液相色谱解析
气相液相色谱答案及解析
4.1气相色谱仪的核心部件是什么？色谱柱是气相色谱仪的核心部件。
多组分样品能否完全分离，主要决定于色谱柱的效能和选择性，色谱柱又可分为填充柱和空心毛细管柱。
毛细管柱一般内径为0.1～0.5mm，长30～300m，空心管壁涂有固定液，主要用于复杂混合物的分析。
其分离效能高，但柱容量较低。
4.2气相色谱仪的检测类型有哪几种？各有什么特点？各适合哪类物质的分析？气相色谱检测器按其原理不同可分为浓度型和质量型两大类：浓度型检测器的响应信号由进入检测器的组分浓度所决定，如热导池、电子捕获检测器等；而质量型检测器的响应信号则上单位时间内进入检测器的组分质量所决定，如氢焰、火焰光度检测器等等。
（1）热导池检测器（TCD）是一种应用很广泛的通用型检测器，它的结构简单，灵敏度适宜，稳定性较好，对所有物质都有响应。
（2）氢焰离子化检测器（FID）对大多数有机物有很高的灵敏度，结构简单、响应快、稳定性好，是目前应用最广的检测器之一。
（3）电子捕获检测器（ECD）是一种高灵敏度的选择性检测器，它只对具有电负性的物质（如含卤素，S，P，N，O的化合物）有响应，电负性越强，灵敏度越高，响应信号与进入检测器的电负性物质浓度有关，ECD是浓度型检测器。
（4）火焰光度检测器（FPD）对硫、磷化合物的高选择性、高灵敏度的检测器，亦称硫磷检测器。
4.3氢火焰离子化检测器不能检测哪些物质？氢火焰离子化检测器对无机气体、水、四氯化碳等含氢少或不含氢的物质灵敏度低或不响应。
4.4可作为固定液使用的化合物必须满足哪些条件？化合物极性是如何规定的？固定液通常是高沸点、难挥发的有机化合物或聚合物。
固定液使用的物质需要满足以下的要求：（1）挥发性小，在操作温度下具有较低的蒸气压，以免在长时间的载气流动下造成固定液流失。
（2）热稳定性好，在工作温度下不发生分解，故每种固定液应给出最高使用温度。
（3）熔点不能太高，在室温下不一定为液体，但在使用温度下一定呈液体状态，以保持试样在气液两相中的分配。
液相色谱 异构体
液相色谱异构体全文共四篇示例，供读者参考第一篇示例：液相色谱（Liquid Chromatography，LC）是一种高效、快速的分离和检测方法，广泛应用于化学、生物化学、药学和环境等领域。
在LC中，液体相相对于固定相以液体形式存在，通过固定相对分析物的吸附、分配和排它作用，使得分离和检测成为可能。
在液相色谱中，异构体（Isomer）是一个常见的概念。
异构体指的是分子结构相同但空间结构不同的化合物。
由于分子的结构和构型的不同，异构体可能在性质上存在差异。
在进行化合物分离和鉴定时，对异构体的分离和检测也是非常重要的。
液相色谱在分析异构体方面具有很大的优势。
液相色谱具有良好的分离能力，可以有效地将不同异构体分离开来。
液相色谱具有高灵敏度和高选择性，可以对微量的异构体进行检测。
液相色谱还可以对复杂样品进行分析，满足实际应用中对异构体监测的需求。
不同类型的异构体在液相色谱中的分离方法也不同。
在立体异构体（Stereoisomers）的分离中，通常采用手性色谱柱进行分离。
手性色谱柱是一种特殊的固定相，具有手性选择性，可以有效地分离手性异构体。
在构象异构体（Conformational isomers）的分离中，通常采用柱温控制、淋洗溶剂的调整等方法进行分离。
对于药物分析中的异构体，液相色谱也发挥着重要作用。
由于药物分子的异构体对药效和毒性有很大影响，因此对药物中异构体的检测和分析至关重要。
通过液相色谱技术，可以对药物中异构体进行高效分离和检测，进而为药物研发和质量控制提供支持。
液相色谱在异构体分离和检测中具有显著的优势，为化学、生物化学、药学和环境等领域的研究提供了重要的技术支持。
随着技术的不断进步和发展，液相色谱在异构体分析领域的应用前景将更加广阔，为科学研究和实际应用带来更多的可能性。
第二篇示例：液相色谱（Liquid Chromatography，LC）是一种高效分离和分析化合物的技术，广泛应用于生物化学、制药、环境监测和食品安全等领域。
高效液相色谱解析
梯度洗提，就是载液中含有两种（或更多）不同极性的 溶剂，在分离过程中按一定的程序连续改变载液中溶剂的配 比和极性，通过载液中极性的变化来改变被分离组分的分离 因素，以提高分离效果。梯度洗提可以分为两种：
a.低压梯度（也叫外梯度）：在常压下，预先按一定程序将 两种或多种不同极性的溶剂混合后，再用一台高压泵输入色 谱柱。
技术：采用高效固定相、高压泵、高灵敏检测器
实现：分析速度快、分离效率高、操作自动化分析。
2 通过进样器，注入样品混合物
3.由于混合物中各组分 性质不同，因而它们在 柱内移动速度不同而逐 渐分离。
1 通过高压泵，将流动相抽入柱子
4.通过检测器检测，得到组分的 电信号并进行放大；记录仪将放 大的电信号以图形形式记录下来。
目前常使用的有三种类型的输液泵，即往复柱塞泵、气动放大泵、 螺旋注射泵，它们各有优、缺点。
二、进样系统
高效液相色谱柱比气相色谱柱 短得多（约5～30c谱柱外的因素所引起 的峰展宽，主要包括进样系统、连 接管道及检测器中存在死体积。柱 外展宽可分柱前和柱后展宽。
六口旋转进样阀示意图
工作原理：手柄位于取样(Load)位置时， 样品经微量进样针从进样孔注射进定量环， 定量环充满后，多余样品从放空孔排出； 将手柄转动至进样(Inject)位置时，阀与液 相流路接通，由泵输送的流动相冲洗定量 环，推动样品进入液相分析柱进行分析。
三、色谱柱
色谱柱是液相色谱的心脏部件，它包括柱管与 固定相两部分。柱管材料有玻璃、不锈钢、铝、铜 及内衬光滑的聚合材料的其他金属。玻璃管耐压有 限，故金属管用得较多。一般色谱柱长5～30cm， 内径为4～5mm，凝胶色谱柱内径3～12mm，制备往 内径较大，可达25mm 以上。一般在分离前备有一 个前置柱，前置柱内填充物和分离柱完全一样，这 样可使淋洗溶剂由于经过前置柱为其中的固定相饱 和，使它在流过分离柱时不再洗脱其中固定相，保 证分离的性能不受影响。
实例解析——高效液相色谱(HPLC)
实例解一一高效液相色谱(HPLC)一、原理利用不同物质在两相中(液液、液固、离子交换、尺寸排阻)具有不同的分配系数，当二者相对运动时候，物质在两相中反复多次分配，从而使得物质得到完全分离二、适用范围高沸点、热不稳定的天然产物、生物大分子、高分子化合物、离子型样品、生化样品三、特点高压、高效、高灵敏度四、仪器组成流动液贮存提供脱气，输液系统、进样系统、分离系统、检测系统，控制记录系统贮液瓶、高压泵、进样器、分离柱、检测器、记录仪五、仪器选择由实验条件确定是选用二元高压还是四元低压、一般来说，二元高压的准确度较高。
四元低压是先将样品按比例混合再泵入，而二元高压是先泵入不同比例的溶剂再混合。
确定采用的脱气系统，一般采用在线脱气。
确定进样方式，人工手动六通阀进样，还是进样针自动进样，一个适用于少量样品，一个适用于大量样品。
选择检测器，如果是有较强的紫外吸收的可用紫外可见检测器(二极管阵列检测器)，如果是芳香族化合物，可选用荧光检测器，对于离子可采用电导检测器。
六、实验条件优化配置待测物质的标准溶液1、色谱柱的确定分析样本确定是采用何种类型的色谱柱(1)分配色谱，两项间分配系数流动相选用极性的物质(甲醇、乙腈、水)则固定相选择非极性物质。
一般用C18 ODS 柱。
(2)吸附色谱，(3)离子交换色谱各种离子与树脂上交换集团的交换能力不同。
固定相：离子交换树脂，流动相为无机酸、无机碱。
常用于分离离子或者可解离的化合物(4)排阻色谱法配置含待测物质的标准品溶液，采用不同C18柱分离，检测，对照不同色谱图像，可得到分离效能最高的色谱柱2、最佳流动相梯度洗脱程序的确定梯度洗脱：按照一定的程度，不断改变流动相中个溶剂组成的比例以改变流动相的极性。
将色谱柱上不同的组分洗脱出来。
配置不同的梯度洗脱方案，用标准溶液进行试验，并选取能达到最高分离效能的梯度洗过方案作为最佳流动相梯度洗脱程序3、流动相的确定在分离效能相似条件下选择更经济、毒性小的流动相4、流速确定流速太大，待分离组分来不及与固定相充分作用，故其中的组分较易被洗脱下来，出峰时间变短，而且柱压比较高，会引起泵负荷的增加，进而导致色谱柱的使用命的缩短，色谱峰的分离度变差。
8种常见液相色谱峰解析常见原因及解决办法
8种常见液相色谱峰解析，常见原因及解决办法！对于每一个身经百柱的实验人员来说，液相色谱图是他们打开未知物质世界的大门，科研中的很多问题都能从色谱图中得到很好的反映，有些问题可以通过改变设备参数得到解决，而有些问题则必须通过修改操作程序来解决，毕竟，正确选择色谱柱和流动相才是得到好的色谱图的关键。
小编在此根据大家实践中可能会经常遇到的一些图谱问题进行了整理汇总，大家一起来看一下吧。
1、拖尾峰1、筛板阻塞：柱子两头的过滤筛板如果堵塞，样品就会在筛板部分受阻而形成时间延迟，使得样品在柱后流出时峰型形成拖尾。
需要通过反冲色谱柱，或者更换筛板。
2、色谱柱塌陷：是指色谱柱由于其它原因引起了柱效率丧失，不能对物质形成保留，使得物质不在固定相上保留而随流动相流出，但是又还有一点柱效，因此形成拖尾。
需要重新填充色谱柱或者更换色谱柱。
3、有污染：即样品不在同一起跑线起跑，从后面开始跑得到达终点稍晚，表现出拖尾。
更换色谱柱或者采用有机溶剂梯度洗脱1h以上，以冲洗柱子。
4、流动相PH值选择错误：如某PH下有的样品存在分子型和离子型的动态平衡，离子型的陆续向分子型转化就会表现出拖尾。
调节PH值可抑制分子解离，改善拖尾，对于碱性化合物，相对较低的PH值更有利于得到对称峰。
2、前沿峰1、样品过载：被保留的样品在正常出峰时间前陆续出来，形成前沿峰。
降低样品含量。
2、样品溶剂选择不恰当：当样品溶剂的洗脱能力大大强于流动相时会出现前沿峰，例如，在反相色谱中用已腈做样品溶剂，而流动相的洗脱力较弱时会出现前沿峰。
选择流动相或者接近流动相的比例作为样品溶剂。
3、色谱柱损坏：色谱柱柱效损失，不能对物质形成保留。
更换色谱柱。
4、在大峰前有小峰出现，假象前沿峰，即大峰前包埋了没有分开的小峰。
调整流动相洗脱梯度。
3、倒峰1、样品折射率小：示差折光检测器测的信号是折射率，出现倒峰的原因是组分的折射率小于流动相。
2、密度的原因：密度不一样，出来的峰正倒不一样。
液相色谱法测定果酱中的柠檬黄、日落黄、苋菜红、胭脂红、亮蓝
食品实验为了改善食品的颜色或外观，从而有利于产品销售，着色剂在食品工业中得到了很广泛的应用。
与天然色素相比，合成着色剂的着色力强、色泽鲜艳、不易褪色、稳定性好、易溶解、易调色、成本低，但安全性低，所以国家对合成着色剂的监管很严格。
根据GB 2760－2014《食品安全国家标准 食品添加剂使用标准》的规定，果酱（食品分类号04.01.02.05）产品允许使用合成着色剂，限值为：柠檬黄0.5g/kg、日落黄0.5g/kg、苋菜红0.3g/kg、胭脂红0.5g/kg、亮蓝0.5g/kg。
不过，GB 5009.35－2016《食品安全国家标准 食品中合成着色剂的测定》只适用于巧克力豆、硬糖、着色糖衣制品、蜜饯、配制酒、饮料、淀粉软糖等7种产品的测定，对于允许而且经常使用合成着色剂的果酱产品，则不在适用范围内。
本文通过检出限、回收率和精密度等检验数据，验证GB 5009.35－2016《食品安全国家标准 食品中合成着色剂的测定》的检测方法是否适用于果酱产品的检测，从而解决实验室选择测试方法的问题。
一、实验材料1.试剂及配制方法。
甲醇：色谱纯。
乙酸铵（CH3COONH4）溶液（0.02mol/L）：称量乙酸铵1.54g，加水至1L，后经微孔滤膜（0.45μm）过滤。
柠檬酸（C6H8O7·H2O）溶液（20g/100m L水），用该浓度的柠檬酸溶液把水调到pH6和pH4。
氨水溶液：氨水含量要求20％－25％，把2mL的氨水加水稀释至100mL。
甲醇－甲酸溶液：把甲醇、甲酸按体积比（6＋4）混匀。
无水乙醇－氨水－水溶液：把无水乙醇、氨水溶液、水按体积比（7＋2＋1）混匀。
聚酰胺粉（尼龙6）：过200μm（目）筛。
无水乙醇（CH3CH2OH），乙酸（CH3COOH）。
2.标准品。
柠檬黄（CAS︰1934－21－0）；苋菜红（CAS︰915－67－3）；胭脂红（CAS︰2611－82－液相色谱法测定果酱中的柠檬黄、日落黄、苋菜红、胭脂红、亮蓝7）；日落黄（CAS︰2783－94－0）；亮蓝（CAS︰3844－45－9）。
液相色谱质谱分析
质谱图是以质荷比(m/z)为横坐标、相对强度为纵坐标构 成，将原始质谱图上最强的离子峰定为基峰并定为相对强度 100％，其他离子峰以对基峰的相对百分值表示。
丙酮的质谱图
（2）离子峰的主要类型
分子在离子源中可产生各种电离，即同一分子可产生多 种离子峰：分子离子峰、同位素离子峰、碎片离子峰、重排 离子峰、亚稳离子峰等。 设有机化合物由A，B，C和D组成，当蒸汽分子进入离子 源，受到电子轰击可能发生下列过程而形成各种类型的离子：
CH3
1) 根据质谱峰的质荷比测定化合物的分子量， 推测分子式及结构式 2) 根据峰强度进行定量分析
2.质谱仪的结构
（1） 进样系统
作用：将样品分子引入到离子源中。 方式： 蠕动泵连续进样
六通阀直接进样 色谱进样系统
(2) 离子源
作用：
1. 将导入质谱仪系统的样品去溶剂化 2. 将离子源处的大气压与质谱仪系统一级 真空阻隔开 3. 被分析物离子化或将溶剂中的离子转化 成气相 4. 去除中性物质和带反极性电荷离子，否 则会对分析产生干扰
电喷雾电离源(ESI)
多电荷离子 测定的样品分子量大
(3) 质量分析器
作用: 是将不同碎片按质荷比m/z分开。 质量分析器类型：磁分析器、飞行时间、四 极杆、离子捕获、离子回旋等。
a 单聚焦型磁分析器
b 四级杆分析器
(4) 检测器
质谱仪常用的检测器有法拉第杯(Faraday Cup)、 电子倍增器及闪烁计数器、照相底片等。
分配比变化范围宽的 复杂样品应采取 梯度洗脱方式分离
流动相溶剂选 择的一般要求
1) 对样品有一定的溶解度，以防在柱头产生沉淀。 2) 适用于所选择的检测器。 3) 化学惰性好，以免破坏固定相。 4) 低粘度，增加样品的扩散系数，提高柱效。 5) 纯度高。溶剂不纯会增加检测器噪声，产生伪峰。
液相色谱质谱基础介绍
21
质谱的调谐和校正
调谐：通过把一系列已知质荷比的标准物引入 三级四极杆并产生离子，利用这些已知离子，调整 离子光学组件上的仪器参数（电压值），以期在全质量范围获得最大传输效率，获得理想信号强度。 调谐包括控制skimmer，八极杆，透镜，四极杆和检测器等的参数。
APCI
分析物的极性
极性 25
LC-MS分析条件的选择
2. 正负离子模式的选择
正离子模式（ESI+）： *适合碱性样品分析，可用乙酸（pH=3~4）或甲酸（pH=2~3）对样品加以酸化，降低pH *流动相酸性环境： 容易加合质子
负离子模式（ESI-）： * 适应于酸性样品，含氯、含溴和多个羟基时可尝试使用 * 流动相碱性环境：易失去质子 * 可用氨水或三乙胺（因产生顽固性背景102峰 [M+H]，慎用！）对样品进行碱化，增加pH
缺点：没有商品化的谱库可对比查询，只能自己建库或自己解析谱图。
2
培训目的
认识和了解液相色谱三重四级杆质谱（1290II-6460） 掌握MussHunter Data Acquisition参数设定，学会数据采集 掌握利用Qualitative Analysis进行数据分析的基本操作
3
• 不过滤离子，所有的带电离子全都通过
B → 扫描（SCAN）
• 指在给定的质荷比范围内，依次采集每个质量数的信号
C → 选择离子监测（SIM）
• 只是采集指定的某个或某几个质荷比的离子信号
高效液相色谱法HPLC
VS
报告结果
整理分析数据，撰写分析报告，提供各组 分的浓度、纯度等相关信息，为科研或生 产提供决策依据。
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实验操作步骤
流动相的准备与平衡
根据实验要求配制流动相，通过泵以适宜的流速 通过色谱柱进行平衡。
洗脱与检测
流动相带着样品经过色谱柱洗脱，各个组分依次 流出并进入检测器进行检测。
ABCD
进样
将样品注入进样器，通过压力将样品送入色谱柱 进行分离。
数据处理与结果分析
对检测器输出的信号进行处理，得到各组分的峰 形和峰面积，进行定性和定量分析。
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进样
将样品注入色谱柱。
分离
在流动相的带动下，样品中的 组分在色谱柱中进行分离。
检测
检测器对分离后的组分进行检 测，并记录信号。
数据处理
对采集到的数据进行处理、分 析和存储。
高效液相色谱仪的维护和保养
定期清洗色谱柱
使用适当的溶剂清洗色谱柱， 以去除残留物和杂质。
维护和检查检测器
定期检查检测器的性能和准确 性，确保其正常运行。
数据处理系统
用于采集、处理、分析和存储色谱数据，通常采用色谱工 作站。
高效液相色谱仪的操作流程
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样品准备
将样品进行适当处理，以 便注入色谱柱。
流动相制备
根据实验要求，选择合适 的流动相，并进行过滤和 脱气处理。
系统平衡
在进样之前，确保色谱系 统达到平衡状态，以提高 分离效果。
高效液相色谱仪的操作流程
样品的预处理
分离
对于复杂样品，需要进行分离操 作以去除杂质或提取目标成分。 常用的分离方法包括离心、过滤、
高效液相色谱分析(主要分离类型与原理)课件
• 高效液相色谱分析简介 • 高效液相色谱的主要分离类型 • 高效液相色谱的分离原理 • 高效液相色谱分析实验操作与注意事项 • 高效液相色谱分析的应用实例
目录
Part
01
高效液相色谱分析简介
高效液相色谱分析的定义
高效液相色谱分析（HPLC）是一种分离和检测复杂样品中各种组分的方法。它利用不同 物质在固定相和流动相之间的分配平衡来实现分离。
THANKS
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ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
Part
03
高效液相色谱的分离原理
高效液相色谱的固定相与流动相
固定相
是色谱柱中的填充物，用于吸附 和固定样品中的组分。常见的固 定相包括硅胶、氧化铝、活性炭 等。
流动相
是携带样品通过色谱柱的液体或 气体，与固定相相互作用，使各 组分得以分离。
高效液相色谱的分离过程
样品在流动相中溶解并被 带入色谱柱。
实验操作前的准备
实验器材与试剂准备
确保所需的色谱柱、检测器、流动相 、样品等都已准备好，并确保试剂的 质量和纯度。
实验条件设定
仪器校准与维护
确保色谱仪器的准确性和稳定性，进 行必要的校准和日常维护。
根据实验需求，设定合适的流动相比 例、流速、检测波长等参数。
实验操作步骤与要点
样品处理
根据实验要求，对样品进 1
Part
02
高效液相色谱的主要分离类型
吸附色谱
STEP 01
原理
STEP 02
应用
利用固定相吸附剂对不同 组分的吸附能力差异实现 分离。
STEP 03
特点
固定相的吸附能力可以通 过改变流动相的组成进行 调节。
液相色谱法名词解释-概述说明以及解释
液相色谱法名词解释-概述说明以及解释1.引言1.1 概述液相色谱法是一种分离和分析化学物质的重要技术手段，广泛应用于各种领域，包括药物研发、食品安全、环境监测等。
它通过在固定相（填料）上溶解待测物质，利用流动的液相作为分离介质，在柱内或板内进行化学分离，最终通过检测器检测不同物质的保留时间或光谱特性，实现对化合物的分离和定量分析。
液相色谱法具有高分辨率、高灵敏度、高选择性和高效率的优点，能够分析复杂的混合物，并且通常能够达到微量甚至痕量水平的检测。
因此，液相色谱法已经成为现代化学分析中不可或缺的一部分。
本文将对液相色谱法的概述、原理及应用进行详细介绍，旨在帮助读者了解液相色谱法的基本概念和特点，进一步探讨其在科学研究和实际应用中的重要性和价值。
1.2 文章结构本文将分为三个主要部分：引言、正文和结论。
在引言部分，将对液相色谱法进行概述，介绍文章的结构和目的。
正文部分将包括液相色谱法的概述、原理和应用。
我们将详细解释液相色谱法是什么，它是如何工作的，以及在实际应用中的具体情况。
结论部分将对液相色谱法进行总结，强调其优势和未来发展方向。
我们将讨论液相色谱法在当今科学领域的重要性，并展望其在未来的应用前景。
1.3 目的本文旨在深入探讨液相色谱法，并对其进行全面解释和解析。
通过对液相色谱法的概述、原理和应用进行详细介绍，旨在帮助读者更好地了解和掌握这一重要的分析技术。
我们将介绍液相色谱法在不同领域的广泛应用，包括生物医药、环境监测、食品安全等方面的案例分析，以展示其在科学研究和工程实践中的重要性和实用性。
同时，我们还将总结液相色谱法的优势，探讨其未来发展的趋势和前景，为读者提供关于这一分析技术的全面了解和展望。
通过本文的阐述，希望读者可以加深对液相色谱法的理解，并在相关领域的研究和实践中更好地运用和应用液相色谱法。
2.正文2.1 液相色谱法概述液相色谱法是一种利用液相作为固定相，通过溶质在流动液相和固定相之间的分配作用实现样品分离的方法。
HPLC高效液相色谱法培训解析
进样方式
①部分装液法：注入的样品体 积应不大于定量环体积的50%， 并要求每次进样体积准确、相 同。
②完全装液法：注入的样品体 积应最少是定量环体积的3倍，
29
以完全置换定第29量页/共1环12页 内流动相， 消除管壁效应，确保进样准确
30
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自动进样器
由计算机自动控制进样六通阀、 计量泵和进样针的位置，按预 先编制的进样操作程序工作， 自动完成定量取样、洗针、进 样、复位等过程。
应用范围
适用于任何挥发性小于流动相的 组分的检测
不适于检测挥发和半挥发性的化47
合物
第47页/共112页
其他检测器难以检测的化合物如
HPLC分析基本操作
1．准备：流动相配制、脱气， 样品制备。
2．开机：依次打开计算机、泵、 检测器、柱温箱电源开关，仪 器自检。
3．装柱：将吸液头插入已经过 滤和脱气处理的甲醇中，开启 泵，使液体流第48页出/共11，2页 调流速在 48 0.2mL/min，连接色谱柱（注意
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进样器
➢ 手动 六通阀
经注射器进样
➢ 自动 六通阀
圆盘式自动进样器 链式自动进样器
24
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六通阀手动进样器原理示意图
Load
Inject
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第26页/共112页
六通阀
有6个接口，1和4之间接定量环，2接高压 泵，3接色谱柱，5、6接废液管。
4
第4页/共112页
仪器组成
进112页
数据处理 系统
5
高压输液系统
溶剂贮液瓶 溶剂脱气装置 高压输液泵 梯度洗脱装置
液相色谱法
2、液相色谱能完成难度较高的分离工作 ①气相色谱的流动相载气是色谱惰性的，不参与分配平衡 过程，与样品分子无亲和作用，样品分子只与固定相相互 作用。 而在液相色谱中流动相液体也与固定相争夺样品分子， 为提高选择性增加了一个因素。也可选用不同比例的两种 或两种以上的液体作流动相，增大分离的选择性。 ②液相色谱固定相类型多，如离子交换色谱和排阻色谱等， 作为分析时选择余地大；而气相色谱是不可能的。 ③液相色谱通常在室温下操作，较低的温度，一般有利于 色谱分离条件的选择。
反相键合相色谱法 在反相色谱中，一般采用非极性键合固定相，如硅胶C18H37（简称O D S或C18），硅胶-苯基等。 用强极性的溶剂为流动相，如甲醇/水，乙腈/水，水和 无机盐的缓冲液等。 目前，对于反相色谱的保留机制还没有一致的看法，大 致有两种观点： ① 一种认为属于分配色谱; ② 另一种认为属于吸附色谱。
三、梯度洗脱装置
在分离过程中使两种或两种以上不同极性的溶剂按一定 程序连续改变它们之间的比例，从而使流动相的强度、极性 、pH值或离子强度相应地变化，达到提高分离效果，缩短分 析时间的目的。
梯度洗脱装置分为两类： 一类是外梯度装置又称低压梯度，流动相在常温常压 下混合，用高压泵压至柱系统，仅需一台泵即可。 一类是内梯度装置（又称高压梯度），将两种溶剂分 别用泵增压后，按电器部件设置的程序，注入梯度混合室 混合，再输至柱系统。
四、化学键合相色谱 通过化学反应把各种不同的有机基团键合到硅胶表面的游离羟 基上，代替机械涂渍的液体固定相。 ① 避免了液体固定相流失； ② 改善了固定相的功能，提高了分离的选择性； ③ 化学键合色谱适用于分离几乎所有类型的化合物。 根据键合相与流动相之间相对极性的强弱，分为极性和非极 性键合相色谱。 在极性键合相色谱中，由于流动相的极性比固定相极性要小， 所以极性键合相色谱属于正相色谱。 流动相的极性比固定相极性强的键合相，既可作为正相色谱， 也可作为反相色谱。
二维液相色谱概念_概述及解释说明
二维液相色谱概念概述及解释说明1. 引言1.1 概述二维液相色谱是一种高效分离技术，广泛应用于分析化学、生物医药等领域。
随着科学技术的不断发展，单一柱液相色谱已经无法满足对复杂样品中成分的完全分离和定性分析的需求。
因此，为了提高分离能力和分析效率，二维液相色谱这一新兴技术诞生了。
1.2 文章结构本文将围绕二维液相色谱的概念、原理、应用领域以及主要组成部分展开详细讨论。
首先，在介绍二维液相色谱概念方面，我们将对其定义进行阐述，并介绍其与传统单一柱液相色谱的区别。
接着，我们将深入探讨二维液相色谱的原理，包括两个柱之间的连接方式以及采用不同机制实现样品分离的方法。
然后，我们会重点关注二维液相色谱在不同领域中的应用案例，并探讨其中取得成功的原因。
随后，我们将详解二维液相色谱系统的主要组成部分，主要包括第一维柱和第二维柱的介绍及原理说明，以及色谱流体介质选择和优化方法，同时还会介绍考虑因素和操作参数调控方法。
在此基础上，我们会详细探讨二维液相色谱的优势与局限性，分析实际应用案例并探讨局限性所带来的挑战，并提出解决方法。
最后，我们将对二维液相色谱的发展趋势进行展望，并提出未来研究方向的建议。
1.3 目的本文旨在全面、系统地介绍二维液相色谱领域中的相关概念、原理、应用和技术组成部分。
通过深入了解二维液相色谱技术，读者能够更好地把握其理论基础和实际应用，为相关领域的科研工作者提供参考和借鉴。
同时也将帮助读者更好地认识到二维液相色谱技术在样品分离与定性分析中所具有的优势与局限性，并为进一步研究提供思路与建议。
2. 二维液相色谱概念:2.1 定义:二维液相色谱（2D-LC）是一种分离方法，通过在不同的柱上进行两次连续的液相色谱分离来实现高效分离和复杂样品分析。
与传统单一柱的液相色谱相比，2D-LC可以更有效地解决复杂样品中的混杂物问题，并提高目标物质的检测灵敏度和分辨率。
2.2 原理:2D-LC的原理基于两个核心概念：首先是选择性，即使用具有不同保留机制和选择性的两个柱进行分离。
液相色谱质谱联用的原理详解ppt课件
ESI是一种软电离方式，即便是分子量大，稳定性差的化 合物，也不会在电离过程中发生分解，它适合于分析极性 强的有机化合物。
ESI的最大特点是容易形成多电荷离子。目前采用电喷雾 电离，可以测量大分子量的蛋白质。
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大气压化学电离源(APCI)
APCI喷嘴的下游放置一个 针状放电电极，通过放电电 极的高压放电，使空气中某
4.流量和色谱柱的选择
不加热ESI的最佳流速是1—50ul／min，应用 4.6 mm内径LC柱时要求柱后分流，目前大多采 用 l—2.1 mm内径的微柱，TIS源最高允许lml ／min，建议使用200—400ul／min
APCI的最佳流速～lml／min，常规的直径4.6mm 柱最合适。
为了提高分析效率，常采用＜ 100 mm的短柱 （此时UV图上并不能获得完全分离，由于质谱 定量分析时使用MRM的功能，所以不要求各组分 没有完全分离）。这对于大批量定量分析可以 节省大量的时间。
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电喷雾与大气压化学电离的比较
电离机理：电喷雾采用离子蒸发，而APCI电离是高压 放电发生了质子转移而生成[M＋H]+或[M-H]-离子。
样品流速：APCI源可从0.2到2 ml／min；而电喷雾源 允许流量相对较小,一般为0.2-1 ml／min.
断裂程度；APCI源的探头处于高温，对热不稳定的化 合物就足以使其分解.
一般质谱仪都采用机械泵预抽真空后，再用高效率扩散 泵连续地运行以保持真空。现代质谱仪采用分子泵可获 得更高的真空度。
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离子源
离子源的作用是将欲分析样品电离，得到带有样品 信息的离子。
1.质谱检测的是离子 2.离子源=接口
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电喷雾电离（ESI）
ESI是近年来出现的一种新的电离方式。它主要应用于液相色谱-质谱 联用仪。流出液在高电场下形成带电喷雾，在电场力作用下穿过气 帘；从而雾化、蒸发溶剂、阻止中性溶剂分子进入后端检测。
液相色谱尖峰-概述说明以及解释
液相色谱尖峰-概述说明以及解释1.引言1.1 概述液相色谱是一种常用的分析技术，广泛应用于化学、医药、环境等领域。
在液相色谱中，尖峰是指在色谱图中显著的、高而狭窄的峰。
尖峰的形成机制与样品的组成、分离柱和操作条件等因素密切相关。
尖峰具有很高的峰度和分离效率，能够提供准确的分析结果。
液相色谱尖峰的形成机制主要包括样品分子在分离柱中的保留、扩散、传递和柱效应等过程。
首先，样品分子在移动相中与固定相表面发生相互作用，从而保留在分离柱中；其次，样品分子在保留的基础上，受到扩散的影响，向两侧扩展，导致峰形变宽；然后，样品分子在移动相中传递，顺流进入分离柱；最后，样品分子在分离柱中发生相互作用，并通过不同的机制实现分离。
液相色谱尖峰具有很高的分离效率和分析灵敏度，能够有效地分离和测定混合物中的成分。
尖峰的形态参数还可以用于定量分析和质谱等进一步的分析。
在药物研发、环境监测等领域，液相色谱尖峰的分析技术得到广泛应用。
对于复杂的样品体系，液相色谱尖峰的形成机制和分离规律的研究具有重要的理论和应用价值。
总而言之，液相色谱尖峰是液相色谱分析中重要的现象，与样品的保留、扩散、传递和柱效应等因素密切相关。
通过研究尖峰的形成机制和分离规律，可以实现样品的高效分离和精确测定，为化学、医药、环境等领域的研究和应用提供有力支持。
1.2 文章结构文章结构是指文章整体的组织和安排方式，它决定了文章内容的呈现方式和逻辑关系。
在本文中，文章结构分为引言、正文和结论三个部分。
引言部分起到引导读者进入主题的作用，可以包括概述、背景信息和问题陈述等内容。
在本文中，引言部分主要包括概述、文章结构和目的三个方面。
概述部分简要介绍了液相色谱尖峰的主题和主要内容，可以提到液相色谱作为一种常用的分析技术，尖峰是其重要的特征之一。
同时，可以提到尖峰的形成机制对于液相色谱分析的准确性和灵敏度具有重要影响。
文章结构部分可以对整篇文章进行概括性描述，说明文章主要包括引言、正文和结论三个部分。
液相色谱峰是圆头峰___概述说明以及解释
液相色谱峰是圆头峰概述说明以及解释1. 引言1.1 概述液相色谱峰是指在液相色谱中出现的某个组分的浓度随时间变化的图形展示。
它是通过将待测样品注入色谱柱中，利用色谱柱内固定填料对各种组分进行分离和检测而得到的。
液相色谱峰通常呈现出一个圆头峰的形状，该形状主要取决于被分离物质在色谱柱中的梯度洗脱速率、进样体积、流动相速度以及其他操作参数等因素。
1.2 文章结构本文将从多个方面对液相色谱峰进行详细解析。
首先，我们将定义和描述液相色谱峰的特征，包括其形状、高度、宽度以及峰面积等参数指标。
然后，我们将介绍不同类型的液相色谱峰，并讨论它们在不同应用领域中的意义和作用。
接着，我们将深入探讨液相色谱峰生成机理，包括组分传递过程、填料表面吸附和扩散效应等因素对峰形成过程的影响。
此外，我们还将介绍常用的分析液相色谱峰的方法和技术，包括峰形参数分析法、色谱条件优化法以及数据处理和解释方法。
最后，我们将讨论液相色谱峰形成过程中常见的问题，并提出相应的解决方法，如压力效应对液相色谱峰的影响及优化策略、注射体积对液相色谱峰形态的影响及调控方法，以及色谱柱选择与使用注意事项。
1.3 目的本文的目的是全面概述液相色谱峰并深入剖析其形成机理和分析方法。
通过对液相色谱峰特征和类型的描述，读者可以更好地理解和解释实验结果中观察到的峰形态。
同时，在介绍液相色谱峰生成机理的基础上，读者能够了解各种因素对峰形成过程的影响，并根据实际需要进行优化。
另外，本文还提供了多种分析液相色谱峰的方法和技术供读者参考，以便更准确地评估样品组分含量和纯度等关键参数。
最后，在讨论常见问题及其解决方法的基础上，读者将能够避免或解决在液相色谱峰形成过程中可能出现的各种困扰。
通过本文的阅读，人们对液相色谱峰的认识将更加全面和深入，并能够更有效地运用液相色谱技术进行实验研究。
2. 正文:2.1 液相色谱峰的定义和特征液相色谱峰是指在液相色谱分析中出现的峰状吸收或荧光信号，用于表示样品中各组分的峰。
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一、分离类型选择
二、流动相的选择
1. 流动相的基本要求
（1）与色谱柱不发生不可逆化学变化，即保留柱效或柱 子的保留性质长期不变；
（2）能溶解被分离的样品； （3）与所用的检测器匹配； （4）黏度尽可能小，以获得高的柱效； （5）价格便宜、毒性小、易于纯化；
离子交换色谱法
固定相表面带与被分析物相反电荷
• 一般使用弱离子交换树脂
根据电荷相互作用力的强弱产生分离
流动相
固定相
分子排阻色谱法
依照分子大小分离 • 固定相材质具有不同大小孔径 • 大分子因其经过的路径短，所以先流出 • 主要应用于聚合物、蛋白质等分子量范围的测定
§3.4 色谱分离条件的选择与优化
e.电化学检测器
特点：1. 灵敏度高，可测至10-15 mol·L-1；
2. 选择性好，只响应电活性物质； 3.线性范围宽，可达45个数量级。
HPLC-ECD法是目前多组分复杂样品分析中的一个重 要手段,尤其在分析低浓度生物样品中具有不可替代的 优势，逐渐受到生命科学和分析科学工作者的关注
f.质谱仪
2. 流动相选择的基本原则
原则： 与固定相极性越接近的流动相，其洗脱能力越
强。
例：采用正相液-液分配分离时：首先选择中等极性溶剂， 若组分的保留时间太短，降低溶剂极性，反之增加。
也可在低极性溶剂中，逐渐增加其中的极性溶剂，使 保留时间缩短。
常用溶剂的极性顺序：
水(最大) > 甲酰胺> 乙腈> 甲醇> 乙醇> 丙醇> 丙酮> 二氧六环> 四氢呋喃> 甲乙酮> 正丁醇> 乙酸乙酯> 乙醚> 异丙醚> 二氯甲烷>氯仿>溴乙烷>苯>四氯化碳>二硫化碳> 环己烷>己烷>煤油(最小)
特点：1. 灵敏度高，可获得待测化合物的结构信息
(5)附属部件
脱气装置，自动进样装置，梯度洗脱装 置，柱温箱，衍生系统，馏分收集装置以及 数据处理等装置
如使用得当，会大大提高仪器的功能和提高 工作效率
§3.3 高效液相色谱分类及原理
高效液相色谱法的类型按组分在两相间分离机理的不同 主要分为：液固吸附色谱法、液液分配色谱法（正相与 反相）、离子交换色谱法及分子排阻色谱法。 其中：以反相的化学键合相色谱应用最为广泛
a. 紫外检测器
应用最广，对大部分有机化合物有响应。
特点： 1、灵敏度高；
2、线形范围高； 3、流通池可做的很小（1mm × 10mm ，容积 8μL）； 4、对流动相的流速和温度变化不敏感，可用于梯度洗脱； 5、波长可选，易于操作；
b. 光电二极管阵列检测器
紫外检测器的重要进展； 光电二极管阵列检测器：1024个二极管阵列，各检测特 定波长，计算机快速处理，三维立体谱图，如图所示。
光电二极管阵列检测器
c. 示差折光检测器
除紫外检测器之外应用最多的检测器； 连续检测参比池和样品池中流动相之间的折光 指数差值。差值与浓度呈正比； 通用型检测器(每种物质具有不同的折光指数)； 灵敏度低、对温度敏感、不能用于梯度洗脱；
d. 荧光检测器
高灵敏度、高选择性； 对多环芳烃，维生素B、 黄曲霉素、卟啉类化合物、 农药、氨基酸、甾类化合物 等有响应；
第三章 高效液相色谱法
§3.1 概述 §3.2 仪器结构及分离原理 §3.3 高效液相色谱分类及原理 §3.4 色谱分离条件的选择与优化 §3.5 高效液相色谱方法的建立和应用
§3.1 概述
流动相是液体的色谱法称为液相色谱法。液相色谱可分为平板色谱和 柱色谱，在液相柱色谱中，采用颗粒十分细的高效固定相，并采用高压泵 输送流动相，全部工作通过仪器来完成,这种色谱法称为高效液相色谱法.
1、高效液相色谱（HPLC）和气相色谱GC的比较
HPLC 1、几乎可以分析各种化合物
2、可用于热不稳定物质的分析
3、柱效不会很高 4、流动相有毒，费用较高 5、仪器制造难度较大
GC 只能分析挥发性物质，约20%的化合物 不能用于热不稳定物质的分析
可得到很高的柱效 流动相为气体，无毒、易处理 仪器制造难度较小
采用化学键合相的液相色谱称为化学键合相色谱法，简称键合相 色谱。用来制备键合固定相的载体，几乎都用硅胶。利用硅胶表面的 硅醇基（Si-OH)与有机分子成键，利用化学反应将有机分子键合到载 体表面上，形成均一的、牢固的单分子薄层而构成各种性能的固定相 。采用的键合反应有酯化键合(Si—O—R型)、硅烷化键合(Si-O-Si-R型 )和硅氮键合(Si-N型)等。以硅烷化键合反应最为常用.
液固吸附色谱法
固定相为固体
• 硅胶silica 和 alumina（氧化铝） 是最常用的固定相
通过一系列的吸附/脱附步骤形成分离 • 样品分子对固定相的吸附程度不同而形成分离
流动相
固定相
液液分配色谱法
iorg Ki iaq 流动相 固定相 涂布式固定相缺点：固定液易流失，重现性差，且不适合 梯度洗脱和采用高速流动相 固定液易流失 化学键合固定相
§3.2 仪器结构
1.结构流程
储液器
高压泵
梯度洗 脱装置
进样器
色
谱
记录仪
柱
馏分 收集器
检测器
2.主要部件
(1) 高压输液泵 要求：
能在高压下连续工作 (>5000psi) 较宽的可程序控制的流速范围 耐化学腐蚀 无脉动输出 输出流量稳定、重复性好 易安装维护
(2) 进样装置
流路中为高压力工作状态， 通常使用耐高压的六通阀进样装置， 其结构如图所示：
(3) 高效分离柱
柱体为直型不锈钢管，内径1～6 mm，柱长5～40 cm。 发展趋势是减小填料粒度和柱径以提高柱效，现在已经有超 高速高效液相色谱。
(4) 液相色谱检测器
按ห้องสมุดไป่ตู้测对象分类
溶质型检测器：对组分的物理或物理化学特性有响 应：紫外、荧光、电化学
总体检测器：对试样或洗脱液总的物理或物理化学 特性有响应：示差折光、介电常数、激光散射检测器
化学键合相具有以下特点：
1）固定相不易流失，柱的稳定性和寿命较高。 2）能耐受各种溶剂，可用于梯度洗脱。 3）表面较为均一，没有液坑，传质快，柱效高。 4）能键合不同基团以改变其选择性，例如键合氰基、氨基等
极性基团用于正相色谱法，链合离子交换基团用于离子色 谱法，键合C2， C4， C6， C8， C16， C18， C22烷基和苯基等 非极性基团用于反相色谱法等。因此，它是HPLC较为理 想的固定相。