品、试验动物，试验环境、 给药方法、观察方法、毒性反应症状、体重变化、病理组织学变化、 雄性反应和死亡出现的时间、LD50和LD5及其可信限的计算方法、 结果讨论等。根据试验结果对急性毒性进行全面评价。
急性毒性试验
急性毒性试验试验目的：急性毒性试验是在24小时内给药1次或2次（间隔6-8小时），观察动物接受过量的受试药物所产生的急性中毒反应，为多次反复给药的毒性试验设计剂量、分析毒性作用的主要靶器官、分析人体过量时可能出现的毒性反应、I期临床的剂量选择和观察指标的设计提供参考信息等。
一、啮齿类动物单次给药的毒性试验（一）试验条件1．动物品系：常用健康的小鼠、大鼠。
选用其他动物应说明原因。
年龄一般为7-9周龄。
同批试验中，小鼠或大鼠的初始体重不应超过或低于所用动物平均体重的20%。
实验前至少驯养观察1周，记录动物的行为活动、饮食、体重及精神状况。
2．饲养管理：动物饲料应符合动物的营养标准。
若用自己配制的饲料，应提供配方及营养成分含量的检测报告；若是购买的饲料，应注明生产单位。
应写明动物饲养室内环境因素的控制情况。
3．受试药物：应注明受试药物的名称、批号、来源、纯度、保存条件及配制方法。
（二）试验方法：由于受试药物的化学结构、活性成分的含量、药理、毒理学特点各异，毒性也不同，有的很难观察到毒性反应，实验者可根据受试药物的特点，由下列几种实验方法中选择一种进行急性毒性试验。
1．伴随测定半数致死量（LD50）的急性毒性试验方法。
2．最大耐受剂量（MTD）试验方法：最大耐受剂量，是引起动物出现明显的中毒反应而不产生死亡的剂量。
3．最大受试药物量试验方法：在合理的浓度及合理的容量条件下，用最大的剂量给予实验动物，观察动物的反应。
4．单次口服固定剂量方法（Fixed-doseprocedure）。
选择5、50、500和2000mg/kg四个固定剂量。
实验动物首选大鼠，给药前禁食6-12小时，给受试药物后再禁食3-4小时。
如无资料证明雄性动物对受药试物更敏感，首先用雌性动物进行预试。
根据受试药物的有关资料，由上述四个剂量中选择一个作初始剂量，若无有关资料作参考，可用500mg/kg作初始剂量进行预试，如无毒性反应，则用2000mg/kg进行预试，此剂量如无死亡发生即可结束预试。
急性吸入毒性试验 急性毒性分类法
急性吸入毒性试验急性毒性分类法Acute Inhalation Toxicity-Acute Toxic Class Method1范围本试验方法规定了急性吸入毒性试验急性毒性分类法的试验原则、试验方法、数据和报告。
本试验方法适用于化妆品原料急性吸入毒性的急性毒性分类。
本试验方法适用于单一成分的化妆品原料，非单一成分的原料若使用本方法进行评价，需要提供更多的科学依据说明其可行性。
本试验方法不适用于测试某些特殊的材料，如难溶的等轴状（isometric）或纤维状（fibrous）材料、或人造纳米材料（manufactured nanomaterials）。
2试验目的本试验方法的目的是通过测试获得受试物的健康危害信息等资料，从而可参考联合国全球化学品分类和标签管理协调制度（the United Nations（UN）Globally Harmonized System （GHS）of Classification and Labelling of Chemicals）的化学品急性毒性分类标准对其急性毒性进行分类。
3定义3.1急性吸入毒性分类法按照一定的连续试验步骤和相应的浓度进行测试，从而获得受试物的毒性分类和半数致死浓度（LC50,Lethal Concentration50%）估测范围的试验方法。
3.2计算浓度nominal concentration使用受试物的量除以通过染毒系统空气的总体积所得到的浓度。
3.3实际浓度actual concentration在吸入式染毒柜中动物呼吸道中的受试物浓度，可通过特异性（如直接采样、吸附或化学反应等方法进行采样、分析）或非特异性（如滤膜增重法）等方法进行测试分析。
4试验原则本试验采用分步试验的方法，观察试验动物暴露4h的反应，从而得到满足对受试物急性吸入毒性等级进行分类的信息。
为了特殊的监管目的也可采用其他暴露时限（不是4h）的试验。
每步试验使用每种性别3只动物，在确定的浓度下进行吸入暴露试验。
急毒
急毒试验最大给药量和最大耐受量辨析急毒试验最大给药量和最大耐受量辨析审评二部张晓东药物急性毒性试验最大给药量和最大耐受量（MTD）是两个不同的概念，在药物非临床安全性评价中表示的是通过不同研究途径得出的两种安全性评价参考信息。
然而，我们在审评过程中经常碰到申报单位提供的中药急性毒性试验研究资料中将最大耐受量和最大给药量的概念混淆的现象。
这种概念混淆不但影响了新药研究资料的科学性和严谨性，而且一定程度上也影响了对药物急性毒性情况的评价和分析。
现行的药物急性毒性研究技术指导原则（包括化学药和中药、天然药物）中明确：“最大耐受量（Maximal tolerance dose, MTD）：指动物能够耐受的而不引起动物死亡的最高剂量”。
这一概念的提出主要是出于从获取安全性信息的角度考虑，有时对实验动物的异常反应和病理过程的观察、分析，较以死亡为观察指标更有毒理学意义。
而最大给药量的概念则源于采用最大给药量法进行药物的急性毒性试验，即最大给药量试验。
现行化学药物急性毒性研究技术指导原则中明确：“对于某些低毒的受试物可采用该方法。
指在合理的最大给药浓度及给药容量的前提下，以允许的最大剂量单次给药或24小时内多次给药(剂量一般不超过5g/kg体重)，观察动物出现的反应。
一般使用10-20只动物，连续观察14天。
” 中药、天然药物急性毒性研究技术指导原则中明确：“最大给药量指单次或24小时内多次（2-3次）给药所采用的最大给药剂量。
最大给药量试验是指在合理的给药浓度及合理的给药容量的条件下，以允许的最大剂量给予实验动物，观察动物出现的反应。
”根据两者的概念，我们不难发现两者的区别：MTD强调的是不引起受试动物死亡的最高剂量，言下之意如果超过该剂量，就会出现受试动物死亡情况。
因此，理论上讲，MTD对于一个药物来说是一个相对固定的值，该数值本身对于阐明某个药物的急性毒性情况就是一个重要的参考信息。
当然，在具体的MTD测定过程中，我们同样需要密切观察和分析受试动物在MTD下出现的异常反应和病理过程，并综合起来分析和评价药物的急性毒性情况。
金关片长期毒性研究
-实验观察-金关片长期毒性研究周奇1杨芳炬2N郝莉1=1.华润三九（雅安）药业有限公司，四川雅安622000；2.四川大学华西基础医学与法医学院，四川成都210000］中图分类号:R280.3文献标志码:A文章编号:1004-745X（2021）01-0077-04doi：10.3369/j.issn.l004-745X.3221.31.321【摘要】目的评价金关片的长期毒性，为临床安全用药提供参考依据。
方法长期毒性试验中，剂量分别为0.3N.4N.2g/kg体质量，分别相当于生药量2.45g/kg（约为临床用药量的1倍）、1.25g/kg（约为临床用药量的8倍）和0.22g/kg（约为临床用药量的4倍）体质量给药,进行了金关片对大鼠口服灌胃的长期毒性（180d）试验。
结果长期毒性试验中，各试药组与生理盐水对照组比,其外观、毛色、行为、精神状态无异常;进食量、体质量增长等情况差异无统计学意义。
各脏器病理切片检查见0.3g/kg用药组雄鼠睾丸出现不同程度退行性变,生精细胞减少，或精管细胞消失，停药14d后雄鼠该情况未见明显改善。
其余脏器未见异常。
结论金关片对大鼠未见明显长期毒性,提示金关片在临床推荐剂量下服用是安全的V【关键词】金关片长期毒性雷公藤安全性评价睾丸大鼠金关片为临床中常用的中成药,具有补益肝肾，祛寒止痛,活血通络的功效，临床用于类风湿性关节炎、强直性脊柱炎等［13］o金关片作为一个上市多年的药物，临床疗效明确［47］,但缺乏系统的研究及评价资料报道。
为扩大产品的影响力，有效地指导临床安全用药,根据国家食品药品监督管理局颁发的《中药、天然药物长期毒性研究技术指导原则》中“慢性毒性试验”要求,本研究进行了金关片对大鼠口服灌胃的长期毒性（180 d试验，以期为临床安全用药提供实验依据。
1材料n药物金关片由雷公藤、续断、山药、细辛、附子（制）、茯苓、桑枝、桂枝、鹿角霜、秦_、丹参、枸杞子、牛膝、鸡血藤、黄精、淫羊仁、黄o等组成，每克药粉相当于生药SUg,由雅安三九药业有限公司生产并提供,批号K-060331,长期毒性研究用时称取药粉以0.5%%甲基纤维素钠溶液配制成8%、4%、2%浓度药液备用。
全身用药的毒性研究
3、剂量设计 低剂量组-无毒剂量（临床用量2-3倍） 中剂量组-高、低剂量几何平均数 高剂量组-毒性剂量
4.给药路径 拟推荐临床用药路径
全身用药的毒性研究
第16页
5、给药容量
应依据体重增加情况调整给药量，按 等量不一样浓度法配制药品。
6.试验周期
临床试验用药 验用药
动物试
＜ 5天
2
周
＜ 2周
4
周
全身用药的毒性研究
全身用药的毒性研究
全身用药的毒性研究
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第一节 新药急性毒性试验
急性毒性试验
毒性反应类型 定性 出现和消失时间
可能靶器官和死亡原因
致死量 定量 最大给药量
半数致死量
全身用药的毒性研究
第2页
一、目标和意义
1.了解新药急性毒性强弱 LD50 ED50 治疗指数（ LD50/ED50）
相对毒性 安全系数（ LD5/ ED95）
全身用药的毒性研究
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四）热原试验
1、目标-判定受试物是否有致热作用 2、动物-家兔 3.方法
3只家兔，侧正常体温，注射药品，每 小时测体温一次，共3次。最高一次温度 减正常体温。如三只家兔中有一只升温超 过0.6℃或三只家兔升温总和超出1.4℃时; 应另取5只家兔复试，方法通上。
全身用药的毒性研究
全身用药的毒性研究
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第三节 制剂全身毒性试验
一、静脉注射制剂全身毒性试验
全身毒性试验
血管刺激性试验 体外溶血试验
过敏性试验 热原试验
全身用药的毒性研究
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一）血管刺激性试验
1、目标-观察静脉注射剂屡次给予后对血管 刺激性情况。
2、动物-家兔（每组最少3只动物） 3、方法-分成两组（阴性对照组、给药组）
《实验一急毒实验》课件
实验二结果：急 毒实验数据记录
实验三结果：急 毒实验数据记录
实验四结果：急 毒实验数据记录
实验结果分析
实验数据记录：详 细记录每次实验的 数据，包括实验动 物的状态、死亡时 间、毒性反应等
数据分析：对实验 数据进行统计和分 析，找出毒性反应 的规律和趋势
实验结论：根据数 据分析结果，得出 实验结论，判断化 合物是否有毒以及 毒性大小
《实验一急毒实验》PPT课件
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目录
01 03 05 07
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02
实验材料验步骤 实验讨论
01
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02
实验概述
实验目的和意义
了解急毒实验的目的和意义
了解实验结果的分析和解释
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掌握急毒实验的基本原理和方法
实验讨论：对实验 结果进行讨论，分 析可能存在的误差 和不足，提出改进 意见和建议
06
实验讨论
实验结果讨论
实验数据对比：将不同实验组的数据进行对比分析，找出差异和规律
实验结果分析：对实验结果进行深入分析，探讨可能的原因和影响 因素 实验结果与预期：将实验结果与预期结果进行比较，分析差异和一致 性
了解急毒实验在药物研发中的应 用
实验原理
实验目的：了解急毒实验的基本原理和操作方法 实验原理：通过观察受试物在不同时间点对实验动物产生的毒性作用，评估其急性毒性等级 实验步骤：准备实验动物、配置受试物、给予受试物、观察实验动物反应 实验结果：根据实验动物反应，判断受试物的急性毒性等级
03
实验材料
实验数据分析与处理方法改进
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金菊感冒片成分鉴别方法
金菊感冒片成分鉴别方法摘要】目的：探索金菊感冒片的主要成分鉴别，以提升药品质量。
方法：用TLC法对方中野菊花、三叉苦和岗梅进行鉴别。
结果：供试品与对照药材在同一色谱相应位置显相同颜色的主斑点。
结论：该法专属性强，分离度和重现性好，可用于金菊感冒片的质量控制。
【关键词】金菊感冒片；质量标准；TLC【中图分类号】R286 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2020）08-0241-02金菊感冒片（以下简称“本品”）由金银花、野菊花、三叉苦等十味组成，收载于《中华人民共和国卫生部药品标准中药成方制剂》（第十七册），标准文号：WS3-B-3259-98，具有清热解毒之功效，临床用于风热感冒，发热咽痛，咳嗽痰黄等症。
本品国家标准[1]在药材鉴别方面仅做了理化试验进行定性鉴别，不具专属性，药品标准有待完善。
因此，为了进一步提高药品质量，增强药品质量可控性，本文对本品组方中的野菊花等三味药材进行TLC鉴别。
1.仪器与试药紫外可见分光光度计（UV-2600型）；超声清洗仪（S10H～S900H型）；金菊感冒片（批号：160205）；野菊花对照药材（批号：120995-201405，中国药品生物制品检定所）；三叉苦对照药材（批号：121682-201301，中国药品生物制品检定所）；岗梅对照药材（批号：121152-201403，中国药品生物制品检定所）。
2.方法与结果2.1 野菊花的鉴别分别取本品和阴性对照样品10g，研碎成粗粉，用石油醚（60～90℃）60ml温热40min，冷却后过滤得滤渣。
取滤渣，温热除去溶剂，用甲醇100ml回流40min，冷却后过滤，取滤渣用适量水溶解后进行聚酰胺柱层析，依次用水、甲醇各60ml洗脱，将甲醇洗脱液蒸干，残渣用适量甲醇溶解后的溶液作为野菊花供试品和阴性对照溶液。
另取野菊花对照药材10g，按照上述方法制成对照药材溶液。
依据TLC法（2015年版药典四部通则0502），吸取供试品、阴性对照以及对照药材溶液各5μl，点于同一用1%NaOH碱化的硅胶G层析板上（CMC-Na为黏合剂），用乙酸乙酯-甲醇-水（90∶15∶5）作为展开剂展开，取出晾干后喷1%AlCl3乙醇溶液，于105℃高温烘烤3min，再喷5%硫酸乙醇溶液，在105℃高温条件下烘烤至斑点显色清晰。
金桔感冒片急性毒性试验
金桔感冒片急性毒性试验
高苏莉;杨春娥;刘渝;张登武;顾宜
【期刊名称】《第四军医大学学报》
【年(卷),期】2003(024)005
【摘要】@@ 1 实验资料金桔感冒片(由金银花、桔梗、射干、酮洛芬、扑尔敏、维生素C等组成,黄色包衣片,片芯为褐色),由第四军医大学西京医院药剂科提供,试验前用蒸馏水配成不同浓度的混悬液. 昆明种小鼠62只,体质量(20.1±1.5) g,雌雄各半. 由第四军医大学实验动物中心提供,小鼠分笼饲养,颗粒饲料喂养,自由饮水,光照12 h,室温(24±2)℃,相对湿度45%～60%.
【总页数】1页(P414-414)
【作者】高苏莉;杨春娥;刘渝;张登武;顾宜
【作者单位】第四军医大学西京医院药剂科,陕西,西安,710033;第四军医大学西京医院药剂科,陕西,西安,710033;第四军医大学西京医院药剂科,陕西,西安,710033;第四军医大学西京医院药剂科,陕西,西安,710033;第四军医大学西京医院药剂科,陕西,西安,710033
【正文语种】中文
【中图分类】R965.3
【相关文献】
1.血脂泰分散片大鼠急性毒性试验研究 [J], 周翠兰;陈奇有;李继洪;彭源贵;黄大森;张广明
2.金桔精油化学成分GC-MS分析及其对小鼠急性毒性 [J], 宋莎娜;米娜;许立拔;王巍;林彩霞;高玲;蒋伟哲;巫玲玲
3.养心氏片对小鼠的急性毒性试验研究 [J], 孙振平;李昇刚;扆雪涛;朱爱民
4.复方甘草酸苷片经口急性毒性试验 [J], 乔茂锡
5.结石通片对小鼠的急性毒性试验及其对乙二酰胺致大鼠肾结石的作用研究 [J], 黎伟华;金学琴;吴璟
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三种黎药的急性毒性研究
三种黎药的急性毒性研究【摘要】目的：观察辣蓼、薜荔和三叉苦等三种黎药水提物的急性毒性反应。
方法:三种黎药水提物对小鼠进行灌胃给药，观察并记录小鼠急性毒性反应和死亡率，采用改良寇氏法测半数致死量LD50。
结果:测得辣蓼LD50为128.3g・kg-1（相当于成人一次用量的256.6倍），LD5095%可信限为（111.1～139.7）g・kg-1，10d后存活小鼠体重平均增加22.2%。
以最大给药量灌胃薜荔（213.6g・kg-1）和三叉苦（168.0g・kg-1），小鼠无死亡，12d后平均体重分别增加28.3%、28.5%。
结论:薜荔和三叉苦口服无毒，而辣蓼毒性很小。
【关键词】辣蓼；薜荔；三叉苦；急性毒性［ABSTRACT］ Objective:To investigate the acute toxic reactionof aqueous extract of three Li herbs including Polygonum hydropiper，Ficus pumila and Evodia lepta in mice. Methods: Mice were treated with aqueous extract of three Li herbs including Polygonum hydropiper， Ficus pumila and Evodia lepta by intragastric gavage. Related toxic reaction and mortality of the treated mice were observed， the median lethal dose LD50 were calculated by modified Kar ber’s method. Results: The LD50 of aqueous extract of Polygonum hydropiper was 128.3g/kg（equal to 256.6 times of adult’s administration dosage），the 95% confidence limit is 111.1��139.7 g/kg， 10 days after the administration， the survived mice gained an average weight of 22.2%. Mice that were treated with the maximum administration dosage of Ficus pumila(213.6 g/kg) and Evodia lepta（168.0 g/kg）by intragastric gavage all survived and have gained average weight of 28.3% and 28.5% respectively 12 days later. Conclusion: Ficus pumila and Evodia lepta are non��toxic; while Polygonum hydropiper shows mild toxicity.［KEY WORDS］ Polygonum hydropiper; Ficus pumila; Evodia lepta;Acute toxicity黎药是海南少数民族黎族的传统用药，常用药材约有100余种，具有悠久的应用历史，但对黎药的现代研究还相对薄弱，基础研究比较缺乏。
急性毒性实验终结版LC
结果评定/结果评价 依据实验动物中毒症状、死亡时间、LC50及
急性毒作用带，参考相应的急性毒性分级标准， 评价毒物的急性毒性强弱，判断该受试物的毒性 大小及其毒性特征。
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实验报告
实验动物的种属、品系、性别及来源。实验前动物禁食和 健康状况。
实验动物体重和随机分组情况。 受试物的名称、来源、纯度、性状等情况。 详细描述实验观察的中毒表现和死亡情况等。 LD50/LC50的计算方法和结果。 受试物的毒性分级、分级依据和结果评价。
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操作步骤 选择健康实验动物，称重（精确到0.1g），编号， 随机分组。 剂量分组
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呼吸道吸入染毒：
依设计剂量浓度及染毒柜体积，计算需要加入的受试物 量。将5♂、5♀共10只小鼠→放入静式染毒柜内→加盖 （注：每只小鼠每小时所需要的气积为3L）。将液态受试 物经加药孔加到接物蒸发器（纱布、滤纸、蒸发皿或小型 加热器）上→开启小电扇，计时→观察、记录中毒症状和 动物死亡情况。染毒结束后，关闭电源，打开盖子，驱走 柜内残存的含毒空气，取出动物，存活者归笼继续观察。 （症状：呕吐、昏迷、抽搐、呼吸麻痹而死亡）
察。观察和记录中毒症状及出现的时间，死亡数量和时间及死 亡前的特征。按照实验结果，填写急性毒性实验记录表。
中毒的症状观察：兴奋、流涎、肌震颤、抽搐、管状尾、 呼吸减慢、呼吸困难、四肢无力、站立不稳、大小便失禁、 大剂量侧卧以致死亡。
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LD50计算（改良寇氏法）
改进寇氏法是利用剂量对数与死亡率呈S型曲线而设计 的方法，又称Karber法或平均致死量法。本法要求每个染 毒剂量组动物数要相同，各剂量组组距呈等比级数，死亡 率呈正态分布，最低剂量组死亡率呈<20%，最高剂量组死 亡率>80%。
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金桔感冒片急性毒性试验研究
金桔感冒片急性毒性试验， 2 h后开始出现死亡. d 5恢复正常. 存活小鼠行为和活动正常，饮食、粪、尿等未发现异常.
1实验资料
金桔感冒片(由金银花、桔梗、射干、酮洛芬、扑尔敏、维生素C等组成，黄色包衣片，片芯为褐色)，由第四军医大学西京医院药剂科提供，试验前用蒸馏水配成不同浓度的混悬液. 昆明种小鼠62只，体质量(20.1 1.5) g，雌雄各半. 由第四军医大学实验动物中心提供，小鼠分笼饲养，颗粒饲料喂养，自由饮水，光照12 h，室温(24 2)℃，相对湿度45%~60%. 取禁食14 h的小鼠12只，雌雄各半，按体质量随机分为3个剂量组，一次性分别灌胃4.85, 9.90和20.20 g kg-1的感冒片，连续观察1 wk，结果4.85 g kg-1组全部存活，9.90 g kg-1组死亡2只，20.20g kg-1组全部死亡.取禁食14h的小鼠50只，雌雄各半，按体质量随机分为5组，根据预试验的结果，组间距按1∶0.7，分别为4.85, 6.93, 9.90, 14.14, 20.20 g kg-1 5个剂量组，然后一次性分别灌胃给予金桔感冒片，试验动物连续观察1 wk. 给药后1 h动物表现安静、活动减少、呼吸困难等. 2 h 后开始出现死亡. d 5恢复正常. 存活小鼠行为和活动正常，饮食、粪、尿等未发现异常.
死亡小鼠(各组分别为1, 2, 4, 7, 10只)解剖观察心、肝、脾、肾、肺、睾丸、子宫等
未见明显的病理变化. 根据改良寇氏法公式计算
LD50=l g-1[Xmi( P-0.5)] (g kg-1)=l g-1 [1.305 - 0.155 (2.4-0.5)]=10.24(g kg-1)
其95%可信限为LD95= LD50 4.5 LD50 i ( P - P2)/(n-1) =10.24 0.56(g kg-1)
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药物治疗折返性心动过速的影响因素，64例折返性心动过速施行单一抗心律失常药物心律平为基础，异丙肾上腺素和心得安为辅助的系列电生理研究，现报道如下.
0引言
折返性心动过速(PSVT)是临床上常见的心律失常，射频消融术是治疗折返性心动过速的主要方法，但由于设备、技术、费用等原因，基层医院往往需要药物治疗. 因此，严格选择抗心律失常药物是临床医生的重要任务. 心律失常的心肌电生理[1]及抗心律
失常药物和离子通道[2]的研究已有报道，心律平属Ⅰc类广谱抗心律失常药物，单一抗心律失常药物的疗效结果往往与临床疗效不符，为探讨其原因和对策，我院近5 a来对64例折返性心动过速施行单一抗心律失常药物心律平为基础，异丙肾上腺素和心得安为辅助的系列电生理研究，现报道如下.
1临床资料
心动过速患者(排除其他器质性心脏病)64(男23，女41)例，年龄14～52岁，心电图确诊为室上性心动过速. 受试前停用一切抗心律失常药物至少5个半衰期，食管心房调搏(TEAP)采用程序刺激诱发出心动过速，测诱发窗口(心动过速带)或高频刺激诱发心动过速，然后按下列步骤进行：①诱发PSVT后缓慢静脉注射心律平70 mg用生理盐水稀释至40 mL，若PSVT被终止，立即停用心律平，否则在注射完后5 min重复静脉注射心律平，总量不超过140 mg，随即重复TEAP. 若不能诱发出持续性PSVT，取异丙肾上腺素静点，直至窦性心律比原来稳定提高20%～40%时重复TEAP. ②上述TEAP又能诱发出PSVT，被超高频刺激终止后，静脉应用心得安0.1 mg/kg，10 min 后再行TEAP. 用高效刺激或程序刺激诱发出PSVT，静点药物后不能再诱发，判断有效. 以程序刺激诱发心动过速时诱发窗口宽度改变，诱发窗口缩小75%为有效，诱发窗口增加为无效. 用药后电生理检查复发为无效. 64例单用心律平显效58例，有效6例，静点异丙肾上腺素后疗效明显降低，其中34例可诱发PSVT，加用心得安后，又有2例可诱发PSVT，但诱发窗口缩小75%以上.
2讨论
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仅供参阅！金桔感冒片经一次性给小鼠灌胃给药，经计算测得其LD50为10.24(g kg-1)，其95%可信限为9.68~10.80(g kg-1).
2讨论
金桔感冒片为中西药复方制剂，处方中中药成分均为药典所载非毒性中药，金桔感冒片急性毒性试验毒性主要来源于西药部分，该药的毒性表现出延迟性，动物死亡时间为1~4 d，经对酮洛芬的急性毒性预试验表明，酮洛芬的毒性表现出延迟性(动物死亡时间为1~6 d)，因此该药的毒性可能主要来自酮洛芬. 建议临床用药时注意观察其延迟性毒性反应. 金桔感冒片的LD50为10.24 (g kg-1)，其95%可信限为9.68~10.80 (g kg-1). 根据毒性分级标准[3]，该药属实际无毒级，临床应用较为安全.
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