进口蓝耳病试剂盒的区别

蓝耳病ELISA检测方法探讨
北京天之泰生物科技有限公司
猪繁殖与呼吸综合征（Porcine reproductive and respiratory syndrome，PRRS）自二十世纪八十年代末期开始流行，1992年国际兽医局正式命名，主要感染猪，尤其是母猪，该病严重影响其生殖功能，临床主要特征为流产，产死胎、木乃伊胎、弱胎，呼吸困难，在发病过程中会出现短暂性的两耳皮肤紫绀，故又称为蓝耳病。

引起该病的病毒（PRRSV）属动脉炎病毒科,单股正链RNA 病毒,基因组大小为15kb ,包括8 个开放阅读框架（ORF）,可编码6 种结构蛋白和2 种非结构蛋白,其中ORF5 编码病毒的糖基化囊膜蛋白(又称E 蛋白或GP5) ,为主要的结构蛋白,也是一个多功能蛋白,参与机体的细胞免疫与体液免疫,是发展新型疫苗和诊断试剂的良好目标基因。

该病在上个世纪八十年代末、九十年代初，曾经迅速传遍世界各个养猪国家，在猪群密集、流动频繁的地区更易流行，常造成严重经济损失。

近几年，该病在国内呈现明显的高发趋势，对养猪业造成了重大损失，已成为严重威胁我国养猪业发展的重要传染病之一。

特别是自2006年以来，一种被称为“高热病”的灾难性疾病袭击我国大部分猪场，该病最初在主要在南方几个省市传播，后逐渐蔓延和扩散到我国绝大部分地区，给养猪业造成了重大损失。

在这种情况下，作为控制疫病的重要手段之一，日常监测就被人们给予了更高的期望。

对于养殖场来说，猪群的日常监测是选择疫苗、评估免疫程序合理性、掌握猪群健康状态的重要手段，同时也可从侧面反映猪场管理是否合理。

目前用于PRRS检测的方法很多，根据检测目的和目标的不同，主要分为抗原检测：聚合酶链式反应 （PCR）、实时荧光定量PCR （Real-time PCR），抗体检测：免疫荧光实验（IFA）、免疫过氧化物酶单层分析法（IPMA）、中和实验（SVN）和酶联免疫吸附试验（ELISA）。

其他方法与相比，ELISA 检测操作简便，易于标准化，快速敏感，非常适合进行大规模流行病调查和疫病监测。

国内外学者在PRRSV 抗体ELISA 试剂盒的研发上做了大量研究，基于不同的PRRSV 蛋白建立了不同的ELSIA 试剂。

1、以核衣壳蛋白（N 蛋白）作为主要包被抗原的PRRSV 抗体间接ELISA 检测试剂盒
N 蛋白在病毒粒子中含量较高，是PRRSV 主要结构蛋白之一，保守性高，具有群特异性，能够同时用于检测欧洲株和美洲株，是最早用于试剂盒研究的蛋白，以此作为基础研发的试剂盒是市场上最早应用的商品化试剂盒，敏感性高、重复性好，应用广泛。

N 蛋白不能诱导
产生病毒中和抗体，因此以N 蛋白作为包被抗原的ELISA 试剂无法反应机体的免疫状态，不适合用于对疫苗免疫效果监测。

代表产品为IDEXX（爱德士）和BIOCHEK（百测）蓝耳病抗体检测试剂盒。

2、以膜蛋白（M 蛋白、GP2、GP
3、GP
4、GP5）作为主要包被抗原的PRRSV抗体间接ELISA 检测试剂盒
图1 膜蛋白包被方法与IPMA试验相关性比较。

ORF5 基因编码的GP5 蛋白是PRRSV 最重要的免疫原性蛋白, 参与中和抗体的产生, 并且在PRRSV 感染后康复猪血清中的中和抗体主要针对GP5 ,因此GP5 是作为新型基因工程疫苗和诊断试剂的良好的靶蛋白。

Govin 等(1999) 曾利用大肠杆菌表达的GST-GP5 融合蛋白建立了PRRSV 的GP5-ELISA 检测方法,并证实具有较好的特异性和敏感性。

最近,又有研究表明由ORF6 编码的非糖基化的基质蛋白(M 蛋白) 也存在中和表位,而且在不同PRRSV分离株中高度保守。

此外,在PRRSV 感染的培养物中GP5 和M 蛋白通过分子间的二硫键连接形成异源二聚体,并包装入病毒粒子中,提示这两种蛋白在PRRSV 的免疫
应答中可能具有重要作用。

因而，采用M 蛋白和GP5 蛋白作抗原的诊断试剂不仅能检测野毒感染状况，而且能解决N 蛋白作抗原的诊断试剂无法反映机体免疫状况的缺陷，有利于疫苗抗体水平的检测，为猪场进行疫苗免疫效果评估提供了重要的技术手段。

实验证实，以膜蛋白作抗原的ELISA 诊断试剂盒与其他检测中和抗体的方法，如IFA、IPMA 有很好的相关性，如图(图 1）所示所测血清转阳规律与IPMA （国际标准方法）相似。

代表产品为法国LSI蓝耳病抗体检测试剂盒，也正是由于此方法在检测方面的这些优点，该试剂盒已被列入农业部2010年检测计划指定用试剂盒。